UNIVERSIDAD DE LAS FUERZAS ARMADAS ESPE

Nombre: Cristian Armas

NRC: 2514

Fecha: 10/07/2017

Informe de Laboratorio N9

Ttulo: Siembra bacteriana por extensin y a profundidad.

Palabras Clave:

Resumen:

Introduccin

Antecedentes

En un ambiente natural los microorganismos se encuentran en poblaciones mixtas y complejas

por lo que se necesita un cultivo puro para poder identificar un microorganismo.

Debido a la ubicuidad de los microorganismos, para preparar un cultivo puro es necesario el

aislamiento de un determinado microorganismo a partir de una poblacin mixta y tambin se
necesita mantener a este microorganismo aislado.

Justificacin

Para estudiar una bacteria en el laboratorio e identificarla es necesario un cultivo puro, que es
una poblacin bacteriana descendiente de una sola bacteria. Se puede cultivar una muestra
patolgica para diagnosticar infecciones, esto se realiza en medios especficos para el
microorganismo buscado.

Ciertos estudias bacteriolgicos requieren de la determinacin del nmero de bacterias

presentes en una unidad de volumen, los recuentos se pueden realizar de distintas formas,
contando clulas individualmente o colonias (Unidades Formadoras de Colonias).

Marco Terico

Las tcnicas de microbiologa permiten obtener cultivos puros a partir de cultivos mixtos,
separando las diversas especies existente en la mezcla. Para cultivar bacterias en el laboratorio
se necesitan medios variados con diferentes nutrientes para que se d el crecimiento bacteriano.

Siembra por extensin

Un mtodo para obtener colonias aisladas es la extensin sobre la superficie de un medio, al

extender una mezcla de clulas sobre una superficie de agar, cada clula aislada se multiplicar
formando colonias independientes, se necesita un volumen pequeo de muestra el cual se
obtiene de una mezcla microbiana diluida.

Siembra en profundidad
A partir de una muestra diluida varias veces para reducir la poblacin microbiana, se espera
obtener colonias separadas cuando se siembren, la muestra se mezcla en agar liquido caliente y
se vierte en placas de cultivo estriles. Por motivos de estadstica nicamente se deben contar
las placas que contienen entre 30 a 300 colonias.

Objetivo General

Realizar una siembra bacteriana por extensin y por profundidad.

Objetivos especficos

Utilizar un codo de vidrio para la siembra por extensin

Ejecutar diluciones seriadas de una muestra bacteriana

Efectuar un conteo bacteriano

Hiptesis

Se observar crecimiento de colonias separadas en cajas Petri donde se realiz una siembra por
extensin y una a profundidad.

Materiales y Mtodos:

Se rotularon cinco tubos de ensayo con los nmeros del uno al cinco. Se tom 1ml de un cultivo
mixto con una pipeta estril, se coloc el cultivo en el tubo de ensayo rotulado con el nmero 1
y se agregaron 9ml de agua destilada en el mismo. Del tubo nmero 1 se tom 1ml con otra
pipeta estril y se traspas al tubo nmero 2, se agito bien. Se realizo el procedimiento anterior
hasta el tubo nmero 5 utilizando pipetas diferentes.

Siembra por extensin.

Se extrajo 0.1ml del tubo nmero 5 y se ubic en el centro de la superficie de una caja Petri con
agar nutriente. Usando un codo de vidrio previamente flameado y esterilizado con alcohol, se
extendi la muestra sobre toda la superficie del agar. Se tap la caja y se sell con parafilm,
incubando posteriormente durante 24 horas a 37C.

Siembra a profundidad.

Se extrajo 0.1ml del tubo nmero 5 y se mezcl con agar derretido caliente, se homogeneizo
bien. El agar derretido caliente se deposit en la base de una caja Petri estril, se distribuy
uniformemente. La caja se tap y se sell con parafilm, se incubo por 24 horas a 37C.

Conteo de colonias.

En las cajas Petri previamente incubadas se cont el nmero de colonias separadas presentes y
se represent el resultado en UFC/ml de muestra original aplicando un factor de conversin (por
cada UFC presente en la caja Petri se encuentran 10^10 bacterias).

Resultados

Siembra por extensin

Como se observa en la Fig. 1. La caja Petri presento crecimiento masivo ( no se identificaron

colonias individuales).
Figura 1. Siembra por extensin

Siembra a profundidad.

Como se observa en la Fig. 2. La caja Petri present crecimiento masivo ( no se identificaron

colonias individuales).

Figura 2. Siembra a profundidad

Discusin:

Segn Prescott, se realizan diluciones en serie para reducir la poblacin bacteriana, y que estas
se siembren en caja Petri, esto para que existan menos clulas bacterianas y se presenten
colonias separadas. En nuestra practica en ambos mtodos de siembra se observ crecimiento
masivo, a pesar de que sea realizaron 6 diluciones en serie, es posible que en el cultivo mixto
inicial presente una alta concentracin de clulas bacterianas o que se obtuvo demasiada
muestra del tubo numero 5.
Conclusin:

Bibliografa:

De la Rosa, M., Prieto, J., & Navarro, J. (2011). Microbiologa en ciencias de la salud : conceptos
y aplicaciones (tercera ed.). Barcelona: Elsevier.

Koch, A. (2017). Gua de la prctica de laboratorio; Aislamiento y cultivo puro. Sangolqu.

Prescott, A., Harley, J., & Klein, D. (2002). Microbiologa (quinta ed.). New York: Mc-Graw Hill.

Rodriguez, E., Gamboa, M., Hernandez, F., & Garca, J. (2005). Bacteriologa General: Principios
Y Prcticas de Laboratorio. San Jos: Editorial Universidad de Costa Rica.

Stainer, R., Ingraham, J., Wheelis, M., & Painter, P. (1992). Microbiologa (Segunda ed.).
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