DETERMINACIONDECARBOHIDRATOSCOMOAZUCARESTOTALESPORMETODODEFENOLSULFURICO1

ANLISIS DE LOS ALIMENTOS FAIA
DETERMINACIN DE CARBOHIDRATOS COMO AZUCARES TOTALES POR
MTODO DE FENOL SULFRICO
I. OBJETIVOS.-
- Determinacin de carbohidratos como azucares totales por
mtodo de fenol sulfrico.
I. FUNDAMENTO TERICO.-
Los carbohidratos abarcan uno de los mayores grupos de compuestos
orgnicos encontrados en la naturaleza, y juntamente con las protenas
forman los constituyentes principales del organismo vivo, adems de
ser la mas abundante y econmica fuente de energa para el hombre.
La glucosa es el monosacrido mas importante y constituye la unidad
estructural de los polisacridos de mayor importancia.
En la mayora de las tablas de composicin de alimentos, los
carbohidratos son generalmente determinados como Carbohidratos
Totales y obtenidos por diferencia.
Entre, los mtodos para cuantificar los carbohidratos, esta el mtodo
FENOL SULFRICO. Cuando los azucares son tratados con cido
fuertes, principalmente el cido sulfrico concentrado, hay formacin de
1
hidroximetil sulfural por deshidratacin que reacciona con una gran
variedad de compuestos (FENOL) dando un color anaranjado que
puede ser cuantificado colorimetricamente.
En algunas ocasiones debe hacerse una clarificacin previa a fin de
retirar sustancias interferentes, resultando en una solucin clara para el
anlisis.
II. EQUIPOS Y MATERIALES.-
- Muestras alimenticias(miel de abeja)
- Balanza analtica
- Glucosa anhidra p. a.
- Agua destilada
- Solucin de fenol al 5%(bi destilada)
- cido sulfrico concentrado
- Espectrofotmetro
II. PROCEDIMIENTOS.-
PREPARACIN DE LA MUESTRA.- (Miel de abeja)
Pesar 5.0g. muestra
2
Disolver en 50ml
agua
Bao maria x 5 min.
Filtracin
Completar a 100ml
en una fiola
Filtrado(liquido) Residuo(descartar)
5/100ml de filtrado
10/100ml
Fenol
sulfrico(0.2ml)
3
CURVA PADRN(Mtodo del Fenol Sulfrico Azucares Totales).-
A partir del padrn de glucosa, cuya concentracin es
0.01%(0.1g/1000ml)(glucosa) se prepara la curva padrn conforme a
datos indicados abajo.
En forma semejante se hace las lecturas de las absorvancias de la
muestra problema, para ello se toman alcuotas de 0.1, 0.2ml de
filtrado y se completa a volumen para 1.0ml con agua destilada.
Seguidamente se hacen las lecturas a 490 nm.
Numer Padrn de H2O(ml) Fenol H2SO4(ml) Concent. Asbs.
o de glucosa(ml) 5%(ml) (ug/ml) (490
tubos nm)
1 0.1 0.9 1.0 5.0
2 0.2 0.8 1.0 5.0
3 0.3 0.7 1.0 5.0
4 0.4 0.6 1.0 5.0
5 0.5 0.5 1.0 5.0
6 0.6 0.4 1.0 5.0
7 0.7 0.3 1.0 5.0
8 0.8 0.2 1.0 5.0
9 0.9 0.1 1.0 5.0
10 1.0 - 1.0 5.0
Blanco - 1.0 1.0 5.0
- Despus de agregar el fenol, debe adicionarse el H2SO4.
4
- Esperar 30 minutos y realizar las lecturas de absorvancia.
- Realizar los mismos pasos de la curva padrn(tabla) con la
muestra a analizar en este caso miel de abeja.
- Realizar los clculos de acuerdo a las indicaciones dadas en
clases de teoras, expresar los resultados en % de azucares
totales.
III. CLCULOS Y RESULTADOS.-
RESULTADOS.-
- PREPARACIN DE LA MUESTRA.-
Miel de
abeja
5.0 g
Muestra disuelta
con 5ml de agua, en
bao Maria
5
Realizar diluciones, de 5/100ml

y 25/100ml en una fiola.
Obteniendo diluciones de:
5g/100ml = 5%
5ml/100ml = 5%
10m/100ml = 10%
CLCULOS.-
- Para la determinacin de la concentracin de la muestra:
0.1g 1000ml
x 0.1ml
x = 0.00001g
x = 0.1mg
x = 10ug
- Anlogamente aplicamos el mismo criterio a determinar las otras
concentraciones, como vemos en las tablas:
6
- Aplicando regresin lineal para obtener los datos de A y B,
ingresamos los datos de concentracin y absorbancia de los
rangos de 0.2 0.8 nm. Obteniendo:
A = - 0.05028
B = 0.011056
r = 0.991753
Y = A + BX
- Realizando los calculos para:
AZUCARES TOTALES.
Para muestra 1:
0.3941 = - 0.05028 + 0.011056 X
X = 40.4214
40.4214ug 0.2ml
X1 100ml
X1 = 20210.7ug
7
X1 = 20.2107mg
202.107mg 10ml
X2 100ml
X2 = 202.107mg
X2 = 0.202g
0.202107g 5ml
X3 100ml
X3 = 4.04g
NOTA: A este dato es para una muestra de 5g, a una
concentracin del 20% aprox., lo cual dice, que hay
4% aproximadamente de azucares totales por 100ml de
solucin.
Para muestra 2:
0.6130 = - 0.05028 + 0.011056 X
X = 59.9927
59.9927g 0.2ml
X1 100ml
8
X1 = 29996.35ug
X1 = 29.99635mg
29.99635mg 10ml
X2 100ml
X2 = 299.9635mg
X2 = 0.29935g
0.29999635g 5ml
X3 100ml
X3 = 5.99927g
NOTA: A este dato es para una muestra de 5g, a una
concentracin del 30% aprox., lo cual dice, que hay %
aproximadamente de azucares totales por 100ml de
solucin.
CURVA PADRON DE GLUCOSA.-
Numer Padrn de H2O Fenol H2SO4 Concent. Asbs.
o de glucosa(ml) (ml) 5%(ml) (ml) (ug/ml) (490
tubos nm)
1 0.1 0.9 1.0 5.0 10 0.0908
2 0.2 0.8 1.0 5.0 20 0.1860
9
3 0.3 0.7 1.0 5.0 30 0.2885

4 0.4 0.6 1.0 5.0 40 0.3932
5 0.5 0.5 1.0 5.0 50 0.5046
6 0.6 0.4 1.0 5.0 60 0.5768
7 0.7 0.3 1.0 5.0 70 0.7495
8 0.8 0.2 1.0 5.0 80 0.8259
9 0.9 0.1 1.0 5.0 90 0.8865
10 1.0 - 1.0 5.0 100 0.9409
Blanco - 1.0 1.0 5.0 - -
- Para el caso de la muestra con miel de abeja tenemos los
siguientes datos:
Numer Padrn de H2O Fenol H2SO4 Concent. Asbs.
o de glucosa(ml) (ml) 5%(ml) (ml) (ug/ml) (490
tubos nm)
1 0.2 0.8 1.0 5.0 20 0.3941
2 0.3 0.7 1.0 5.0 30 0.6130
CURVA PADRN DE LAS MUESTRAS(Ver grafico siguiente)
10
IV. CONCLUSIONES.-
Los azcares reductores que son los ms comunes,
tienen la capacidad de funcionar como agentes
reductores debido a que estn presentes en la
molcula grupos aldehdos libres o potencialmente
libres como en las formas hemiacetlicas cclicas.
Los azcares reductores estn constituidos por el
conjunto de los azcares con funcin cetnica o
aldehdica determinados por su accin reductora sobre
la solucin cupro-alcalina. El azcar invertido reduce el
cobre de la solucin Fehling (azul) a oxido cuproso
insoluble (rojo).
V. BIBLIOGRAFAS.-
- http://www.coexphal.es/Revista/AEV/5/general.htm.
- http://www.utadeo.edu.co/comunidades/estudiantes/ciencias_basicas
/analitica_instrumental/guia_3_3.pdf.
- http://www.uepg.br/gtm/PDF3.pdf.
11
- http://www.unex.es/quianaelec/jimaynar/documentos
%20QE/Resumen%20pr%E1cticas.pdf
12

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DETERMINACIN DE CARBOHIDRATOS COMO AZUCARES TOTALES POR

MTODO DE FENOL SULFRICO

- Determinacin de carbohidratos como azucares totales por

mtodo de fenol sulfrico.

Los carbohidratos abarcan uno de los mayores grupos de compuestos

orgnicos encontrados en la naturaleza, y juntamente con las protenas

forman los constituyentes principales del organismo vivo, adems de

ser la mas abundante y econmica fuente de energa para el hombre.

La glucosa es el monosacrido mas importante y constituye la unidad

estructural de los polisacridos de mayor importancia.

En la mayora de las tablas de composicin de alimentos, los

carbohidratos son generalmente determinados como Carbohidratos

Totales y obtenidos por diferencia.

Entre, los mtodos para cuantificar los carbohidratos, esta el mtodo

FENOL SULFRICO. Cuando los azucares son tratados con cido

fuertes, principalmente el cido sulfrico concentrado, hay formacin de

hidroximetil sulfural por deshidratacin que reacciona con una gran

variedad de compuestos (FENOL) dando un color anaranjado que

puede ser cuantificado colorimetricamente.

En algunas ocasiones debe hacerse una clarificacin previa a fin de

retirar sustancias interferentes, resultando en una solucin clara para el

II. EQUIPOS Y MATERIALES.-

- Muestras alimenticias(miel de abeja)

- Solucin de fenol al 5%(bi destilada)

- cido sulfrico concentrado

PREPARACIN DE LA MUESTRA.- (Miel de abeja)

Pesar 5.0g. muestra

Bao maria x 5 min.

CURVA PADRN(Mtodo del Fenol Sulfrico Azucares Totales).-

A partir del padrn de glucosa, cuya concentracin es

0.01%(0.1g/1000ml)(glucosa) se prepara la curva padrn conforme a

datos indicados abajo.

En forma semejante se hace las lecturas de las absorvancias de la

muestra problema, para ello se toman alcuotas de 0.1, 0.2ml de

filtrado y se completa a volumen para 1.0ml con agua destilada.

Seguidamente se hacen las lecturas a 490 nm.

Numer Padrn de H2O(ml) Fenol H2SO4(ml) Concent. Asbs.

o de glucosa(ml) 5%(ml) (ug/ml) (490

- Despus de agregar el fenol, debe adicionarse el H2SO4.

- Esperar 30 minutos y realizar las lecturas de absorvancia.

- Realizar los mismos pasos de la curva padrn(tabla) con la

muestra a analizar en este caso miel de abeja.

- Realizar los clculos de acuerdo a las indicaciones dadas en

clases de teoras, expresar los resultados en % de azucares

III. CLCULOS Y RESULTADOS.-

Realizar diluciones, de 5/100ml

- Para la determinacin de la concentracin de la muestra:

- Anlogamente aplicamos el mismo criterio a determinar las otras

concentraciones, como vemos en las tablas:

- Aplicando regresin lineal para obtener los datos de A y B,

ingresamos los datos de concentracin y absorbancia de los

rangos de 0.2 0.8 nm. Obteniendo:

- Realizando los calculos para:

0.3941 = - 0.05028 + 0.011056 X

NOTA: A este dato es para una muestra de 5g, a una

concentracin del 20% aprox., lo cual dice, que hay

4% aproximadamente de azucares totales por 100ml de

0.6130 = - 0.05028 + 0.011056 X

NOTA: A este dato es para una muestra de 5g, a una

concentracin del 30% aprox., lo cual dice, que hay %

aproximadamente de azucares totales por 100ml de

CURVA PADRON DE GLUCOSA.-

Numer Padrn de H2O Fenol H2SO4 Concent. Asbs.