HISTORIA DE LA CROMATOGRAFA DE INTERCAMBIO IONICO

Los mtodos inicos se han utilizado desde 1850, cuando H. Thompson y J. T. Way,
investigadores de Inglaterra, trataron diversas arcillas con sulfato de amonio o carbonato en
solucin para extraer el amonaco y liberar calcio. En 1927 se utiliz la primera columna
de zeolita mineral para eliminar iones de calcio y magnesio que interferan en la solucin,
para determinar el contenido de sulfato de agua. La versin moderna de la IEC se desarroll
durante la poca de la guerra del Proyecto Manhattan. Se requera una tcnica para separar
y concentrar los elementos radiactivos necesarios para hacer la bomba atmica. Los
investigadores eligieron absorbentes que pudieran cerrarse sobre elementos transurnidos
cargados, y que pudieran eliminarse diferencialmente. Finalmente, una vez desclasificada
en 1947, la Comisin de Energa Atmica dio a conocer la informacin sobre el uso de la
cromatografa de intercambio inico para la separacin de productos de fisin nuclear.
Estas tcnicas pueden utilizar nuevas resinas IE para desarrollar los sistemas que se utilizan
a menudo hoy en da para la purificacin especfica de productos biolgicos y de sustancias
inorgnicas.

A principios de los aos 1970, Hamish Small y sus compaeros de trabajo en Dow
Chemical Company desarrollaron la cromatografa inica como un novedoso mtodo de
IEC utilizable en el anlisis automatizado. La CI utiliza resinas inicas ms dbiles para su
fase estacionaria, y una nueva neutralizacin de stripper, o supresor de la columna para
eliminar los iones quitados que se depositan en el fondo. Es una poderosa tcnica para
determinar bajas concentraciones de iones, y es especialmente til en estudios sobre el
medio ambiente y la calidad del agua, entre otras aplicaciones.

FUNDAMENTO

El principio bsico de la cromatografa de intercambio inico es que las molculas cargadas

se adhieren a los intercambiadores de forma reversible de modo que dichas molculas
pueden ser asociadas o disociadas cambiando el ambiente inico. La separacin mediante
intercambiadores inicos se realiza por lo general, en dos fases: en la primera las sustancias
a separar se unen al intercambiador utilizando condiciones que originan una unin fuerte y
estable; a continuacin, se eluye de la columna con buffers de diferentes pH o diferente
fuerza inica, compitiendo los componentes del buffer con el material por los sitios de
unin. R + A - es un intercambiador aninico en la forma A - y B - representa a los aniones
en la disolucin.

TIPOS DE CROMATOGRAFIA DE INTERCAMBIO IONICO

Un intercambiador inico es, por lo general, un polmero que tiene grupos cargados unidos.
La mayora de las protenas son estables dentro de un margen de pH determinado (es decir,
hay un margen en el que no se desnaturalizan), en el que estn cargadas positiva o
negativamente. Por lo tanto si una protena es estable a valores de pH por encima del punto
isoelctrico, se debe utilizar un intercambiador anicnico. Si es estable a valores de pH
situados por debajo del punto isoelctrico, debe utilizarse un intercambiador catonice.

INTERCAMBIADORES ANINICOS: Son portadores de grupos con cargas positivas que

unen aniones de forma reversible. Si el grupo cargado es positivo, es un intercambiador de
aniones. Los intercambiadores dbilmente bsicos ms corrientes son los grupos aminos
alifticos o aromticos.

INTERCAMBIADOR CATINICO: Los intercambiadores catnicos son portadores de

grupos con carga negativa que unen cationes de modo reversible. Un grupo tpico que se
utiliza en los intercambiadores de cationes es el grupo sulfnico, SO-3. Si se une un H+ al
grupo, se dice que el intercambiador se encuentra en forma cida y puede, por ejemplo,
intercambiar un H+ por un Na+ o dos H+ por un Ca+2. El grupo cido sulfnico es un
intercambiador de cationes fuertemente cido. Otros grupos de utilizacin corriente son el
carbonilo e hidroxilo fenlico, dos intercambiadores catinicos dbilmente cidos.

DESCRIPCION DE LA CROMATOGRAFIA DE INTERCAMBIO IONICO

Esta tcnica est basada en 4 etapas:

1- Equilibrio

El primer paso es el equilibrio de la fase estacionaria con las condiciones iniciales

deseadas. Cuando el equilibrio se ha logrado, toda la fase estacionaria se encuentra
asociada a iones complementarios (que pueden ser cloro o sodio). Por ejemplo, un
intercambiador catinico sulfonado asociado a Na+ producto de la disociacin de
NaOH

2- Aplicacin y Lavado:

El paso siguiente es sembrar la muestra a la cual queremos filtrar a travs de la

columna mediante un lavado especfico. Para ello es necesario aplicar un buffer con el
mismo pH y fuerza inica que el buffer inicial para que todas las protenas cargadas se
unan al intercambiador. Por ejemplo: A la forma sdica de la resina lavada se le aade
una solucin cida (pH=3) de la mezcla de aminocidos; a dicho pH los aminocidos se
encuentran en forma de cationes con carga neta positiva. Los aminocidos catinicos
tienden a desplazar algunos de los iones ligados a las 4 partculas de resina. A pH 3 los
aminocidos ms bsicos se unirn a la resina de forma ms estrecha que los ms
cidos.
3- Elusin:

Las molculas captadas por el intercambiador son eludas debido a cambios en la

composicin del buffer. La elusin puede realizarse de dos formas diferentes; la ms
usual consiste en aumentar progresivamente la concentracin de un contra in, de modo
de desplazar el equilibrio de unin de la macromolcula hacia la forma libre. El
contrain es normalmente una sal, disuelta en eluyente (NaCl, KCl, etc). Las
macromolculas de una mezcla se irn desplazando de manera secuencial, de acuerdo a
la fuerza de unin: las que posean menos densidad de carga eluiran antes, mientras que
para las de mayor carga neta el tiempo de retencin ser mayor. La otra manera es
realizar un cambio en el PH del solvente; esta tcnica se emplea con intercambiadores
dbiles. La lgica es que al cambiar el PH, de modo de acercarnos al PI de cada
protena, la carga neta de esta ir disminuyendo y en algn punto dejara de
interaccionar con la matriz. Sin embargo, esta tcnica posee sus desventajas. Dado que
es este caso las protenas se eluiran a un PH igual a su PI su solubilidad estar
disminuida y pueden precipitar. Adems, La disminucin del pH protonar a los grupos
negativos de los aminocidos, por lo que su carga neta tender a ser positiva, por lo cual
se necesitaran intercambiadores cationicos ( portadores de grupos con cagas negativas)
que van a unir estos cationes de forma reversible; en contraposicin el aumento del PH
provocara una desprotonacin de los grupos positivos de los aminocidos, por lo cual
su carga neta tendera a ser negativa; necesitndose asi intercambiadores anionicos que
unan reversiblemente cargas negativas. Las diversas fracciones pueden analizarse
cuantitativamente mediante la reaccin con ninhidrina. Los aminocidos aninicos
aparecen primero y los ms catinicos aparecen posteriormente (con un intercambiador
catinico).

4- Regeneracin:

Por ltimo, se remueven las partculas que an estn asociadas al intercambiador. Los
iones que se adhieren a los sitios activos de la resina son de muy diferente tipo y pueden
ser removidos total o parcialmente durante el proceso de regeneracin. Una vez
agotadas las resinas, se pueden regenerar a su forma inicial para reanudar la operacin
de intercambio. As, el intercambio inico es un proceso cclico y no continuo. La
regeneracin de las resinas se hace segn reacciones inversas.

BIBLIOGRAFIA

http://www.textoscientificos.com/quimica/cromatografia