UNIVERSIDAD NACIONAL DE JAN INGENIEA DE INDUSTRIAS ALIMENTARIAS-VII

PRACTICA N 3

PRODUCCION DE BIOMASA EN UN BIORREACTOR DE COLUMNA DE

BURBUJAS

I. OBJETIVOS
Evaluar el comportamiento del biorreactor de columna de burbujas,
durante el proceso de obtencin de biomasa de Saccharomyces
cerevisiae.
Evaluar el rendimiento de biomasa logrado en el sustrato.
Identificar las condiciones en que Saccharomyces cerevisiae realiza la
reproduccin celular

II. FUNDAMENTO

Muchas sustancias valiosas econmicamente, son producto del

metabolismo microbiano. La buena marcha de las industrias de bebidas
y del vino depende de la capacidad de las levaduras para producir
alcohol. Vitaminas, aminocidos y otras sustancias qumicas son
fabricadas comercialmente mediante procesos microbiolgicos.

Los procesos de conversin del sustrato en un nuevo producto, es

posible si se garantiza el crecimiento celular del microorganismo de
inters, por ello el inters del investigador en evaluar el crecimiento
microbiano, mediante pruebas rpidas como: recuento celular,
determinacin del peso hmedo o del peso seco. El aumento
considerable de la poblacin del microorganismo de estudio constituye
lo que se conoce como biomasa, y es punto de partida para el desarrollo
de cualquier proceso biotecnolgico y especialmente el fermentativo.

El funcionamiento de cualquier birreactor depende de muchas funciones

incluyendo:
La concentracin de la biomasa, la cual debe permanecer alta;
El mantenimiento de las condiciones estriles;

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Distribucin uniforme del sustrato y microorganismo en el reactor;

Eliminacin del calor generado.
Hay tres grupos de biorreactores usados actualmente para la produccin
industrial:
No agitados, sin aireacin (86%)
No agitados, con aireacin (11%)
Agitados, con aireacin (13%)

BIORREACTORES SIN AGITACION Y CON AIREACION

En los reactores de columna de burbujas, la aireacin y la mezcla

se alcanza mediante la inyeccin de gas, proceso que requiere menos
energa de adaptacin mecnica. Las columnas de burbujas se emplean
industrialmente para la produccin de levadura de panadera, cerveza y
vinagre, y en el tratamiento de aguas residuales. En la produccin de
levadura de panadera es normal utilizar una relacin altura-dimetro de
3:1, mientras que en otras aplicaciones pueden utilizarse torres con
relaciones de 6:1. En los reactores muy altos se instalan placas
horizontales perforadas para evitar la coalescencia de las burbujas y
lograr una mejor redistribucin del aire.

Las ventajas del reactor de columna de burbujas incluyen los

bajos costos de capital, la ausencia de partes mviles y un adecuado
rendimiento de la transferencia de materia y de la transmisin de calor.
La presencia de espuma puede ser un problema y ser necesario un
dispersor mecnico o un agente antiespumante. La hidrodinmica de la
columna de burbujas y las caractersticas de la transmisin de calor
depende por completo del comportamiento de las burbujas formadas en
el difusor.

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III. MARCO EXPERIMENTAL

3.1. Materiales
1) Muestra: Un litro de mosto de uva filtrado, sin adicin de azcares

2) .Material biolgico: Cultivo de repique de cepa de Saccharomyces

cerevisiae. Tambin se puede usar la levadura que se emplea para
panadera.
3) Material y equipo de laboratorio:
Un reactor de columna de burbujas de vidrio.
Purificador de aire
Una bomba de aire
Cocina semindustrial
Olla
Mostmetro
Brixmetro
Equipo de titulacin
Matraces tipo erlenmeyers de 125ml
Baguetas de vidrio

4) Reactivos
Agua destilada
Indicador fenolftalena
Solucin de NaOH 0.1 N

3.2. MTODOS

a) Higienizacin del reactor:

Considerando que las condiciones de esterilidad garantizan el
desarrollo microbiano en el sustrato, se realizar una esterilizacin
qumica, empleando hipoclorito de sodio y alcohol yodado.

El reactor diseado como resultado de la primera prctica se lavar

con cuidado y minuciosidad empleando para ello la sustancia
adecuada (crema de lavar) y agua, seguidamente se limpiar interna y
externamente con algodn empapado de alcohol yodado. La limpieza

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se realiza a todo el equipamiento incluyendo el purificador de aire y

sistema de mangueras.

La produccin de biomasa se realizar en un tiempo mximo de 4

das al final del cual el alumno deber reportar el peso de biomasa en
funcin a la unidad de volumen (produccin), y en funcin a la unidad
de volumen y tiempo (productividad).

b) Pasteurizacin del medio de cultivo o sustrato:

Se realizar una pasteurizacin en tanque abierto del mosto, con
cscaras pero sin semillas; filtrndose se embotella en caliente y se
enfra rpidamente en agua corriente.

c) Inoculacin de la levadura:
Se realiza el montaje del reactor higienizado, el sistema de
purificacin y bombeo de aire. Se llenar con el mosto pasteurizado
fro, evitando las contaminaciones. Se inocular al 1% de un cultivo
repicado de la cepa.

En el caso de la levadura de panadera se debe de realizar su

respectiva activacin para proceder a la inoculacin.

d) Aireacin de mosto:
Se bombear al sistema, aire purificado, cinco veces al da (para
ajustarse al horario disponible por el estudiante) por un espacio de 15
minutos.

e) Controles a realizar:
El primer y ltimo da debe verificarse la presencia de azcares
reductores.

El equipo de produccin de biomasa debe trabajar por un mximo de

4 das.

Diariamente, siempre a la misma hora realizar los siguientes

controles:

Acidez
Grados brix

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Presencia de azcares reductores.

Aumento de la biomasa (Peso seco).

Tomar 20 ml de muestra diario en un frasco para muestra y

almacenar en condiciones de refrigeracin para ser procesadas el
da cuarto. En dichas muestras se evaluar el peso de biomasa
hmeda o biomasa seca y se expresar como: (gml-1 gl-1) y (gml-
1 h-1 gl-1 h-1).

IV. RESULTADOS

Los datos registrados se reportarn del modo siguiente:

4.1. Construya la grfica: tiempo de produccin vs grados brix y

explique el comportamiento de dicha curva

Das brix

1 12

2 4

3 4

4 3.5

5 3.5

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4.2. Construya las grficas: tiempo de produccin vs produccin de

biomasa, tiempo de produccin vs productividad de biomasa y
explique el comportamiento de dichas curvas.

a. tiempo de produccin vs produccin de biomasa

tiempo levaduras

1 4200000.00

2 8750000.00

3 13400000.00

4 13700000.00

5 16600000.00

b. tiempo de produccin vs productividad de biomasa

tiempo pH

1 4.32

2 4.44

3 4.42

4 4.46

5 4.48

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V. CUESTIONARIO

5.1. Cules sern las desventajas del uso del reactor de columna de
burbujas para mostos de alta densidad y/o viscosidad?

Este tipo de biorreactor carece de un sistema de transmisin mecnica

para mezclar el caldo de cultivo, es bsicamente un contenedor
cilndrico con un eyector de gas en el fondo

5.2. Qu caractersticas debe tener un birreactor de columna de

burbujas de relacin altura: dimetro 6:1, y seale que es
coalescencia de burbujas?

Fase solida (microorganismo) disuelta en fase liquida

Clulas susceptible de dao celular
Microorganismos floculantes (Lecho fluidizado trifsico)
Procesos: produccin de cerveza, vinagre. Levadura de pan , SCP,
aguas residuales
Caractersticas de diseo - Distribuidores de gas parte inferior de
recipiente - Parte superior con mayor dimetro (arrastre)
Control por velocidad de transporte de oxgeno.Sistema bifsicos
(control pelcula liquida)

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Diseo: f (flujo en el recipiente) f (mezcla axial). Modelo de dos

zonas (3)

5.3. Qu otros mtodos existen para evaluar el crecimiento celular en

mostos?

1. Las tcnicas de recuento microscpico de clulas sin fijar usando

microscopa de contraste de fae. Para ello se cuenta el nmero de
partculas en un volumen determinado usando una clula de Petroff-
Hauser o de Neubauer
2. Contaje de partculas utilizando sistemas automticos del
tipo Coulter Counter
3. Tcnicas de recuento en placa.
4. Tcnicas turbidomtricas basadas en la medida de la turbidez de los
medios de cultivo en los que crecen microorganismos unicelulares
5. Medida de peso seco.
6. Medida del ATP.

VI. CONCLUSIONES

Las columnas de burbujas se emplean industrialmente para la

produccin de levadura de panadera, cerveza y vinagre, y en el
tratamiento de aguas residuales durante el proceso de obtencin de
biomasa de Saccharomyces cerevisiae.

El el procedimiento que se realiz El reactor diseado como resultado

de la primera prctica se lavar con cuidado y minuciosidad empleando
para ello la sustancia adecuada (crema de lavar) y agua, seguidamente
se limpiar interna y externamente con algodn empapado de alcohol
yodado. La limpieza se realiza a todo el equipamiento incluyendo el
purificador de aire y sistema de mangueras

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VII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

Daz, R., Gamazo, C., LpezGoi, I. 2002. Manual prctico de

microbiologa. Elservier (Ed), Espaa, pp. 1235.
Carrascosa, A.V., Muoz, R., Gonzlez, R. 2005. Microbiologa del
vino. AMV Ediciones (Ed), Espaa, pp. 1949, pp. 231263, pp. 273
294.
Surez, J.A., igo, B. 2004. Microbiologa enolgica: Fundamentos
de vinificacin. Mundiprensa (Ed) Espaa, pp. 17307, pp. 411585.

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