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89 REB 28(3): 89-101, 2009

LA C APACIDAD A NTIOXIDANTE TOTAL.


BASES Y A PLICACIONES*
Martha Anglica Quintanar Escorza 1 y Jos Vctor Caldern Salinas 2

RESUMEN ABSTRACT
Los organismos han desarrollado sistemas de defensa Organisms have developed systems antioxidant defense
antioxidante para hacer frente a la atmsfera oxidativa systems to deal with the planet oxidative atmosphere and
del planeta y al metabolismo oxidativo que permiti la with the oxidative metabolism. These systems allowed
evolucin de la vida. Lo que permiti alcanzar eficientes evolution of life in this antioxidant defense to confront to
sistemas amortiguadores antioxidantes que mantienen la the atmosphere oxidative of the planet and to the oxidative
capacidad de reducir a los radicales libres, las especies metabolism that allowed evolution of life in that
reactivas y los oxidantes endgenos y exgenos. Estos atmosphere, reaching efficient buffer antioxidant systems
sistemas amortiguadores antioxidantes desembocan, se that conserve capacity to reduce free radicals, reactive
regeneran y se cargan de hidrgenos y electrones a travs species and endogenous and exogenous oxidants. These
del sistema de glutatin-NADPH y de la reduccin de buffer antioxidant systems lead into the system of
NADP+ a partir del metabolismo. De tal forma las enzimas glutatin-NADPH and with NADP+ reduction from the
antioxidantes, los cosustratos antioxidantes y los metabolism, where regenerate and load hydrogens and
antioxidantes endgenos y exgenos generan barreras para electrons. Of such a form antioxidant enzymes, antioxidant
conducir la reduccin de los oxidantes y disminuir as su cosustrates and antioxidant endogenous and exogenous
potencia oxidativa, con lo que se hace frente a la variedad generate barriers to take the reduction of the oxidants and
de diversas especies y formas oxidativas capaces de to diminish this way their oxidative power, with what there
agredir al organismo. Los sistemas antioxidantes se are confront the varieties of diverse species and oxidative
pueden medir de diferentes formas especficas y el sistema forms capable of attacking to the organism. The
amortiguador antioxidante global se puede evaluar con antioxidant systems can measure up of different specific
las pruebas de capacidad antioxidante total. La mejora forms and the global buffer antioxidant system can
tecnolgica e interpretativa de estos mtodos ha permitido measure up to the tests of total antioxidant capacity; the
profundizar en el conocimiento bsico de las formas de technical and interpretive improvement of these
defensa de la clula, ha multiplicado los estudios de technologies allowed to profounder into the basic
capacidad antioxidante desde sustancias puras hasta knowledge of the forms of defense of the cell, it has
organismos complejos, sirviendo incluso para mtodos multiplied the studies of antioxidant capacity from pure
diagnsticos y de evaluacin de la efectividad de los substances up to complex organisms, serving even for
tratamientos. diagnostic methods and evaluation of the efficiency of
treatments.
PALABRAS CLAVE: Radical libre, dao oxidativo,
antioxidantes, oxidacin, redox, estrs oxidativo. KEY WORDS: Free radical, oxidative damage,
antioxidants, oxidation, redox, oxidative stress.

La oxidacin y los agentes oxidantes de hidrgenos o la ganancia de oxge- trario; es decir, la ganancia de elec-
Qumicamente la oxidacin de un no en una molcula. La reduccin de trones, de hidrgenos o la perdida de
compuesto es la prdida de electrones, un compuesto es exactamente lo con- oxgeno. En tal sentido, un agente

*Recibido: 22 de enero de 2009 Aceptado: 11 de agosto de 2009


1
Departamento de Bioqumica, Facultad de Medicina, Universidad Jurez del Estado de Durango, Av. Universidad y Fanny
Anitua S/N, Durango, Dgo. Mex. C.P. 34000. 2Departamento de Bioqumica, Centro de Investigacin y de Estudios Avanzados.
Av. IPN 2508, Zacatenco, Delegacin Gustavo A. Madero, AP 14-740 Mxico 07000 D.F. Tel (01-55) 5747-3955. Correo E:
aquintanar69@hotmail.com, jcalder@cinvestav.mx
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oxidante es una molcula que se re- cin de productos oxidantes del meta- orbitales externos y es capaz de tener
duce al reaccionar con la molcula a bolismo, especies reactivas de oxge- una existencia independiente; sin em-
la cual oxida. Este par oxido-reductor no y en muchas ocasiones radicales bargo, es muy reactivo ya que tiende
es necesario qumicamente y esencial libres. Numerosas reacciones en las a reducirse, es decir, sustrae un elec-
para entender la biologa de las xi- clulas implican oxidaciones, en prin- trn de tomos o molculas estables,
do-reducciones en el organismo. cipio todas las degradaciones para ob- a las cuales oxida, con el fin de alcan-
Las macromolculas de importan- tener energa y muchas reacciones del zar su propia estabilidad. Una vez que
cia biolgica (protenas, cidos metabolismo intermedio (3). el radical libre ha conseguido el elec-
nucleicos, carbohidratos y lpidos) son De igual forma, mltiples xeno- trn que necesita para aparear a su
molculas nucleoflicas que tienen biticos ejercen sus efectos, general- electrn libre, la molcula estable que
electrones susceptibles de compartir, mente txicos, sobre la clula por pro- pierde el electrn se oxida y deja a
es decir, tienen electrones en orbitales cesos oxidativos inducidos por la pro- otro electrn desapareado, lo que la
superficiales que pueden ser captura- pia molcula xenobitica o por el me- convierte a su vez en un radical libre,
dos (oxidacin) o compartidos en una tabolismo para su biotransformacin. inicindose y despus propagndose
reaccin nucleoflica para formar Este tipo de ambiente hace necesa- de la misma manera, generando as
compuestos o aductos. rio que las clulas mantengan sistemas una reaccin en cadena (5).
Los oxidantes son compuestos de amortiguamiento reductor, para
electroflicos especies que tienen avi- poder aprovechar los beneficios del Tipos de radicales libres
dez por los electrones y que tienen metabolismo oxidativo y a su vez li- Los radicales libres de importan-
afinidad para reaccionar con mitar al mximo los daos severos (4). cia biolgica pueden clasificarse
macromolculas nucleoflicas, mu- como:
chas de ellas de la mayor importancia Los radicales libres 1.- Especies reactivas de oxgeno
biolgica (1). La mayor parte de los compuestos qu- (ERO). Las principales son el oxge-
Las especies reactivas de oxgeno micos de importancia biolgica estn no molecular (O2), el ozono (O3) y el
(ERO) y nitrgeno (ERN), son un formados por tomos unidos por enla- oxgeno en singulete (O21), as como
subgrupo de molculas oxidantes, que ces covalentes, en estos enlaces dos las especies de oxgeno que estn par-
como su nombre lo indica son alta- tomos comparten un par de electro- cialmente reducidas; esto es, el anin
mente reactivas. Otro subgrupo son los nes en un orbital molecular y cada superxido (O2 ) el perxido de hidr-
radicales libres que no solo tienen alta electrn muestra una rotacin o giro geno (H2O2), hidroperoxilo (HO2 ) y
reactividad y capacidad oxidativa, opuesto a su par. En las clulas se lle- el radical hidroxilo ( OH). Estas es-
sino que adicionalmente pueden ge- van a cabo reacciones qumicas que pecies son producto de la ruptura o
nerar reacciones oxidativas en cade- rompen estos enlaces de manera de la excitacin del O2 y son ms
na. Los radicales libres en particular heteroltica, haciendo que una de las reactivos que el O2 en su estado basal.
y las especies reactivas en general, partes conserve dos electrones y la otra El perxido de hidrgeno, no es un
participan en algunas funciones bio- tenga deficiencia de dos electrones, lo radical libre pero est estrechamente
lgicas (proliferacin celular, diferen- cual genera compuestos estables relacionado con la produccin de ra-
ciacin celular, fagocitosis, metabolis- nucleoflicos o electroflicos, respec- dicales porque es el principal precur-
mo, reacciones inflamatorias) y se tivamente, que son los conocidos sor del radical hidroxilo. Estas ERO
encuentran involucradas en diversas aniones y cationes. son molculas altamente reactivas que
patologas (2). Sin embargo, algunas reacciones atacan constantemente al organismo
qumicas, las radiaciones electromag- mediante reacciones bioqumicas de
El ambiente oxidativo nticas y otros factores, pueden rom- oxido-reduccin, que ocurren como
La mayora de las clulas y organis- per estos enlaces de la forma llamada parte normal del metabolismo celular
mos de nuestro planeta se enfrentan a homoltica, proceso despus del cual o por factores patolgicos.
ambientes con agresores oxidativos. cada parte conserva un solo electrn 2.- Metales de transicin. Los elemen-
Todo inicia con el empleo del oxge- que estar desapareado, generndose tos del primer periodo de la serie "d"
no como la molcula oxidante final del as las especies qumicas llamadas ra- de la tabla peridica (Fe, Mn, Co, Ni
metabolismo aerbico y oxidativo, el dicales libres. y Cu) pertenecen a los llamados me-
cual realizan la mayora de los orga- En forma general, un radical libre tales de transicin, tienen la caracte-
nismos del planeta. Ello hace que las es un tomo o molcula que tiene uno rstica de llegar a ser estables por si
clulas mantengan una alta concentra- o ms electrones desapareados en sus mismos sin necesidad de reaccionar
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con otro elemento, esto es, cuando a mitir que algunas molculas puedan fican las bases nitrogenadas, lo que
su ltimo nivel de energa le faltan difundir y actuar en orgnulos o clu- induce mutaciones y carcinognesis, ya
electrones para estar completo los uti- las vecinas, tal es el caso del H2O2 y sea por la prdida de expresin o por
liza de los niveles o subniveles inter- del NO . la sntesis de una protena alterada.
nos, con lo cual logra su estabilidad,
la falta de electrones en el nivel de Dao inducido por radicales libres b) Dao a las protenas. Las ERO pue-
donde los transfiri se compensa con Los radicales libres producidos en den inducir en el extremo la fragmen-
otros electrones de otro nivel o cantidades moderadas en los organis- tacin de protenas, pero adems exis-
subnivel, y as sucesivamente: a este mos pueden ser neutralizados por el ten una serie de alteraciones que pue-
fenmeno se le llama transicin elec- propio sistema. Ante un determinado den modificar notablemente su fun-
trnica. La mayora de los metales de insulto oxidativo, los organismos sue- cin, modificando con ello el metabo-
transicin tienen electrones len adaptarse rpidamente. En gene- lismo, la estructura, el transporte, los
desapareados y precisamente gracias ral, una agresin oxidante de baja in- receptores, las protenas reguladoras y
a esta transicin pueden existir en for- tensidad hace que una clula pueda los inmunorreguladores, entre otros.
ma de radical libre. resistir posteriormente condiciones Los radicales libres de oxgeno, pueden
3.- Otros radicales libres. Entre los que ms oxidantes. reaccionar directamente con el ligando
se encuentran los radicales libres de Sin embargo, las ERO que se pro- metlico de muchas metaloprotenas.
nitrgeno; tales como, el xido ntri- ducen y escapan a los sistemas de de- Debido a la reactividad de las ERO con
co (NO ) y el dixido ntrico (NO2 ). fensa, producen continuamente irre- las molculas insaturadas o residuos
El NO es un radical muy reactivo y mediables daos a los carbohidratos, de protenas que contienen azufre,
de importancia fisiolgica puede oxi- al ADN, a las protenas y a los lpidos adems de aminocidos tales como,
dar y daar, pero es esencial en fun- que alcanzan. Las consecuencias de triptofano, tirosina, fenilalanina,
ciones biolgicas complejas como son las reacciones de los radicales libres histidina, metionina sufren oxidacio-
la neurotransmisin y neurorregu- con los diferentes compuestos celula- nes que provocan entrecruzamientos
lacin del sistema nervioso, as como res pueden ser muy variadas, pero y fenmenos de agregacin; en el caso
en procesos de agregacin plaquetaria siempre de importancia biolgica y de los residuos de cistena estos fen-
y coagulacin sangunea, con el O2 ge- con consecuencias irremediables a menos se ven favorecidos por la for-
nera NO 2 y con el O 2 forma corto, mediano o largo plazo. macin de puentes disulfuro intra e
peroxinitrito (ONOO-). Este tipo de intermoleculares. Mientras que en los
ERN son capaces de generar dao a) Dao al ADN. Los radicales libres aminocidos prolina, arginina y lisina,
oxidativo y muerte celular. Existen pueden causar entrecruzamiento de las especies reactivas de oxgeno pue-
otros radicales libres que tienen dife- protenas-ADN, intercambio de den generar derivados de tipo
rente naturaleza como el in cromtidas hermanas, dao a la estruc- carbonilo. El OH convierte a la
hipoclorito (ClO ) y el radical tura de la desoxirribosa-fosfato, oxi- fenilalanina en o-tirosina y el NO .
triclorometilo ( CCl3) este ltimo pro- dacin de las bases nitrogenadas, con- transforma la tirosina en nitrotirosina.
ducido durante el metabolismo del versin de bases (la desaminacin de El H 2 O 2 modifica los grupos
CCl4 por el citocromo P450. la citosina en uracilo y de la 5- sulfhidrilos de algunas cistenas, de
La reactividad qumica de los di- metilcitosina en timidina), aperturas manera que se pueden formar cidos
ferentes tipos de radicales libres es va- de anillos, liberacin de bases, rom- sulfnicos, sulfnicos y sulfnicos.
riable pero siempre elevada y de baja pimiento de cadenas (una o dos he-
especificidad. La vida media biolgi- bras). El OH puede atacar tanto las c) Dao a los lpidos. La oxidacin de
ca del radical libre es de no ms de purinas como las pirimidinas; el O21 los lpidos membranales provoca pr-
microsegundos, ya que puede reaccio- es ms selectivo y generalmente pro- dida de la permeabilidad, la fluidez y
nar rpidamente con todo lo que est duce slo aductos de guanina, sobre la integridad de las membranas (la
a su alrededor, pudiendo provocar un todo 8-hidroxiguanina (7). Debido al plasmtica y de los orgnulos celula-
gran dao a macromolculas y a es- mayor ambiente oxidativo de la res). Los cidos grasos polinsaturados
tructuras supramoleculares como las mitocondria, el ADN mitocondrial de las membranas celulares y las
membranas (6). Diferentes radicales generalmente presenta un mayor n- lipoprotenas son particularmente sus-
y especies reactivas tienen diferentes mero de modificaciones que el ADN ceptibles al ataque del radical
vidas medias, siempre muy bajas, pero nuclear. Los radicales libres y en ge- hidroxilo OH, del oxgeno singulete
algunas de ellas suficientes para per- neral las agresiones oxidativas modi- (O21) y del hidroperoxilo (HO2 ). Con
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esta reaccin se forma un radical Mecanismos de defensa antioxidante ejemplo; el glutatin y el NADPH. El
lipdico que despus de un rearreglo Para evitar que se desborde el insulto glutatin es un tripptido (-glutamil-
molecular (dieno conjugado), puede oxidativo, las clulas y los organismos cisteinil-glicina) con gran facilidad
reaccionar con el oxgeno para origi- aerbicos requieren generar y mante- para ceder electrones (muy
nar el radical peroxilo (R-OO ). Este ner defensas antioxidantes de manera nucleoflico) debido a su grupo
a su vez puede reaccionar con otros ptima e incrementarlas acorde al ta- sulfhidrilo (-SH) y su potencial redox;
cidos grasos de la membrana, forman- mao de la agresin. una vez que queda oxidado se puede
do otros radicales lipdicos, transfor- Los mecanismos homeostticos regenerar gracias a la enzima glutatin
mndose el mismo en hidroperxido antioxidantes con los que el organis- reductasa (GR) que lo reduce con la
(R-OOH). El hidroperxido, en presen- mo enfrenta el dao oxidativo son es- oxidacin de NADPH. El NADPH tie-
cia de varios complejos metlicos, se pecficos, afines, numerosos y diver- ne un potencial redox muy negativo y
puede descomponer en ms radicales, sos; reflejando la necesidad de hacer por ende es un importante donador de
incluyendo entre ellos al OH, lo que frente a la multiplicidad de formas de electrones e hidrgenos, con lo que
provoca un fenmeno de expansin radicales libres y especies reactivas; puede pasar a NADP+ que en su for-
del dao y propagacin de la tambin son numerosos los comparti- ma oxidada diversas enzimas lo em-
peroxidacin. mientos donde actan en el organis- plean como cosustrato (9).
En ausencia de iones metlicos mo y en las clulas.
los hidroperxidos se pueden acu- Los mecanismos antioxidantes se d) Enzimas que regeneran sustratos o
mular en la membrana y con esto pueden clasificar de diversas formas, cosustratos antioxidantes. Por ejem-
alterar su funcin. Tambin se pue- la siguiente se basa en las lneas de plo, las enzimas que regeneran al
den transformar en hidrocarburos defensa en el organismo: glutatin reducido, la vitamina E y el
voltiles, alcoholes o aldehdos NADPH. El glutatin se mantiene casi
(malondialdehdo, entre otros), los a) Macromolculas que acomplejan todo en forma reducida principalmen-
cuales pueden difundir lejos del lu- especies reactivas y evitan su accin. te a travs de glutatin reductasa (GR),
gar donde se originaron, ocasionan- Por ejemplo, protenas que acumulan una flavoenzima que gracias a la oxi-
do daos a otras macromolculas. A o transportan metales de transicin, dacin del NADPH cataliza la reduc-
este fenmeno se le llama como la transferrina y la cin del glutatin oxidado (GSSG) a
lipoperoxidacin y, en ausencia de ceruloplasmina o como el oxgeno, la glutatin reducido (GSH). La vitami-
algn proceso que la inhiba, puede hemoglobina y la mioglobina. na E al actuar como antioxidante se
provocar la rpida destruccin de la oxida a tocoferilquinona, para conti-
estructura lipdica de las membra- b) Enzimas antioxidantes con gran nuar su trabajo antioxidante se requie-
nas. Dentro del proceso de la afinidad para catalizar con altas velo- re que se reduzca nuevamente a vita-
lipoperoxidacin, los radicales que cidades la reaccin de reduccin par- mina E, tal reduccin la pueden llevar
se forman pueden causar tambin cial de una especie reactiva. Por ejem- a cabo el ascorbato (vitamina C) o el
daos a las protenas membranales, plo: la superxido dismutasa (SOD) glutatin con la catlisis de las
inactivando receptores o enzimas cataliza la dismutacin del O2 a H2O2; enzimas tocoferilquinona reductasa o
unidas a las membranas. la glutatin peroxidasa (GPx) que es una GPx, respectivamente. El
una enzima dependiente de selenio y ascorbato se oxida a deshidroascorbato
d) Dao a los carbohidratos. Los cataliza la reduccin del perxido de y se puede reducir a ascorbato con
carbohidratos son daados por los ra- hidrgeno (H 2O2) o lipoperxidos NADPH o con GSH por enzimas ta-
dicales libres en menor proporcin que (L-OOH); la glutatin sulfhidril les como las deshidroascorbato
otras molculas. Azcares tales como transferasa (GST) que cataliza el ata- reductasa (DAR) o por la glutatin
glucosa, manitol o ciertos desoxiaz- que nucleoflico del cosustrato GSH peroxidasa (GPx). El NADPH se re-
cares pueden reaccionar con el radi- sobre el centro electrfilo de un gran genera principalmente a travs de la
cal hidroxilo para producir sustancias nmero de oxidantes y la catalasa va de las pentosas a partir del NADP+
reactivas. As mismo, los polisacridos (CAT) que reduce el H2O2 a H2O (8). por accin de la deshidrogenasa de la
pueden sufrir el ataque de los radica- glucosa-6-P y la deshidrogenasa de
les libres, en este caso, fragmentn- c) Cosustratos antioxidantes, son em- gluconato-6-P; sin embargo, en algu-
dose en unidades ms sencillas como pleados por las enzimas para poder nas clulas la enzima mlica/NADP+
en el caso de la despolimerizacin del reducir parcialmente a los radicales (MDP) que oxida malato a piruvato
cido hialurnico (1, 5). libres y las especies reactivas. Por puede contribuir a la formacin de
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NADPH o bien obtenerse a partir de degradan un tramo de nucletidos en a molculas oxidantes para evitar su
la isocitrato deshidrogenasa citoslica una hebra alrededor de la regin alte- accin en los sitios incorrectos o con
(IDPc) dependiente de NADP+ que rada, posteriormente una polimerasa altas concentraciones y que solo ejer-
cataliza la reaccin de isocitrato a - de ADN y una ligasa de ADN reparan zan su accin oxidante en el sitio y
cetoglutarato. el tramo. reaccin necesaria. El sistema de
Los enlaces tiol (sulfhidrilo) de las enzimas antioxidantes, se encuentra en
e) Antioxidantes endgenos. Los protenas pueden ser nuevamente re- los sitios donde se producen los
antioxidantes son molculas ducidos por la enzima tiorreductasa oxidantes (orgnulos o estructuras
nucleoflicas con gran afinidad y que (TR) empleando glutatin como do- supramoleculares), con la finalidad de
se comportan como compuestos muy nador de electrones y regulando siste- reducirlos parcialmente y con ello dis-
susceptibles para que los oxiden las mas efectores y de balances minuir o anular la capacidad
especies reactivas (electroflicas); es oxidorreductores como seales electroflica de los oxidantes. Para
decir, ofrecen electrones a las espe- intracelulares y como molculas poder realizar la reduccin de los
cies reactivas para evitar que estas ata- efectoras. La enzima metionina oxidantes se requiere tener un par re-
quen a las macromolculas sulfxido reductasa, reduce los ductor que se oxide, estos son los
nucleoflicas necesarias para la fun- sulfxidos de metionina de las prote- cosustratos antioxidantes, tales como
cin y estructura celular (protenas, nas daadas, en una reaccin depen- el glutatin y el NADPH. Otro juego
lpidos, carbohidratos y cidos diente del NADPH. de enzimas se encarga de la regenera-
nucleicos). Una vez que los radicales Los daos producidos por radica- cin los cosustratos de las enzimas
libres reaccionan con los antioxidantes les libres en trminos generales mar- antioxidantes y de algunos antioxi-
se reducen parcialmente o se unen en can las protenas para su degradacin. dantes, lo que permite mantener la ca-
forma de aductos, reduciendo su El reconocimiento de los sitios oxida- pacidad de accin de las enzimas y el
reactividad y oxidando al dos o halogenados o bien la exposi- poder reductor antioxidante de la clu-
antioxidante. Ejemplos de estos cin de regiones hidrofbicas deter- la. La otra lnea de defensa son los
antioxidantes en los organismos son: minan la ubiquitinacin de las prote- antioxidantes endgenos y los
el glutatin, el NADPH, la albmina, nas y su degradacin en el proteosoma. exgenos, los cuales ofrecen electro-
el cido rico, la coenzima Q, la En el caso de los lipoperxidos se pue- nes con gran afinidad para los
bilirrubina y la melatonina (9). den reducir mediante GPx de oxidantes y que estos reaccionen con
fosfolpidos o son eliminados a travs el antioxidante en lugar de que reac-
f) Antioxidantes exgenos. Son de las fosfolipasas como la fosfolipasa cionen y oxiden a las macromolculas.
antioxidantes que provienen de la die- A2, que aumenta su actividad durante Finalmente, cuando los anteriores sis-
ta, tales como la vitamina E (- la agresin oxidativa. temas no fueron suficientes y hay dao
tocoferol), la vitamina C (cido El uso extensivo de sistemas de re- a macromolculas se inicia un com-
ascrbico), el -caroteno (provitamina paracin o el intenso dao al ADN plejo sistema de reparacin, que pue-
A), el cobre, el selenio, el zinc, el puede inducir el proceso de apoptosis, de limitar y eventualmente reparar
manganeso, los polifenoles, los que visto de esta manera sera la muer- parcialmente el dao o enviar la
licopenos, los cidos eglicos, los te por suicidio cuando la reparacin macromolcula a destruccin y de ser
flavonoides, la quercitina, la es imposible o el dao fue extensivo, muy abundante el dao, someter la
hespiridina, las catequinas y los protegiendo al rgano y al organismo clula a apoptosis; tratando de evitar
taninos (10, 11). de daos locales y sistmicos, inclu- la carcinognesis y un mayor dao al
yendo el desarrollo de clulas cance- rgano o al organismo (12, 13). To-
g) Sistemas de reparacin. Son siste- rosas (12). dos estos mecanismos y respuestas
mas que tratan de recuperar la funcin condicionan el estrs oxidativo indu-
de las macromolculas daadas, repa- Sistema conjunto de proteccin cido por el insulto oxidativo y la cali-
rar el dao establecido o destruir la antioxidante dad y cantidad de ambos determina el
macromolcula que pudiera causar En la figura 1 se presenta, con fines dao oxidativo resultante (Fig. 1).
dao a la economa celular. Hay me- didcticos, una propuesta de accin
canismos de reparacin especficos conjunta de la funcin de los sistemas Sistema amortiguador antioxidante
que sustituyen las bases mal antioxidantes antes enumerados. En Todos los sistemas antioxidantes se
apareadas, oxidadas, desaminadas o general, el diseo celular antioxidante encuentran enlazados en un sistema
que aaden la base faltante y otros que coloca a las molculas que secuestran amortiguador celular, donde se suman
94 Quintanar Escorza MA y Caldern Salinas JV

COMPLEJOS CON la gluconato-6-P deshidrogenasa y las


PROTENAS DE
enzimas malato e isocitrato deshidro-
TRANSPORTE O
ACUMULACIN genasas citoslicas dependientes de
AGENTES OXIDANTES
NADP+.
ESPECIES REACTIVAS La vitamina E se integra al siste-
RADICALES LIBRES ma amortiguador al regenerarse con
electrones del ascorbato y de GSH y
ENZMAS
ANTIOXIDANTES (1) MOLCULA ANTIOXIDANTE NADPH por medio de las enzimas
ANTIOXIDANTES OXIDADO GST o de la DAR.
ENZMAS
ANTIOXIDANTES (3)
Otros agresores oxidativos pueden
desembocar en radicales O2 o OH,
RADICALES,
ESPECIES Y OXIDANTES los primeros sern convertidos en
MENOS POTENTES MOLCULA H2O2 por la SOD y los segundos en
BLANCO agua por la GPx empleando GSH que
ENZMAS se oxida a GSSG y que ser nueva-
ANTIOXIDANTES (2) mente reducido con la glutatin
ESTRES
MOLCULA OXIDATIVO reductasa gracias a los electrones del
OXIDADA NADPH. Por su parte el H2O2 se trans-
COMPUESTOS DAADA formar en H2O gracias a la accin de
NO-OXIDANTES la CAT o de una peroxidasa.
ENZMAS
REPARADORAS El estado redox de las protenas,
DAO es decir su estado de oxido reduccin,
REPARACIN DE LA MOLCULA
OXIDATIVO
O DE LA FUNCIN es un indicador del estado redox de la
clula y se emplea como un sistema
APOPTOSIS
de transduccin, sealizacin y efector
Figura 1. Sistemas antioxidantes en el estrs oxidativo. El esquema muestra los complejos de de respuestas intracelulares; este es-
transporte o acumulacin de oxidantes, la interaccin con molculas antioxidantes y los 3 tado redox de las protenas es modu-
tipos de enzimas antioxidantes. Las tipo 1 reducen parcialmente a los agentes oxidantes, gene- lado directamente con glutatin redu-
rando oxidantes menos potentes (por ejemplo: superxido dismutasa). Las tipo 2 reducen a los
oxidantes a compuestos no oxidantes (por ejemplo: catalasa). Las tipo 3 son las enzimas en-
cido e indirectamente con NADPH
cargadas de reducir nuevamente (regenerar) a los antioxidantes que fueron oxidados para (13).
reducir a los oxidantes (por ejemplo: glutatin reductasa). A pesar de las defensas las
macromolculas pueden verse afectadas por la oxidacin, esto produce dao oxidativo y re- El estrs oxidativo
quiere de ser reparado por las enzimas correspondientes (por ejemplo: polimerasas). Si la En las clulas y en los organismos en
reparacin falla o el dao es muy extenso se puede generar apoptosis.
condiciones normales se mantiene un
balance entre la produccin de radica-
y colaboran entre s, para hacer frente oxidacin de GSH y NADPH, este l- les libres y especies reactivas con los
a cualquier agresin oxidativa en la timo esencial para reducir nuevamen- sistemas antioxidantes; de manera tal
clula y el organismo. Un esquema de te al glutatin oxidado, por lo que los que la toxicidad por oxidacin es limi-
la interaccin de estos sistemas se sistemas que reducen al NADP+ (re- tada, an este limitado dao es parcial-
presenta en la figura 2. Los sistemas generan al NADPH) resultan de vital mente responsable del envejecimiento
antioxidantes integrados en un sistema importancia para mantener el flujo de natural de las clulas y los organismos.
amortiguador garantizan hacer frente a electrones e hidrgenos en todo el sis- Sin embargo, se considera que la
cualquier agresor oxidativo y no ago- tema amortiguador y de esta forma agresin oxidativa alcanza niveles pa-
tar un solo sistema antioxidante, sino estar preparado para mantener el pro- tolgicos cuando se rompe el balance
compartir y combinar los efectos; as, ceso antioxidante preparado para el entre ella y la eficiencia de los siste-
los cambios de un antioxidante se com- siguiente insulto oxidativo. mas amortiguadores antioxidantes; lo
pensa con los de otros. Dado que los En esta figura se puede observar cual se puede producir por un dficit
antioxidantes actan bsicamente redu- que en el centro del sistema amorti- de antioxidantes o por un incremento
ciendo las especies reactivas y a los guador antioxidante se encuentra la re- en la produccin de las especies
oxidantes en general, todos los siste- duccin del NADP+ a partir de las reactivas. De igual manera cuando se
mas antioxidantes desembocan en la enzimas glucosa-6-P deshidrogenasa, reduce la agresin oxidativa, se redu-
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-Tocoferol Oxidantes
cada agresor oxidativo en cada siste-
TQR . endgenos
ma.
La evaluacin depende del fluido,
RL o exgenos
Tocoferil- tejido o clula que se pretenda estu-
quinona diar, ya que cada uno de los ambien-
RH
tes tiene diferentes sistemas
antioxidantes y una conjuncin o in-
Pr-ox Pr-red tegracin diferente. As mismo, el tipo
Dehidro- TR de sistema antioxidante predominan-
ascorbato te es heterogneo y se debe de consi-
derar para saber efectivamente que se
GSH GR GSSG est evaluando.
Radiaciones
Metales Las tcnicas desarrolladas para
Ascorbato DAR
GST Metabolismo medir la capacidad antioxidante total
G6PD / Gluc6PD de las muestras biolgicas valoran la
NADP+ NADPH+H+
MDP / IDPc habilidad de los compuestos
antioxidantes (donantes de un hidr-
GR geno o un electrn) presentes en el
GSSG GSH
fluido o clula, para reducir las espe-
. cies oxidantes introducidas (iniciador)
RH RL
GPx O2. en el sistema de ensayo, por lo que son,
H2O H2O2 en general, clasificados como mto-
SOD
CAT dos de inhibicin directos o indirec-
O2 O2 tos del poder oxidante de una mol-
cula estndar determinada que es el
Figura 2. Sistema amortiguador global de antioxidantes. Radicales libres (RL.), radical redu- iniciador.
cido (RH), glutatin reducido (GSH), glutatin oxidado (GSSG), protenas oxidadas (Pr-Ox), En el plasma, la capacidad
protenas reducidas (Pr-red), radical superxido O2., protn (H+), fosfato de nicotinamida-
adenina dinucleotido reducido (NADPH), fosfato de nicotinamida-adenina dinucleotido oxi-
plasmtica antioxidante total depen-
dado (NADP+). Las enzimas: glutatin peroxidasa (GPx), tocoferilquinona reductasa (TQR), de preferentemente de la capacidad y
deshidroascorbato reductasa (DAR), tiolreductasa (TR), glutatin transferasa (GST), catalasa cantidad de albmina y de cido rico.
(CAT), glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6PD); gluconato 6 fosfato deshidrogenasa Cuando se realiza en sangre total, la
(Gluc6PD), glutatin reductasa (GR), superxido dismutasa (SOD), isocitrato deshidrogenasa capacidad sangunea antioxidante to-
citoslica dependiente de NADP+ (IDPc) y malato deshidrogenasa dependiente de NADP+
(MDP).
tal, evala adicionalmente enzimas
antioxidantes, glutatin y NADPH.
La capacidad antioxidante total del
ce la eficiencia total del sistema amor- El estrs oxidativo al que se some- eritrocito evala los sistemas
tiguador antioxidante, evitando as te una clula o el organismo puede ser eritrocitarios y no los plasmticos.
gastos energticos excesivos y una eficiente y limitar el dao o ser En las clulas se evala predomi-
condicin reductora muy elevada en ineficiente y no poder evitar el incre- nantemente los mecanismos anti-
la clula que comprometa las accio- mento del dao, lo cual puede depen- oxidantes enzimticos, glutatin,
nes oxidantes de importancia para el der de la intensidad del insulto o de la NADPH y molculas antioxidantes
funcionamiento celular. falta de elementos de respuesta en los endgenas y exgenas; pero depen-
La respuesta de la clula o el orga- sistemas antioxidantes (1). diendo de la clula y los orgnulos
nismo a la agresin oxidativa implica predominantes se podr tener una par-
no slo cambios cinticos y La capacidad antioxidante total ticipacin mayoritaria de cierta acti-
moleculares de enzimas, cosustratos, El sistema amortiguador antioxidante vidad enzimtica o de antioxidantes
cofactores y molculas antioxidantes, puede ser evaluado indirectamente intracelulares.
sino tambin el encendido de genes y como una capacidad antioxidante to- En orina, la capacidad urinaria
los cambios de la expresin de prote- tal. Este parmetro puede ofrecer una antioxidante total se evala midiendo
nas, todo este fenmeno se conoce idea de cmo se encuentra el conjun- la distribucin y excrecin de antioxi-
como estrs oxidativo. to de la respuesta antioxidante ante dantes hidrosolubles endgenos y
96 Quintanar Escorza MA y Caldern Salinas JV

exgenos y pueden dar un reflejo del estticas, por lo que indica un estado pio similar al descrito y mostrado en
consumo o exceso de tales antioxi- en una ventana de tiempo particular y la figura 3.
dantes. no da una imagen de la respuesta ce- La actividad de la SOD se puede
Es posible medir la capacidad lular, el estrs oxidativo o una condi- estudiar generando el radical O2 por
antioxidante total en cualquier clula cin dinmica del proceso de dao o el sistema xantina-xantina oxidasa en
o fluido (lquido cefalorraqudeo, ar- defensa de la clula o el organismo. presencia de oxgeno, el radical indu-
ticular, saliva, etc.) y cada vez hay ms Los antioxidantes. Los sistemas ce la oxidacin del azul de
datos comparativos para entender sus antioxidantes se pueden valorar inde- nitrotetrazolio y da origen a un com-
significados y los elementos que re- pendientemente a travs de medir la puesto colorido que se detecta a una
flejan estos resultados. actividad, la expresin y la concentra- longitud de onda de 560 nm. La acti-
Con las consideraciones descritas cin de las enzimas antioxidantes, vidad de SOD presente en la muestra
se puede indicar que la evaluacin de tambin se pueden medir las concen- reduce al radical O2 obtenindose con
la capacidad antioxidante total es un traciones de antioxidantes endgenos ello una reaccin colorida, por lo que
parmetro que puede ser til desde el y por supuesto de cosustratos la actividad de SOD es proporcional
punto de vista diagnstico. Sin embar- antioxidantes. Es posible evaluar la a la menor cantidad de color en uni-
go, otras consideraciones deben de capacidad de los sistemas de reparacin dad de tiempo.
realizarse para poder aclarar su posi- y eventualmente se pueden medir las Para evaluar la actividad de la CAT
ble valor en este sentido. concentraciones de antioxidantes se sigue la reaccin de descomposi-
exgenos. Las evaluaciones pueden ser cin del H2O2, por la prdida de la ab-
Evaluacin de los procesos de oxi- directas por diferentes mtodos por sorcin a 240 nm o se mide la libera-
dacin y de los sistemas antioxi- ejemplo, la concentracin de una pro- cin de O2 utilizando un electrodo es-
dantes tena de transporte, la enzima pecfico.
El dao oxidativo. La oxidacin de antioxidante o de reparacin, la activi- La accin de la GPx puede ser va-
cidos nucleicos se puede evaluar con dad de una enzima antioxidante, la con- lorada indirectamente por la reaccin
ensayos cometa (electroforesis centracin neta de un antioxidante o de acoplada con la GR. El GSSG produ-
unicelular alcalina) para ver el dao a un cosustrato antioxidante, necesario cido por la reaccin con los
ADN, el dao a las cadenas y la rup- para la actividad de enzimas hidroperxidos catalizada por la GPx
tura con tcnicas de dicroismo circu- antioxidantes. es reciclado a su estado reducido por
lar y electroforesis. El dao oxidativo Las evaluaciones antioxidantes fre- la GR usando como coenzima el
a las protenas se puede medir con la cuentemente son indirectas y por inhi- NADPH. La oxidacin de NADPH a
presencia de aductos de agentes bicin, donde un agente oxidante lla- NADP+ se acompaa de la disminu-
oxidantes por mtodos de HPLC e mado inductor generalmente un radi- cin de su absorbancia a 340 nm, la
inmunohistoqumica; la carbonilacin cal libre, oxida a una molcula moni- tasa de disminucin de la absorbancia
oxidativa de residuos de protenas y tor (sonda) que sufre un cambio de co- a 340 nm es directamente proporcio-
la generacin de enlaces sulfhidrilo lor, emite luz (quimioluminiscencia), nal a la actividad GPx de la muestra.
anmalos, adems de la ruptura del fluorescencia o electricidad o se pue- La actividad de la enzima GST puede
enlace peptdico por electroforesis, de detectar por sus productos ser determinada utilizando como
calorimetra, dicroismo circular y (inmunoqumica o espectro de masas); sustratos al 1-cloro-2,4-dinitrobenceno
espectrofotometra. La oxidacin de la capacidad antioxidante se mide (CDNB) y glutatin reducido
lpidos puede determinarse midiendo cuando al colocar la muestra a eva- (GSH), en donde la GST cataliza la
las especies reactivas al cido luar, la oxidacin de la molcula son- conjugacin del grupo tiol del
tiobarbitrico y dienos conjugados por da se oxida y con ello el parmetro glutatin al CDNB. La absorbancia
mtodos espectofotomtricos y modificado. Una vez comparada la del producto GS-DNB a 340 nm, es
HPLC. El dao a carbohidratos se intensidad de la inhibicin de la mo- directamente proporcional a la acti-
puede estudiar con la determinacin dificacin en las mismas condiciones vidad de la GST.
con inmunohistoqumica o con reac- con un antioxidante de potencia co- La GR se puede evaluar espectro-
ciones especficas de oxidacin de nocida por ejemplo, trolox, se pueden fotomtricamente por la prdida de
grupos particulares. obtener los equivalentes de la capaci- absorbancia a 340 nm generada por
La evaluacin de la oxidacin se dad antioxidante. Con discretas va- la oxidacin de NADPH o por el in-
basa en el dao a macromolculas en riantes todas las mediciones cremento en la absorbancia a 412 nm
condiciones estacionarias, estables y antioxidantes se basan en un princi- generado por la reduccin del cido
REB 28(3): 89-101, 2009 La capacidad antioxidante total 97

5,5-ditiobis 2-nitrobenzoico (DTNB). lor se mide a 565 nm y es proporcio- mar en cuenta que el estado oxidativo
La actividad de la enzima TQR nal a la concentracin de NADPH de integra el efecto de la exposicin a
(tocoferilquinonarreductasa) y la DAR la muestra; mientras que el NADP+ de oxidantes acoplado con los mecanis-
se pueden evaluar determinando la la muestra se transforma a NADPH mos protectores antioxidantes de una
transformacin de tocoferilquinona a empleando a la glucosa-6-P deshidro- manera dinmica y no como una cons-
tocoferol o de deshidroascorbato a genasa. tante esttica independiente.
ascorbato, respectivamente, con res- El ensayo del cometa y el ensayo
pecto al tiempo y cuantificando por de inhibicin de la poliADP-ribosa Evaluaciones globales
HPLC la concentracin de tocoferol polimerasa (PARP) son las tcnicas Dentro del dinamismo del balance
o de ascorbato, empleando un detec- empleadas para la evaluacin de la oxidativo, se pueden observar siste-
tor de absorcin ultravioleta-visible, reparacin del ADN, los metabolitos mas que al analizarlos presenten ni-
a 295 nm o 254 nm, respectivamente. 8-oxoguanosina (8-oxodG) y glicol veles elevados de oxidacin,
La actividad de la glucosa 6-fosfato timina (GT) pueden ser utilizados lipoperoxidacin y ADN, asociados
deshidrogenasa se puede evaluar ini- como marcadores de ataque al ADN y con una respuesta antioxidante apa-
ciando la reaccin con glucosa-6- las pruebas de inhibicin, indican los rentemente eficiente, indicando que el
fosfato y detectando la reduccin del mecanismos de defensa y su eficien- insulto es superior a la respuesta; Por
NADP+ a 340 nm. cia. otro lado, se pueden tener sistemas que
La actividad de la TR, puede de- La reparacin de las bases al analizarlos se presenten con alto
terminarse por la formacin de pro- escindidas es ejecutada por un siste- nivel de dao y deficiente respuesta
tenas reducidas con respecto al tiem- ma denominado (BER, por sus siglas antioxidante, indicando que aun con
po determinando los grupos tiol de- en ingls) y las vas de reparacin de un insulto menor se puede tener mu-
tectando su absorbancia a 415 nm al la escisin de nucletidos (NER, por cho dao al no tener una respuesta efi-
hacerlos reaccionar con el reactivo sus siglas en ingls). Para el anlisis ciente; por lo que la evaluacin nica
DTNB que interacciona con el grupo de los sistemas de reparacin BER y e independiente del insulto pro-
tiol para dar cido tionitrobenzoico en NER se puede emplear un ADN cir- oxidante o del fenmeno antioxidante,
una reaccin equimolar para cada re- cular con 8-oxoG como sustrato en puede propiciar errores de interpreta-
siduo de cistena. clulas de mamferos, donde al expo- cin y limitaciones para su aplicacin
Las vitaminas C y E pueden cuan- ner al sistema a estudiar se determina clnica.
tificarse por HPLC empleando un de- la cantidad de bases reparadas. Con respecto a los antioxidantes
tector de absorcin ultravioleta-visi- Tambin se pueden estudiar la can- extracelulares y endgenos, los prin-
ble, permitiendo un anlisis rpido y tidad de aductos o la inhibicin de pro- cipales antioxidantes del plasma hu-
especfico de los picos a una longitud duccin de aductos en pruebas in vivo mano son la albmina y el cido rico,
de onda de 254 y 295 nm, respectiva- o in vitro. Para determinar la repara- los cuales conforman ms del 50% de
mente. cin de protenas se pueden determi- la actividad antioxidante total.
En el caso del glutatin en sus dos nar entrecruzamiento y biotinilizacin En trminos generales se puede se-
formas oxidado y reducido se pueden en pruebas de inhibicin. Otras prue- alar que la mayora de los estudios
medir por HPLC; tambin se puede bas que pueden emplearse son sobre el estado oxidativo miden par-
estudiar con el cambio de color desa- espectrometra de masas, calorimetra, cialmente los marcadores biolgicos
rrollado por la reduccin del DTNB a dicroismo circular, resonancia magn- involucrados en el proceso y estable-
412 nm reducido por GSH; el empleo tica nuclear, entre otras pruebas aco- cen aseveraciones generalizadas res-
de la enzima GR, transforma el GSSG pladas con ensayos de inhibicin, para pecto la etiologa, la fisiopatologa y
en GSH por lo que se obtiene el determinar indirectamente los siste- el pronstico de muchos de los pade-
glutatin total, la diferencia permite mas de reparacin. cimientos crnico-degenerativos, lo
obtener el GSSG y con un sencillo Todas estas determinaciones espe- cual genera confusin, resultados in-
calculo la relacin GSH/GSSG. cificas son utilizadas como consistentes y contradictorios con res-
El NADPH se puede medir apro- biomarcadores aislados y de manera pecto a la evaluacin de la agresin
vechando la reduccin del colorante esttica, interpretando el estado oxidativa y la respuesta antioxidante
azul de tetrazolio (MTT) inducido oxidativo como el incremento de las del sistema. Por tal motivo, es indis-
por el NADPH y en presencia de biomolculas oxidadas o la disminu- pensable establecer propuestas que
metasulfato de fenazina (PMS), la cin de los componentes antioxidantes incluyan todos los parmetros existen-
disminucin en la intensidad del co- intracelulares o extracelulares, sin to- tes para medir un mecanismo
98 Quintanar Escorza MA y Caldern Salinas JV

bioqumico tan complejo como es el atrapamiento de radicales (TOSC, antioxidante es efectivo para el radi-
estado oxidativo y as evitar contra- ORAC y TRAP, por sus siglas en cal hidroxilo, la prueba mostrar como
dicciones y confusin. ingls, respectivamente) (Tabla I). si no existiera o fuera muy pobre la
Sin embargo, estas pruebas suelen actividad antioxidante, lo cual es muy
Tcnicas para determinar la capa- ser ms complicadas y de difcil frecuente que ocurra cuando se prueba
cidad antioxidante total estandarizacin. capacidad antioxidante de sustancias
Los mtodos de determinacin de la La seleccin de la tcnica a usar puras o de muestras poco complejas y
actividad antioxidante total se basan debe de tener en cuenta que los ini- con pocos grupos antioxidantes.
en comprobar cmo un agente ciadores pueden ser oxidantes que Este problema es menor cuando se
oxidante induce dao oxidativo a un capturan electrones o hidrgenos, lo quiere conocer la capacidad
sustrato oxidable, dao que es inhibi- cual esta valorando al antioxidante que antioxidante de muestras complejas,
do o reducido en presencia de un existe en la muestra y con ello puede clulas o tejidos, ya que en este caso
antioxidante. Esta inhibicin es pro- afectar y ser ms o menos eficiente; el sistema amortiguador de la mues-
porcional a la actividad antioxidante por ejemplo, si es un prooxidante que tra compensa e integra cualquier
del compuesto o de la muestra. Por genera al radical superxido y el oxidante iniciador de la prueba y se
otra parte, hay ensayos que se basan
en la cuantificacin de los productos
formados tras el proceso oxidativo. Sistema Iniciador
Los distintos mtodos difieren en el productor de
agente oxidante, en el sustrato emplea- oxidantes Oxidante-(e- H)
do, en el tiempo de evaluacin, en la Oxidante reducido
tcnica instrumental utilizada, la sen-
sibilidad y en las interacciones de la Sonda
muestra con el medio de reaccin (Ta- (e- H) Luz
Sonda Color
bla I y Fig. 3). La mayora de los m-
Oxidada Fluorescencia
todos de medida de la actividad
antioxidante no emplean especies ra- Absorbancia
dicales de significado biolgico, sino Conductividad
Sonda Voltaje
radicales que son oxidantes iniciado-
Oxidada Masas
res ajenos al organismo; por ejemplo, Inmunoreactividad
el 2',2'-azobis-2-methylpropiona- Sonda
mida (AAPH.) o el 2,2-difenil-1- (e- H)
picrilhidrazilo (DPPH).
Algunos ensayos usan sistemas Oxidante
complejos para poder generar radica- Oxidante-(e- H)
Sistema Iniciador reducido
les libres y medir la capacidad productor de
antioxidante (Fig. 3), tal es el caso del oxidantes
ensayo llamado habilidad del plasma
para reducir las sales frricas (FRAP, Sistema antioxidante
por sus siglas en ingles) donde el Fe2+ Sistema antioxidante oxidado
y el H2O2 en la reaccin redox produ- (e- H)
ce el radical OH. El empleo de los
radicales peroxilo o hidroxilo en los Figura 3. Esquema que muestra el mecanismo general para la evaluacin de los sistemas
ensayos les aade un mayor signifi- antioxidantes. Un agente iniciador productor de oxidantes inicia el proceso, el oxidante produ-
cado biolgico, ya que estas especies cido oxida a la sonda. La sonda oxidada (negritas) tiene cambios susceptibles de cuantificarse
reactivas son las ms importantes a por alguna propiedad que confiere la oxidacin (parntesis rectangular). En la parte inferior
del esquema se muestra la competencia que se establece entre el antioxidante al que se enfrenta
nivel fisiolgico tales pruebas son por
el oxidante en el proceso de evaluacin y que compite con la sonda por el oxidante que gener
ejemplo las llamadas capacidad total el iniciador, lo que lleva a que la oxidacin de la sonda sea menor (negritas y flecha) y con ello
de retiro de oxirradicales, capacidad un menor cambio cuantificable (parntesis rectangular). La menor oxidacin de la sonda de-
de absorcin de radicales de oxgeno pender de la concentracin y de la capacidad antioxidante del sistema correspondiente (como
y potencial total antioxidante de se indica con las flechas punteadas).
REB 28(3): 89-101, 2009 La capacidad antioxidante total 99

TABLA 1
Caractersticas generales de algunas pruebas para la evaluacin de la capacidad antioxidante total

Prueba DCFH-DA Crocina DPPH ABTS FRAP ORAC Luminol TRAP VC TOSC

Tcnica Espectro- Espectro- Espectro- Espectro- Espectro- Fluorometra Quimio Consumo de Voltametra Cromatografa
fotometra fotometra fotometra fotometra fotometra luminiscencia oxigeno ciclica de gas

Iniciador APPH ABAP DPPH Hidroxilo Hidroxilo APPH APPH APPH Corriente ABAP
(oxidante) electrones

Monitor DCFH-DA Crocina DPPH ABTS TPTZ-Fe Ficoeritrina Luminol Oxigeno Voltaje a-ceto-m
(sonda) butrico

Condicin de 504 nm 433 nm 515 nm 414 nm 595 nm Exc 504 nm 490 nm Unidades mV Integracin
cuantificacin Em 565 nm arbitrarias

Forma de Equivalentes Equivalentes I-50 Equivalente uM Fe/l Equivalentes Equivalentes Equivalentes Potencial Equivalentes
expresin de de trolox de trolox s de trolox de trolox de trolox de trolox redox trolox
resultados

2,2,7-diclorofluorescena diacetato (DCFH-DA), 2,2-difenil-2-picrilhidrazilo (DPPH), 2,2-azinobis-(cido -3 etilbenzotiazolino-6-sulfnico)


(ABTS), 2',2'-azobis-2-metilpropionamida (APPH.), 2,4,6-tri(2-piridil)-s-triazina (TPTZ), 2,2'-azobis(2-amidinopropano) (ABAP), potencia
antioxidante reductora frrica (FRAP), capacidad de absorcin de radicales libres de oxigeno (ORAC), potencial total de atrapamiento de
radicales perxido (TRAP), capacidad total de atrapamiento de oxi-radicales (TOSC), voltametra cclica (VC).

integran los diferentes antioxidantes da y de ambos con respecto a la con- El valor diagnstico
para compensan las especies iniciado- centracin esperada de antioxidante en Los procesos celulares y las enferme-
ras y las que se forman por efectos de la muestra, lo que permite manejar las dades asociadas directa o indirecta-
las oxido reducciones de los concentraciones de la muestra para mente con dao oxidativo y con estrs
antioxidantes involucrados. disear curvas de inhibicin con un oxidativo se han incrementado verti-
Los monitores de la oxidacin mnimo de interferencia, en tiempos ginosamente con cascadas de informa-
(sondas) son las molculas oxidadas muy cortos y con alta intensidad de cin. Sin embargo, para que se califi-
que reportan la intensidad del dao respuesta. que la participacin de procesos
que produce el iniciador (oxidante); En caso de muestras pequeas o oxidativos en una enfermedad es ne-
al inicio se emple el dao oxidativo con bajas concentraciones de cesario que se cumplan algunos crite-
avanzado a una molcula (cidos antioxidantes, las tcnicas pueden rios tales como: Daos compatibles
grasos, carotenos, protenas, ADN), adaptarse para hacer evaluaciones en con oxidacin; identificacin del
las pruebas eran poco sensibles, muy funcin de tiempo e integrar las reas agente oxidante en el sitio de lesin;
inespecficas y sin poder tener evalua- bajo la curva lo que permite aumentar reproduccin del dao con otro agen-
ciones dinmicas. Posteriormente, se la sensibilidad, an cuando se debe de te oxidante; que el dao se retire al
han desarrollado diversos mtodos tener en cuenta el aumento de interfe- retirar el agente oxidante y que la en-
que usan sondas desarrolladas rencia y la posibilidad de oxidacin fermedad responda al tratamiento
especficamente para estas pruebas espontnea de las propias sondas, antioxidante.
(Tabla I), las cuales permiten evaluar afectando la evaluacin global y ge- La mayor parte de las veces se aso-
pasos iniciales de oxidacin en tiem- nerando falsos negativos. cia la enfermedad con la oxidacin solo
pos muy cortos, en ventanas de tiem- La mayora de los mtodos para por un criterio, sin importar si se cum-
po inicial, con mayor sensibilidad y medir la capacidad antioxidante estn plen o no con los otros criterios. Lo
especificidad; el 2,2-azinobis-(cido diseados para evaluar muestras anterior genera solo una pequea pro-
-3 etilbenzotiazolino-6-sulfononico) hidrosolubles; sin embargo, es posi- porcin de enfermedades que se puede
diamonio (ABTS+.) y el 2,2,7- ble emplearlos con detergentes, sol- tener la certeza de estar asociadas con
diclorofluorescena diacetato (DCFH- ventes e incluso con fracciones oxidacin, aunque la investigacin cl-
DA) son molculas sonda mas fre- particuladas, una vez que se hacen las nica cada vez con ms herramientas
cuentemente empleadas (Tabla I). matrices, los controles y los blancos diagnosticas incrementa cada vez ms
Para evitar las interferencias se em- correspondientes y asegurarse que no las posibilidades de estudiar esta aso-
plea una alta relacin molar entre la hay precipitacin de la muestra en los ciacin y con ello la cantidad de enfer-
sonda y el iniciador a favor de la son- tiempos de evaluacin (13, 14, 15). medades que tienen a la oxidacin
100 Quintanar Escorza MA y Caldern Salinas JV

como etiologa, patognia o compli- nado a que integran de manera global nivel de campo y de consultorio re-
cacin de las mismas. la evaluacin de los sistemas amorti- sultarn en muy corto plazo en valo-
Muchos esfuerzos se han realiza- guadores antioxidantes y su estatus res lmite ms confiables y en inter-
do para que las enfermedades asocia- temporal, las hace muy adecuadas pretaciones ms concretas y adecua-
das con las oxidaciones puedan ser como gua diagnstica. das.
diagnosticadas y tratadas con Ante una evidencia clnica o de la-
antioxidantes, nuevamente se ha reba- boratorio de dao, un incremento de Conclusiones
sado el diagnstico y la evaluacin la capacidad antioxidante total puede El conocimiento cada vez ms profun-
correcta de resultados con una serie indicar un estrs oxidativo y una res- do de los procesos oxidativos y las
de pruebas parciales que muestran re- puesta antioxidante del organismo, lo defensas antioxidantes, permite poco
sultados favorables con el tratamien- que implica un sobregasto de a poco y de mejor manera su integra-
to antioxidante, pero que no permiten antioxidantes y la necesidad de una cin a la etiologa o fisiopatologa y
establecer bases slidas para la ade- intervencin teraputica. Una reduc- con ello a elementos diagnsticos en
cuada evaluacin de la participacin cin de la capacidad antioxidante to- la clnica de mltiples enfermedades
oxidante y antioxidante en el curso de tal ante evidencia de dao puede indi- asociadas a la oxidacin. El desarro-
las enfermedades. car una falta de respuesta, disminucin llo del conocimiento de los sistemas
Enfermedades como la diabetes, la de antioxidantes o un insulto oxidativo amortiguadores antioxidantes, su for-
artritis, los infartos, las infecciones, las que supera la capacidad antioxidante ma de funcionar y la posibilidad tc-
intoxicaciones, el empleo de algunos y con ello la indicacin de una inter- nica de medirlos eficientemente, abre
frmacos, entre muchas otras, cursan vencin teraputica antioxidante. una carretera de conocimientos que
con fases oxidativas que son suscep- La capacidad antioxidante total permiten entender la respuesta
tibles de ser tratadas con antioxidantes tambin puede ser empleada para va- antioxidante en la gnesis, proteccin
y mejorar la evolucin y evitar algu- lorar, individualizar y dar seguimien- y forma de evolucin de las enferme-
nas complicaciones (16). to a la efectividad de un tratamiento dades. En tal contexto, la capacidad
Para poder realizar el diagnstico antioxidante y no sobremedicar o dar antioxidante total se ofrece como una
y la intervencin correcta es necesa- tratamientos insuficientes al paciente. gran alternativa para estudiar sustan-
rio aplicar pruebas ms rpidas y es- El gran reto de estas pruebas es es- cias puras, fluidos clulas, tejidos, no
pecficas e interpretarlas correctamen- tandarizar los valores normales para slo para entender la biologa de los
te. En tal sentido, la evaluacin de la poblaciones especficas ya que al mo- fenmenos, sino incluso para tener un
oxidacin de los antioxidantes y la ca- mento los resultados solo pueden ser lugar en las pruebas diagnsticas; su
pacidad antioxidante adquieren un pa- comparativos y relativos y aunque desarrollo tcnico y su interpretacin
pel sobresaliente, adicional al emplea- muy tiles, an no pueden ofrecer va- dar una plataforma para entender
do en el estudio bsico y el estudio lores normales poblacionales. Sin mejor la respuesta oxidativa de los
clnico de las enfermedades nuevas (2, embargo, la evaluacin masiva, su in- organismos que han aprendido a de-
4, 12). troduccin cada vez ms frecuente en fenderse de la oxidacin en una atms-
Dada la facilidad y rapidez de las pruebas diagnsticas, los mtodos co- fera oxidante y con un metabolismo
pruebas de capacitad antioxidante, au- merciales que facilitan la aplicacin a oxidativo.

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