UNIVERSIDAD SAN PEDRO

PRACTICA N 6

PROTEINAS TOTALES
OBJETIVOS

Demostrar el manejo adecuado de la tcnica para la determinacin de

protenas en una muestra biolgica.
Establecer los valores de referencia de protenas y comparar con el
valor de nuestra muestra problema a analizar.
Definir cules son las principales patologas que se presentan si
tenemos valores altos o bajos de protenas
Aprender y practicar principios de espectrofotometra.
Aprender a manejar las pipetas automatizadas.

INTRODUCCION

Las protenas son compuestos orgnicos macromoleculares, ampliamente

distribuidos en el organismo, esenciales para la vida. Actan como elementos
estructurales y de transporte y aparecen bajo la forma de enzimas, hormonas,
anticuerpos, factores de coagulacin, etc. En el plasma, las protenas
contribuyen a mantener el volumen del fluido circulante, transportan sustancias
relativamente insolubles y actan en la inactivacin de compuestos txicos y en
la defensa contra agentes invasores. La determinacin de protenas totales es
til para el monitoreo de cambios ocasionados por diversos estados de
enfermedad. En condiciones patolgicas como prdidas renales, desnutricin,
infecciones prolongadas, etc., suelen presentarse hipoproteinemias, mientras
que en otras como mieloma mltiple, endocarditis bacteriana y
hemoconcentracin de diversos orgenes, (ej.: deshidratacin) se observan
hiperproteinemias.

FUNDAMENTOS DEL METODO

Los enlaces peptdicos de las protenas reaccionan con el in cprico en medio

alcalino, para dar un complejo color violeta con mximo de absorcin a 540 nm,
cuya intensidad es proporcional a la concentracin de protenas totales en la
muestra

MATERIAL BIOLOGICO

SUERO (debe obtenerse suero libre de hemlisis.)

Tubo rojo (con activador)

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MATERIAL REQUERIDO

Espectrofotmetro o fotocolormetro
Micropipetas y pipetas para medir los volmenes indicados.
Tubos de ensayo
Gradillas
Reloj o timer.
Reactivo A: complejo EDTA/Cu 13 mmol/l en hidrxido de sodio 875
mmol/l y alquil aril politer (AAP).

PROCEDIMIENTO

1. Marcar los 3 tubos, 1tubo con B (blanco) 2 tubo con S (estndar) 3 tubo
con Mx (muestra).
2. Agregar 1 ml de reactivo a los 3 tubos
3. Agregar 10 ul de estndar al tubo 2 rotulado de estndar
4. Agregar 10 ul de muestra al tubo 3 rotulado de muestras
5. Mezclar y Mantener los tubos entre 15 y 28 C durante 5 minutos
6. Leer en espectrofotmetro a 540 nm o en fotocolormetro con filtro verde
(520-560 nm) llevando a cero con el Blanco de Reactivo.

BLANCO ESTNDAR MUESTRA

ESTNDAR 10 ul
MUESTRA 10 ul
REACTIVO 1 ml 1ml 1ml

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ESTABILIDAD DE LA MEZCLA DE REACCION FINAL

El color de la reaccin es estable durante 1 hora por lo que la absorbancia

debe ser leda dentro de ese lapso

CONDICIONES DE REACCION

Longitud de onda: 540 nm en espectrofotmetro o en fotocolormetro con

filtro verde (520-560 nm).
Temperatura de reaccin: 15 28 C
Tiempo de reaccin: 5 minutos
Volumen de muestra: 10 ul
Volumen de Reactivo A: 1 ml

CALCULOS DE RESULTADO

VALORES DE REFERENCIA

Se determin el contenido de protenas totales en suero de personas sanas, de

ambos sexos, con alimentacin mixta normal y edades entre 17 y 40 aos. Se
obtuvieron los siguientes

Rangos: Protenas totales: 6,6 a 8.3 g/dl

RESULTADOS

Mx = 9.14 g/dl

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ALBUMINAS
Demostrar el manejo adecuado de la tcnica para la determinacin de
albmina en una muestra biolgica.
Establecer los valores de referencia de la albmina y comparar con el
valor de nuestra muestra problema a analizar.
Definir cules son las principales patologas que se presentan si
tenemos valores altos o bajos de albmina en una muestra biolgica

INTRODUCCION
Las protenas son compuestos orgnicos macromoleculares, ampliamente
distribuidos en el organismo. La albmina es el principal contribuyente de las
protenas totales plasmticas. Entre sus mltiples funciones se pueden
mencionar: transporte de una amplia variedad de sustancias como hormonas
esteroides, cidos grasos, bilirrubina, catecolaminas, que en forma libre son
insolubles en medio acuoso; mantenimiento de la presin coloidosmtica, que
estara relacionado con su bajo peso molecular y su gran carga neta. Los
aumentos anormales de albmina son ocasionales y se relacionan casi siempre
con la deshidratacin que provoca la reduccin en el contenido del agua
plasmtica. La hipoalbuminemia ocurre en condiciones patolgicas tales como
prdida excesiva de protenas en el sndrome nefrtico, desnutricin,
infecciones prolongadas, quemaduras severas. Otras causas son disminucin
en la sntesis por una dieta deficiente, enfermedad heptica o malabsorcin.

FUNDAMENTOS DEL METODO

La albmina reacciona especficamente (sin separacin previa) con la forma
aninica de la 3,3',5,5'-tetrabromo cresolsulfon ftalena (BCG). El aumento de
absorbancia a 625 nm respecto del Blanco de reactivo, es proporcional a la
cantidad de albmina presente en la muestra.

MATERIAL BIOLGICO

Suero (debe obtenerse suero libre de hemlisis.)

Tubo rojo con activador

MATERIAL REQUERIDO

Espectrofotmetro o fotocolormetro
Micropipetas y pipetas para medir los volmenes indicados.
Tubos de ensayo
Gradillas
Reloj
Reactivo A: solucin de BCG 0,3 mmol/l, buffer acetato 0,1 mol/l y
polioxietiln lauril ter 0,9 g/l.

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PROCEDIMIENTO

1. Marcar los 3 tubos, 1tubo con B (blanco) 2 tubo con S (estndar) 3 tubo
con Mx (muestra).
2. Agregar 1 ml de reactivo a los 3 tubos
3. Agregar 10 ul de estndar al tubo 2 rotulado de estndar
4. Agregar 10 ul de muestra al tubo 3 rotulado de muestras
5. Mezclar y Mantener los tubos entre 15 y 28o C durante 10 minutos
6. Leer en espectrofotmetro a 625 nm o en fotocolormetro con filtro rojo
(620-650 nm) llevando a cero con el Blanco de Reactivo.

BLANCO ESTNDAR MUESTRA

ESTNDAR 10 ul
MUESTRA 10 ul
REACTIVO 1 ml 1ml 1ml

Estabilidad de la mezcla de reaccin final El color es estable 20 minutos por lo

que la absorbancia debe ser leda dentro de ese lapso.

CONDICIONES DE REACCION

Longitud de onda: 625 nm en espectrofotmetro o en fotocolormetro con

filtro rojo (620-650 nm)
Temperatura de reaccin: 15-28 c
Tiempo de reaccin: 10 minutos
Volumen de muestra: 10 ul
Volumen de Reactivo A: 1 ml

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CLCULOS DE RESULTADO

VALORES DE REFERENCIA

Se determin el contenido de albmina en suero de personas sanas, de ambos

sexos, con alimentacin mixta normal y edades entre 17 y 40 aos. Se
obtuvieron los siguientes rangos:

Albmina: 3,8 a 5,1 g/dl

RESULTADOS

Mx = 4.04 g/dl

NOTA:

La globulina es resultado es.

P (protenas) A (albumina)
9.14 g/dl 4.04 g/ dl = 5.1 g/dl
Rx Globulina = 5.1 g/dl

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BIBLIOGRAFIA

Manual de prcticas bioqumica clnica

http://www.wienerlab.com/VademecumDocumentos/Vademecum%20espan
ol/albumina_aa_sp.pdf
http://www.wienerlab.com.ar/VademecumDocumentos/Vademecum%20esp
anol/proteinas_totales_aa_sp.pdf
Manual de prcticas de laboratorio de bioqumica (2014)

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