Dicrosmo circular

El dicrosmo circular es una tcnica de espectroscopa de absorcin electrnica, basada en el cambio de

configuracin electrnica molecular de un estado fundamental a un estado excitado, debido a la absorcin
de radiacin electromagntica polarizada.

Un haz de luz polarizado es aquel que tiene su vibracin electromagntica en un solo plano. Un haz de luz
polarizado circularmente, se obtiene girando el plano de polarizacin de forma continua y en un solo
sentido alrededor del eje de propagacin de la fase luminosa. As, el campo elctrico de una onda polarizada
circular derecha (ED), se puede comparar con una hlice que gira alrededor de la direccin de la propagacin.
Igualmente, una componente circular izquierda (EI), constituye una hlice que gira alrededor de la direccin
de propagacin en la direccin opuesta a ED.

Si ED gira en el sentido de las manecillas del reloj y E I gira en sentido inverso, ambas con una frecuencia tal
que los dos vectores formen un ngulo idntico, su resultante E corresponde al movimiento de la onda
polarizada en un plano, en el cual el campo elctrico oscila siguiendo la direccin del eje de las x.

Se puede considerar entonces a una onda polarizada en el plano, como la superposicin de una onda
polarizada derecha y una onda polarizada circular izquierda, ambas de la misma frecuencia.

Cuando un haz de luz polarizado, incide sobre una muestra en la cual el rayo circularmente polarizado a la
derecha es absorbida de una manera distinta al rayo circularmente polarizado a la izquierda, se da el
fenmeno de dicrosmo circular.

Como consecuencia de la diferencia de absorcin entre EI y ED, la longitud de vector EI es distinto a la

longitud del vector ED y la resultante E no describe una circunferencia, sino una elipse; la velocidad del
componente EI es diferente de la de ED, de esta manera, la interaccin de la radiacin con la muestra induce
un desfasamiento y un cambio de magnitud diferencial en ambos componentes originalmente polarizados
circularmente, y estos fenmenos provocan una rotacin del plano de polarizacin en un ngulo y la
distorsin de este plano genera una elipse.

Por lo tanto, el dicrosmo circular mide la capacidad de molculas pticamente activas de absorber
diferencialmente la luz polarizada circularmente a izquierda y a derecha.

Los espectros se realizan diferencialmente, calculando la absorbancia a izquierda y derecha de la muestra:

= = = ( )

Siendo AL lo que absorbe la muestra cuando se incide luz polarizada circularmente a la izquierda, y A R a la
derecha.

El ngulo de elipticidad () representa la arcotangente del cociente del eje menor entre el eje mayor de la
elipse, y es directamente proporcional a A y . Se utiliza en unidades de grados (deg) y su valor es de:

Tambin se utiliza la elipticidad molar [], de unidades deg.cm2/dmol y su valor es de:

[] =
Espectros DC de protenas

El dicrosmo circular es una de las tcnicas ms sensibles para determinar las estructuras secundarias y
monitorear cambios en dicha estructura.

El cromforo en el UV lejano (200 nm aprox.) es el enlace peptdico; y en el UV cercano (280 nm aprox.)

son los residuos aromticos y los puentes disulfuro de las cistenas. El CD en el UV lejano permite obtener
medidas empricas de la estructura de la protena y su conformacin. Se pueden diferenciar -hlices, hojas
, giros , random coils. En el CD en UV cercano se debe constatar que la protena tenga un espectro. La
intensidad en el cercano es mucho menor que en el lejano por lo que se requiere mayor concentracin de
protena. Esto es debido a que en una protena hay menos residuos aromticos que enlaces peptdicos. Este
tipo de CD depende del plegamiento de la protena (estructura terciaria) y es como una huella dactilar de la
misma en condiciones nativas (plegada). Esto implica que este mtodo es til para saber si la protena est
correctamente plegada. Tambin se pueden seguir el cambio conformacional provocado por algn ligando
que se una a un residuo aromtico, o cambios provocados por desnaturalizacin.

En amarillo se observa el espectro en el UV lejano de la

protena plegada y en verde el de la misma protena pero
desplegada o desnaturalizada. Esta ltima casi no tiene seal
de CD debido a que como la protena pierde su estructura
secundaria, pierde su quiralidad.

En el UV cercano se verifica que la protena tenga un espectro,

es un control cualitativo que sirve para chequear la integridad
de la protena.

Absorcin caracterstica:

-hlice: dos mnimos a 208 y 222 nm y un mximo a 190 nm

hoja : un mnimo a 217 nm y un mximo a 195 nm

El espectro en el UV lejano se puede suponer como la suma de los

espectros componentes de la estructura secundaria:

() = () + () + () + ()

Siendo i () los espectos CD base para cada estructura secundaria

(polipptidos sintticos o protenas modelo).

Cuando se tiene una protena en estudio no conocida, con CD solo se puede saber el porcentaje de
estructura secundaria que presenta. Por medio de algoritmos se ajustan los espectros de protenas
conocidos al obtenido y se calcula el porcentaje de cada estructura secundaria componente de la protena.