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Extraccin de ADN de tejidos animales y vegetales

Fundamento
La extraccin del cido Desoxirribonucleico (ADN) consta de una etapa de lisis, que consiste en romper las
estructuras que confinan el citoplasma y liberar al medio su contenido, otra etapa es la purificacin del ADN,
que implica la retirada de la solucin final de la mayora de elementos que pueden interferir en posteriores
anlisis de Cambio de Reaccin de la Polimerasa-PCR (Microbial, 2009)
El ADN se encuentra en el interior del ncleo celular, disperso y muy replegado, unido a protenas para formar
la cromatina. Para extraerlo es necesario homogeneizar el tejido y romper las clulas para separar el ncleo,
romper ste para liberar el ADN, separarlo de las protenas y precipitarlo para extraerlo de la solucin.
Aparecer como un agregado de fibras blanquecinas que se adhieren a la varilla de vidrio. Por ltimo, se puede
situar sobre un porta, teirlo con un colorante bsico y observarlo al microscopio
(http://platea.pntic.mec.es/~cmarti3/bio/ADN/adn/adn.pdf).

Objetivo
Extraer el ADN de tejidos animales y vegetales

Materiales y Mtodos
Materiales y equipos
Tejido animal (hgado de pollo), vegetal (pltano maduro), 1 pia
Mortero o batidora
Licuadora
Tenedor (limpio)
Embudo
Trozo de tela para filtrar (limpia)
Arena fina y lavada (si se usa mortero)
Probeta
Pipetas
Varilla de vidrio
Vaso de precipitados
Matraz Erlenmeyer
Pipeta Pasteur
Alcohol 96 (congelar mnimo 3 horas antes del desarrollo de los experimentos)
Agua destilada
Solucin de NaCl 2M
Detergente tipo lavavajillas
Papel filtro
Microscopio
Refrigerador
Balanza
Termmetro
Soporte universal (para embudo)
Bandeja
Hielo

Metodologa
Experimento N 1
Extraccin de ADN de Hgado de pollo
1. Triturar en fro la muestra de hgado en el mortero junto con arena o mediante la batidora.
2. Aadir 50 ml de agua y remover suavemente pero mezclando a fondo.
3. Filtrar varias veces el resultado a travs de un pedazo de tela
4. Aadir al filtrado resultante un volumen igual de solucin de NaCl 2M.
5. Aadir ahora 1 ml de detergente (tipo Mistol o Woolite) y remover suavemente, mezclando bien pero
evitando que se forme espuma. Repetir la mezcla varias veces dejando reposar un minuto cada vez. Si se
forma espuma se puede retirar con un esquina de papel de filtro o con un cuentagotas.
6. Ahora se aaden unos 50 ml de alcohol muy fro ladeando el tubo o vaso de precipitados y dejando resbalar
muy lentamente el alcohol por la pared de aquel para formar una capa sobre la solucin anterior. Es muy
importante evitar que se mezclen ambas soluciones, pues en la interfase precipitar el ADN.
7. El ADN ir apareciendo poco a poco en la interfase agua-alcohol en forma de grumos blancos. Se favorece
la precipitacin y recoleccin si se va recogiendo mediante la varilla de vidrio, u otro instrumento similar,
introducindola ligeramente bajo la interfase y hacindola girar suavemente mientras se extrae. As se irn
pegando en la varilla unas hebras blancas que corresponden a miles de fibras de ADN.
8. Se puede ahora tomar una muestra del ADN recogido, depositarla sobre un porta y teir con azul de metileno
durante 1 a 3 minutos. Tras limpiar bien el porta, se observa al microscopio.
9. Otra posibilidad es conservar el ADN obtenido por uno de los siguientes mtodos:
- En un frasco bien cerrado con alcohol etlico al 50% o 70%.
- Dejndolo secar al aire extendido sobre papel de filtro.

Experimento N 2
Extraccin de ADN de Pltano maduro

1. Trituracin del pltano: Con la ayuda de un cuchillo cortar unos 100g de pltano y lo trocear hasta
obtener porciones muy pequeas. Luego aplastar todos los trozos con un tenedor para formar una pasta ms o
menos homognea. Depositar esta pasta en un vaso de precipitado.
2. Preparacin de la solucin de extraccin: Pesar 3g de sal. En una probeta adicionar 100 ml de agua
destilada y 10ml de jabn lquido (para lavar platos). Mezclar todo en un Erlenmeyer procurando no formar
burbujas.
3. Detergente + pltano: Verter el detergente en el vaso de precipitado que contiene el pltano y mezclar
todo procurando de no hacer burbujas.
4. Bao caliente: Poner agua a calentar y con un termmetro medir la temperatura hasta 60C (o utilizar bao
Mara). Luego introducir el vaso de precipitado con la mezcla (en el agua caliente) y con una vara agitadora,
mover ligeramente por 15 minutos (no hacer burbujas). Mantener la temperatura en 60C.
5. Bao frio: Preparar un recipiente con agua y hielo e introducir el vaso de precipitado. Dejar en el bao de
agua helada por 5 minutos removiendo ligera y constantemente.
6. Preparacin del zumo de pia: Trocear una pia y triturar la parte central o corazn en la batidora (licuar).
Filtrar la pasta con un colador para obtener el zumo.
7. Filtracin de la solucin: Preparamos un Erlenmeyer con un colador encima y vertemos el contenido del
vaso de precipitado (muestra del paso 5). A continuacin preparar un embudo con un papel de filtro encima y
verter la solucin obtenida anteriormente recogiendo el lquido en un tubo de ensayo. Este segundo proceso
puede tardar unos minutos.
8. Solucin + zumo de pia: Con una pipeta Pasteur cogemos 1ml de zumo de pia y aadir a 5ml del extracto
en un tubo de ensayo. Dejar que acte el zumo en la solucin de 2 o 3 minutos.
9. Solucin + alcohol: Sacar el alcohol del congelador y transferir en un tubo de ensayo aproximadamente el
mismo volumen de alcohol que de la solucin de inters (volumen obtenido en el paso 8).
10. Observacin del DNA: Verter muy lentamente el alcohol en el tubo de ensayo con la solucin. Luego de
pocos segundos se podr observar tres capas bien diferenciadas. Encima de todo estar el alcohol, debajo de
todo estarn los restos celulares (membranas, orgnulos) del pltano y los otros componentes de la solucin y,
en la interfase se observar una especie de hilos blancos rodeados de burbujas, es el ADN.

Resultados y Discusin
Anotar y /o tomar fotografas a los resultados obtenidos y discutir, comparando con la bibliografa

Conclusin

Recomendacin

Referencias
Martnez Martn Laura. 2015. EXTRACCIN DE DNA Experimento con reactivos de la vida cotidiana.
Recuperado de:
http://genetica.uab.cat/base/documents/genetica_gen/Laura%20Mart%C3%ADnez%20Mart%C3%ADn2015_
4_19P21_19.pdf

Microbial 2009. La extraccin y purificacin del ADN para el anlisis por PCR. Mitos y realidades. Recuperado
de: http://www.microbial-systems.com/web/docs/Newsletter_Microbial_03.pdf

http://platea.pntic.mec.es/~cmarti3/bio/ADN/adn/adn.pdf