LABORATORIO DE MICROBIOLOGA GENERAL

INFORME 02

NORMBRE: Junior Galvez venegas

COLORACION GRAM

INTRODUCCIN

La coloracin es de gran importancia en Microbiologa porque permite distinguir

dos grandes grupos de bacterias (Gram+ y Gram-), segn se comporten ante
esta tincin. El fundamento permanece en la diferente estructura de la pared
celular de ambos grupos: bacterias Gram+ tienen una gruesa capa de
peptidoglicano en su pared, mientras que las bacterias Gram- tienen una capa
de peptidoglicano ms fina y una capa lipopolisacardica externa.

El dimensin de la colectividad de las clulas bacterianas es tal que resultan

dificultosos de ver con el microscopio ptico. La principal dificultad es la falta de
contraste entre la clula y el medio que la rodea. El modo ms simple de
aumentar el contraste es la utilizacin de colorantes.

En estos microrganismos a menudo se utilizan mtodos que no tien de igual

modo todas las clulas, es el proceso denominado tincin diferencial.

Tras la tincin con el primer colorante (Cristal violeta) se efecta un lavado

conetanol que arrastrar al colorante slo en las Gram (-), mientras que en
lasGram (+) el colorante queda retenido y las clulas permanecern azules.
Las clulas Gram (-) se teirn despus con un colorante de contraste
(safranina) para que puedan observarse.
I.- OBJETIVOS

Utilizacin de tcnicas sencillas para la observacin de microorganismos

Conocer o manejo del microscopio ptico para la observacin de bacterias

(importancia del objetivo de inmersin)

Conocer y manejar las unidades de medida de las clulas y establecer

Identificar bacterias Gram + y Gram mediante la tincin de Gram

II.- mtodos tericos

FUNDAMENTO
Gram Positivas capa de pptidoglucano ms grueso. Color azul oscuro o violeta.
Gram Negativas capa de pptidoglucano ms fino, pero pared celular ms compleja.
Color rosado tenue.

TINCION DE GRAM.

Tincin empleada en microbiologa para la visualizacin de bacterias en muestras

clnicas. Tambin se emplea como primer paso en la diferenciacin bacteriana. El
examen con microscopio ptico de preparacin con tincin de Gram se emplea de rutina
para determinar la forma de las bacterias. Las formas comunes son cocos (esfricas),
bacilos (alargadas) y formas espira ladas

Las bacterias pueden distinguir con esta tincin en dos grupos:

Gram. Positivos esta bacterias se suelen tien de azul.

Gram negativos: alrededor de un tercio de los cocos, la mitad de los bacilos y todos los
organismos espira lados se tien de rojo.

Las estudios ms comunes de la coloracin de Gram:

La presencia de cocos gram positivos agrupados sugiere estafilococos; en cadenas

sugiere estreptococos; en forma de lanceta a los diplococos

La presencia de diplococos gramnegativos es caractersticas de especies de Neisseria

Los bacilos Gram. Positivos grandes sugieren especies de Bacillus o clostridium, los
bacilos Gram. Positivos pequeos sugieren especies de Listeria o una de las
corniformes (diferidos)

Los bacilos Gram. Negativos son las bacterias ms comunes halladas en los
laboratorios clnicos e incluyen a Enterobacteriaceae, bacilos no fermentados
y especies de Haemophilus.

El valor diagnstico de esta tincin es variable; normalmente permite una buena

orientacin al microbilogo para seleccionar las tcnicas de cultivo ms adecuadas y
tambin tiene valor en orientar hacia un diagnstico etiolgico, en especial para instaurar
un tratamiento inicial
IV. MATERIALES:

muestra biolgica obtenida de un cultivo o fluido corporal (carne de pollo)

lamina portaobjetos

REACTIVOS:

Cristal de violeta
Lugol
Alcohol acido
Safranina
Agua

EQUIPOS

Microscopio

PROCEDIMIENTO:

1.-Poner la muestra (carne de pollo) en un envase y aadir un poco de agua.

2.-Luego con la ayuda de un isopo rotular sobre la lmina portaobjeto.
3.-Dejar secar en condiciones naturales (medio ambiente).
4.-Colorear:
5.-Colorear el frontis, previamente fijado con cristal de violeta durante 1 minuto.
6.-Lavar a chorro moderado con agua destilada.
7.-Aplicar lugol sobre la muestra coloreada y esperar 2 minutos.
8.-Volver a lavar con agua destilada.
9.-Decolorar brevemente con alcohol por 30 segundos.
10.-Repetir el lavado.
11. Aplicar la safranina como colorante de contraste.
12.-Lavar por ltima vez con agua destilada.
12.-Secar la lmina coloreada al medio ambiente.
Finalmente del procedimiento ya terminado observar en el microscopio a 100X,
pero previamente colocar una gota de aceite de inmersin sobre el frontis
coloreado
Tincin gran con muestra de carne de pollo

1.-Empezamos aadiendo el primer colorante que es el cristal violeta por

encima de la muestra puesta en el portaobjetos.
2.-Despus esperamos por un minuto a que la muestra capte bien el colorante
3.-Despus de unos minutos realizamos la operacin de lavado con ayuda de
una piseta con agua destilada.
4.-Luego aadimos el segundo colorante, el Lugol y esperamos por un minuto
para que capte bien.
5.-Nuevamente volvemos a lavar la muestra con agua destilada.
6.-Despus aadimos alcohol cetona para la decoloracin y esperamos por un
minuto.
7.-Como ltimo paso lavamos por ultimo con agua destilada y esperamos a que
la muestra este bien fijada.
8.-Lavamos con agua destilada y esperamos a que la muestra este bien fijada,
lo dejamos a temperatura ambiente unos diez a quince minutos o ms si es
necesario.
9.-Despus del tiempo ya pasado la muestra fijada en el portaobjetos y luego
agregar una gota de aceite de inmersin y observar en el microscopio a 100 x.
MUESTRAS OBSERVADAS.
CONCLUSIONES:

tuvimos muestra en la cual no se pudo ver ningn tipo de bacteria

entonces como dice nuestra bibliografa se pudo haber hecho mal el frotis,
se pudo lavar con mucha fuerza, entre otra causas de mala practica de
manejo.

La tcnica de tincin tiene como finalidad crear un contraste entre la clula

y el medio que la rodea. Es por eso que esta tcnica se vuelve
fundamental en el estudio de la microbiologa, y el conocimiento de su
correcta realizacin es prcticamente obligatorio.
El estudio de la literatura acerca de la tincin de Gram nos permite tener
un prembulo para poder diferenciar frente al microscopio los diferentes
tipos de microorganismos.
Con los fundamentos encontrados podemos decir que en nuestra practica
se observaron bacterias Gram positiva y Gram negativas teidas del color
respectivo esto fue en la muestra de pulmn de pollo no se pudo ver bien
la morfologa pero se encontraron en forma de cocos, estreptococos,
diplococos.
Tambin tuvimos muestras en la cual no se pudo ver ningn tipo de
bacteria entonces como dice nuestra bibliografa se pudo haber hecho mal
el frotis, se pudo lavar con mucha fuerza, entre otra causas de mala
prctica de manejo.
ANEXOS
 UNIVERSIDAD NACIONAL SAN ANTONIO ABAD DEL CUSCO

FACULTAD DE INGENIERIA DE PROCESOS

TEMA: PREPARACION DE MEDIO DE CULTIVO Y SIEMBRA DE

BACTERIAS EN MEDIO DE CULTIVO

ASIGNATURA: MICROBIOLOGIA GENERAL

INTEGRANTES: KATIUSKA LICONA PACCO

DOCENTE: BLO.