AO DE LA DIVERSIFICACION PRODUCTIVA Y EL

FORTALECIMIENTO DE LA EDUCACION

UNIVERSIDAD NACIONAL DE
PIURA
FACULTAD DE INGENIERIA
INDUSTRIAL

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL E

INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

INFORME N08: COLIMETRIA

CURSO: MICROBIOLOGIA

INTEGRANTES:
CALLE DAZ JOSEFA

JULCA MORALES MAYBELLINE JHANETT

DOCENTE: JULIA TICONA MICHILOT

FECHA DE ENTREGA: 07/12/2015

PIURA PER
2015
INTRODUCCION
En esta prctica, vamos a centrarnos en determinar las bacterias coliformes presentes en un agua
mediante el Mtodo de los tubos mltiples colimetria y en la prctica siguiente se realizara un
recuento del nmero de bacterias aerobias totales en un agua problema. El anlisis
microbiolgico de un agua, tiene como finalidad, el control de calidad microbiolgica de la
misma, segn establece el Ministerio de Sanidad y Consumo por Orden Ministerial publicada en
el BOE. En dicha Orden se establecen las normas oficiales de anlisis para la investigacin de:

Bacterias aerobias totales

Bacterias coliformes

Estreptococos fecales y

Clostridios sulfito reductores.

Existen diversos mtodos para cuantificar el nmero de microorganismos presentes en muestras

lquidas y slidas. Dentro de las tcnicas ms comunes se encuentra el recuento directo por
microscopia de fluorescencia, as como los procedimientos basados en diluciones en serie,
haciendo crecer microorganismos en medios de cultivo sintticos slidos o lquidos, como el
recuento en placa de Unidades Formadoras de Colonias

(UFC) o la estimacin por el mtodo del Nmero Ms Probable (NMP).

El mtodo del nmero ms probable fue descrito por McCrady en 1915 y actualmente sigue
siendo ampliamente utilizado. En un principio este mtodo fue empleado para estimar el nmero
de microorganismos en muestras de alimentos y aguas. Sin embargo, se ha demostrado que
tambin puede ser aplicado para la determinacin de microorganismos aerobios y anaerobios en
lodos, sedimentos marinos y ssuelos contaminados, por tanto este mtodo es aplicable para
estimar el nmero de microorganismos en muestras de suelo y agua, tanto para bacterias aerobias
como anaerobias.
Los Coliformes Fecales son un subgrupo de los Coliformes totales, capaces de fermentar la
lactosa a 44 C en vez de 37 C como lo hacen los totales.
Aproximadamente el 95% del grupo de los Coliformes presentes en heces estn formados
por Escherichia coli y ciertas especies de Klebsiella. Ya que los Coliformes Fecales se
encuentran casi exclusivamente en las heces de los animales de sangre caliente, se considera que
reflejan mejor la presencia de contaminacin fecal. stos ltimos se denominan termotolerantes
por su capacidad de soportar temperaturas ms elevadas. Esta es la caracterstica que diferencia a
Coliformes Totales y Fecales. La capacidad de los Coliformes fecales de reproducirse fuera del
intestino de los animales homeotrmicos es favorecida por la existencia de condiciones
adecuadas de materia orgnica, pH, humedad. Desde hace mucho tiempo se han utilizado como
indicador ideal de contaminacin fecal. Su presencia se interpreta como una indicacin de que
los organismos patgenos pueden estar presentes y su ausencia indica que el agua o el alimento
estudiado se hallan exentos de organismos productores de enfermedades.

OBJETIVO

Determinar la presencia de coliformes en efluente o muestra de consumo.

Marco teorico
COLIFORME

La denominacin genrica coliformes designa a un

grupo de especies bacterianas que tienen ciertas Bacterias coliformes
caractersticas bioqumicas en comn e importancia
relevante como indicadores de contaminacin del Taxonoma

agua y los alimentos.

Reino: Bacteria
Caracteres bioqumicos

El grupo contempla a todas las bacterias entricas que Filo: Proteobacteria

se caracterizan por tener las siguientes propiedades
bioqumicas: Clase: Gamma Proteobacteria

ser aerobias o anaerobias facultativas;

ser bacilos Gram negativos; Orden: Enterobacteriales
no ser esporgenas; (Si es Gram negativo NO
esporula).
Familia: Enterobacteriaceae
Habitat del grupo coliforme
Gneros
Las bacterias de este gnero se encuentran
principalmente en el intestino de los humanos y de Escherichia

los animales de sangre caliente, es Klebsiella

decir, homeotermos, pero tambin ampliamente Enterobacter

Citrobacter
distribuidas en la naturaleza, especialmente
en suelos, semillas y vegetales.

Los coliformes se introducen en gran nmero al medio ambiente por las heces de humanos y
animales. Por tal motivo suele deducirse la mayora de los coliformes que se encuentran en el
ambiente son de origen fecal. Sin embargo, an existen muchos coliformes de vida libre.
Los coliformes como indicadores

Tradicionalmente se los ha considerado como indicadores de contaminacin fecal en el control

de calidad del agua destinada al consumo humano en razn de que, en los medios acuticos, los
coliformes son ms resistentes que las bacterias patgenas intestinales y porque su origen es
principalmente fecal. Por tanto, su ausencia indica que el agua es bacteriolgicamente segura.

Asimismo, su nmero en el agua es directamente proporcional al grado de contaminacin fecal;

mientras ms coliformes se aslan del agua, mayor es la gravedad de la descarga de heces.

Bacterias que integran el grupo de los coliformes

El grupo de los coliformes incluye bacterias en forma de bacilo, Gram negativos, con las
siguientes propiedades bioqumicas: oxidasa negativo y capacidad de fermentar lactosa, con
produccin de gas en 48 horas a una temperatura de 37 C.

El grupo coliforme est formado por los siguientes gneros:

1. Escherichia
2. Klebsiella
3. Enterobacter
4. Citrobacter
Coliformes totales y coliformes termotolerantes

No todos los coliformes son de origen fecal, por lo que se hizo necesario desarrollar pruebas para
diferenciarlos a efectos de emplearlos como indicadores de contaminacin. Se distinguen, por lo
tanto, los coliformes totales que comprende la totalidad del grupo y los coliformes
fecales aquellos de origen intestinal.

Desde el punto de vista de la salud pblica esta diferenciacin es importante puesto que permite
asegurar con alto grado de certeza que la contaminacin que presenta el agua es de origen fecal.
 Coliformes Termotolerantes

Las bacterias coliformes fecales forman parte del total del grupo coliforme. Son definidas como
bacilos Gram-negativos, no esporulados que fermentan la lactosa con produccin de cido y gas
a 44.5 C +/ 0.2 C dentro de las 24 +/ 2 horas. La mayor especie en el grupo de coliforme
fecal es el Escherichia coli.

La presencia de coliformes en el suministro de agua es un indicio de que el suministro de agua

puede estar contaminado con aguas negras u otro tipo de desechos en descomposicin.
Generalmente, las bacterias coliformes se encuentran en mayor abundancia en la capa superficial
del agua o en los sedimentos del fondo.

Los niveles recomendados de bacterias coliformes fecales son:

Agua potable: 0 colonias por 100 ml de la muestra de agua.

Natacin: menos de 200 colonias por 100 ml de la muestra de agua
Navegar/Pescar: menos de 1,000 colonias por 100 ml de la muestra de agua.
Revisar la NOM-004-SEMARNAT-2002, es una fuente ms confiable.

E. coli

El aislamiento de esta bacteria en el agua da alto grado de certeza de contaminacin de origen

fecal, alrededor del 99 %. No es absoluta porque se han aislado cepas de E. coli que no tienen
origen fecal, pero es un grado de certeza ms que razonable para certificar contaminacin con
ese origen. Sin embargo, el aislamiento de este microorganismo no permite distinguir si la
contaminacin proviene de excretas humana o animal, lo cual puede ser importante, puesto que
la contaminacin que se desea habitualmente controlar es la de origen humano. Esto no significa
menospreciar la de origen animal, especialmente dada la existencia de zoonosis, enfermedades
que son comunes al hombre y animales, que tambin se pueden transmitir por el agua.

Contaminacin fecal humana o animal

La Escherichia coli de origen animal y la de origen humano son idnticas. Sin embargo, algunos
investigadores han encontrado que las bacterias del gneroRodococcus se asocian solamente a la
contaminacin fecal por animales.
 Escherichia coli y bacterias coliformes termotolerantes

Las bacterias del grupo de los coliformes totales que son capaces de fermentar lactosa a 44-45 C
se conocen como coliformes termotolerantes. En la mayora de las aguas, el gnero
predominante es Escherichia, pero algunos tipos de bacterias de los gneros Citrobacter,
Klebsiella y Enterobacter tambin son termotolerantes. Escherichia coli se puede distinguir de
los dems coliformes termotolerantes por su capacidad para producir indol a partir
de triptfano o por la produccin de la enzima -glucuronidasa. E. coli est presente en
concentraciones muy grandes en las heces humanas y animales, y raramente se encuentra en
ausencia de contaminacin fecal, aunque hay indicios de que puede crecer en suelos tropicales.
Entre las especies de coliformes termotolerantes, adems de E. coli, puede haber
microorganismos ambientales.

Coliformes e higiene de alimentos

En la higiene de alimentos los coliformes no se consideran indicadores de contaminacin fecal

sino solamente indicadores de calidad.

Los coliformes totales se usan para evaluar la calidad de la leche pasteurizada, leche en polvo,
helados, pastas frescas, frmulas para lactantes, fideos y cereales para el desayuno.

Los coliformes fecales se usan para evaluar los mariscos frescos.

Por ltimo, la E. coli se usa como indicador en quesos frescos, quesillos, cereales, masas con
relleno, alimentos infantiles, cecinas cocidas y verduras frescas.

Coliformes y aguas servidas

La prueba de coliformes totales y fecales tambin se utiliza para determinar la calidad

bacteriolgica de los efluentes de los sistemas de tratamiento de aguas servidas.

Eliminacin de coliformes

La eliminacin de coliformes pude realizarse tanto en agua (dixido de cloro) como en aire,
(equipos de ozono certificados).
PROCEDIMIENTO:

1. Limpiar el rea de trabajo con alcohol y algodn.

2. Colocar los materiales que va a utilizar.
3. Prender el mechero.

4. Con la pipeta coger 10 ml de la muestra de bebida(Cebada)

5. Aperturar el matraz con solucin salina y agregarle los 10 ml de la bebida (cebada) y
agitar.
6. Sacar 1 ml del matraz (Solucion salina+ Cebada)
7. Agregarle al tubo 101 (testigo) 1ml de la solucin, agitar y sellar.
8. Sacar del tubo 10-1, 1ml, y agregarle al tubo 10-2(testigo), agitar y sellar.
9. Del matraz 10-1, extraer 3 ml para los tubos de ensayo se la seccin 10-3.
10. Del tubo de ensayo 10-2, extraer 3 ml para los tubos de ensayo de la seccin 10-2.
11. Del tubo de ensayo 10-1, extraer 3 ml para los tubos de ensayo de la seccin 10-1.
12. Rotular los tubos
13. Incubar a 37C por 24-48 hrs.
14. Observar si hay o no presencia de coliformes(Prueba presuntiva)
15. Observamos que solo en un tubo hay presencia de coliformes
16. Hacerle a este tubo la prueba confirmativa de caldo lactosa bilis verde brillante.
 4.- sacar 10ml de cebada 5.- agregar la cebada al matraz Muestra obtenida
con solucin salina.

Sacar la muestra del matraz para

6.-Sacar 1 ml del matraz Agregarle a los siguientes tubos. los tubos de 10-1
(Solucin salina+ Cebada)

Agregar a los tubos de ensayos Agregar del tubo testigo a los

sus respectivas muestras de respectivos tubos de ensayo.
testigo
RESULTADOS:

Tubos 10-1

Pudimos observar que en esta dilucin 1 de los 3 tubos presento fermentacin y produccin de gas lo
cual nos indica que hay presencia de Coliformes fecales y totales.

1/3

Tubos 10-2

Pudimos observar que en esta dilucin 0 de los 3 tubos no presento fermentacin y produccin de gas lo
cual nos indica que no hay presencia de Coliformes fecales y totales.

0/3
 Tubos 10-3

Pudimos observar que en esta dilucin 0 de los 3 tubos no presento fermentacin y produccin de gas
lo cual nos indica que no hay presencia de Coliformes fecales y totales.

0/3

TUBOS
-1
10 10-2 10-3
A + - -
B - - -
C - - -

Tabla
para

encontrar los valores de NMP:

Como se puede apreciar en la combinacion de tubos se obtuvo: 0-0-1. Fijndonos en la tabla se obtiene
un valor de 4 NMP/ml.
DISCUSIN

Qu caractersticas tienen las bacterias coliformes?

Son gramnegativos.
Aerobias hasta facultativo anaerobios.
Mesfilas hasta termfilas (44C, E. coli)
Sensibles a acido degradan la lactosa a cido y gas.

Qu medios de cultivo se emplean para el anlisis sobre bacterias coliformes?

Agar violeta cristal- rojo neutro bilis (AVRB)
Agar ENDO
Caldo EC (CEC)
Caldo laurilsulfato (CLS)
Caldo laurilsulfato fluorocult (CLSF)
Caldo verde brillante bilis lactose (CVBU)
Caldo verde brillante bilis lactosa fluorocult (CVBLF)

En el anlisis sobre bacterias coliformes con caldo verde brillante bilis

lactosa se muestra turbidez en los tubos, pero no se forma gas. Cmo se puede
explicar esto?
La turbidez fue causada por micrococos o enterococos que no producen gas y son
resistentes a verde brillante y bilis.

La turbidez fue causada por bacterias coliformes que no producen gas (muy raras veces)
CONCLUSIONES
Podemos concluir con respecto a los objetivos antes relacionados que la determinacin de
bacterias coliformes fecales y totales, pueden estar presentes tanto en los alimentos como en los
sistemas de agua potable, ya que estos microorganismos se pueden transmitir a travs de las
heces fecales.
La mayora de los enterococos, estreptococos y dems grupos o gneros microbianos son algunos
patgenos y no patgenos, de estos se pueden preparar fermentaciones, que mediante un largo
proceso, llegan a ser elaboradas en productos comestibles, garantizando al consumidor la mayor
seguridad al consumir ese producto fermentado.