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UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA

UNA MONOGRAFA PRESENTADA A

JUAN CARLOS PALMA

PROFESOR PRINCIPAL

DEPARTAMENTO ACADMICO DE QUMICA

FACULTAD DE CIENCIAS

APLICACIONES DE LAS TCNICAS INSTRUMENTALES DE ANLISIS EN

ALIMENTOS Y MEDIOAMBIENTALES

INTEGRANTES:

ANAMPA GARCA, ESTRELLA MAYTE

BARRETO CABRERA, ERIK JEFERSON

BERROCAL MAJERHUA, NADITZA ELIANA

CHICANA ZAPATA, WILSON DANIEL

JUNIO 2017
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CONTENIDO

INTRODUCCIN .. 3

MTODOS ELECTROQUMICOS

POTENCIOMETRA 4

CONDUCTIMETRA.9

ELECTROGRAVIMETRIA...11

VOLTAPEROMETRA..13

TECNICAS NO ESPECTROSCOPICAS

REFRACTOMETRIA18

DIFRACCION DE RAYOS X20

POLARIMETRA...22

TCNICAS ESPECTROSCPICAS

ESPECT. ABSORCION MOLECULAR UV-VIS.25

ESCPECT.. DE RADIACION IR...26

ESPECT. DE ABSORCION ATMICA...30

ESPECT. DE EMISION ATMICA..31

TECNICAS MAGNETICAS

RESONANCIA MAGNETICA NUCLEAR (RMN)..32

ESPECTROMETRIA DE MASAS.38

TECNICAS DE SEPARACION

CROMATOGRAFIA DE GASES...43

BIBLIOGRAFIA48
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INTRODUCCIN

Los mtodos electroqumicas, ampliamente utilizados, se basan en reacciones de oxidacin

y reduccin consistentes en una transferencia de electrones de unas especies qumicas a
otras; la especie que se oxida es el reductor y la que se reduce es el oxidante. (Torres, 2006)
El anlisis qumico consiste en el estudio de la materia con la finalidad de obtener
informacin cualitativa (identificacin de los componentes presentes en una muestra as
como de su estado y estructura) o cuantitativa (composicin en trminos de concentracin
de uno o varios de los componentes en una muestra). (Skoog, 1988)
Los mtodos instrumentales son mtodos analticos que se basan en la medida de las
propiedades fsicas de los analitos (conductividad, potencial de electrodo, absorcin o
emisin de luz, relacin carga/masa, fluorescencia,) para:
La determinacin cuantitativa o cualitativa de los analitos : mtodos no separativos.
La separacin de varios analitos: mtodos separativos.

Los sistemas instrumentales aplicados al anlisis y control qumicos son ampliamente

aceptados como mtodos que ahorran tiempo, requieren menos separaciones qumicas y
son seguros y sensibles. La ventaja que tienen sobre los mtodos de anlisis por va
hmeda deriva directamente del hecho de que determinan la composicin qumica por
medio de la medicin de las propiedades fsicas. Como resultado, los aparatos y los
procedimientos de inters son comunes tanto a lo que tradicionalmente se denomina
anlisis como a las investigaciones qumicas. (Pradillo, 2017)
Los mtodos instrumentales se diferencian de los mtodos analticos clsicos
principalmente en que no se requiere que haya reaccin qumica y que son mtodos
relativos. Es decir, se requiere realizar un calibrado para relacionar la seal medida con la
propiedad que se quiere obtener y esta relacin slo se puede aplicar a las condiciones en
la que se ha determinado. (Pradillo, 2017)
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MTODOS ELECTROQUMICOS

POTENCIOMETRA

El objetivo de una medicin potenciomtrica es obtener informacin acerca de la

composicin de una solucin mediante el potencial que aparece entre dos electrodos. La
medicin del potencial de la celda se determina bajo condiciones reversibles en forma
termodinmica y esto implica que se debe dejar pasar el tiempo suficiente para que la celda
se equilibre y que slo se podr extraer una corriente insignificante en el transcurso de la
determinacin (Harris, 2007).

Los potencimetros limitan el paso de la corriente elctrica (Intensidad)

provocando una cada de tensin en ellos al igual que en una resistencia, pero en este caso
el valor de la corriente y la tensin en el potencimetro las podemos variar solo con cambiar
el valor de su resistencia. En una resistencia fija estos valores seran siempre los mismos.

Modelo de potencimetro
Fuente: http://www.vilaglex.hu/Kemia/Html/PoteMetr.htm

INSTRUMENTACIN

El equipo necesario para llevar a cabo una potenciometra se compone de un

electrodo de referencia, un electrodo indicador y un dispositivo para medir el potencial,
denominado potencimetro.
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Fuente: http://potenciometria.blogspot.pe/
TIPOS DE ELECTRODOS

La seal analtica que se obtiene en potenciometra es una diferencia de potencial

entre dos electrodos, uno de los cuales debe ser sensible a la concentracin del analito
mientras el otro electrodo deber presentar un potencial constante, independiente de la
composicin de la dilucin en la que se encuentre. El electrodo que cumple esta condicin
se conoce como electrodo de referencia. Cualquier cambio en el potencial del sistema de
electrodos se deber a la contribucin del otro electrodo, llamado electrodo indicador,
sensible a los cambios en la composicin de la disolucin (Bermejo & Moreno, 2014).

ELECTRODOS DE REFERENCIA:

Con esta definicin se conoce a aquel electrodo cuyo potencial de semicelda es

conocido, constante y completamente insensible a la composicin de la disolucin en
estdio. Un electrodo de referencia ideal tiene las siguientes caractersticas:

Es reversible y obedece a la ecuacin de Nerst

Presenta un potencial constante todo el tiempo
Retorna a su potencial original despus de haber estado sometido a pequeas
corrientes
Presenta poca histresis con ciclos de temperatura
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Fuente: http://arturobola.tripod.com/ph.htm
A continuacin, se presenta los electrodos de referencia ms usuales:

A) ELECTRODOS DE CALOMELANOS:

Estn compuestos de mercurio en contacto con una solucin saturada de cloruro

de mercurio (I) que contiene tambin una concentracin conocida de cloruro de potasio. La
semicelda de este electrodo se puede representar como:

Hg / Hg2 Cl2 (sat), K Cl (x M ) //

Siendo X la concentracin molar de cloruro de potasio en la disolucin. El
potencial de electrodo para esta semicelda est determinado por la reaccin:

Hg2Cl2 (s) + 2 e- <====> 2 Hg ( l ) + 2 Cl-

Que tambin depende de la concentracin x de cloruro, por lo cual, esta cantidad se
debe especificar en la descripcin del electrodo.

De los electrodos de este tipo, el ms utilizado es el electrodo de calomelano

saturado ( ECS ) debido a la gran facilidad con la que se puede preparar. Sin embargo,
presenta ciertos inconvenientes tales como que su coeficiente de temperatura es
significativamente mayor en comparacin con otros; y tambin que al cambiar la
temperatura, el valor del nuevo potencial se alcanza lentamente debido al tiempo requerido
para restablecer el equilibrio de solubilidad del cloruro de potasio y de calomelanos. El
potencial del electrodo de calomelano saturado a 25C es de 0,2444 V (Klaes & Dusset,
2011).
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B) ELECTRODOS DE PLATA / CLORURO DE PLATA:

El sistema es semejante al anterior y consiste en un electrodo de plata sumergido en
una disolucin saturada de cloruro de potasio y cloruro de plata:

Ag / Ag Cl (sat), K Cl (xM) //
Cuya semirreaccin es:
Ag Cl (s) + e- <==> Ag (s) + Cl- E0= 0,199 V
Los modelos comerciales de este electrodo son semejantes en apariencia
externa a los electrodos de calomelanos, si bien en estos de plata / cloruro de plata, el tubo
interno se reemplaza por un alambre de plata recubierto con una capa de cloruro de plata
que se encuentra sumergido en una disolucin de cloruro de potasio saturada con cloruro
de plata.

Los electrodos de plata / cloruro de plata tienen la ventaja de que pueden

utilizarse a temperaturas superiores a 60C, mientras que los electrodos de calomelanos no.
Por otra parte los iones Hg ( I ) reaccionan con menos componentes de la muestra que los
iones plata. Tales reacciones pueden conducir a la obturacin de la unin entre el electrodo
y la disolucin del analito (Klaes & Dusset, 2011).

ELECTRODOS INDICADORES

En combinacin con el electrodo de referencia se utiliza el electrodo indicador, el

cual genera un potencial que vara de manera conocida con la actividad del analito, de
forma rpida y reproducible (Bermejo & Moreno, 2014).

Fuente: http://www.ictsl.net/productos/021b07961a0ad1e34/02e34698b40f2cd11.html
ELECTODOS INDICADORES METLICOS:
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Electrodos redox: electrodos que responden al potencial redox de una disolucin

formada por una o ms parejas redox. Los ms utilizados son aquellos constituidos por oro,
platino, paladio u otros metales inertes. estos electrodos actan como una fuente o como
un sumidero de los electrones transferidos desde un sistema redox presente en la disolucin.

Hay que resaltar que los procesos de transferencia de los electrones en los
electrodos inertes no suelen ser reversibles y, por lo tanto, lo electrodos inertes no
responden a muchas de las semirreacciones de las tablas de electrodos de una dorma
predecible.

Electrodos de primera clase: estn formados por un metal en contacto con una
disolucin que contiene sus iones. Por ejemplo, un hilo de plata en una disolucin de nitrato
de plata. El potencial del electrodo responde a la actividad de los iones plata en disolucin,
entre otros.

Electrodos de segunda clase: estn formados por un metal en contacto con una
disolucin saturada de una de sus sales poco solubles. Se basan en la propiedad de que
algunos metales no slo responden hacia sus propios cationes, sino que tambin son
sensibles a la actividad de aniones que forman precipitados poco solubles o complejos
estables con dichos cationes (Klaes & Dusset, 2011).

ELECTRODOS DE MEMBRANA O ELECTRODOS SELECTIVOS DE IONES:

Los electrodos selectivos de iones (ESI) implican la medida de un potencial de
membrana, es decir, permiten la determinacin rpida y selectiva de numerosos cationes y
aniones por medidas potenciomtricas directas. Se les denomina electrodos selectivos de
iones por la gran selectividad que tienen.

La respuesta de la clula electroqumica, por tanto, se basa en la interaccin entre

la membrana y el analito que altera el potencial a travs de dicha membrana. La selectividad
de la respuesta de potencial hacia la especie de inters depende de la especifidad de la
interaccin de la membrana con esa especie (Klaes & Dusset, 2011).
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ELECTRODOS DE MEMBRANA SENSIBLE A LOS GASES:

Los electrodos sensibles a los gases consisten en un ESI en contacto con una capa
fina de un electrolito acuoso que se encuentra en el interior de otro ESI rodeada de una
membrana permeable a los gases. Los gases pasan a travs de la membrana, se disuelven
en el electrlito y modifican la situacin de equilibrio del sistema. Esta modificacin es
detectada por el ESI y est relacionado con la presin parcial del gas en la muestra (Klaes
& Dusset, 2011).

ELECTRODOS DE MEMBRANA BIOCATALTICA: BIOSENSORES:

Estn formados por un ESI, o un electrodo sensible a los gases en contacto con una
capa fina de un material biocataltico. El biocatalizador convierte el sustrato (analito) en
un compuesto que puede ser detectado por el electrodo. Los electrodos de este tipo se
conocen como biosensores. La capa de biocatalizador est constituda por una enzima
inmovilizada que es escogida por su selectividad cataltica hacia el analito. Por ejemplo, la
ureasa inmovilizada en un gel de poliacrilamida situado en el extremo de un ESI para el
in NH4+ , da lugar a un electrodo selectivo para la determinacin de la urea. (Bermejo &
Moreno, 2014)

CONDUCTIMETRA

La conductividad de una disolucin es una medida del flujo de corriente que resulta
de la aplicacin de una fuerza elctrica dada, y depende directamente del nmero de
partculas cargadas que contiene. Todos los iones contribuyen al proceso de conduccin,
pero la fraccin de corriente transportada por cada especie est determinada por su
concentracin relativa y su movilidad inherente en el medio (Brunatti y de Napoli, 2009).
La conductividad de las disoluciones es medida a travs de un conductmetro, el cual posee
una celda que permite medir los cambios de esta magnitud fsica ante la adicin continua
y uniforme de reactivo titulante. La principal ventaja de las titulaciones con monitoreo
conductimtrico es que pueden analizarse disoluciones muy diluidas y/o coloreadas,
sistemas en que la reaccin no es suficientemente cuantitativa (Gmez-Biedma y cols.,
2002; Christian, 2009).

En este sentido, los vinos, los jugos naturales y las bebidas gaseosas, entre otras,
cumplen con parte de estas caractersticas fisicoqumicas antes sealadas. Particularmente,
en los vinos la acidez total es la concentracin de iones hidronio consumidos por valoracin
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con un estndar bsico para obtener el punto de equivalencia. Cuando se titula un cido
dbil o una mezcla de cidos dbiles, como los contenidos en el vino, con una base fuerte
y monitoreo conductimtrico se obtiene una curva de titulacin caracterstica. En ella, la
conductividad de la disolucin vara con un comportamiento prcticamente lineal en
algunas regiones, de manera que el punto de equivalencia puede ilustrarse grficamente
como la interseccin entre dos lneas. La importancia de la presente investigacin es
realizar una valoracin de la acidez titulable de vino tinto utilizando el mtodo visual, el
potenciomtrico y el conductimtrico como indicadores del punto de equivalencia
experimental. En funcin de los resultados que arroje el monitoreo conductimtrico se
utilizar en la prctica docente de qumica analtica.

Los resultados con monitoreo conductimtrico se obtuvo un promedio de 7,99

0,06 g/L (c.v. = 0,75%) de cido tartrico siendo mayor que los obtenidos por los mtodos
con monitoreo visual (5,35 0,06 g/L) y potenciomtrico (5,16 0,03 g/L). El punto de
equivalencia experimental min con los grficos de los valores de conductividad corregida
en funcin del volumen del titulante adicionado, obtenindose dos rectas cuyo punto de
interseccin representa el punto de equivalencia experimental. Durante una titulacin con
monitoreo conductimtrico, el volumen de la disolucin crece constantemente, lo que
genera curvas de titulacin no lineales, a menos que se corrija la conductividad por este
efecto. La correccin puede efectuarse multiplicando la conductividad observada por el
factor (V0+ V) / V0, donde V0 lumen inicial de la disolucin y V es el volumen total del
reactivo titulante agregado. La correccin presupone que la conductividad es una funcin
lineal de la dilucin (Saavedra y cols., 2010). Debido a esto y con el objeto de mantener V
pequeo, se utiliz el titulante varias veces ms concentrado (0,3730 N) que en los mtodos
antes mencionados (0,0937 y 0,1926 N).

En una prueba se muestran, en la figura 3, los resultados de las lecturas de

conductividad corregidas por dilucin. Este comportamiento grfico obtenido fue el
esperado (Harris, 2001), observndose un aumento paulatino en la conductividad debido al
aumento proporcional de los iones sodio liberados antes del punto de equivalencia. Sin
embargo, una vez superado ste, el rpido aumento de los iones hidroxilo, produjo un
aumento notable en la pendiente de la recta. Esto puede deberse a que el vino contiene una
mezcla de cidos, flavonoides, cationes y ms compuestos minoritarios. Lo anterior
demuestra que el mtodo conductimtrico presenta una selectividad diferente al detectar la
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totalidad de electrolitos, dando evidencia de la contribucin de otros cidos presentes en el

vino. En este sentido, Darias-Martin y cols. (2003) proponen una magnitud especial para
la acidez titulable obtenida por el mtodo conductimtrico la cual definen como Tac (acidez
total) y es mayor a la acidez titulable obtenida por titulacin con monitoreo visual. Este
ltimo mantiene una correlacin notoria con los resultados obtenidos con monitoreo
potenciomtrico.

Fuente: Cez, M; Garca, A; Bernal, A; Federico, R; Wicochea, J. 2010.

Conductimetra y titulaciones, cundo, por qu y para qu? Educacin qumica 22(2).

ELECTROGRAVIMETRA

COULUMBIMETRA

La coulombimetra permite medir la cantidad de soluto que hay en una disolucin

haciendo reaccionar el soluto con el electrodo de trabajo. Conociendo la corriente que
circula y el tiempo que dura el ensayo es posible saber la carga que se ha empleado en la
reaccin, y, por tanto, aplicando la ley de Faraday, puede calcularse la cantidad de soluto
que ha reaccionado. Existen dos tipos de coulombimetra:
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1. Coulombimetra controlada por tensin

En este caso se aplica una tensin constante durante el tiempo necesario para que
todo el soluto presente en la disolucin reaccione. Al aplicar una tensin constante, la
corriente por electrodo de trabajo va decreciendo de forma exponencial hasta que se hace
cero (cuando se haya consumido todo el soluto). Para obtener la carga total es necesario
integrar la corriente medida a lo largo del tiempo de ensayo. En disoluciones en las que
haya varios solutos el potencial aplicado se establece de forma que permita nicamente la
reaccin del soluto que se desea cuantificar. Para poder aplicar un potencial controlado al
electrodo de trabajo es necesario utilizar una configuracin a 3 electrodos conectada a un
potenciostato.

2. Coulombimetra controlada por corriente

En este caso se aplica una corriente constante, lo que por un lado acelera el proceso
y por otro facilita el clculo de carga, ya que basta con multiplicar el valor de la corriente
por el tiempo de ensayo. Sin embargo, esta tcnica plantea dos problemas. En primer lugar,
conforme el soluto se va consumiendo la corriente empezar a disminuir. Para mantenerla
constante ser necesario aumentar la tensin aplicada al electrodo de trabajo para mantener
constante el ritmo de consumo del soluto. Pero ese aumento puede provocar nuevas
reacciones en las que no est involucrado el soluto, con lo que no se cumplira la relacin
entre la carga medida y la cantidad de soluto consumida. En ocasiones para mantener el
ritmo de consumo del analito sin provocar reacciones que no contribuyan a su consumo se
agregan sustancias mediadoras [16]. Se trata de sustancias que reaccionan fcilmente con
el analito permitiendo que la corriente consumida se corresponda exactamente con el
consumo del analito. En segundo lugar, en este tipo de coulombimetra resulta difcil
conocer cundo el ensayo ha concluido. Para ello es necesario detectar en qu momento el
analito ha sido completamente consumido. Normalmente esto se consigue mediante
tcnicas auxiliares como la potenciometra (Alcaiz,2011).
 ~ 13 ~

Figura 1. Diagrama de la instrumentacin para la coulombimetra a corriente

constante.

VOLTAPEROMETRA

En la voltamperometra se mide la intensidad en funcin del potencial aplicado

"seal de excitacin" en condiciones que favorecen la polarizacin de un electrodo
indicador o de trabajo. Las curvas obtenidas nos dan la informacin sobre el analito.

I) Voltamperometra de barrido lineal

I.A) Instrumentacin

Celda de tres electrodos sumergida en la disolucin del analito. Al electrolito

problema se le suele aadir un exceso de electrlito no reactivo "electrlito soporte". Se
denomina "de barrido lineal" porque se modifica linealmente el potencial del microlectrodo
durante el anlisis.

* Electrodo de trabajo o "microelectrodo". Hay varios tipos:

1. Microelectrodo de disco

2. Microelectrodos de mercurio (electrodo de disco con electrodeposicin de Hg).

3. Electrodo de gotas de mercurio (capilar que gotea mercurio desde una columna
de mercurio cada 2 a 6 s). Es el ms usado, llamndose a la voltamperometra que lo usa
"polarografa".
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* Electrodo de referencia: con potencial constante.

* Electrodo auxiliar "contraelectrodo": espiral de hilo de platino o un depsito de

mercurio que funciona como conductor de la electricidad desde la fuente a travs de la
disolucin al microelectrodo.

* Fuente generadora de potencial de barrido lineal.

I.B) Voltamperogramas de barrido lineal

Como se observa en dicha figura, son caractersticas de ella:

* Intensidad lmite "il": que es la intensidad que se alcanza al final de la curva

polarogrfica, cuando la velocidad de transporte del reactivo hasta la superficie del
electrodo (transporte de masas) alcanza su valor lmite mximo. Al ser directamente
proporcional a la concentracin de reactivo, esta il tiene gran valor cuantitativo.

* Potencial de semionda "E1/2": que se define como el potencial al cual la

intensidad de corriente es la mitad de la iL. Este potencial de semionda tiene valor
cualitativo porque depende de la naturaleza de la especie que sufre la reaccin redox.

I.C) Tipos de voltamperiometra de barrido lineal

Para alcanzar rpidamente intensidades lmites reproducibles, es necesario que la

disolucin o el microelectrodo estn en movimiento continuo reproducible. Se originan as
dos tipos de voltamperometras:

I.C.1) Voltamperometra hidrodinmica:

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El reactivo se transporta a la superficie del electrodo por conveccin (agitacin) y

difusin (debida al gradiente de analito entre la capa de lquido en contacto con la superficie
del electrodo y el seno de la disolucin).

Aplicaciones:

* Detector para HPLC: en este caso el microelectrodo se monta sobre el tubo de

salida de la columna de HPLC. No es necesaria la agitacin de la muestra porque est en
movimiento, bombeada por el sistema HPLC.

* Sensores voltamperomtricos: son muy usados en anlisis clnicos, entre ellos

tenemos el sensor de oxgeno de Clark y el electrodo de glucosa.

Ej. Electrodo de glucosa: consta de una membrana con tres capas:

1. Pelcula de policarbonato permeable a la glucosa: impermeable a las protenas y

a otros constituyentes de la sangre.

2. Pelcula intermedia con la enzima glucosa oxidasa inmovilizada.

3. Membrana de acetato de celulosa: permeable a molculas pequeas como el

perxido de hidrgeno.

El H2O2 producido difunde hacia la superficie del electrodo, donde se oxida a

oxgeno. La intensidad de corriente resultante es directamente proporcional a la
concentracin de glucosa en la disolucin.

* Valoraciones amperomtricas. Si uno de los reactivos o productos de la reaccin

de valoracin se oxida o reduce en el microelectrodo, se puede estimar el punto final de la
titulacin midiendo la intensidad de corriente, a un potencial cercano al del potencial de la
zona de iL, en funcin del volumen de reactivo. Las lecturas a ambos lados del punto de
equivalencia son lneas rectas con distintas pendientes. El punto final se determina en el
punto en que intersectan.

I.C.2) Polarografa

La polarografa utiliza un electrodo de gotas de mercurio como electrodo de trabajo.

No hay agitacin, por lo que el mecanismo responsable del transporte de masas al electrodo
es la difusin. Las intensidades lmite se suelen denominar intensidades de difusin "id".
 ~ 16 ~

II) Voltamperometra de impulso diferencial

Se aplican seales de excitacin en impulsos (Ej. impulsos de 50 mV durante los

ltimos 50 milisegundos de la vida de la gota de mercurio), realizando dos medidas de
intensidad: una, se efecta antes del impulso, y otra, despus del impulso. La diferencia de
intensidad por impulso (i) se registra en funcin del potencial que aumenta linealmente.
A diferencia de la voltamperometra de barrido lineal, se obtiene una curva en forma de
pico. La altura del pico es directamente proporcional a la concentracin de sustancia. Nota:
para sincronizar el impulso con la gota, sta se desprende en el momento adecuado por un
medio mecnico.

Ventajas:

* Mayor sensibilidad, selectividad y ms rpida que la voltamperometra de

barrido lineal.

* Se pueden diferenciar picos individuales de sustancias con potenciales de

semionda mucho menores que en la polarografa clsica que requiere una diferencia de
unos 0.2 V para la resolucin de las ondas.

* Los lmites de deteccin con polarografa de impulsos diferencial son dos o tres
rdenes de magnitud ms bajos que los de la polarografa clsica (10-7 a 10-8 M).

Debido a estas dos ventajas es el procedimiento polarogrfico analtico ms

utilizado.

I.E.) Voltamperiometra de redisolucin

Muy importante en el anlisis de trazas (stas se concentran en el electrodo).

Primero: el analito se deposita en el microelectrodo.

Segundo: el analito depositado se determina por un mtodo voltamperomtrico.

Hay dos mtodos:

* Mtodo de redisolucin andica: el microelectrodo se comporta como ctodo en

la etapa de deposicin y como nodo en la de redisolucin.
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* Mtodos de redisolucin catdica: al revs.

II) Aplicaciones de la voltamperiometra

Anlisis polarogrfico inorgnico:

a) Cationes metlicos: la mayora, incluso los alcalinos y alcalinotrreos, se reducen

en el electrodo de gotas de mercurio siempre que el electrlito soporte no reaccione a los
elevados potenciales requeridos (se emplean haluros de tetraalquilamonio como
electrlitos de soporte debido a sus elevados potenciales de reduccin).

b) Aniones inorgnicos (BrO3-, IO3-, dicromato, NO3-, ...). Es necesario utilizar

un tampn para obtener resultados reproducibles, ya que el H+ interviene en los procesos
de xido-reduccin de estas especies.

Anlisis polarogrfico orgnico: el nmero de grupos funcionales que se puede

oxidar en un electrodo de gotas de mercurio es limitado ya que, el uso de potenciales
andicos mayores de +0,4 V oxidan al mercurio. Sin embargo, los grupos funcionales
orgnicos oxidables pueden estudiarse con microelectrodos de platino, oro o carbn. En
polarografa orgnica los problemas de solubilidad obligan a utilizar mezclas acuosas con
cantidades variables de disolventes miscibles (alcoholes, glicoles, formamida) (Gomz
2002).
 ~ 18 ~

TCNICAS NO ESPECTROSCPICAS

REFRACTOMETRA

Es una tcnica analtica que consiste en la medida del ndice de refraccin de un lquido
con objeto de investigar su composicin si se trata de una disolucin o de su pureza si es
un compuesto nico. La refraccin es la desviacin que experimentan los rayos
luminosos al pasar de un medio transparente de densidad determinada a otro cuya
densidad es distinta de la del anterior. Si bien este fenmeno se presenta generalmente al
paso de un medio a otro, existe un caso en el que dicho paso no implica refraccin, que es
cuando la incidencia se produce perpendicularmente a la superficie de separacin de
ambos medios. La refraccin es fundamental para la explicacin de los procesos que
experimenta la luz en prismas y lentes de todo tipo. Mientras que la luz se propaga con
velocidades diferentes dependiendo de la densidad del medio por el que lo hace (cuanto
mayor es la densidad de ste tanto ms lenta es la propagacin de la luz), la intensidad del
fenmeno de la refraccin depende del grado de la variacin de la velocidad de
propagacin (cuanto mayor es ste tanto mayor es la refraccin que experimenta el rayo y
en consecuencia tanto mayor es el poder de refraccin del medio.(Skoog y Holler,1994)

http://www.valiometro.pe/refractometro

Refractmetro mecnico de 0-32% brix TR-032ATC, Modelo: TR-032ATC

Refractmetro ideal medir lquidos, emulsiones, espesantes, colas, vinos y

emulsiones en Brix.

o Rango: 0 ... 32 % Brix

o Resolucin: 0,2 %
o Precisin: 0,2 %
 ~ 19 ~

Por otra parte, la luz blanca es el resultado de la suma de radiaciones de diferentes

longitudes de onda correspondientes al visible. Si se ilumina el refractmetro con luz
blanca, al atravesar el prisma se produce el fenmeno de difraccin de la luz, que se
visualiza en el retculo como una serie de bandas de distintos colores en la zona de
separacin luz-sombra. Esta situacin no permitira determinar correctamente la
verdadera lnea de separacin de estas regiones. Para solucionar este inconveniente, el
refractmetro posee en el interior del anteojo un sistema de prismas, denominado prismas
de Amici, que recomponen la luz antes de llegar al ocular, obteniendo as una correcta
visualizacin de la lnea divisoria luz - sombra. Ello se logra girando dichos prismas
mediante una perilla exterior.

http://virtual.ffyb.uba.ar/file.php/29/M4/FUND_M4_REFRACTO.pdf
 ~ 20 ~

DIFRACCION DE RAYOS X

La difraccin de rayos X es uno de los fenmenos fsicos que se producen al

interaccionar un haz de rayos X, de una determinada longitud de onda, con una sustancia
cristalina. La difraccin de rayos X se basa en la dispersin coherente del haz de rayos X
por parte de la materia (se mantiene la longitud de onda de la radiacin) y en la
interferencia constructiva de las ondas que estn en fase y que se dispersan en
determinadas direcciones del espacio. (Vendrell M., 2013)

El fenmeno de la difraccin puede describirse con la Ley de Bragg, que predice la

direccin en la que se da interferencia constructiva entre haces de rayos X dispersados
coherentemente por un cristal:

n = 2 d sen
El espectro contnuo. Los rayos X se producen cuando una partcula cargada elctricamente
con suficiente energa cintica es frenada rpidamente. Los electrones sonlas partculas
utilizadas habitualmente y la radiacin se obtiene en un dispositivo conocido como tubo de
rayos x

https://www.upct.es/~minaeees/difraccion_rayosx.pdf
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ESQUEMA DE DIFRACCION DE RAYOS X

Fuente: The Rogues Gallery

EQUIPO DE DIFRACCION DE RAYOS X

Difractmetro Multi-propsito PANalytical modelo X'Pert MPD .

http://pendientedemigracion.ucm.es/centros/webs/cai5084/index.php
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POLARIMETRIA

La polarimetra es una tcnica que se basa en la medicin de la rotacin ptica producida

sobre un haz de luz linealmente polarizada al pasar por una sustancia pticamente activa.
La actividad ptica rotatoria de una sustancia tiene su origen en la asimetra estructural
de las molculas.
Es una tcnica no destructiva consistente en medir la actividad ptica de compuestos
tanto orgnicos como inorgnicos, puede darse tanto en slidos, como en lquidos y
soluciones.
Un compuesto es considerado pticamente activo si la luz linealmente polarizada sufre
una rotacin cuando pasa a travs de una muestra de dicho compuesto. La actividad
ptica viene determinada por la estructura molecular y la concentracin de molculas
quirales.
El mtodo polarimtrico es una forma simple y precisa para la determinacin e
investigacin de estructuras en macro, semimicro y micro anlisis de compuestos cuyo
coste econmico o cuya dificultad para duplicarlos es alta. La polarimetra se usa en
control de calidad, control de procesos e investigacin en la industria farmacutica,
qumica, aceites esenciales, alimentacin y aromas.( Carla De Angelis,2008)

Esquema de un polarmetro de Laurent bsico

http://ecaths1.s3.amazonaws.com/labtia5/816541115.Polarimetr%C3%ADa.pdf
 ~ 23 ~

http://ecaths1.s3.amazonaws.com/labtia5/816541115.Polarimetr%C3%ADa.pdf
 ~ 24 ~

TCNICAS ESPECTROSCPICAS

Tcnicas espectroscpicas se basan en la interaccin de la radiacin electromagntica con

la materia. A travs de esta interaccin las molculas pueden pasar de un estado
energtico, m,a otro estado energtico distinto, l, absorbiendo una cantidad de energa
radiante igual a la diferencia energtica existente entre los dos niveles: El Em.(Castro
y Litter,2010)
Para conseguir esto, las molculas absorben un fotn de una radiacin tal que:

Debido a la existencia de diferentes tipos de energa: de los electrones en s, de los

movimientos vibracionales de las molculas, de la rotacin de las mismas...etc., las
molculas pueden interaccionar con radiaciones electromagnticas de un rango muy
amplio de longitudes de onda, dando lugar a distintos tipos de espectroscopas segn las
diferentes regiones. Un esquema podra ser el siguiente:

http://www.bvsde.paho.org/texcom/cd045364/MCEcap3.pdf
 ~ 25 ~

ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIN MOLECULAR UV-VISIBLE

La absorcin de radiacin ultravioleta- visible es utilizada en gran medida para identificar

y determinar muchas especies qumicas inorgnicas, orgnicas y bioqumicas.
La espectroscopia de absorcin molecular en las regiones ultravioleta y visible del
espectro se
utiliza en su mayor parte para el anlisis cuantitativo y posiblemente es aplicada de
manera ms
extensa en los laboratorios qumicos y clnicos que cualquier otra tcnica. (Skoog, 2014).

Esta tcnica se basa en la absorcin, por parte del analito de radiacin electromagntica
de la regin ultravioleta (UV) y visible del espectro. La radiacin ultravioleta
corresponde a longitudes de onda desde 10 a 380 nm aproximadamente. En la
espectroscopia UV se hace uso nicamente de la regin denominada ultravioleta prximo
de 180 a 380 nm, ya que la radiacin UV entre 10 y 180 nm (UV lejano) es absorbida por
el oxgeno del aire, por lo que se hace necesario llevar a cabo la medidas en ausencia de
este gas, lo que resulta en un mayor grado de complejidad instrumental. Por otro lado la
regin visible del espectro se extiende desde los 380 a los 780 nm. (Bermejo y Moreno,
2014)

Gary Christian, 2009 explica sobre los detectores UV-Vis. Estos detectores varan en
funcin de la regin de longitudes de onda que se va a medir. Un fototubo o fotocelda es
de uso comn en las regiones ultravioleta y visible. ste consiste de un ctodo fotoemisor
y un nodo. Se aplica un alto voltaje entre nodo y ctodo. Cuando un fotn entra por la
ventana del tubo y llega al ctodo se emite un electrn que es atrado hacia el nodo,
haciendo que pase una corriente que se puede amplificar y medir. La respuesta del
material fotoemisor depende de la longitud de onda, y se dispone de diversos fototubos
para las diferentes regiones del espectro. Por ejemplo, se puede usar uno para las partes
azul y ultravioleta, y un segundo para la parte roja del espectro.

Segn Douglas A. Skoog, la espectroscopia molecular de absorcin en las regiones

ultravioleta y visible es una de las herramientas disponibles ms tiles para el anlisis
cuantitativo.
 ~ 26 ~

ESPECTROFOTMETRO
UV-VISIBLE

La medida de la absorbancia se lleva a cabo con la ayuda de u espectrofotmetro , que en

esencia consta de un monocromador (prisma o red de difraccin) que controla la longitud
de onda de la radiacin que se hace incidir sobre la muestra. La radiacin no absorbida se
detecta y mide convenientemente. La absorbancia de la muestra se compara con la de una
referencia que consta estrictamente de disolvente. (CONNOR, K.A., 1980)

ESPECTROSCOPIA DE RADIACIN INFRARROJA

la espectroscopia infrarroja se basa en la absorcin por parte de la materia, de la radiacin

electromagntica de la regin correspondiente a longitudes de onda de entre
780nm(donde limita con la regin visible) y 1 nm.Los fotones de la radiacin IR son
menos energticos por tanto que los correspondientes a la regin visible, y su absorbancia
por parte de una especie qumica origina transiciones a estados vibracionales de4 mayor
energa ,dentro del estado elctrico en el que se encuentra dicha especie. (Bermejo y
Moreno, 2014)
 ~ 27 ~

https://es.slideshare.net/jhonwflorez/espectroscopa-infrarroja

Por qu es til la espectroscopia de infrarrojo?

1. Las bandas vibracionales de muchos grupos funcionales aparecen a
longitudes de onda caractersticas.
2. El espectro en su conjunto constituye un criterio inequvoco para la
identificacin de una molcula.
La complejidad de un espectro IR permite su uso para identificar sustancias ya
que cada compuesto tiene un espectro caracterstico
Por otra parte la identificacin de ciertas bandas caractersticas brinda
informacin sobre la presencia de grupos funcionales
Todos los enlaces de una molcula van a sufrir transiciones vibracionales, cada una con
una frecuencia determinada y caracterstica, y cada una de estas transiciones va a
provocar una banda de absorcin (William J.,2015)
 ~ 28 ~

El espectro IR va a registrar todas estas bandas

https://analisisinstrumentalfisico.files.wordpress.com/2012/09/introduccion-a-la-espectroscopia-de-absorcion-molecular-uv.pdf

Espectro IR de la butanona
O

https://analisisinstrumentalfisico.files.wordpress.com/2012/09/introduccion-a-la-espectroscopia-de-absorcion-molecular-uv.pdf
 ~ 29 ~

Espectro IR del ciclobutanol

OH

https://analisisinstrumentalfisico.files.wordpress.com/2012/09/introduccion-a-la-espectroscopia-de-absorcion-molecular-uv.pdf

INTERPRETACIN DE UN ESPECTRO IR

Carbon-oxygen doubl, C=O (1680-1750)

Carbon-oxygen single, C-O (1000-1300)

Oxygen-hydrogen, O-H (2500-3300)

Carbon-hydrogen, C-H (2853-2962)

Carbon-carbon single, C-C (H.dact)

 ~ 30 ~

ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIN ATMICA

Se basa en la absorcin, emisin y fluorescencia de radiacin electromagntica por

partculas atomicas.Se emplean principalmente radiaciones del espectro ultravioleta y
visible y rayos X.
La emisin o absorcin de rayos x comporta la excitacin de los electrones ms cercanos
al ncleo y, por tanto, que no participan enlaces. En consecuencia los espectros atmicos
de rayos x se producen con independencia del estado de combinacin del elemento en la
muestra. (Bermejo y Moreno, 2014)

https://es.slideshare.net/alexamorincardenas/exposicin-espectrofotometra
 ~ 31 ~

ESPECTROSCOPIA DE EMISION ATMICA

En principio la espectroscopia de emisin puede aplicarse tanto a tomos como a

molculas, pero la emisin molecular no tiene apenas aplicaciones analticas. Se
fundamenta en la medicin de la intensidad de la radiacin emitida por tomos excitados,
es decir, por tomos cuyos electrones de valencia se encuentran en un estado electrnico
excitado. (Bermejo y Moreno, 2014)

Por tanto, hay que atomizar la muestra, y, adems, excitarla. Se hace necesario una fuente
de energa que realice las dos funciones:
Debe proporcionarse suficiente energa como para convertir los compuestos en
tomos gaseosos
Debe proporcionarse suficiente energa como para excitar los electrones de los
tomos gaseosos

https://www.emaze.com/@ALWCFCWI/Instrumental
 ~ 32 ~

MTODOS MAGNTICOS

RESONANCIA MAGNTICA NUCLEAR

La tecnologa de la RM se basa en los momentos magnticos que presentan los ncleos

atmicos. El ncleo del tomo est constituido por un determinado nmero de protones y
neutrones (la nica excepcin es el ncleo de hidrgeno que es un solo protn), y tiene un
movimiento colectivo complejo de rotacin sobre su propio eje (Figura 1). Esta rotacin le
confiere al protn, desde el punto de vista mecnico, un momento cintico
denominado espn, representado por el vector , con la misma direccin de su eje de
rotacin y magnitud expresada en [Hz] y, desde el punto de vista elctrico, un momento
magntico representado por el vector de imantacin cuya magnitud se expresa en teslas
[T].

Figura 1. Momentos resultantes sobre un protn.

De acuerdo con la mecnica cuntica depende del nmero

cuntico I caracterstico de cada istopo y de la cercana del protn al ncleo atmico. La
direccin de c, debe estar cuantizada en el espacio, esto significa que deben especificarse
los valores de la proyeccin de en la misma direccin vertical z del sistema de

coordenadas cartesianas en el que el campo magntico externo acta sobre el protn.

Para el ncleo del hidrgeno, con I=1/2, este protn presenta dos posibles orientaciones
 ~ 33 ~

que corresponden a dos niveles de energa. El momento magntico es proporcional al

momento cintico de rotacin mediante la siguiente expresin:

Donde g es la constante de giro magntico en [MHzT-1], constante propia de cada

ncleo que relaciona ambos momentos. Para las dos posibles orientaciones del protn, se
tiene que su momento magntico , es:

Donde es la constante de Planck (6,626x10-34/(2p) Js). En RM deben

considerarse dos clases de momentos magnticos; los momentos magnticos individuales
de cada protn ( ) denominados momentos microscpicos, los cuales se estudian con las
leyes de la fsica cuntica, y los momentos magnticos macroscpicos ( ) asociados a
volmenes de materia (vxeles), que se estudian con las leyes clsicas del
electromagnetismo. Cada vxel posee un momento magntico macroscpico que
corresponde al sumatorio de todos los momentos individuales de sus protones, esto es:

Comportamiento del momento magntico. La interaccin de los momentos

magnticos y con un campo magntico externo genera tres fenmenos

importantes que deben ser considerados de forma separada a escala microscpica (modelo
cuntico) y a escala macroscpica (modelo clsico); estos fenmenos son: la orientacin
del momento, la energa de interaccin y el movimiento de precesin.

Orientacin del momento. En un campo los momentos microscpicos de los

distintos protones se orientan segn dos posibles ngulos cuyos valores son suplementarios
q (p-q) como se indica en la Figura 2a. Sin embargo, los momentos pueden localizarse
en una posicin cualquiera sobre el cono definido por los ngulos q y (p-q) (Figura 2b).
 ~ 34 ~

Figura 2. Orientacin posible de en un campo .

En ausencia del campo exterior los diferentes momentos microscpicos estn

orientados en forma aleatoria en cualquier direccin y su suma es nula, pero en presencia

de se orientan segn uno de los ngulos antes mencionados apareciendo el vector de

imantacin macroscpica , paralelo a .

Secuencias para la reconstruccin de imgenes RMI. El procedimiento bsico

simplificado para la reconstruccin de una imagen de RM en dos dimensiones se resume
en los siguientes 5 pasos representados por una secuencia (diagrama de eventos medidos
en el tiempo, Figura 8:

1-Pulso de RF de 90 para excitar los espines.

2-Pulso de gradiente de seleccin Gs del plano de corte en la muestra

3-Pulso de gradiente de codificacin de la fase Gf.

4-Pulso de gradiente de codificacin de la frecuencia Gf y registro de la seal de RF emitida

(n puntos de datos).

5-Incremento del valor del gradiente de codificacin de fase Gf y repeticin de los pasos 1
a 4, m veces.
 ~ 35 ~

Figura 8. Secuencia simplificada de reconstruccin de una imagen FT bidimensional.

En la secuencia tpica 90 FID mostrada en la Figura 8, la ordenada y la abscisa

indican la magnitud y la duracin respectivamente de los pulsos de gradientes de campo
magntico. Los pulsos 1 y 2 se programan simultneamente. Una vez el pulso de RF
finaliza, el Gs tambin es suprimido e inmediatamente se activa Gf que, a su vez al finalizar,
permite dar inicio a Gf y el registro simultneo de la seal FID al cabo de un tiempo
denominado tiempo eco TE. Esta secuencia de pulsos se repite normalmente entre 128 y
256 veces.

El tiempo empleado en la repeticin de la secuencia es denominado TR y cada vez

que la secuencia se repite, la magnitud de Gf es incrementada en forma lineal. Por cada
localizacin que se quiera determinar, en la direccin de aplicacin de Gf, ser necesario
realizar un incremento de este gradiente y hacer el registro de una seal FID. Las seales
FID son adquiridas en el dominio del tiempo f(t) y son procesadas mediante la FT para
tener la localizacin de los espines. Primero se aplica la FT en la direccin de Gw para
extraer la informacin de las frecuencias dominantes f(w) y luego en la direccin de Gf para
extraer la informacin de la localizacin en esta direccin. Los datos de la FT son
mostrados como una imagen a travs de la conversin de las intensidades de los picos de
frecuencia y fase a intensidades de brillo de pxel (picture element). As la imagen RMI
obtenida es una matriz de m filas por n columnas, en la cual Gf permite codificar las
lneas m y Gw permite codificar las columnas. Por tanto, en cada pxel de la matriz de la
imagen se codifica la seal (wi, fj) emitida por un grupo de protones contenidos en un vxel.

La tecnologa RM de baja resolucin (escala macroscpica) es la ms utilizada en

el sector de los alimentos. En sta rea se han desarrollado instrumentos de RM para
 ~ 36 ~

aplicaciones especficas, destacndose los que cuantifican el contenido de slidos en grasas

y aceites; los trabajos en determinacin de la razn slido-lquido en margarinas y grasas
comestibles, la evaluacin del contenido de aceites en semillas oleaginosas, del contenido
de grasa y humedad de la leche en polvo y derivados lcteos, del contenido de aceites y
grasas en carnes frescas o enlatadas y pescados, del contenido de humedad en azucares,
pulpa de remolacha, pur de tomate, humedad de arroz, fideos y pastas.

Investigacin con RM en productos vegetales y frutas. Desde 1977 cuando fue

adquirida y publicada la primera imagen RMI de una fruta, especficamente un
limn, Figura 9, Hinshaw et al. (1977), se han realizado numerosas investigaciones
utilizando esta tecnologa para estudiar, de forma no destructiva, la calidad interna de frutas
y productos hortcolas, las cuales han sido recogidas por Chen y Sun, 1991; Schrader,
Litchfield y Schmidt, 1992; McCarthy, 1994; Abbott et al., 1997; Clark et al., 1997; Faust,
Wang y Maas, 1997; Hills, 1998; Ishida et al., 2000; Hills y Clark, 2003; Butz, Hoffmann
y Tauscher, 2005.

Figura 9. Primera imagen RMI realizada en limn (Hinshaw, 1977).

Los estudios de calidad en frutas y vegetales con RM han sido llevados a cabo
principalmente en las siguientes reas: crecimiento de las frutas, evaluacin de la
maduracin, deteccin de defectos internos, estudios de desrdenes fisiolgicos y respuesta
a tratamientos poscosecha. A continuacin, se destacan algunos de estos trabajos.

Daos por insectos. Chen, McCarthy y Kauten (1989), obtuvieron imgenes RMI
de pera asitica mostrando las cavidades y galeras producidas por larvas al interior de la
 ~ 37 ~

fruta, y Mazucco et al. (1993), citados por Clark et al. (1997), obtuvieron imgenes RMI
de mango infestado por larvas de mosca de la fruta al momento de la cosecha y varios das
despus. Aristizabal (2006), tambin capt imgenes de la evolucin durante varios das
del dao interior producido en melocoton por larvas de la mosca del Mediterrneo Ceratitis
capitata (Figura 10).

Figura 10. Imgenes RMI de daos por Ceratitis capitata en melocotn (Arsitizbal,
2006).

Daos por hongos. Alteraciones en tejidos internos producidas por Botrytis

cinerea en frambuesa roja, grosella negra y uva; Botrytis cinerea, Colletotrichum
acutatum y Phytophtora cactorum en fresa; P. infestans, Phoma foveata, Fusarium
sulphureum y F. coeruleum en patata y Penicillium digitatum en mandarina Fortuna y
naranja Valencia; mostraron en todo los casos diferentes atributos en las imgenes RMI
con relacin a los tejidos sanos (Goodman, Williamson y Chudek, 1992; Goodman et al.,
1996; Clark et al., 1997; Glidewel et al., 1997; Galed et al., 2004). Tambin, Jagannathan,
Govindaraju y Raghunathan (1995), utilizando imgenes RMI observaron en fruta de coco
en estado rancio, la extensin del dao interno y la degradacin debida a un crecimiento
fngico. Aristizbal (2006), visualiz en imgenes RMI las podredumbres interiores
producidas por Alternaria citri, Diplodia natalensis y Botrytis cinerea en naranja Navel
Barnfield con apariencia externa completamente sana (Figura 11).
 ~ 38 ~

Figura 11. Imgenes RMI de daos internos en naranja producidos por los hongos:
a. Alternaria citri, b. Diplodia natalensis, c. Botrytis cinerea.

Fuente: Aristizbal, ID. 2007. La Resonancia Magntica y sus Aplicaciones en la

Agroindustria, una Revisin. Revista de la Facultad Nacional de Agronoma de Medelln
60(2).

ESPECTROMETRA DE MASAS

La espectrometra de masas est basada en el diferente comportamiento que

presentan los iones que se forman por las diferentes tcnicas de ionizacin, al atravesar
campos elctricos y magnticos. As dichos iones son separados en funcin de su relacin
masa/carga (m/z) y detectados posteriormente. Un espectrmetro de masas consta de varios
componentes bsicos:

Dispositivo de introduccin de la muestra.

Cmara de ionizacin o fuente, donde se generan los iones a partir de las sustancias
qumicas a analizar.
Analizador, que diferencia los iones generados en funcin de su relacin m/z
Detector que produce una seal elctrica amplificada para cada uno de los iones
generados.

As, una vez separadas las sustancias en el cromatgrafo, es necesario ionizar las
molculas y obtener iones en fase gaseosa. Este proceso tiene lugar en la fuente de
ionizacin y actualmente existen diferentes tcnicas que permiten llevar a cabo dicha
ionizacin. Entre las ms importantes destacan la ionizacin electrnica, que se basa en el
bombardeo de electrones o la ionizacin qumica, donde la ionizacin se realiza a travs
de choques con molculas previamente ionizadas como metanol. Para el acoplamiento con
los cromatgrafos de lquidos, la ionizacin a presin atmosfrica (API) ha tenido un gran
 ~ 39 ~

xito ya sea mediante la modalidad de electrospray o la denominada ionizacin qumica a

presin atmosfrica, siendo la ms empleada en la mayora de los equipos.

Una vez generados los iones son introducidos en el analizador, existiendo distintas
modalidades, siendo el ms usado el denominado cuadrupolo debido a su gran robustez
para anlisis de rutina y su relativo bajo costo comparado con otros como la trampa de
iones o los analizadores de tiempo de vuelo. Este analizador se compone de 4 barras
alargadas conectadas elctricamente entre s en pares opuestos a los que se le aplica un
voltaje variable y, para un voltaje dado, slo los iones con una m/z determinada presentarn
una trayectoria estable y podrn ser detectados (iones resonantes) mientras que el resto son
expulsados del cuadrupolo y no llegan al detector (iones no resonantes).

Estos analizadores pueden trabajar en dos modos bsicos. Si operan en modo

barrido completo o full scan, los voltajes aplicados varan en funcin del tiempo para
obtener un espectro de masas del compuesto, proporcionando informacin muy precisa
relacionada con la identidad del producto. Sin embargo, tambin se puede fijar un voltaje
 ~ 40 ~

determinado seleccionando as un solo in, originando una excelente sensibilidad con una
alta especificidad, siendo ideal con fines cuantitativos de trazas y ultratrazas.

En funcin del tipo de analizador es posible repetir el ciclo ruptura-deteccin de

fragmentos generados, apareciendo lo que se denomina espectrometra de masas en tndem
(MS)n. El objetivo es obtener ms informacin estructural mediante la fragmentacin de
iones aislados, as como mejorar la selectividad y sensibilidad para el anlisis cuantitativo.

En este sentido, los analizadores ms habituales son la trampa de iones y el triple

cuadrupolo. En el primero la ruptura y aislamiento se produce en el tiempo, mientras que
para el segundo dicho proceso se realiza en el espacio, presentando ambos analizadores
ventajas y desventajas, emplendose ambos en anlisis de rutina. En concreto, el triple
cuadrupolo est compuesto de tres cuadrupolos colocados consecutivamente, de los cuales
el primero y el tercero seleccionan los iones producto de inters, y el segundo acta como
celda de colisin. Este segundo cuadrupolo es el que permite la realizacin de
espectrometra de masas en tandem, en este caso MS-MS, puesto que el ciclo ruptura-
deteccin se realiza dos veces. Fsicamente se aceleran los iones (denominados
precursores) desde el primer cuadrupolo hacia el segundo en presencia de un gas de colisin
(generalmente argn o helio), pudiendo obtenerse distintas fragmentaciones.

El triple cuadrupolo se puede emplear de diversas maneras como barrido de iones

productos, barrido de iones precursores o prdida neutra, siendo lo ms habitual
monitorizar una reaccin (selection reaction monitoring) que consiste en que ambos
analizadores (primer y tercer cuadrupolo) registran solo unas masas seleccionadas. En esta
modalidad los iones seleccionados por el primer analizador slo son detectados si producen
una fragmentacin especfica. Al no hacer un barrido de masas y al medir slo una masa
durante todo el tiempo se puede aumentar la sensibilidad.

De esta forma, teniendo en cuenta el criterio de identificacin por puntos indicado

por la UE, por cada in precursor se obtiene un punto de identificacin y por cada in
producto 1,5 puntos por lo que, por ejemplo, mediante el empleo de un triple cuadrupolo
se necesitan al menos dos transiciones ms el in precursor para la correcta identificacin
de un compuesto ilegal.
 ~ 41 ~

En la tabla 1 se muestran algunos ejemplos representativos de la aplicacin de dicha

tcnica de deteccin donde se puede observar el alto grado de sensibilidad alcanzado para
la determinacin de estos contaminantes en muestras tan complejas como leche, pescado y
miel.

En la figura 2 se muestra un ejemplo de determinacin de plaguicidas en muestras

de hgado de pollo mediante GC-MS-MS35. Se puede observar como en el cromatograma
total de iones (figura 2a) es difcil la deteccin de los plaguicidas, pero cuando se
monitorizan solamente las transiciones de los plaguicidas deseados (figura 2b-2e) se
consigue una gran sensibilidad y selectividad. Para la determinacin del
endosulfan a (figura 2c) se observa otro pico correspondiente al endosulfan que presenta
las mismas transiciones pero que no interfiere para su determinacin. Adems, se puede
observar como el aumento de la selectividad conseguida por el empleo de la espectrometra
de masas permite discriminar entre plaguicidas que aparecen coeluidos.
 ~ 42 ~

El empleo de la espectrometra de masas ha permitido una rpida y correcta

identificacin de dicho producto en vegetales, como se puede observar en la figura 3, donde
se muestra el pico cromatogrfico del isofenfos metil (separado mediante un cromatgrafo
de gases) junto a los iones caractersticos de dicho compuesto al ser fragmentado y que ha
permitido su rpida deteccin en pimientos contaminados por dicho plaguicida.
 ~ 43 ~

Fuente: Romero, R; Fernndez, JL; Plaza, P; Garrido, A; Martnez, JL. 2007.

Empleo de la espectrometra de masas como herramienta para la determinacin de txicos
en alimentos: hacia la seguridad alimentaria. Revista Espaola de salud Pblica 81(5).

MTODOS INSTRUMENTALES DE SEPARACIN

CROMATOGRAFA DE GASES
Las primeras tcnicas de deteccin que se acoplaron a GC para el anlisis antidepresivo
fueron los detectores de ionizacin de llama (FID) y de captura electrnica (ECD), el
segundo de los cuales requiere derivatizacin previa de los compuestos. La utilizacin del
detector de nitrgeno-fsforo (NPD) ha dado lugar al desarrollo de numerosos mtodos
para la deteccin de ADTs, ISRSs y venlafaxina debido a sus estructuras nitrogenadas. Esta
tcnica ha probado ser una herramienta de gran utilidad en el screening toxicolgico y el
anlisis cuantitativo de estos compuestos sin necesidad de llevar a cabo procedimientos de
derivatizacin, debido a su buena sensibilidad (lmites de deteccin del orden de ng/mL),
evitndose adems muchas de las interferencias obtenidas con el uso de detectores no
selectivos como FID.
 ~ 44 ~

Fuente: de Castro, A. 2006. Aplicacin de la Cromatografa Lquida acoplada a la

Espectrometra de Masas en Tandem a la Determinacin de Antidepresivos en Plasma y
Fluido Oral. Santiago de Compostela, Espaa, Universidad de Santiago de Compostela, 67.

Un estudio por CG/EM del extracto hexnico permiti identificar 17 componentes.

Se encontraron hidrocarburos, entre ellos 4 alifticos (picos 3, 5, 7, 9) y uno cclico (pico
15); alcoholes superiores (pico 2, 8, 13, 17), un diterpeno (pico 4), esteroles (12, 14, 16),
vitamina E (11), g-tocoferol (10), una cetona (picos 1) y un compuesto lactnico (6);
resultaron predominantes los compuestos hidrocarbonados. En la figura 1 se muestra el
cromatograma gaseoso del extracto y en la tabla 1 los metabolitos con sus respectivos
tiempos de retencin, abundancia relativa, ion molecular y frmulas qumica.
 ~ 45 ~

Fuente: Gutirrez, Y; Miranda, M; Bello, A; Verona, S; Montes, R. 2011.

Caracterizacin qumica por cromatografa de gases/espectrometra de masas de dos
extractos obtenidos de Phyllanthus orbicularis HBK. Revista Cubana de Farmacia 45(3).

CROMATOGRAFA LQUIDA DE ALTA PERFORMANCE Y DE FLUIDOS

SUPERCRTICOS
La cromatografa lquida (HPLC), es una tcnica utilizada para separar los
componentes de una mezcla. Consiste en una fase estacionaria no polar (columna) y una
fase mvil. La fase estacionaria es slica que se ha tratado con RMe2SiCl . La fase mvil
acta de portador de la muestra.

La muestra en solucin es inyectada en la fase mvil. Los componentes de la

solucin emigran de acuerdo a las interacciones no-covalentes de los compuestos con la
columna. Estas interacciones qumicas, determinan la separacin de los contenidos en la
muestra.

La utilizacin de los diferentes detectores depender de la naturaleza de los

compuestos a determinar.
 ~ 46 ~

APLICACIONES

Esta tcnica esta indicada para la separacin de compuestos orgnicos

semivlatiles.

Hidrocarburos Poliaromticos (PAHs), Aminocidos: OTA, cido Flico,

Herbicidas, Vitaminas, Acido tenuazonico, Formaldehdoetc.
Rango de trabajo para muestras lquidas: g L-1 - mg L-1
Rango de trabajo para muestras slidas: g Kg-1 - g g-1

EQUIPOS

VARIAN 920 LC

Bomba de gradiente cuaternaria.

Columna termostatizada rango de temperatura : ambiente+10C-65C.
Automuestreador (200 vialesx2ml) con jeringa de inyeccin (0-50l) con
posibilidad de realizar incrementos de 1l.
Detector PDA (diodo array) con un rango de longitudes de onda (190 -900 nm) con
lmpara de deuterio para UV y halgena de cuarzo para visible, con una resolucin
espectral <1nm para el fotodiodo.
Detector de Fluorescencia: Lmpara de Xe de 150W, y lmpara de Hg para
chequear la longitud de onda. Presin 145psi.
 ~ 47 ~

Fuente: Miranda, A; Martn, O. 2013. Cromatografa Lquida (HPLC). Disponible

en http://www.ucm.es/data/cont/docs/650-2013-12-02-gases lquidos.pdf (Cromatografa
Lquida (HPLC)).

Por cromatografa lquida de alta eficiencia (HPLC) y con la ayuda de un estndar,

se determin la presencia de siringol, el cual presenta un tiempo de retencin de 26 min.

En la figura 3 se muestra la concentracin del siringol cuantificado por HPLC en

diferentes formulaciones con vinagre de guadua entre 5 y 20 %, as como maltodextrina
entre 30 y 60 %.

Fuente: Arboleda, C; Jaramillo, F; Palacio, H. 2012. Determinacin del potencial

antioxidante en extractos de vinagre Guadua angustifolia Kunth para aplicaciones
alimenticias. Revista Cubana de Plantas Medicinales 17(4).
 ~ 48 ~

BIBLIOGRAFA

1. Arboleda, C; Jaramillo, F; Palacio, H. 2012. Determinacin del potencial antioxidante en

extractos de vinagre Guadua angustifolia Kunth para aplicaciones alimenticias. Revista
Cubana de Plantas Medicinales 17(4).

2. Aristizbal, ID. 2007. La Resonancia Magntica y sus Aplicaciones en la Agroindustria,

una Revisin. Revista de la Facultad Nacional de Agronoma de Medelln 60(2).

3. Bermejo R. y Moreno A., 2014.Analisis Instrumental. Editorial

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FSICA/ FFYB/ UBA/ Ctedra de Fsica-
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