Anti-Human Globulinic (Coombs)

(cod produs: 10180010)

SUMAR

In general, anticorpii implicati in reactiile transfuzionale sunt de doua tipuri, anticorpi completi si anticorpi incompleti. Anticorpii
completi aglutineaza eritrocitele in mediu salin iar anticorpii incompleti se fixeaza pe membrana eritrocitara, sensibilizand eritrocitele
dar fara a produce reglutinare.
De obicei, clasa anticorpilor IgM si tipurile IgG1 si IgG3 fixeaza complementul. In vivo, liza celulara este mediata prin sistemul
complementului iar componentul complementului C 3b este activat pana la producerea C3d.
La testele antiglobulinice directe, reactivul anti-Human Globulin este utilizat pentru a detecta anticorpii atasati in vivo pe suprafata
eritrocitelor.
La testele antiglobulinice indirecte, reactivul anti-Human Globulin este utilizat pentru a detecta anticorpii atasati in vitro pe suprafata
eritrocitelor.
Reactivul anti-Human globulin este folositor pentru efectuarea testelor de compatibilitate, pentru detectia anticorpilor, identificarea
anticorpilor, pentru testarea eritrocitelor provenite din cordonul ombilical si detectarea variantei Du a antigenului D (Rh) eritrocitar.

REACTIVI
Eryclone anti-Human Globulin este un amestec echilibrat de imunoglobuline inalt purificate, gata de utilizare. Contine anticorpi IgG
umani si anticorpi care reactioneaza cu complementul uman C3d. Acesti anticorpi anti-complement sunt de clasa IgM, monoclonali si
confera reactivului sensibilitatea necesara.

DEPOZITARE SI STABILITATE
Pastrati reactivul la 2 8oC. A NU SE CONGELA!
Termenul de valabilitate al reactivului este inscris pe eticheta.

PRINCIPIU DE LUCRU

Eritrocitele umane normale, in prezenta anticorpilor indreptati impotriva antigenelor care se gasesc pe membrane eritrocitara, pot sa
se ataseze pe eritrocite fara sa le aglutineze ci doar sa sensibilizeze eritrocitele. Acest fapt se poate datora particularitatilor antigenelor
si anticorpilor implicati in reactie. Reactivul Eryclone anti-Human Globulin ar putea reactiona cu eritrocitele sensibilizate cu
gamaglobuline sau componente ale complementului uman implicat si poate produce aglutinarea eritrocitelor.

NOTA
1. A se folosi doar pentru diagnosticul in vitro si de catre personal calificat. Nu se utilizeaza in scopuri medicinale.
2. Fiecare reactiv contine 0.01% azida de sodiu, ca si conservant. Evitati contactul cu pielea si cu mucoasa. Atunci cand il aruncati,
folositi o cantitate mare de apa.
3. Turbiditatea crescuta poate indica contaminarea bacteriana sau denaturarea proteinelor cauzata de factori termici. Acesti reactivi
se vor arunca.
4. Reactivul Eryclone nu este de sursa umana, prin urmare este exclusa contaminarea cu HBsAg, HCV si HIV.
5. Pipetarea reactivului se va face folosind numai pipeta calibrata atasata flaconului cu reactiv.
6. Se recomanda purtarea echipamentului de protectie.
7. Nu folositi reactivi deteriorati sau flacoane din care s-a scurs reactivul.

RECOLTAREA PROBELOR SI PREGATIREA REACTIVILOR

Nu este necesara o pregatire speciala a pacientului inainte de recoltare. Nu se folosesc probe hemolizate.
Pentru testul antiglobulinic direct: se utilizeaza de preferinta sange recoltat pe EDTA; se poate folosi si sange recoltat in vacutainer cu
oxalat sau citrat sau sange integral. Se recomanda testarea imediata a probei.
Pentru testul antiglobulinic indirect: se poate folosi ser recoltat cu maxim 24 de ore inainte de testare!

PREPARAREA ERITROCITELOR DE CONTROL PT. COOMBS

1. Diluati reactivul ERYCLONE Anti-D (IgG) 1:50 in ser fiziologic.
2. Preparati o suspensie 5% de eritrocite de grup O RhoD pozitiv in ser fiziologic.
3. Omogenizati volume egale de reactiv anti-D (precum este descris la punctul 1 de mai sus) si suspensie 5% de eritrocite O RhoD
pozitiv (precum este descris la punctul 2 de mai sus) si incubati la 37 oC timp de 15 minute.
4. Decantati si spalati eritrocitele cu ser fiziologic, de cel putin trei ori.
5. Resuspendati in ser fiziologic pentru a obtine o suspensie 5% de eritrocite de control Coombs.

MATERIALE DE LUCRU NECESARE

Pentru testul antiglobulinic direct: Tuburi de sticla (12 x 75 mm), pipete Pasteur, ser fiziologic, eritrocite de control Coombs,
lupa/microscop.
Pentru testul antiglobulinic indirect si pentru testul de compatibilitate: Tuburi de sticla (12 x 75 mm), pipete Pasteur, albumina bovina
Eryclone, centrifuga, incubator (37oC), ser fiziologic, eritrocite de control Coombs, lupa/microscop.

PROCEDURA
Inainte de testare aduceti toti reactivii la temperatura camerei.

Testul antiglobulinic direct (Testul Coombs direct)

1. Preparati o suspensie 5% din eritrocitele care urmeaza sa fie testate, in ser fiziologic.
2. Adaugati 1 picatura din suspensia de eritrocite 5% in tubul pentru testare.
3. Umpleti tubul cu ser fiziologic si centrifugati timp de 30 de secunde la 3400 RPM (1000g).
4. Decantati si repetati procedeul de cel putin 3 ori.
5. Adaugati 2 picaturi de reactiv Eryclone anti-Human Globulin si omogenizati bine.
6. Centrifugati timp de 1 minut la 1000 RPM (125g) sau pentru 20 secunde la 3400 RPM (1000g).
7. Rasuciti usor eprubeta si resuspendati eritrocitele sedimentate pe fundul eprubetei. Observati macroscopic aglutinarea.
8. In cazul tuturor testelor antiglobulinice directe negative, adaugati 1 picatura de eritrocite de control Coombs si observati
aglutinarea.

Testul antiglobulinic indirect

Testul de compatibilitate
Etapa initiala
1. Etichetati 2 tuburi: A (pentru albumina) si B (pentru ser fiziologic); numarul de tuburi necesare testarii poate fi mai mare, in functie
de numarul de probe de donator care urmeaza sa fie testate.
2. Preparati o suspensie 5% din eritocitele care urmeaza sa fie testate in ser fiziologic.
3. Adaugati cate 2 picaturi din serul pacientului in ambele tuburi etichetate.
4. Adaugati cate 1 picatura din eritrocitele donatorului in ambele tuburi etichetate si omogenizati bine.
5. Adaugati 2 picaturi de reactiv Eryclone albumina bovina doar in tubul A (cu albumina) si omogenizati bine.
6. Centrifugati ambele tuburi timp de 1 minut la 1000 RPM (125g) sau pentru 20 secunde de 3400 RPM (1000g).
7. Intai observati hemoliza. Resuspendati celulele sedimentate si observati macroscopic aglutinarea.
8. Continuati cu etapa de incubare.

Etapa de incubare
1. Incubati tubul cu ser fiziologic la temperatura camerei iar tubul cu albumina la 37 oC pentru 15 minute.
2. Intai observati hemoliza. Resuspendati eritrocitele sedimentate si observati aglutinarea macroscopic.
3. Continuati cu etapa testului antiglobulinic.

Etapa testului antiglobulinic

1. In aceasta etapa se testeaza doar tubul A (cu albumina).
2. Spalati bine suspensia de eritrocite cu ser fiziologic de cel putin 3 ori. Dupa ultima spalare, decantati complet serul fiziologic.
3. Adaugati 2 picaturi de reactiv Eryclone anti-Human globulin in tubul de testare care contine eritrocitele spalate si omogenizati bine.
4. Centrifugati timp de 1 minut la 1000 RPM (125g) sau pentru 20 secunde la 3400 RPM (1000g).
5. Resuspendati usor eritrocitele sedimentate si observati macroscopic aglutinarea.

INTERPRETAREA REZULTATELOR

Testul Coombs direct

Aglutinarea eritrocitelor reprezinta un rezultat pozitiv si indica prezenta IgG-ului uman sau a componentelor complementului pe
suprafata eritrocitelor.
Absenta aglutinarii reprezinta un rezultat negativ si indica absenta IgG-ului uman sau a componentelor complementului pe suprafata
eritrocitelor.
 Testul Coombs indirect
Daca, in toate etapele testului de compatibilitate, nu este observata aglutinare sau hemoliza, atunci pacientul si donatorul pot fi
considerati compatibili. Daca pe parcursul oricarei etapte a testului de compatibilitate este observata aglutinare sau hemoliza, atunci
pacientul si donatorul pot fi considerati incompatibili.

CARACTERISTICI DE PERFORMANTA
Din testarea a peste 500 de probe recoltate aleator (de la donatori de sange, pacienti sau nou-nascuti) pe anticoagulantii recomandati
s-a obtinut o specificitate si senzitivitate de 100%.

NOTE:
1. Daca la testul antiglobulinic indirect este folosita plasma, anticorpii dependenti de complement pot sa nu fie detectati datorita
absentei calciului.
2. In cazul tuturor probelor negative, dupa etapa de aglutinare, se adagua 1 picatura de celule de control Coombs. Daca aceste celule
nu aglutineaza, atunci testul de compatibilitate trebuie repetat.
3. La testul antiglobulinic indirect, se va efectua o procedura de auto control (eritrocitele pacientului in ser propriu).
4. Eritrocitele care dau un rezultat pozitiv la testul testul antiglobulinic direct nu pot fi folosite pentru testul antiglobulinic indirect.
5. Este recomandat ca activitatea anticorpilor anti-IgG din reactivul anti-Human globulinic sa fie testata, de preferat zilnic, folosind
eritrocite de control Coombs ca si control pozitiv.
6. Toata sticlaria folosita la testare trebuie sa fie foarte curata, bine uscata si fara contaminare cu ser uman.
7. Serul, albumina bovina, serul fiziolog sau sticlaria contaminate pot inactiva reactivul anti-Human globulin.
8. Administrarea anumitor medicamente precum si anumite boli (precum anemia megaloblastica) sunt asociate cu un test Coombs
direct pozitiv.
9. Eritrocitele din cordonul ombilical de la nou nascuti cu boala hemolitica a nou-nascutului datorata incompatibilitatii in sistemul OAB
cu mama, pot da reactii fals negative la testul Coombs direct.
10. Reactivul Eryclone anti-human globulinic nu contine anti-C4 si nu are activitate Anti-T.
11. Deoarece timpul de centrifugare prea scurt sau prea lung poate genera rezultate eronate, se recomanda ca fiecare laborator sa isi
ajusteze timpul de centrifugare in functie de performanta echipamentului din dotare.

GARANTIE:
Acest produs este creat pentru a fi utilizat precum este indicat pe eticheta si in prospectul de lucru. Producatorul nu este raspunzator
pentru distribuirea sau utilizarea in alte scopuri.

Tr: 03.2014 ms/ v. lo