FACULTAD Informe de Prctica de Laboratorio I

LABORATORIO DE ANLISIS
DE INSTRUMENTAL
CIENCIAS EXACTAS Y
NATURALES
Determinacin de hierro en alimentos por espectroscopa de Ultravioleta - Visible
Moreno Gordon Luisa Fernanda, Valencia Ortiz Luisa Fernanda.

Fecha de presentacin 30/03/2016

____________________________________________________________________________________________________________________________

Resumen
La espectrometra UV/Vis se utiliza habitualmente en la determinacin cuantitativa de soluciones de iones metlicos de transicin y compuestos
orgnicos muy conjugados. La ley de Lambert - Beer establece que la absorbancia de una solucin es directamente proporcional a la concentracin
de la solucin. Por tanto, la espectrometra UV/Vis puede usarse para determinar la concentracin de una solucin. El objetivo de esta prctica fue
determinar por espectroscopa de Ultravioleta - Visible la concentracin de hierro en cereal tipo All Bran. La concentracin de hierro en el cereal tipo
All Bran mediante la ecuacin de mnimos cuadrados fue de 273,8 ppm y grficamente mediante la curva de calibracin fue de 274 ppm.

Palabras Clave: Espectrometra UV/Vis; Cereal All Bran; Hierro; Curva de calibracin; Patrones; Concentracin
____________________________________________________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________________________________________________
se puede encontrar en la naturaleza presente en dos estados de
oxidacin que son: 2+ (ferroso) y 3+ (frrico).
1. Introduccin
La espectrometra ultravioleta-visible o espectrofotometra UV- El hierro (II) forma un complejo de color rojo con 1,10-
Vis implica la espectroscopia de fotones en la regin de fenantrolina segn la reaccin:
radiacin ultravioleta-visible. La espectrometra UV/Vis se
utiliza habitualmente en la determinacin cuantitativa de
soluciones de iones metlicos de transicin y compuestos
orgnicos muy conjugados (Ref-[1]).

El que una sustancia tenga color significa que transmite luz de

ciertas longitudes de onda en la regin visible del espectro,
mientras que absorben luz de otras longitudes de onda en dicha
regin (Ref-[2]). A la fraccin de luz absorbida por una
solucin medida a un largo de onda dado se le conoce como por
absorbancia. La absorbancia est dada por la Ley de Beer:
A = bc
Dnde:
A = absorbancia
= absortividad molar en unidades de L/(mol x cm)
(Es una propiedad inherente de la sustancia y depende de la
longitud de onda al cual se mide la absorbancia.)
b = la longitud del paso de luz (Equivale al ancho de la celda)
c = concentracin molar del analto
La ley de Lambert - Beer establece que la absorbancia de una
solucin es directamente proporcional a la concentracin de la
solucin. Por tanto, la espectrometra UV/VIS puede usarse
para determinar la concentracin de una solucin. Es necesario
saber con qu rapidez cambia la absorbancia con la
concentracin (Ref-[3]).
Para determinar el hierro en una matriz alimenticia es
importante conocer que el hierro es un elemento metlico, que
Para asegurarse de que todo el hierro presente en la muestra se
encuentra en forma de Fe2+ se aade, antes de la formacin del
complejo, un agente reductor como es el clorhidrato de
hidroxilamina, el cual reduce el Fe3+ a Fe2+ segn la reaccin:
4Fe 3+ + 2 NH2OH 4 Fe 2+ + N2 O + 4 H3O + + H2 O
La formacin del complejo hierro (II) con fenantrolina se da
en un intervalo de pH comprendido entre 2 y 9, aunque ste es
suficientemente amplio, para asegurar la formacin
cuantitativa del complejo se adiciona al medio acetato sdico
que neutraliza el cido formado durante la reduccin del hierro
(III) y ajusta el pH a un valor al que se puede efectuar la
formacin del complejo (Ref-[4]).
Este mtodo puede aplicarse a matrices alimentarias y permite
determinar el contenido total de hierro (Fe2+ + Fe3+).
En las siguientes secciones se expondr el procedimiento y los
resultados para determinar por espectroscopa de Ultravioleta -
Visible la concentracin de hierro en cereal tipo All Bran.

1
 conseguir unas cenizas blancas o ligeramente grises, y
homogneas. Se llevaron al desecador para previo
enfriamiento y posteriormente se pesaron.

1.2 Determinacin de hierro en las cenizas

Dilucin de las cenizas: En la campana de extraccin, se le

aadi al crisol fro 8 mL de HCl concentrado hasta que se
disolvieron las cenizas. Se adicionaron 10 mL de agua
destilada, agitando con un agitador de vidrio hasta que se
disolvieron las cenizas en su totalidad. Se filtr para eliminar
pequeos grumos, se pas cuantitativamente el lquido a un
matraz de 25 mL y para finalizar se afor.

Cuantificacin del hierro: Se tomaron tres alcuotas de 0,2

mL (Figura No. 2) de la solucin obtenida de las cenizas y se
llevaron a tubos de ensayo, se aadieron los siguientes
reactivos, en este orden para que se desarrollara de color
Figura No. 1
anaranjado por la reaccin entre el hierro (II) y el 1,10
Calcinacin de la muestra de cereal All Bran.
fenantrolina: 0,1 ml de solucin de clorhidrato de
hidroxilamina, 0,8 ml de acetato de sodio, 1ml de 1,10-
2. Materiales y Mtodos fenantrolina. Luego se agit y se dej en reposo durante 15
minutos (Ref-[5]).
Materiales
Baln volumtrico de 5 ml y 25 ml
Beaker
Celdas Espectrofotomtricas de plstico
Crisol
Espectrofotmetro
Embudo en V
Gradilla
Mechero
Mufla
Pipetas y micro pipetas
Tubo de ensayo
Papel filtro

Reactivos
Cereal tipo All bran
Acetato de Sodio (C2H5COONa)10%
Clorhidrato de hidroxilamina (NH2OH*HCl)10%
cido Clorhdrico (HCl) Figura No. 2
Alcuotas de la muestra problema y de los patrones.
1,10-Fenantrolina 0,1%
Sulfato de hierro amoniacal (NH4Fe(SO4)2*12H2O)

3. Procedimiento Experimental II. PREPARACION DE LA CURVA DE

CALIBRACION
I. PREPARACION DE LA MUESTRA
a. Preparacin de los estndares de calibracin
1.1 Obtencin de cenizas totales
Se prepararon 5mL de un conjunto de 5 estndares diferentes
Se pes 6,003g de la muestra de cereal All Bran en un crisol, de concentracin. Para elegir el intervalo de concentracin en
previamente se calcin la muestra (Figura No. 1) hasta el cual se prepararon los patrones se investig el contenido de

2
hierro en el cereal All Bran y con base en este dato se
realizaron los clculos para obtener la curva de calibracin.

b. Construccin de la curva de calibracin

1. Se tomaron alcuotas de 0,2 ml de cada una de las

soluciones de los estndares preparados (Figura No. 2) y
se llevaron a diferentes tubos de ensayo, para posterior
mente adicionar los siguientes reactivos en el siguiente
orden: 0,1 mL de solucin de clorhidrato de hidroxilamina,
0,8 mL de acetato de sodio, 1mL de 1,10-fenantrolina, se
dej en reposo durante 15 minutos para que se diera la
reaccin necesaria y apareciera el color deseado.
2. Se procedi a registrar un barrido espectral entre 400 y 600
nm, del complejo hierro-(1,10-fenantrolina), utilizando
como blanco de referencia agua tratada de la misma Tabla No. 1
manera que los estndares. Se registr la longitud de onda Algunos alimentos ricos en hierro.
donde se dio el pico de mayor absorbancia y esta se utiliz
en la lectura de la muestra problema.
3. Se realiz la curva de calibracin de absorbancia frente a
concentracin a longitud de onda seleccionada. Con estos datos se pudieron hallar los volmenes de los
4. Se obtuvo la absorbancia de la muestra problema, para patrones a partir de la Frmula No. 2.
posteriormente interpolarla con la curva de calibracin y
as obtener la concentracin de la muestra problema.
C1V1=C2V2 (Frmula No. 2)
4. Resultados y Anlisis de resultados
Despejando V1, se obtiene que:
I. BARRIDO ESPECTRAL

Para la realizacin del barrido espectral se ley uno de los 1 = (C2 V2)/C1 (Frmula No. 3)
patrones que contena hierro, teniendo en cuenta el intervalo de
longitud de onda entre 400 y 600 nm, obteniendo como
longitud de onda del hierro 515 nm. 1255
1,1 = 1250
= 0,5 mL
II. CURVA DE CALIBRACIN DE LOS
PATRONES
1505
1,2 = = 0,6 mL
1250
De acuerdo a la Tabla No. 1 el cereal tipo All Bran contiene 20
mg de hierro. Se determin la concentracin del cereal de la
siguiente manera: 2005
1,3 = = 0,8 mL
1250
20 mg 1000g
= 200 (Frmula No. 1)
100g 1kg
2255
1,4 = = 0,9 mL
Para determinar el intervalo de concentracin de los patrones se 1250
eligieron dos concentraciones por encima (125 ppm y 150 ppm)
de la concentracin del cereal (200 ppm) y dos por debajo de
este (225 ppm y 250 ppm), obteniendo de la suma de las 2505
1,5 = = 1,0 mL
concentraciones un total de 950 ppm. La muestras madre 1250
presentes en el laboratorio tenan concentraciones de 200 ppm,
250 ppm y 1250 ppm respectivamente. Despus de tomar alcuotas de 0,2 mL de las soluciones de los
estndares preparados y haberles agregado la cantidad
Se eligi la concentracin para la muestra madre de 1250 ppm apropiada de clorhidrato de hidroxilamina, acetato de sodio y
puesto que esta fue la ms cercana al total de 950 ppm.

3
1,10 fenantrolina respectivamente, se procedi a realizar la
curva de calibracin en el espectrofotmetro a una longitud de 0,714 (1,024)
onda de 515 nm, obteniendo las absorbancias de los patrones =
0,010
como se muestra en la Tabla No. 2.
= 173,8

Tambin se determin la concentracin de la muestra

problema grficamente (Grfico No. 1) obteniendo como
resultado 174 ppm.

Patrn Concentracin (ppm) Absorbancia

1.8
1 125 0,203
1.6
2 150 0,552
1.4
3 200 0,923
1.2

Absorbancia
4 225 1,186
1
5 250 1,538
0.8
0.6
0.4
0.2
Tabla No. 2 0
Absorbancias de los patrones a 515nm.
125 150 200 225 250
y = 0,330x - 1,024 Concentracin
R = 0,9975

De acuerdo al Grfico No. 1, la curva de calibracin es lineal Grfico No. 1

demostrando de esta manera que cumple con la ley de Lambert Curva de calibracin de los patrones (Absorbancia vs.
Beer ya que a mayor concentracin hubo mayor absorbancia. Concentracin).

III. CONCENTRACIN DE LA MUESTRA

PROBLEMA 5. Cuestionario
Se procedi a medir por triplicado en el espectrofotmetro la 1. Describir las desviaciones que pueden presentarse en
absorbancia de la muestra problema obteniendo como resultado la aplicacin de la Ley de Beer.
las siguientes absorbancias: 0.688, 0.721, 0.714.
a. Desviaciones reales.
Se sac la medida de tendencia central la cual fue 0,714 y a i. La concentracin debe ser inferior a 0,01 M
partir de la Formula No. 4 se hall la concentracin de la ii. La absorbancia debe darse en un rango de 0,15 -0,8
muestra problema la cual fue de 173,8 ppm.
b. Desviaciones instrumentales.
y= mx + b (Formula No. 4) i. Radiacin no monocromtica
ii. Radiacin parsita
Despejando x: iii. Errores de lectura

c. Desviaciones qumicas.
= (Formula No. 5) i. Influencia del equilibrio (dimerizacin, acido-base,

complejos)
Dnde: ii. Influencia del disolvente
iii. Influencia de la temperatura
y= 0,714 b= -1.024 iv. Impurezas de los reactivos
m= 0,330 v. Interaccin entre especies absorbentes (Ref-[6]).

4
2. Qu es un complejo?
Un complejo es una ion que se compone de un tomo central
que acta como receptor de pares electrnicos y de grupos
ligando que actan como dadores de pares electrnicos
formando enlaces coordinados dativos. Los complejos se
forman especialmente con los elemento de transicin los cuales
en su notacin espectral quedan con varios orbitales
semillenos. Experimentalmente se observa que los diferentes
cambios de color que forman los complejos se dan debido al
orden de la fuerza creada por los ligandos, un orden que se
esperara por los efectos electrostticos y teniendo en cuenta el
desplazamiento delos iones, se forma la serie espectro-qumica
debido a las diferentes coloraciones observadas (Ref-[7]).
3. Por qu se llaman complejos por transferencia de
carga?
Porque es una asociacin qumica de dos o ms molculas, en
el que la atraccin entre las molculas se debe a una transicin
electrnica hacia un estado electrnico excitado. La atraccin
electrosttica resultante provee una fuerza estabilizadora para el
complejo molecular. La molcula fuente de donde la carga es
transferida se denominada electrn donante, y la molcula
receptora es denominada electrn receptor (Ref-[8]).
4. Cules son los factores que deben tenerse en cuenta
para la determinacin espectrofotomtrica de iones
inorgnicos por formacin de complejos?
Los factores que se deben tener en cuenta son: velocidad de
reaccin, formacin de insaturaciones, tiempo, temperatura y
equilibrio qumico (Ref-[9]).
5. Qu sucede si no se adiciona hidroxilamina antes de
agregar la 1, 10 fenantrolina? Qu condiciones debe
tener el agua que se utiliza para preparar las soluciones
en este anlisis?
Para asegurarse que todo el hierro presente en la muestra est
en estado de oxidacin (+2), antes de la formacin del
complejo, se agrega un agente reductor como lo es el cloruro de
hidroxilamina, el cual reduce el Fe+3 a Fe+2. Por lo tanto si
este no se agrega no se podra presentar el complejo, puesto
que se necesita que el Fe este en estado de oxidacin +2 (Ref-
[6]).
El agua debe ser destilada, es decir con un pH neutro, ya que se
necesita que la solucin se neutralice y esta no afecte la
formacin de complejo.
6. Si la solucin de su muestra problema tiene una
absorbancia por encima o por debajo de las
absorbancias de las soluciones patrn usadas para la
curva de calibracin; qu efecto puede tener esto en el
resultado del anlisis y como se soluciona este
inconveniente?
El resultado que puede tener en nuestro experimento es que
la absorbancia de nuestra muestra problema no corte la curva
de calibracin, es decir, que nuestra muestra problema no
contiene el compuesto requerido o que este en mnimas
concentraciones. Para solucionar este inconveniente se
sugiere hacer ms patrones y de esta manera ampliar el
intervalo permitiendo de esta manera que la muestra
problema se pueda interpolar con las concentraciones de los
patrones.
6. Conclusiones
Se logr determinar la concentracin de hierro en una
muestra de cereal tipo All Bran a 515 nm, la cual fue
de 273,8 ppm. Esta se hall a partir de la reduccin del
Fe+3 a Fe+2 por accin de la 1,10 fenantrolina, para
generar un complejo. Grficamente mediante una
curva de calibracin e interpolando la muestra
problema se obtuvo una concentracin de 274 ppm.
La curva de calibracin aportada por la solucin
madre indica que hay una relacin directa entre la
concentracin y la absorbancia, es decir, hay un
cumplimiento de la ley de Lambert Beer.
Para que la ley de Beer se cumpla, las soluciones a
utilizar deben ser homogneas, sin impurezas o
precipitados, y la luz utilizada debe ser
monocromtica.
El conocer el adecuado uso del espectrofotmetro
permiti obtener en el laboratorio resultados con alta
calidad analtica en las mediciones que son emitidas
por este.
7. Bibliografa:
Textos
[3] Skoog, D. A, a, Qumica Analtica, Editorial MC
Graw-Hill, Ed.7, Mxico 2004, pg. 629,630.
Internet
[1] Guillermo Prez., Espectrometra,
ESPECTROMETRIA .COM,
www.espectrometria.com/espectrometra_ultravioleta-
visible
[2] Departamento de qumica analtica, Utilizacin de
las nuevas metodologas docentes e internet en la
enseanza de la Qumica Analtica
http://www.ugr.es/~decacien/Planes/Quimica/Plan%2
01997/temarios/671111darchivos/Practicas/Fe%20en
%20vinos.doc
[4] Scribd, Valoracin espectrofotomtrica,
http://es.scribd.com/doc/14174329/4-
5
 VALORACION-ESPECTROFOTOMETRICA#scribd
[5] Universidad de Caldas, Determinacin de hierro
en alimentos por espectroscopa de Ultravioleta -
Visible, Gua de Practicas de Laboratorio de Anlisis
Instrumental.
[6] Blogger, Espectroscopia de absorcin atmica, 11
de Agosto de 2009, http://absorcion-
atomica.blogspot.com.co/2009/08/limitaciones-de-la-
ley-de-lambert-beer.html
[7] Universidad Nacional, Complejos,
http://www.bdigital.unal.edu.co/249/12/80_-
_11_Capi_5.pdf
[8] Wikipedia, Complejo de transferencia de carga,
https://es.wikipedia.org/wiki/Complejo_de_transferenc
ia_de_carga
[9] Universidad Autnoma de Mxico, Fundamentos
Espectroscopa,
http://www.uam.es/personal_pdi/ciencias/lhh345a/Esp
ectrofotometria2.pdf