Fundamentos sobre atribuio

de frmulas moleculares na
espectrometria de massas

Discente: Ms. Gssica A. Vasconcelos

Orientador: Prof. Dr. Boniek G. Vaz Maio, 2017
O que espectrometria de massas?
 Espectro de Massas
515.03729
100

ons
90

80

70

60

Relative Abundance
50

40

30

20

10

0
100 200 300 400 500 600 700 800 900 1000 1100 1200

m/z
 O que so istopos?

1H 1H 1H
1 2 3

- - -
n nn
+ + +
Todos elementos tem istopos?
 Abundncia isotpica
12C 100% 14N 100% 64Zn 100%
13C 1,082% 15N 0,369% 66Zn 57,372%
68Zn 38,556%
79Br 67Zn 8,431%
35Cl 100% 100%
81Br 70Zn 1,275%
37Cl 31,961% 97,278%

M M+2
35 79 81
100
36 Cl
100
Br Espectro
50 50
contendo
37
zinco?
0 0
m/z m/z
 Perfil Isotpico do Zn
64
100
Abundncia
95
Istopo Nomenclatura
90
85
relativa
80
75 64Zn 100% M
70
Relative Abundance

65
60 66 66Zn
55
57,372% M+2
50
45
68 68Zn 38,556% M+4
40
35
30
25 67Zn 8,431% M+3
20
15
10 67
70Zn 1,275% M+6
5 70
0
62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72
m/z
 Perfil Isotpico [C22H19N4O2 Zn]+

Massa
Nomimal Monoisotpica

H=1 1H = 1.0078
C = 12 12C = 12.0000

436.782 435.079 Cl = 35 Molecular

35Cl = 34.9688

Massa Massa
molecular monoisotpica H = 1.0079
C = 12.000
Cl = 35.4532
 Perfil Isotpico [C22H19N4O2 Zn]+

M
100
435.07940
Isotope Simulation
M+3
80
M+2
437.07629
60
M+4 M+6
439.07510
40
436.08275

Relative Abundance
20 438.07964
440.07845
441.07893
0
435.07968
100
Acquired Spectrum
Istopo
Abundncia
Nomenclatura C2113C1H19N4O2Zn
relativa 80

64Zn 100% M 60 437.07596

436.782
66
Zn 57,372% 435.079 M+2 40 439.07434
436.08228 438.07788
68Zn 20
38,556% M+4 440.07724
441.07758
0
67Zn 8,431% M+3 430 432 434 436 438 440 442 444 446 448 450
m/z
70
Zn 1,275% M+6
 Defeito de Massa
Exemplo: $He
%
amu = u = Da = %& C = 1.66054 x 10-27 Kg

Experimental

mhlio = 4.00150608 amu

Terico

mprton = 1.00227647 x 2 = 2.01455294 amu

mneutron = 1.00866490 x 2 = 2.01733298 amu +

mhlio = 4.03188274 amu

 Defeito de Massa
%
amu = u = Da = %& C = 1.66054 x 10-27 Kg
Exemplo: $He Energia de ligao
nuclear

mterica = 4.03188274 amu

-
mexperimental = 4.00150608 amu

+0.003037666 amu

Velocidade da Luz
DEFEITO DE
MASSA
 $
Defeito de Massa He

p p
p p Energia
de ligao
+
nuclear
n n
n n (E = m.c2)
Defeito de Massa
Massa Massa
Elemento
nominal atmica
1H 1 1.007825
2 He 4 4.002603
3 Li 7 7.016004
4B

5 Be
7 7.016004 +
9 9.012182
6C 12 12.00000
7N 14 14,003074
8O 16 15,994915
9F 19 18.99840

-
11 Na 23 22.98977
15 P 30 30.97376
16 S 32 31.97207
17 Cl 35 34.96885
Por que defeito de massa importante?
Massa
m/z 180 Da? nominal

Massa
exata

CCHHNNOO
 Exatido de massas

Erro (amu) = mexata - mexperimental

mexata mexperimental +
Erro (em ppm) = . 10
mexata

mexata = 400.0000 Erro = 400.000 400.0020 = 0.0020 amu

mobtido = 400.0020
'.''&
Erro (ppm) = x 10+ = 5 ppm
$''
%
amu = u = Da = %& C = 1.66054 x 10-27 Kg
 Erro negativo existe?
Erro (amu) = mexata - mexperimental

m/z m/z m/z

+ 0 -
amu (ppm) amu (ppm) amu (ppm)
m/z Terico
m/z Experimental
Xcalibur
 Modos de Obteno do Espectro
Gaussian Lorentzian

Modo
contnuo

Intensidade
Mxima

Modo Centride
centride

m/z
m/z
 Como a massa determinada?
100

Relative intensity
50

0
2006.1 2008.1 2010.1 2012.1 2014.1
m/z

100

Relative intensity
50

Ai intensidade 0
mi massa 1721.9 1723.9 1725.9 1727.9
m/z
Resoluo x Poder de Resoluo

Resoluo de x Poder de
massa Resoluo
Resoluo de Massa
2 2/5
= =
2 2/5

8''.''
/ = 8''.'89$::.:8

8''.''
=
'.%

R = 5000
m/z
Resoluo de Massa
Poder de Resoluo
Por que alta resoluo importante?
m/z 250-550 ESI(+) QExactive
m/z 180-1000
100

90

80

70
Relative Abundance

60

50

40

30

20

10

0
200 300 400 500 600 700 800 900 1000
m/z
Por que alta resoluo importante?
m/z 300-350

100

90

80

70
Relative Abundance

60

50

40

30

20

10

0
260 280 300 320 340 360 380 400 420 440 460 480 500 520 540
m/z
 Por que alta resoluo importante?
m/z 324-325

100

90

80

70
Relative Abundance

60

50

40

30

20

10

0
300 305 310 315 320 325 330 335 340 345 350
m/z
 Por que alta resoluo importante?
m/z 324.264-325.272

324.26859
100

90

80

70
Relative Abundance

60

50

40 324.23224

30
324.17450
20

10 324.32614
324.13846
0
324.0 324.1 324.2 324.3 324.4 324.5 324.6 324.7 324.8 324.9
m/z
 Por que alta resoluo importante? R=126006
W=2.6mmu

324.26855 324.26855
R = / = = = 124178
324.2698 324.2672 0.0026

324.26855
100

90

80 324.2672 324.2698
Relative Abundance

70
60

50

40
30

20

10
0
324.264 324.265 324.266 324.267 324.268 324.269 324.270 324.271 324.272
m/z
 Por que alta resoluo importante?
294.22165
R=132202
100 338.28418
95 R=123306
90
366.31555
85 R=117502
254.19034
80 R=139006 392.33118
R=113706
75
420.36252
Relative Abundance

70
R=109406
65
222.12778
60 R=149206 462.40952
55 R=104602
50
522.59753
45 R=97606
40
35
30 572.51947
R=92106
25 636.55090
R=86706
20 692.61377
15 R=81006 762.69141
10 R=76506 848.80182 914.84821
R=69906 R=62906 962.84943
5 R=59106
0
200 300 400 500 600 700 800 900 1000
m/z
 Qual a resoluo necessria?
C24H19N C21H23NS

321.1517 321.1551

m 321.1534 321.1517
R= = = = 94456
m50% 321.1517 321.1551 0.0034
 Correlao entre resoluo e exatido

324.26859
100

90

80

70 Resoluo Exatido
Relative Abundance

60

50

40 324.23224

30
324.17450
20

10 324.32614
324.13846
0
324.0 324.1 324.2 324.3 324.4 324.5 324.6 324.7 324.8 324.9
m/z
Resoluo vs. Preo
Year of 2004

Orbitrap
 Concluso

Perfil de istopos importante para confirmar a presena se

certos elementos

Defeito de massa importante na atribuio de frmulas

Resoluo necessria depende da amostra, da matriz e da

abundncia relativa.

Resoluo e exatido de massa esto intrinsicamente ligados e

so importantes para resolver problemas analticos complexos
Obrigada pela
ateno!