UNIVERSIDAD VERACRUZANA

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS Y AGROPECUARIAS

ZONA: Poza Rica -Tuxpan

Tecnologas para la restauracin de suelos

contaminados por hidrocarburos.

TESINA
QUE PARA OBTENER EL GRADO DE:
ESPECIALISTA EN GESTIN
E IMPACTO AMBIENTAL.

PRESENTA:

I.BQ. Daniela Itzel Loya Del Angel

DIRECTOR:

Dr. Pablo San Martn Del Angel

CO-DIRECTORA:

Dra. Rosa Idalia Hernndez Herrera

Tuxpan de Rodrguez Cano, Ver., a 09 de Julio de 2013

 AGRADECIMIENTOS

A la Universidad Veracruzana por esta oportunidad.

A mis maestros por los nuevos conocimientos adquiridos y su entrega para

ensearnos.

A mis compaeros, por su amistad y los buenos momentos, por todas las
ancdotas vividas a lo largo de este ao.

Al Dr. San Martn por su motivacin para concluir este trabajo.

A la Dr. Rosa Idalia por su apoyo y valiosa a portacin.

Al Dr. Pech por su amistad y su apoyo para este trabajo.

Al Dr. Alans por su incondicionable apoyo siempre.

i
A mi familia

A Esteban

Este trabajo no se hubiera concluido sin su apoyo, motivacin y amor para

conmigo. Gracias por todo.

Esforzaos y cobrad nimo; no temis, ni tengis miedo de ellos,

porque Jehov tu Dios es el que va contigo; no te dejar,

ni te desamparar.

Deuteronomio 31:6

ii
Tecnologas para la restauracin de suelos contaminados por
hidrocarburos.
Loya del Angel Daniela Itzel

RESUMEN

El petrleo es la fuente principal de energa de la sociedad actual, sin embargo la

explotacin del mismo trae consigo consecuencias ambientales dainas al suelo.

A travs de una revisin bibliogrfica, se analizaron los diferentes casos de

aplicacin de medidas remediativas como son la biorremediacin y

fitorremediacin, empleadas para atenuar los efectos contaminantes despus de

un derrame. Se define la efectividad de dichas tcnicas al determinar la relacin

entre microorganismos, propiedades del suelo, caractersticas del contaminante y

tipo de plantas, al examinar los resultados obtenidos en cada uno de los casos de

estudio tratados en la presente revisin.

En la inspeccin de los logros alcanzados en cada una de las aplicaciones

remediativas, los porcentajes de remocin oscilaron entre el 75 y 90 %,

conseguidos en un lapso de tratamiento que va de los 25 a 90 dias, el

hidrocarburo que mostr mayor remocin fue el fenantreno en fitorremediacin y el

diesel en biorremediacin. Aunque las tcnicas de fitorremediacin incluyen el uso

de microorganimos y plantas, estas relaciones resultan igual de efectivas que las

manejadas en los sistemas de biorremediacin que solo usan microorganismos ya

sean autctonos o en consorcios bacterianos.

Palabras clave: Biorremediacin, Fitorremediacin, bacterias, hongos, suelo

iii
 NDICE GENERAL
PGINA

Resumen ...I
Introduccin .1
Objetivo general .4
Objetivos especficos .4
Fundamento .5

CAPTULO I HIDROCARBUROS .6
Caracterstica de los hidrocarburos .6
Composicin qumica del petrleo .7
Hidrocarburos en el ambiente .8
Efectos ambientales 10
Consecuencias 12
Fuentes de contaminacin por
14
hidrocarburos en Mxico

CAPITULO II SUELOS 17
Caracterizacin del suelo 18
Hidrocarburos en el suelo 21

CAPITULO III REMEDIACIN 25

Tecnologas de remediacin ...25
Clasificacin de tecnologas 26
Biorremediacin 28
Mtodos aplicados a la
29
biorremediacin
Microorganismos degradadores de
38
hidrocarburos
Propiedades de algunos
microorganismos 45
hidrocarbonoclastas
Fundamentos bioqumico de la
51
biodegradacin
Fitorremediacin 54
Aplicaciones de la fitorremediacin 56
Tolerancia de las plantas a los
..60
contaminantes

CAPITULO IV REMEDIACION DE
63
SUELOS
Casos de estudio 63
Taxonoma de microorganismos 81
CAPITULO V
83
CONSIDERACIONES FINALES

BIBLIOGRAFA CITADA 87
BIBLIOGRAFA CONSULTADA 92

iv
 NDICE DE CUADROS

PGINA

Cuadro 1 9
Relacin de compuestos orgnicos y su
destino en el ambiente.

Cuadro 2 .22
Parmetros que influyen en el transporte
de contaminantes en el suelo

Cuadro 3 60
Tipos de fitorremediacin

Cuadro 4 78
Estudio de la efectividad de las tecnicas de
bio y fitorremediacin en los casos de
aplicacin y estudio.

NDICE DE FIGURAS
PGINA

Figura 1 .29
Esquema de biofiltracin para la
descontaminacin de tolueno.

Figura 2 .30
Esquema de bioventeo

Figura 3 .31
Esquema de tratamiento por biopilas
estticas

Figura 4
Proceso de atenuacin natural

Figura 5
Procesos de fitorremediacin ..59

v
 INTRODUCCIN

El medio ambiente es el conjunto de todas las cosas vivas que nos rodean. De

ste obtenemos agua, comida, combustibles y materias primas que sirven para

fabricar las cosas que utilizamos diariamente. Desde sus orgenes, la accin

humana ha introducido cambios en los procesos ecolgicos, y lo que empez

como un conjunto de pequeas alteraciones puntuales adquiri en los ltimos

tiempos una dimensin altamente preocupante. Durante el ltimo medio siglo la

humanidad ha modificado los ecosistemas ms extensa y rpidamente que en

cualquier otro perodo comparable de la historia reciente. Esta accin

transformadora se relaciona sobre todo con la necesidad de atender las crecientes

demandas de recursos y energa. Desde la Revolucin Industrial del siglo XVIII se

increment el uso de combustibles fsiles y, con ello, la emisin de contaminantes

al ambiente (SEMARNAT, 2006).

El petrleo es la fuente principal de energa de la sociedad actual, este compuesto

y sus productos de refinacin no son sustancias especficas y nicas, puesto que

son mezclas de varios hidrocarburos y otros compuestos cuyas propiedades

fsicas y qumicas son muy variadas, las cuales determinan su comportamiento e

impacto en los elementos ambientales (recursos fsicos, biolgicos y actividades

socioeconmicas) cuando ocurre una descarga al ambiente. Al suceder esto es

necesario hacer una investigacin y caracterizacin de la contaminacin para

1
evaluar los daos e implementar una correccin ambiental efectiva (Echarri,

1998).

Segn las estadsticas de la Procuradura Federal de Proteccin al Ambiente

(PROFEPA, 1999), entre los aos de 1997 y 2001, de 2,592 emergencias

ambientales con materiales peligrosos a nivel nacional, Petrleos Mexicanos

provoc 57 % de ellas. Entre los estados con mayores emergencias ambientales

se encuentra Veracruz, donde el 80 % de estos eventos son causados por

PEMEX. La mayora de las emergencias se presentan en ductos, provocando

derrames con sustancias como petrleo crudo, combustleo, diesel, gasolina,

turbosina, gas natural y amoniaco. Los derrames en ductos en el rea de PEMEX

Refinacin se deben en orden de importancia a: toma clandestina, daos o averas

provocadas por terceros, corrosin y fallas del material. En el 60 % de estos

eventos existe afectacin al suelo, en 30 % al agua y en 10 % al aire (CEMDA,

2006). De los 50 mil kilmetros de ductos que existen en el pas, por lo menos 20

mil necesitan de urgente atencin, datos que son confirmados por el Instituto

Mexicano del Petrleo (IMP), pues cerca de la mitad de los ductos tienen ms de

30 aos de operacin.

El problema de los suelos contaminados con hidrocarburos radicaba en que no

exista conciencia de las tcnicas y costos de la biorremediacion pero gracias al

desarrollo tecnolgico ahora se cuenta con diversos estudios que han definido

estas metodologas y sus diferentes aplicaciones. En Mxico, se han iniciado

algunos trabajos de caracterizacin de sitios afectados por hidrocarburos,

2
especficamente en zonas petroleras como Tabasco y Veracruz (Gutirrez y

Zavala, 2002), donde el suelo es el factor que ms se estudia. Estas prcticas

remediativas consisten en el uso de organismos como plantas, hongos, bacterias

naturales o modificadas genticamente para neutralizar sustancias toxicas,

transformndolas en sustancias menos dainas o bien inocuas para el ambiente y

la salud humana.

Este trabajo presenta una recopilacin de las principales tcnicas de

biorremediacin de suelos contaminados con hidrocarburos, as como el anlisis

de los criterios considerados en cada una de las metodologas aplicadas y su

efectividad de acuerdo a las caractersticas del sitio, propiedades del contaminante

y el tipo de organismos (bacterias y plantas) usados en dichas prcticas.

3
 OBJETIVO GENERAL

Generar un documento informativo sobre las principales tcnicas en el tratamiento

de suelos contaminados con hidrocarburos, as como de los criterios considerados

en las diferentes tcnicas remediativas que definen su efectividad.

OBJETIVOS ESPECFICOS

1. Buscar y recopilar informacin;

2. Revisar las tcnicas de aislamiento y caracterizacin de microorganismos y

plantas de sitios contaminados por hidrocarburos;

3. Analizar los casos de aplicacin y estudio de biorremediacin y

fitorremediacin en Mxico documentados en artculos cientficos.

4. Describir la relacin entre microorganismos, propiedades del suelo,

caractersticas del contaminante y tipo de plantas que definen la efectividad

de las medidas biocorrectivas.

4
 FUNDAMENTO

Se realiz una revisin bibliogrfica de artculos cientficos que abordan casos de

estudio y aplicacin de medidas de biorremediacin, se recopilaron los resultados

de cada uno de ellos para concentrarlos en una tabla para el anlisis de las

variables como son la tcnica aplicada, el contaminante en cuestin, porcentaje y

tiempo de remocin, tipo de suelo, cantidad de muestra y el microorganismo o

planta utilizada en los mtodos correctivos para determinar las relaciones entre los

factores biticos y abiticos que definen la efectividad en los procesos

remediativos.

Al hacer una revisin bibliogrfica y una recopilacin de informacin sobre los

diversos casos de estudio y aplicacin de medidas biocorrectivas se genera un

documento til como herramienta de consulta al facilitar la bsqueda bibliogrfica

ya que compila valiosa y diversa informacin de artculos cientficos de los

principales y ltimos casos de biorremediacin.

5
 CAPITULO I

HIDROCARBUROS

Caractersticas de los hidrocarburos

Los hidrocarburos son compuestos formados por tomos de carbono e hidrgeno,

de gran abundancia en la naturaleza, presentes principalmente en el petrleo

(Chappin, 1988). Se consideran como una mezcla compleja de gases, lquidos y

slidos, existiendo cantidades combinadas de nitrgeno, oxgeno y azufre,

adems de contener compuestos de hierro, nquel, vanadio u otros metales

(Wood, 1974). El petrleo tiene una proporcin de 76 a 86 % de carbono y de 10 a

14 % de hidrogeno. Los hidrocarburos se clasifican de la siguiente forma:

Hidrocarburos biognicos: stos son sintetizados por casi todas las plantas,

animales terrestres y marinos, incluyendo a la microbiota, bacterias, plancton

marino, diatomeas, algas y plantas superiores (Bedair y Al-Saad, 1992).

Hidrocarburos antrpicos: stos son introducidos al ambiente como resultado de la

actividad humana (Bedair y Al-Saad, 1992).

6
Composicin qumica del petrleo.

El petrleo es una mezcla compleja de hidrocarburos que contiene principalmente

carbono e hidrogeno en cantidades que varan entre 86 % y 14 %,

respectivamente, en la mezcla que lo constituye, los hidrocarburos coexisten en

fase slida, lquida y gaseosa y pueden presentar adems en su composicin,

pequeas proporciones de heterocompuestos con presencia de nitrgeno, azufre,

oxgeno y algunos metales. El petrleo vara mucho en su composicin, la cual

depende principalmente del tipo de yacimiento de donde provenga (Chow, 1987).

Los hidrocarburos que componen al petrleo pueden agruparse en cuatro

categoras: alifticos, aromticos, polares o resinas y asfaltenos. La proporcin de

cada una de estas fracciones depende de muchos factores como la zona

geogrfica, historia geolgica, edad, migracin y alteracin del petrleo crudo

(Chow, 1987).

Alifticos: La fraccin de los compuestos alifticos incluye alcanos lineales,

alcanos ramificados (isoparafinas), alcanos cclicos (naftenos), alquenos y

alquinos.

Aromticos: La fraccin de los aromticos contiene hidrocarburos como el

benceno, tolueno, xileno, etc., e hidrocarburos poliaromticos, como los

naftenoaromticos y compuestos aromticos de sulfuro como el tiofeno y

dibenzotiofeno. La fraccin de los hidrocarburos aromticos policiclicos

(HAPs) contiene compuestos cancergenos como el benzopireno.

7
 Polares: La fraccin de polares, o resinas que contienen compuestos

polares con Nitrgeno, Azufre y Oxgeno, con una gran variedad de

componentes como piridinas, quinoleinas, carbazoles, tiofenos, sulfxidos y

amidas, que pueden ser slidos amorfos que difcilmente se disuelven en el

petrleo.

Asfaltenos: Son compuestos de molculas grandes que se dispersan en el

petrleo como compuestos poliaromticos, cidos naftnicos, sulfuros,

fenoles polihdricos, cidos grasos y metaloporfirinas (Chow, 1987).

Hidrocarburos en el ambiente

Las caractersticas determinantes de los hidrocarburos en el ambiente son las

siguientes: densidad, presin de vapor, coeficiente de particin de suelo, polaridad

(McBride, 1994), electronegatividad, hidrofobicidad (caracterstica qumica ms

importante usada para asegurar lo siguiente: (a) movilidad qumica, (b) estabilidad

qumica, (c) acumulacin qumica, (d) bioacumulacin qumica y (e) sorcin

qumica en el ambiente) y solubilidad en agua. La alta solubilidad de un

compuesto qumico promueve su mayor movilidad y tener menos probabilidad de

ser acumulativo, bioacumulativo, voltil y persistente. Como compuesto qumico

altamente soluble es propenso a ser biodegradado y metabolizado por los

microorganismos (Ney, 1990), el contenido de materia orgnica del suelo o

sedimento es importante en la adsorcin de los contaminantes orgnicos (Ney,

8
1990). El coeficiente de distribucin agua-suelo/sedimento (kd) de contaminantes

no polares es fuertemente dependiente del contenido de materia organica del

suelo o sedimento (fom) o alternativamente del contenido de carbn orgnico del

suelo/sedimento (foc) (Chiou, 1998).

Se expresa la siguiente relacin:

Koc = kd / foc

Cuadro 1. Se muestra el destino de los contaminantes orgnicos en el ambiente

en funcin de su coeficiente de distribucin en suelo y solubilidad en el agua.

Suelo Koc > 10,000 Koc de 1,000 a 10,000 Koc < 1,000

SA < 10 ppm SA 10 10,000 ppm SA > 1,000 ppm

Adsorcin S Otra va No

Movilidad No Otra va Si

Acumulacin Si Otra va No

Bioacumulacin Si Otra va No

Contaminacin de la Si Otra va No

cadena alimenticia

Solubilidad No Otra va Si

Persistencia Si Otra va No

Disipacin Si Otra va Si

Simbologa: No denota insignificante, Koc coeficiente de particin en suelo, SA; solubilidad al agua .

9
Efectos ambientales

Un derrame de petrleo lleva consigo una serie de cambios progresivos de sus

propiedades fsicoqumicas los cuales se atribuyen al proceso de

intemperizacin, el cual incluye: evaporacin, disolucin, dispersin, oxidacin,

emulsificacin, sedimentacin y biodegradacin, los cuales se describen a

continuacin.

La intemperizacin es la prdida de ciertos componentes del petrleo a travs de

una serie de procesos naturales que comienzan una vez que ocurre el derrame y

continan indefinidamente.

La evaporacin es el proceso que afecta la composicin del producto derramado;

aumenta su densidad y viscosidad, decrece su solubilidad en el agua reduciendo

as el nivel de toxicidad del producto. En la medida que los compuestos ms

voltiles se evaporan, el petrleo se hace ms pesado y puede llegar a hundirse.

A las 24 horas casi el 40% del petrleo se ha evaporado. Estos porcentajes van

variando de acuerdo al grado de viscosidad del hidrocarburo, por lo que el proceso

de evaporacin juega un papel muy importante en los derrames, en especial

cuando se trata de gasolinas o crudos livianos.

La Disolucin Este proceso es aquel por el cual parte del hidrocarburo se

disuelve en el volumen de la columna de agua y en los alrededores del derrame.

10
El tiempo de disolucin depende de la composicin, tasa de esparcimiento,

temperatura del agua, turbulencia y grado de dispersin. Aunque el proceso

comienza inmediatamente, es de largo plazo y contina durante todo el proceso

de degradacin del hidrocarburo. Es de notar que los compuestos ms ligeros son

los ms solubles en el agua y por lo tanto se convierten en los ms txicos, por lo

que es muy importante calcular su concentracin, para estimar los posibles

efectos txicos.

La oxidacin Es la combinacin qumica de hidrocarburos con el oxgeno

atmosfrico y contribuye a la descomposicin o degradacin final del petrleo.

Cuanto ms rea expuesta exista, mayor ser la oxidacin y mayor la velocidad de

degradacin. Este proceso es lento puesto que slo una pequea cantidad de

oxgeno puede penetrar en una mancha de petrleo. La radiacin ultravioleta solar

produce la oxidacin fotoqumica, dependiendo de la intensidad de la radiacin

solar.

La emulsificacin Este es el proceso por el cual un lquido se dispersa en otro

lquido en forma de pequeas gotitas, es decir como suspensin. Muchos

hidrocarburos presentan una tendencia a absorber agua en emulsiones que

pueden aumentar el volumen del contaminante en un factor entre 3 y 4. Estas

emulsiones a menudo son extremadamente viscosas y como resultados de estos

los dems procesos que haran que el hidrocarburo se disipe se ven retardados.

11
La sedimentacin Puede suceder por dos mecanismos: el primero se define en la

medida que el hidrocarburo se intemperiza resultando en un incremento de su

densidad respecto al agua circundante y por consiguiente se hunde. El segundo

ocurre por la adhesin de las partculas suspendidas en la columna de agua al

petrleo.

Biodegradacin: Este es el proceso por el cual la mancha desaparece del medio

ambiente. Ciertas especies de bacterias marinas, hongos y otros organismos

utilizan los hidrocarburos como fuente de alimento. Es un proceso natural y muy

lento debido al agotamiento continuo de oxgeno, a la formacin de emulsiones de

agua en petrleo (mousse), etc. La tasa de biodegradacin depende del contenido

de nutrientes (nitrgeno y fsforo), oxgeno disuelto, salinidad, rea superficial del

derrame y de la composicin y tamao de la poblacin microbiana.

Consecuencias

Un derrame o descarga de hidrocarburo afecta bsicamente a tres elementos del

ambiente, los cuales son:

Elementos abiticos (suelo, formaciones del relieve, geomorfologa, etc).

Elementos biticos (flora y fauna).

Elementos socioeconmicos (actividades humanas, pesca, agricultura,

lugares de esparcimiento de clubes, de recreacin, de turismo, etc).

12
Los derrames de petrleo pueden causar un dao considerable a los recursos

biolgicos en una variedad de formas:

Mortalidad directa debido a sofocacin, suciedad (cobertura) y asfixia,

envenenamiento por contacto directo con petrleo (especialmente petrleo fresco),

absorcin de las fracciones txicas de la columna de agua (ej. algas). La toxicidad

del petrleo aumenta con la concentracin de compuestos aromticos no

saturados y de baja ebullicin. Las formas vivientes larvales o juveniles, por lo

general son ms sensibles.

Mortalidad indirecta debido a la muerte de recursos alimenticios o a la

destruccin o eliminacin del hbitat.

Incorporacin de cantidades subletales de fracciones petrolferas en los

tejidos del cuerpo (ej. ingestin), que disminuye potencialmente la tolerancia a

otras tensiones (ej. depredacin y enfermedad).

Reduccin o destruccin de los alimentos o del valor comercial de

pesqueras, debido a la degeneracin del sabor por la absorcin de hidrocarburos.

Incorporacin de sustancias potencialmente cancergenas o mutagnicas

en la cadena alimenticia.

Comportamiento alterado de la biota que podra entorpecer las funciones

ecolgicas normales.

13
Fuentes de contaminacin por hidrocarburos en Mxico

Como consecuencia de varios siglos de actividad minera en Mxico y

posteriormente, debido a la industria de la qumica bsica, petroqumica y de

refinacin del petrleo, se han producido cantidades muy grandes, pero muy

difciles de cuantificar de residuos peligrosos. Aunado a lo anterior, la intensa

actividad de otras industrias, junto con accidentes durante el almacenamiento,

transporte o trasvase de sustancias (fugas, derrames, incendios) y la disposicin

clandestina e incontrolada de residuos, contribuyen en gran medida a la

contaminacin de suelos (SEMARNAT, 2002). El nmero de sitios contaminados,

an en las estimaciones ms conservadoras, asciende a varios miles de lugares

cuyo riesgo potencial es desconocido. De acuerdo con datos publicados por el

INEGI (2000), la superficie de suelo degradado por causas de contaminacin en

1999 fue de 25,967 km2.

Todos los eventos en los que se encuentran involucradas sustancias que implican

algn riesgo para el ambiente o la poblacin y que puedan generar la

contaminacin de suelos y cuerpos de agua, son conocidos como emergencias

ambientales. De acuerdo con estadsticas de la Procuradura Federal de

Proteccin al Ambiente (PROFEPA, 1999), cada ao se presentan en Mxico un

promedio de 550 emergencias ambientales asociadas con materiales y residuos

peligrosos. Dentro de los compuestos peligrosos ms comnmente involucrados

en emergencias ambientales, se encuentran el petrleo y sus derivados

14
(gasolinas, combustleo, diesel), agroqumicos, gas LP y natural, entre otros

(PROFEPA, 1999).

Dentro de los contaminantes que se consideran prioritarios en Mxico debido a su

alta toxicidad y a su persistencia en el ambiente, se encuentran los siguientes:

dioxinas, furanos, hexaclorobenceno, bifenilos policlorados (BPC), plaguicidas

organoclorados, mercurio, plomo, cromo, cadmio, compuestos txicos

atmosfricos e hidrocarburos poliaromticos (HAP). De stos, compuestos como

los BPC se han almacenado en tambores que, en muchas ocasiones, han sido

dispuestos clandestinamente. Por su parte, los HAP se encuentran como

componentes de los hidrocarburos totales del petrleo (HTP) (PROFEPA, 2002).

La industria petroqumica en Mxico se ha desarrollado aceleradamente,

generando diversos satisfactores econmicos. Sin embargo, su expansin y

desarrollo tambin ha dado origen a graves problemas ambientales, derivados de

emergencias ambientales, con graves repercusiones a la salud de la poblacin y al

equilibrio ecolgico de los ecosistemas (Quadri, 1994; PROFEPA, 2000). Entre las

causas que han generado este deterioro ambiental por la contaminacin de

cuerpos de agua y suelos a lo largo de todo el pas, se encuentran las siguientes:

(i) manejo inadecuado y abandono de materiales y residuos peligrosos; (ii)

mantenimiento inadecuado o falta de ste en instalaciones petroleras; (iii)

explosiones en instalaciones de alto riesgo; (iv) fugas en lneas de conduccin y

(v) derrames de hidrocarburos (CENAPRED 2001, PROFEPA 2002).

15
En el inventario de residuos peligrosos de PEMEX en el 2001 reportan la

generacin de ms de 270 mil toneladas de residuos peligrosos.

Aproximadamente el 86 % del volumen total de estos residuos, corresponde a

lodos y recortes de perforacin (72 %), lodos aceitosos (8 %) y aceites gastados

(6 %). Con respecto a los derrames y fugas de hidrocarburos, PEMEX reporta que

durante el ao 2001 hubo un total de 8,031 toneladas de hidrocarburos (crudo,

diesel y gasolina) derramados en su mayora en tierra, en los cuatro sectores de

ductos del pas (PEMEX, 2001). Esta ltima cifra es importante, ya que de esta

manera puede estimarse la magnitud de la contaminacin en los sitios cercanos a

los derrames.

De los estados con mayor incidencia de sitios contaminados por actividades

petroleras estn Tabasco y Veracruz. De acuerdo con informacin de PEMEX, dos

de los lugares ms contaminados por hidrocarburos a nivel nacional son la

refinera Lzaro Crdenas y el pantano de Santa Alejandrina, precisamente

ubicados en Tabasco (PEMEX, 2001).

Los productos combustibles como gasolina, diesel, combustleo, gasleo, gas

avin y gas LP, son producidos y distribuidos en Mxico por PEMEX. La

distribucin al menudeo de gasolina y diesel, se lleva a cabo en estaciones de

servicio (gasolineras). Uno de los riesgos ambientales que involucra el manejo de

estas estaciones, son los derrames o fugas de combustibles, que provocan la

contaminacin de los sitios en donde se encuentran los tanques de

almacenamiento (CENAPRED, 2001).

16
 CAPTULO II

SUELOS

El suelo representa un ecosistema donde, actualmente, se puede encontrar una

gran variedad de compuestos txicos, entre los cuales se incluyen los

hidrocarburos derivados de las actividades petroleras. El suelo es un cuerpo

natural que conforma el hbitat de bacterias, hongos, levaduras, virus y plantas

superiores, entre otros, que sirve para la alimentacin de los animales y del

hombre a travs de los ciclos trficos. El suelo y los microorganismos mantienen

los sistemas ecolgicos, ya que le aportan componentes qumicos y minerales

(como resultado de la biodegradacin); y complejos orgnicos como cidos

hmicos y flvicos, enzimas, vitaminas, hormonas y antibiticos; adems, albergan

una rica reserva gentica (IMP, 2006; INE, 2006).

Por la gran importancia que representa el suelo para la vida del hombre y de todos

los seres vivos, este recurso se debe conservar. Sin embargo, en la actualidad

est seriamente amenazado por la prctica de sistemas de produccin

inadecuados o mal aplicados, que incluso han acelerado los procesos de erosin y

desertificacin de grandes zonas (INE 2006). Para elegir la tecnologa adecuada

es necesario considerar una serie de procesos y fenmenos fisicoqumicos y

microbiolgicos que ocurren en el suelo. Por esta razn, la evaluacin o

determinacin de las propiedades fsicas, qumicas y microbiolgicas de un suelo

contaminado contribuye al seguimiento del proceso de remediacin; adems de

17
ser til para tomar acciones pertinentes en el mejoramiento de dichos procesos

(INE 2006).

Caracterizacin del suelo

El suelo constituye un recurso natural que desempea diversas funciones en la

superficie de la Tierra, proporcionando un soporte mecnico as como nutrientes

para el crecimiento de plantas y micro-organismos. La matriz del suelo est

formada por cinco componentes principales: minerales, aire, agua, materia

orgnica y organismos vivos (Eweis, 1998).

Los materiales minerales son los principales componentes estructurales y

constituyen ms del 50 % del volumen total del suelo. El aire y el agua juntos

ocupan el volumen de los espacios, y usualmente conforman de 25 % a 50 % del

volumen total. La proporcin relativa de aire/ agua flucta considerablemente con

el contenido de humedad del suelo. El material orgnico ocupa entre 3 % y 6 %

del volumen promedio, mientras que los organismos vivos constituyen menos del

1% (Eweis, 1998).

Todos estos factores definen el tipo de suelo, que junto con las condiciones

particulares de un sitio frecuentemente pueden limitar la seleccin de un proceso

de tratamiento en particular. Por otra parte, la posibilidad de usar una tecnologa

de tratamiento, puede eliminarse con base en la clasificacin del suelo u otras

18
caractersticas propias de ste (Van Deuren 1997). A continuacin se describen

algunos de los datos del suelo, que pueden obtenerse con relativa facilidad y que

controlan la eficiencia de una tecnologa de remediacin.

Tamao de partcula. Los suelos se clasifican en funcin de su tamao de

partcula, siendo sus tres principales componentes las arcillas (< 0.002 mm), los

sedimentos (0.002 - 0.05 mm) y las arenas (0.05 - 2.0 mm). Es importante

considerar esta propiedad, ya que la relacin rea/volumen de los diferentes tipos

de partcula, tienen un impacto directo sobre las propiedades fsicas, qumicas y

biolgicas del suelo, y por consiguiente en las tecnologas de remediacin. En

general, los materiales no consolidados (arenas y gravas finas) son ms fciles de

tratar (Van Deuren, 1997; Eweis, 1998).

Heterogeneidad. Un suelo demasiado heterogneo puede impedir el uso de

tecnologas in situ que dependan del flujo de un fluido. Pueden crearse canales

indeseables de fluidos en las capas arenosas y arcillosas, dando como resultado

tratamientos inconsistentes (Van Deuren, 1997).

Densidad aparente. Es el peso del suelo por unidad de volumen, incluyendo agua

y espacios. Es importante considerar que el suelo est compuesto por slidos y

espacios llenos de agua y/o aire, y que su densidad depender de su humedad.

Es til para realizar clculos para el transporte del material (Van Deuren, 1997).

19
Permeabilidad. Se refiere a la facilidad o dificultad con la que un lquido puede

fluir a travs de un medio permeable. La permeabilidad de un suelo es uno de los

factores que controla la efectividad de tecnologas in situ (Sellers 1999). En

general, una baja permeabilidad en el suelo disminuye la efectividad de la mayora

de las tecnologas de remediacin.

El pH determina el grado de adsorcin de iones por las partculas del suelo,

afectando as su solubilidad, movilidad, disponibilidad y formas inicas de un

contaminante y otros constituyentes del suelo (Alexander 1994). La solubilidad de

muchos contaminantes inorgnicos cambia en funcin del pH y normalmente su

movilidad disminuye con altos valores de pH.

Humedad. La humedad del sitio a tratar es un factor importante para la eleccin

de una tecnologa en particular. Una alta humedad puede impedir el movimiento

de aire a travs del suelo, lo que afecta los procesos de biorremediacin, as como

provocar problemas durante la excavacin y transporte, adems de aumentar

costos durante el uso de mtodos de remediacin trmicos (Van Deuren 1997).

Materia orgnica. La fraccin orgnica de los suelos est constituida por

desechos vegetales y animales, que generalmente se le conoce como humus. Un

suelo con alto contenido hmico, disminuye la movilidad de los compuestos

orgnicos y as la eficiencia de ciertas tecnologas (extraccin de vapores, lavado

de suelo) (Van Deuren, 1997).

20
Hidrocarburos en el suelo

El comportamiento de los contaminantes orgnicos est en funcin de sus

caractersticas fsicas y qumicas como la densidad, polaridad, entre otras.

Adems, las caractersticas del medio, como la unidad del suelo, permeabilidad,

estructura, tamao de las partculas, contenido de humedad y de materia orgnica,

as como la profundidad del manto fretico, factores climatolgicos como la

temperatura y la precipitacin pluvial tambin tienen gran influencia (Jury, 1989).

Todas las variables en conjunto definen el tamao y la distribucin tridimensional

del frente de contaminacin en una zona especfica. En el cuadro 2 se indican

algunos parmetros del compuesto qumico, suelo y ambiente que influyen en el

transporte a travs del suelo.

Los compuestos orgnicos ligeros como gasolinas, aceites y petrleo crudo

tienden a formar una capa en forma de nata en el nivel fretico y se mueven

horizontalmente en direccin al flujo del agua subterrnea. Los compuestos

densos, migran hacia la base del acufero creando una columna a partir de la cual

pueden moverse en direccin del flujo de agua subterrnea contaminando as el

acufero en toda su profundidad. La presencia de contaminantes en el suelo se ha

conceptualizado a travs de observaciones indirectas que indican la acumulacin

de contaminantes orgnicos en asociacin con adsorbentes naturales (Luthy,

1997), establecindose los siguientes procesos: absorcin de la materia orgnica

en forma, amorfa o natural o en lquidos de la fase no acuosa (LFNA), condensada

o en polmeros o residuos de combustin, adsorcin en superficies minerales

21
(cuarzo), adsorcin a superficies orgnicas hmedas (holln) y adsorcin dentro de

los micro poros o en minerales (zeolitas).

Cuadro 2. Se presentan los parmetros que influyen en el transporte de

contaminantes en el suelo. (Tomado de Jury, 1989)

Parmetros del contaminante Parmetros del suelo Parmetros ambientales

Solubilidad Contenido y retencin de agua Temperatura

Porosidad, densidad y
Presin de vapor Precipitacin
permeabilidad

Nmero y tipo de grupos

Contenido de arcilla Evapotranspiracin
funcionales

Polaridad Contenido de materia orgnica

Profundidad de agua

subterrnea

Mungua y Martnez (SEMARNAT, 1996), concluyeron que las propiedades fsicas

del suelo ms afectadas por derrames de hidrocarburos son:

La estructura del suelo debido a la ruptura de los agregados.

Aumento de la retencin del agua en la capa superficial.

El potencial hdrico

22
Las propiedades qumicas del suelo ms afectadas por un derrame de

hidrocarburos son:

Aumento de carbono orgnico, ya que el 75 % del carbono del petrleo

crudo es oxidable.

Disminucin del pH, debido a la acumulacin del carbono orgnico y

generacin de cidos orgnicos.

Aumentos del manganeso y hierro intercambiable.

Aumento del fsforo disponible (SEMARNAT, 1996).

Los efectos txicos de los hidrocarburos en el ambiente dependern de:

La cantidad y composicin del petrleo.

La frecuencia y tiempo de exposicin

El estado fsico del derrame.

Las caractersticas del sitio donde sucedi el derrame.

Variables ambientales como temperatura, humedad y oxgeno.

El uso de dispersantes qumicos (est restringido su uso).

La sensibilidad de la biota especfica del ecosistema impactado

(SEMARNAT, 1996).

23
El petrleo contamina el suelo por su presencia y su permanencia en l. Esto

tambin depende del tipo de suelo lo cual es un producto de su composicin y

textura (tamaos de las partculas que lo forman) ya que segn las caractersticas

del suelo el petrleo se adherir o penetrar con mayor o menor fuerza y por lo

tanto permanecer mayor o menos tiempo en ese ambiente.

En general se puede afirmar que:

En suelos arenosos (suelos de grano grueso); el petrleo penetra con

mayor rapidez, en mayor cantidad y a mayor profundidad (llega hasta la capa

fretica).

En suelos arcillosos o rocosos (suelos de grano fino); el petrleo no penetra

con facilidad, penetra en poca cantidad y a poca profundidad y por ende se retirar

mediante recojo y/o lavados de manera rpida, por ejemplo, las playas arcillosas

de la selva.

En suelos con alto contenido de materia orgnica el petrleo se adhiere

fuertemente a las partculas y restos vegetales de tal manera que permanece por

ms tiempo en el ambiente por ejemplo, en suelos de manglares y pantanos.

24
 CAPTULO III

REMEDIACIN

Tecnologas de remediacin

El trmino tecnologa de tratamiento implica cualquier operacin unitaria o serie

de operaciones unitarias que altera la composicin de una sustancia peligrosa o

contaminante a travs de acciones qumicas, fsicas o biolgicas de manera que

reduzcan la toxicidad, movilidad o volumen del material contaminado (EPA, 2001).

Las tecnologas de remediacin representan una alternativa a la disposicin en

tierra de desechos peligrosos que no han sido tratados, y sus capacidades o

posibilidades de xito, bajo las condiciones especficas de un sitio, pueden variar

ampliamente.

El uso de una tecnologa de remediacin en particular depende, adems de los

factores especficos del sitio y de las propiedades fisicoqumicas del contaminante,

de su disponibilidad, de la fiabilidad demostrada o proyectada, de su estado de

desarrollo (laboratorio, escala piloto o gran escala) y de su costo (Sellers, 1999).

25
Clasificacin de tecnologas de remediacin

Las tecnologas de remediacin pueden clasificarse de diferentes maneras, con

base en los siguientes principios: (i) estrategia de remediacin; (ii) lugar en que se

realiza el proceso de remediacin, y (iii) tipo de tratamiento. Es importante

mencionar que cada una de estas clasificaciones proporciona diferente

informacin acerca de las tecnologas de remediacin. A continuacin se

describen con ms detalle las clasificaciones anteriores (Van Deuren 1997, Sellers

1999, EPA 2001).

Estrategia de remediacin. Son tres estrategias bsicas que pueden usarse

separadas o en conjunto, para remediar la mayora de los sitios contaminados:

Destruccin o modificacin de los contaminantes. Este tipo de tecnologas busca

alterar la estructura qumica del contaminante (Van Deuren 1997, Sellers 1999,

EPA 2001).

Extraccin o separacin. Los contaminantes se extraen y/o separan del medio

contaminado, aprovechando sus propiedades fsicas o qumicas (volatilizacin,

solubilidad, carga elctrica) (Van Deuren 1997, Sellers 1999, EPA 2001).

Aislamiento o inmovilizacin del contaminante. Los contaminantes son

estabilizados, solidificados o contenidos con el uso de mtodos fsicos o qumicos.

Lugar de realizacin del proceso de remediacin. En general, se distinguen dos

tipos de tecnologa:

26
In situ. Son las aplicaciones en las que el suelo contaminado es tratado, o bien,

los contaminantes son removidos del suelo contaminado, sin necesidad de

excavar el sitio. Es decir, se realizan en el mismo sito en donde se encuentra la

contaminacin (Van Deuren 1997, Sellers 1999, EPA 2001).

Ex situ. La realizacin de este tipo de tecnologas, requiere de excavacin,

dragado o cualquier otro proceso para remover el suelo contaminado para

realizarse el tratamiento fuera del terreno (Van Deuren 1997, Sellers 1999, EPA

2001).

Tipo de tratamiento. Esta clasificacin se basa en el principio de la tecnologa de

remediacin y se divide en tres tipos de tratamiento:

Tratamientos biolgicos (biorremediacin). Utilizan las actividades metablicas

de ciertos organismos (plantas, hongos, bacterias) para degradar (destruccin),

transformar o remover los contaminantes a productos metablicos inocuos (Van

Deuren 1997, Sellers 1999, EPA 2001).

Tratamientos fisicoqumicos. Este tipo de tratamientos, utiliza las propiedades

fsicas y/o qumicas de los contaminantes o del medio contaminado para destruir,

separar o contener la contaminacin (Van Deuren 1997, Sellers 1999, EPA 2001).

27
Tratamientos trmicos. Utilizan calor para incrementar la volatilizacin

(separacin), quemar, descomponer o fundir (inmovilizacin) los contaminantes en

un suelo (Van Deuren 1997, Sellers 1999, EPA 2001).

Biorremediacin

Las prcticas de biorremediacion consisten en el uso de organismos como

plantas, hongos, bacterias naturales o modificadas genticamente para neutralizar

sustancias toxicas, transformndolas en sustancias menos txicas o

convirtindolas en inocuas para el ambiente y la salud humana (Benavides y col.

2005).

Las bacterias son las ms empleadas en el proceso de biorremediacin, aunque

tambin se han empleado otros microorganismos como hongos, algas,

cianobacterias y actinomicetes para la degradacin de compuestos txicos en el

suelo. As mismo, existen animales que actan como agentes descontaminates,

ya que pueden desarrollarse en medios con fuerte toxicidad y poseen en su

interior microorganismo capaces de retener metales pesados; tal es el caso de la

lombriz de tierra (Lumbricus terrestris) la cual absorbe los contaminantes a travs

de los tejidos y los acumula en las vas digestivas (Benavides y col. 2005).

La biorremediacin del suelo, puede ser dividida en estrategias, en el lugar (in situ)

corresponde a la biorremediacin referente a tratamientos que no requieren

excavacin del suelo contaminado; o fuera del lugar (ex situ) es un mtodo donde

se excava el suelo o el material a tratar y se le maneja en un sistema controlado

28
como una celda para biolabranza o algn tipo de biorreactor (Benavides y col.

2005). Las tcnicas de biorremediacin en el lugar presentan una mayor ventaja

sobre las fuera del mismo por el menor costo y la disminucin de la generacin de

residuos a eliminar en la superficie. La biorremediacin en el sitio contaminado es

la ms aplicada y utiliza microorganismos autctonos, estos en el suelo pueden

degradar un gran nmero de constituyentes de lodo pero su eficacia y su

poblacin son afectados cuando algunos contaminantes txicos estn presentes

en altas concentraciones. La reintroduccin de microorganismos aislados de un

sitio contaminado ayuda a resolver este problema ya que los microorganismos

pueden degradar los constituyentes y tiene una gran tolerancia a la toxicidad

(op.cit.).

Mtodos aplicados en bioremediacin

Biofiltracin, en esta entra el aire contaminado a unos biorreactores en los cuales

la flora microbiana degrada los contaminantes voltiles en dixido de carbono,

agua y biomasa (Benavides y Quintero, 2005) (Figura 1).

29
 Figura 1. Esquema de biofiltracin.

Bioventeo, el cual es un proceso de biorremediacion en el lugar de la

contaminacin que consiste en la ventilacin forzada del suelo mediante la

inyeccin de O2 en la zona no saturada mediante pozos de inyeccin; debido a la

aireacin se va a favorecer la degradacin de los hidrocarburos por volatilizacin y

migracin de la fase ms voltil del contaminante, y por biodegradacin, ya que al

incrementar la oxigenacin del suelo se va a estimular la actividad microbiana

(Benavides y Quintero, 2005), para disear estos sistemas es necesario conocer

la permeabilidad del suelo a los gases, con el fin de determinar el radio de

influencia de los pozos de venteo, la distancia entre pozos y las dimensiones de

los equipos de inyeccin. La bioaireacin generalmente se lleva a cabo en reas

poco profundas y pequeas; a menudo es factible la instalacin de barreras para

guiar el flujo, el uso de cubiertas, un control intensivo, un plan de muestreo y un

30
sistema de ventilacin. Una caracterstica determinante en la seleccin de esta

tcnica es el tipo de contaminante, puesto que es de mayor efectividad donde los

contaminantes tienen baja volatilidad. Adems se deben tener en cuenta las

caractersticas fsicas del suelo, la profundidad de la zona contaminada y el

potencial para transportar contaminantes fuera de la zona (Torres y Zuluaga,

2009) (Figura 2).

Figura 2. Esquema de Bioventeo.

Bioaspersin es un mtodo in situ que combina el efecto de la ventilacin con la

utilizacin de los microorganismos autctonos para degradar compuestos

orgnicos absorbidos por el suelo en la zona saturada. En este el aire y los

nutrientes se inyectan en la zona saturada para mejorar la actividad de los

31
microorganismos presentes. Est tcnica se utiliza para la degradacin de

compuestos orgnicos en el suelo y aguas subterrneas (Torres y Zuluaga, 2009).

Las caractersticas determinantes en la seleccin de esta tcnica son:

El tipo de contaminante. Se degradan fcilmente las molculas ms pequeas

(hasta C20), siendo ms biodegradables los compuestos parafinados o de cadena

lineal que los compuestos aromticos. En general, son favorables los compuestos

de alta volatilidad (presin de vapor mayor de 10 mm de Hg a 20C) (Torres y

Zuluaga, 2009).

Tipo de suelo. Los suelos deben contener bajos contenidos en arcilla y ser lo ms

homogneamente posible, con un valor de permeabilidad al aire adecuado (> 10-

10 cm2) (op. cit.).

Los aportes de oxgeno deben ser suficientes, as como la existencia de fuentes

de carbono, aceptores de electrones y energa suficientes (op. cit.).

Deben existir unas condiciones ptimas de pH (6 a 8), de humedad (12 a 30%

en peso), potencial redox mayor de -50 mV, temperatura entre 0 y 40 C y los

nutrientes del suelo en relacin N:P de 10:1 (op. cit.).

32
Biopilas, son un tipo de biorremediacin de tipo ex situ (o fuera del sitio

contaminado) en condiciones no saturadas, consiste en la reduccin de la

concentracin de contaminantes derivados del petrleo de suelos excavados

mediante el uso de la biodegradacin (Benavides y Quintero, 2005), (Figura 3).

Figura 3. Esquema de tratamiento por biopilas estticas.

La tcnica consiste en la formacin de pilas de material biodegradable de

dimensiones variables formadas por suelos contaminados y materia orgnica,

compost, en esta se aplica una aireacin activa volteando la pila o pasiva por

tubos de aireacin. Este principio se puede aplicar a la mayora de los compuestos

orgnicos siendo ms eficaz en los ligeros. Entre los factores que influyen en la

aplicacin de esta tcnica se destacan: los hidrocarburos deben ser no

halogenados con concentraciones en suelo menores a 50 ppm, superficie de

trabajo relativamente grandes, necesidad de una poblacin microbiana mayor a

1000 UFC (Unidades Formadoras de Colonias) por gramo de suelo (Benavides y

Quintero, 2005).

33
Atenuacin natural, es una tcnica de biorremediacin en el lugar de la

contaminacn (in situ) de bajo costo, su caracterstica principal es la utilizacin de

los procesos fsicoqumicos de interaccin contaminante suelo y los proceso de

biodegradacin tienen lugar de forma natural. Estos procesos se conocen como

procesos de biotransformacin natural, que van a reducir la concentracin de los

contaminates. Entre ellos se encuentra la dilucin, la dispersin, volatilizacin,

adsorcin, biodegradacin y las reacciones qumicas que se producen en el suelo.

Las tcnicas de recuperacin para acuferos contaminados ms empleadas son el

bombeo de agua contaminada y posterior tratamiento en superficie, inyeccin de

soluciones acuosas con reactivos e inyeccin de airea para eliminar sustancias

voltiles y el uso de microorganismos para trasformar y degradar el contaminante

(Benavides y Quintero, 2005).

Entre los factores que influyen en la eficacia y viabilidad de la atenuacin natural

destacan:

La existencia de unas condiciones geolgicas y geoqumicas favorables.

Las necesidades de reduccin de la masa contaminante en un intervalo

razonable de tiempo (meses a aos), tanto en la superficie del suelo como

en la zona ms subsuperficial del mismo (Torres y Zuluaga, 2009).

Confirmacin de la existencia de los tipos y nmero de poblaciones de

microorganismos que puedan biodegradar los contaminantes.

34
 La concentracin de los compuestos utilizados como aceptores de

electrones en condiciones anaerobias debe ser superior a 0,21 mg/l para

nitratos, la de Fe3+ para que pueda ser reducido a Fe2+ debe ser superior

a 21,8 mg/l y la de sulfatos mayor de 0,21 mg/l (Torres y Zuluaga, 2009).

El potencial redox debe estar situado entre un rango de -400 y 800 mV.

Deben existir unas condiciones ptimas de pH (6 a 8), de humedad (12 a

30% en peso), temperatura entre 0 y 40 C y los nutrientes del suelo en

relacin N:P de 10:1 (Torres y Zuluaga, 2009).

Existencia de un coeficiente de retardo favorable para que se produzcan los

fenmenos de sorcin con suficiente eficacia (Torres y Zuluaga, 2009).

Si se aportan al medio algunos de los elementos de los que carece o bien se

potencian los existentes, se favorece la eliminacin del posible contaminante. En

muchos casos este tipo de intervencin ser necesario para reforzar el proceso

natural o bien para implantar unas condiciones que reduzcan el riesgo. En esto se

basan la bioestimulacin y la bioaumentacin, que son aproximaciones

biotecnolgicas de la atenuacin natural (Torres y Zuluaga, 2009).

35
 Fig. 4 Proceso de atenuacin natural.

En el sistema de bioestimulacin, el agua subterrnea es conducida a la

superficie por medio de un sistema de pozos de extraccin, se acondiciona en un

reactor para volverla a inyectar y estimular la degradacin bacteriana de los

contaminantes del subsuelo y del acufero. En el reactor en superficie se agregan

al agua: nutrientes, oxgeno, microorganismos previamente seleccionados y

adaptados, y el efluente se retorna al subsuelo por medio de pozos de inyeccin,

aspersores superficiales o galeras de infiltracin distribuidas a lo largo y ancho del

sitio que se requiere remediar. Algunas veces esta tcnica utiliza biosurfactantes

para ayudar al lavado de contaminantes del suelo (Zitrides, 1990); (Cole, 1994).

Las caractersticas determinantes en la seleccin, el xito o el fracaso de esta

tcnica de remediacin son:

36
 Tipo de suelo. Los suelos deben ser lo ms homogneos posible, con un

valor de porosidad y permeabilidad al aire adecuado (> 10-10 cm2)

(Zitrides, 1990); (Cole, 1994).

Deben existir unas condiciones ptimas de pH (6 y 8), de humedad (12-

30% en peso), temperatura entre 0 y 40 C y los nutrientes del suelo en

relacin N:P de 10:1 (Zitrides, 1990); (Cole, 1994).

Bioaumentacin.

Otras lneas de investigacin han llevado a la introduccin de microorganismos

aclimatados o incluso modificados genticamente en el medio, con el fin de

mejorar la biodegradacin (Walter, 1997; Atlas y Unterman, 1999). Esta tcnica

funciona en condiciones de laboratorio o bioreactor, pero en ambientes externos

(suelo o agua) su implantacin depende de una serie de factores (Alexander,

1999).

Presencia de toxinas, nutrientes y condiciones ambientales, movilidad y/o

distribucin de los microorganismos y la presencia de abundante materia

orgnica.

Los microorganismos aadidos deben sobrevivir a los depredadores y

competir con xito con la poblacin autctona antes de ocupar los nichos

potenciales.

37
 En general, los ambientes ms selectivos y la utilizacin de consorcios

microbianos favorecen la bioaumentacin.

Microorganismos degradadores de hidrocarburos

La biodegradacin o bioxidacin, es el mecanismo ms importante, efectivo y

econmico para la eliminacin final de los hidrocarburos no voltiles del petrleo

presentes en el medio marino. Bajo su accin se ponen en juego mltiples

reacciones de oxidacin que conducen a la formacin de hidrocarburos de menor

peso molecular, adems de la formacin de dixido de carbono, agua y biomasa

microbiana (Benavides y Quintero 2005).

Las diferencias en la composicin y concentracin de hidrocarburos en el petrleo

determinan una alta especificidad en el proceso de oxidacin microbiana (Jackson

y Pardue, 1999). En el ambiente marino las n-parafinas son degradadas ms

rpidamente, seguido por los aromticos, isoalcanos, cicloparafinas y policclicos

aromticos de cadenas largas (Prince, 1993). Cuando se trata de petrleos

pesados se mantiene esta secuencia de degradacin incluidas las resinas y los

asfaltenos, compuestos de alto peso molecular (Haines, 1996).

La microbiota marina capaz de utilizar los crudos o fracciones refinadas del

petrleo como nica fuente de carbono y energa, est ampliamente representada

en diversos gneros. Sin embargo, sta solo se corresponde con el 1 % de la

38
poblacin hetertrofa total en ecosistemas no contaminados y puede alcanzar

hasta un 10 % cuando ocurre un derrame de petrleo (Venosa, 2000).

Entre las bacterias hidrocarbonoclastas marinas que refiere la literatura

especializada se incluyen los gneros Pseudomona, Rhodococcus,

Flavobacterium, Acinetobacter, Achromabacter, Bacillus, Corynebacterium y

Mycobacterium; entre las levaduras los gneros Candida y Rhodotorula son los

ms representativos, mientras que entre los hongos filamentosos los ms

frecuentes son Cladosporium, Penicillium y Aspergillus.

Se encuentran microorganismos con diferentes metabolismos como

quiomioorganotrfico, fotolittrofo, quimiolitotrofo, organtrofo y hetertrofo

(Atlas y Bartha 1998). En la degradacin de los hidrocarburos del petrleo, se

involucran consorcios de microorganismos, incluyendo procariontes y eucariontes.

Las bacterias y levaduras son los organismos dominantes en la degradacin de

compuestos del petrleo en ecosistemas acuticos, mientras que bacterias y

hongos son los que dominan en muestras de suelo. Los microorganismos ms

comunes que son responsables de la degradacin del petrleo comprenden

principalmente gneros bacterianos como: Nocardia, Pseudomonas,

Acinetobacter, Flavobacyterium, Micrococcus, Arthobacter, Corynebacterium,

Achromobacter, Rhodococcus, Alcaligenes, Mycobacterium y Bacillus.

39
Los gneros ms comunes de hongos son: Aspergillius, Mucor, Fusarium,

Penicillium, Rhodotorula, Candida y Sporobolomyces (Atlas, 1981; Bossert y

Bartha, 1984). Durante la biodegradacin, los microorganismos estn equipados

con la maquinaria metablica para utilizar al contaminante como fuente de

carbono y energa para su crecimiento, produciendo biomasa, subproductos,

dixido de carbono y agua (Eweis, 1998).

El grado de eficiencia de los procesos de degradacin se encuentra ntimamente

relacionado con factores ambientales que rodean al sistema microorganismo-

contaminante (Fernndez, 1995). Entre los ms importantes se encuentra el pH, la

concentracin de nutrientes, la temperatura, el tamao y caractersticas de las

partculas de suelo, la biodisponibilidad y concentracin del contaminante, la

toxicidad, la presencia de otros nutrientes, etc. La persistencia de un contaminante

en el ambiente depende de las caractersticas fsicas y qumicas del compuesto

qumico, como la baja solubilidad y la toxicidad que presenta hacia los

microorganismos degradadores (Alexander, 1994).

La mayora de los microorganismos que oxidan hidrocarburos llevan a cabo por

va aerobia las reacciones de oxido-reduccin, teniendo como ltimo aceptor de

electrones al oxgeno, aunque tambin se encuentran microorganismos que

requieren condiciones anaerobias para la oxidacin de estos compuestos. Sin

embargo, para la mayora de los compuestos, la degradacin ms rpida y

completa ocurre en condiciones aerobias (Cookson, 1995).

40
Tanto la va aerobia como la anaerobia producen subproductos derivados de la

oxidacin incompleta del hidrocarburo, tales como alcoholes, dioles y cetonas.

Tambin pueden producirse cidos orgnicos, como pirvico, ctrico y oxlico. La

degradacin microbiana de los compuestos orgnicos no siempre conduce a la

mineralizacin sino a una biotransformacin y los compuestos que se producen

pueden ser, en algunos casos, ms txicos que el original (King, 1992).

La capacidad de los sistemas biolgicos para degradar componentes de petrleo

es muy generalizada, puesto que ciertos microorganismos en el suelo pueden

adaptarse a los constituyentes del petrleo.

Los mecanismos de degradacin del petrleo y sus fracciones de penden de la

fraccin qumica dominante y de los microorganismos involucrados. En la

biodegradacin microbiana de hidrocarburos se conocen genes involucrados en la

metabolizacin de las diferentes fracciones del petrleo en donde mltiples vas

metablicas interaccionan para oxidarlos, dichos genes codifican para la sintsis

de enzimas como monoxigenasas, dioxigenasas, deshidrogenasas, etc. Tambin

se presentan procesos de cometabolismo en donde el co-metabolito, en este caso

el compuesto contaminante, puede ser transformado slo en presencia de un

sustrato utilizado por el microorganismo para su crecimiento o en presencia de

otro compuesto transformable (Dalton y Stirling, 1982).

Por otro lado, se ha visto que muestras de suelos no contaminados, contienen

poblaciones de alrededor de 107109 UFC por gramo de suelo, en donde tan slo

el 1% puede degradar componentes del petrleo. En un suelo contaminado con

41
hidrocarburos, cambia el nmero de microorganismos capaces de degradar

petrleo, con poblaciones desde 103 -106 UFC por gramo de suelo (Agteren,

1998). Esto es posible debido a que los microorganismos pueden obtener su

fuente de carbono de los hidrocarburos, y con ello obtener energa para crecer y

multiplicarse. En la biodegradacin del petrleo interviene otro factor relevante: la

disponibilidad de los hidrocarburos para el microorganismo, ya que algunos

compuestos presentan una baja solubilidad, lo que dificulta su transporte al interior

de la clula a travs de las membranas celulares, adems de la adsorcin que

presentan algunos compuestos hacia el propio suelo.

Los microorganismos pueden producir compuestos tensoactivos a fin de

emulsionar el hidrocarburo y mejorar as su disponibilidad (Reylli y col. 1996). Se

conoce poco de los mecanismos involucrados en el transporte de hidrocarburos a

travs de la membrana celular. Se cree que la protena alkL que est involucrada

en el transporte a travs de la membrana externa de hidrocarburos y que

posiblemente tambin la protena alkN est involucrada en procesos de

quimiotaxis de hidrocarburos , dicha protena se encuentra en la membrana

interna (Van Hamme y col. 2003). Durante un largo perodo se crey que el

transporte de hidrocarburos era un proceso pasivo; sin embargo, hay evidencia de

un requerimiento de energa para la captacin de hidrocarburos. En las levaduras

degradadoras la presencia de poros en las membranas celulares permite el paso

de hidrocarburos (Morgan y Watkinson, 1994).

42
La oxidacin de hidrocarburos alifticos, tanto por bacterias como por hongos,

consiste en convertir la cadena hidrocarbonada del alcano en el cido graso

correspondiente mediante la oxidacin del grupo metilo terminal. En presencia de

oxgeno la cadena del alcano puede ser atacada por monoxigenasas o

dioxigenasas (Bouwer y Zehnder, 1993), las cuales introducen uno o dos tomos

de oxgeno en la molcula, formndose as un alcohol.

Posteriormente, el alcohol es oxidado a un aldehdo y despus al cido graso

correspondiente. Una vez que el hidrocarburo se encuentra en forma de cido

graso, es utilizado en la ruta catablica de la -oxidacin, donde se remueven

unidades de dos carbonos para la formacin de acetil-CoA, ste es llevado hasta

CO2 y H2O por el ciclo de los cidos tricarboxlicos, la oxidacin de NADH + H+ y

FADH2 generados por la oxidacin de nutrientes se lleva a cabo en cadena

respiratoria y como subproducto se produce ATP (Wackett y col. 1989).

Los compuestos alifticos insaturados (alquenos y alquinos) son oxidados por va

aerobia por mecanismos similares a los utilizados para los alcanos. Sin embargo,

los enlaces dobles o triples son ms reactivos qumicamente y pueden

experimentar otro tipo de reacciones tales como epooxidacin e hidratacin

(Bouwer y Zehnder, 1993). Existen un sin nmero de rutas catablicas de los

hidrocarburos que generalmente pueden llegar a intermediarios menos txicos

para el ambiente (Smit, 1994).

43
Los compuestos polares como las resinas y los asfaltenos, poseen estructuras

qumicas muy complejas que los convierten en compuestos recalcitrantes a la

biodegradacin, debido a su insolubilidad y a que presentan grupos funcionales

que se encuentran protegidos del ataque microbiano, adems de estar

constituidos por un gran nmero de anillos aromticos (Atlas, 1991; Baker y

Herson, 1994). Sin embargo, algunos estudios han reportado la degradacin de

asfaltenos por cometabolismo, en presencia de alcanos alifticos de 12 a 18

tomos de carbono (Leahy y Colwell, 1990).

Los compuestos aromticos que poseen como estructura primaria la molcula de

benceno, denominados BTEX (benceno, tolueno, etilbenceno y xilenos), se

encuentran como contaminantes frecuentes y constituyen un porcentaje elevado

de la composicin del petrleo. Su degradacin se lleva a cabo mediante dos vas

oxidativas: la activacin del anillo y su ruptura. La activacin involucra la

incorporacin de oxgeno en el anillo, esto es, una dihidroxilacin del ncleo

aromtico. Esta activacin se lleva acabo tambin por la accin de las enzimas

mono o dioxigenasas (Cerniglia, 1992). En la segunda fase, los dihidrodioles

sufren una oxidacin para formar derivados dihidroxilados, como el catecol, los

cuales son precursores de la ruptura del anillo por oxidacin va meta u orto,

produciendo el semialdehdo 2-hidroximucnico y el cido mucnico,

respectivamente. Posteriormente, estos compuestos son oxidados para formar

cidos grasos que pueden ser utilizados por los microorganismos para la sntesis

celular y la produccin de energa (Eweis y col. 1998).

44
Se sabe que los hidrocarburos aromticos policclicos (HAP) son degradados, un

anillo a la vez, por mecanismos similares a los de la degradacin de los

hidrocarburos aromticos. Sin embargo, la biodegradabilidad de los HAP) tiende a

disminuir conforme se incrementa el nmero de anillos que los constituyen y

conforme se incrementa el nmero de radicales alquilo que poseen (Park y col.

1990). El metabolismo microbiano del naftaleno, fenantreno y antraceno ha sido

estudiado ampliamente (Gibson y Subramanian, 1984; Bouwer y Zehnder, 1993).

La solubilidad que presentan en compuestos polares influye mucho en la

biodegradacin de estos compuestos. Al utilizar cepas puras pueden formarse

intermediarios txicos, pero el uso de cultivos mixtos o consorcios microbianos

permite degradar estos intermediarios, favoreciendo la mineralizacin completa de

los contaminantes (Singleton, 1994). El sinergismo entre bacterias, hongos y

levaduras provoca un incremento en la velocidad de oxidacin de los

hidrocarburos (Riser-Roberts 1998).

Propiedades de algunos microorganismos hidrocarbonoclastas.

Uno de los gneros bacterianos ms explotados en bioprocesos no

convencionales es Rhodococcus, un grupo nico consistente en microorganismos

que presentan una gran diversidad metablica, capaz de transformar, biodegradar

y utilizar como nica fuente de carbono compuestos hidrfobos. Los Rhodococcus

son aerbios, Gram positivos, inmviles, Nocardiformes, Actinomicetos, que en

algunas ocasiones presentan pequeas proyecciones filamentosas. Las

45
caractersticas bioqumicas encontradas en algunas cepas son la produccin de

poli-3- hidroxialcanoatos, acumulacin de metales pesados y enzimas tiles como

la fenilalanina, deshidrogenasa y endoglucosidasas (Benavides y Quintero, 2005).

El Rhododoccus posee una gran variedad de vas metablicas para la

degradacin y modificacin de compuestos aromticos, incluyendo las actividades

de di-oxigenasa y mono-oxigenasa sobre anillos, as como la actividad de ruptura

de catecol. Algunas cepas presentan tambin la va del 3-oxoadipato. Lo anterior

sumado a su capacidad de crecimiento en medios con escasos nutrientes, la

carencia de un sistema de represin catablica y su persistencia ambiental las

hacen excelentes candidatas para los tratamientos de biorremediacin (Flavio y

Zachia, 1999).

El Rhodococcus sp. utiliza el dibenzotiofeno (DBT) como nica fuente de azufre, el

DBT y sus derivados son los rganoazufrados ms abundantes en el diesel

primario. En Mxico, investigadores del Instituto Mexicano del Petrleo han aislado

cepas de Rhodococcus de sitios contaminados con petrleo capaces de desulfurar

muestras de diesel. Otros microorganismos reportados como capaces de utilizar el

DBT como fuente de azufre son las cepas de Gordona y Nocardia sp. Dentro de

las aplicaciones industriales y ambientales, se incluye la produccin de cido

acrlico y acrilamida, conversin de esteroides, biorremediacion de hidrocarburos

clorados y fenoles, a lo que se aade su gran capacidad de degradar

hidrocarburos alifaticos halogenados y numerosos compuestos aromaticos, como

46
los PHAs (hidrocarburos policiclicos aromticos), evidenciandose que tanto R.

rhodochorus como R. erythropolis demostraron ser una excepcin, pues la

degradacin de naftaleno por parte de estos no es significativa, debido a que la

actividad degradadora de PAHs por parte de estos microorganismos, se ve

regulada por las proteobacterias del medio afectado (Nicholson y Fathepure,

2004).

Las bacterias del gnero Pseudomonas poseen la habilidad para utilizar diversos

substratos, incluyendo aquellos creados por el petrleo. Las Pseudomonas son

bacterias Gram negativas, oblicuas, que pertenecen a la subclase gamma de las

Proteobacterias. Las Pseudomonas son bacterias productoras de biosurfactantes

como los ramnolipidos involucrados en procesos de remocin de aceites y

productos relacionados, Bushnell y Hass fueron de los primeros en describir

bacterias productoras de biosurfactantes, como el Corynebacterium simplex y

cepas de Pseudomonas. La Pseudomona aeruginosa, es otro de los

microorganismos ms usado y estudiado en biorremediacin y presenta una serie

de actividades naturales sobre xenobiticos. Lamentablemente, tambin es

conocida por ser un patgeno oportunista en humanos y causante de

complicaciones graves en personas inmunosuprimidas, con quemaduras severas

o con fibrosis qustica (Rockne y col. 2000).

Estudios con relacin al desempeo metablico de la Pseudomonas aeruginosa

ha permitido identificarla como degradadora de gran cantidad de sustratos como el

n-hexadecano, mineralizacin de compuestos alifticos en condiciones

anaerobias, y degradadora de hidrocarburos aromticos y poli aromticos, as

47
como del pireno en estudios in vitro. La P. aeruginosa tiene la capacidad de

sintetizar ramnolipidos cuando se encuentra en la fase estacionaria de su

crecimiento, por tal razn esto slo se puede realizar en la primera fase del

proceso de biorremediacion y contribuyendo as con la movilizacin y

solubilizacin de los contaminantes durante la fase siguiente de mineralizacin. Al

mismo tiempo que pueden transformarse bajo microcosmos en el suelo con un

tratamiento fsico o qumico especifico, caracterstica que comparte con el

Agrobacterium tumefasciens (Demaneche, 2011).

La Pseudomona putida es un saprofito del suelo, oportunista, cosmopolita,

metablicamente verstil, por poseer una dioxigenasa inicial, una tolueno

dioxigenasa, aunque no presenta la dioxigenasa especfica para los PAHs por lo

cual es una buena candidata para las aplicaciones biotecnolgicas, tales como

agricultura, biocatlisis, biorremediacin, biocontrol en proteccin de las plantas y

produccin de bioplsticos (Danne, 2011).

La Pseudomonas fluorescens es degradadora de naftaleno y fenantreno, ventaja

que tiene frente a las otras Pseudomonas, que solo metabolizan naftaleno y

asfaltenos. Estudios realizados demuestran que Flavobacterium y Pseudomonas

son los microorganismos ms aislados en la fase de degradacin de los TPH

(Hidrocarburos Totales). La Pseudomonas stutzeri es una degradadora de PHAs.

Burkholderia es otro gnero bacteriano utilizado para biorremediacin de

herbicidas y pesticidas recalcitrantes y tambin es usado para proteger cultivos

48
contra hongos. Debido a su genoma extremadamente flexible, Burkholderia

cepacia, bacilo Gram negativo no fermentador, productora de pigmento amarillo

tiene una gran capacidad mutagnica y adaptativa, ha sido recuperada a partir de

agua y superficies hmedas, es resistente a mltiples antibiticos y sta capacidad

es altamente transmisible entre especies. Por todas estas razones, la seleccin de

cepas seguras para su uso ambiental no es posible por el momento y su uso en la

agricultura tambin debe ser cauteloso. Aunque es una excelente degradadora de

los hidrocarburos aromticos (Rockne, Sanford, 2000).

El Acinetobacter sp. es un bacilo Gram negativo, es productor de cido a partir de

la glucosa, se desarrolla a 41 y 44C, produce a-xilosa y utiliza el malato. Dentro

de las especies de importancia ambiental se destacan, A. baumanii, Acinetobacter

calcoaceticus carente de cido metlico. Las cepas de Acinetobacter baumanii son

eficientes en la degradacin de fracciones de alcanos (Diaz, Burguess, 2002).

En cuanto a la capacidad de degradacin del isoctano, resulta ser complicada en

las muestras naturales, solo se ha aislado el Mycobacterium austroafricanum con

esta capacidad, as como tambin se ha encontrado que esta cepa se caracteriza

por el uso de ciclohexano como un co-sustrato, pues su habilidad radica en el uso

de isoctano como nica fuente de carbono (Floriane y col. 2000).

Otro gnero estudiado dentro de las tcnicas de biorremediacion es

Sphingomonas, bacilos no fermentadores y dentro de estos la Sphingomona

wittichi es un microorganismo capaz de degradar en condiciones anaerobias el 2,7

49
diclorobenceno, produciendo el metabolito 4 clorocatenol y el 1,2,3,4

tetraclorodibenceno, y cepas como Sphingomonas yanoikuyae, y Sphingomonas

paucimobilis como degradadoras de PAHs utilizndolos como nica fuente de

energa, tienen actividad Catecol 2,3- dioxigenasa, fenantreno y antraceno. Se han

aislado cepas capaces de metabolizar naftaleno y fenatreno como nica fuente de

carbono, estas fueron taxonmicamente implicadas en diferentes subclases de las

Proteobacterias (Sphingomonas sp. Acidovorax sp. Comamonas sp. y

Pseudomonas sp. ) y a bacterias Gram positivas con bajo y alto contenido de DNA

G+C (Paenibacillus sp. y Rhodococcus sp. respectivamente). Alcalgenes sp.,

Micobacterium sp. y Bacteroides sp. han sido reportados como degradadores de

hidrocarburos de petrleo, y estos filotipos son candidatos para el tratamiento de

terrenos contaminados con TPH (Nannipiery y col. 2001).

La degradacin del bifenil policlorinato PCBs y otros hidrocarburos por

microorganismos como Comamonas acidovorans, Acinetobacter calcoaceticus,

Achromobacte, Pseudomonas, Flavobacterium devorans, Bacillus lentus, Bacillus

mascerans y Bacillus thuringensis ha sido aplicada con buenos resultados para el

tratamiento de los mismos. Se ha referenciado que las Comamonas son

degradadoras de fenaltreno, Gordona degrada el Pireno, de 5 a 35 das luego de

ser inoculada. Azoarcus puede degradar benceno, tolueno, etilbenzeno y xileno

(De Boer, 2003; Jizhong, 2001)

50
Fundamento bioqumico de la biodegradacin

El fundamento bioqumico de la biorremediacin se basa en que en la cadena

respiratoria, o transportadora de electrones de las clulas, se van a producir una

serie de reacciones de xido-reduccin cuyo fin es la obtencin de energa. La

cadena la inicia un sustrato orgnico (compuestos hidrocarburados) que es

externo a la clula y que acta como dador de electrones, de modo que la

actividad metablica de la clula acaba degradando y consumiendo dicha

sustancia (Maroto y Rogel, 2001).

Los aceptores ms comnmente utilizados por los microorganismos son el

oxgeno, los nitratos, el hierro (III), los sulfatos y el dixido de carbono. Cuando el

oxgeno es utilizado como aceptor de electrones la respiracin microbiana se

produce en condiciones aerobias, y los procesos de biodegradacin sern de tipo

aerobio; sin embargo, si utiliza los sulfatos o el dixido de carbono se produce en

condiciones reductoras o anaerobias, y los procesos de biodegradacin sern de

tipo anaerobio (Maroto y Rogel, 2001).

Degradacin aerobia:

Sustrato + O2 biomasa + CO2 + H2O

Degradacin anaerobia:

Sustrato + (NO3 -, SO4 2-, Fe3+, Mn4 +, CO2) Biomasa + CO2 + (N2, Mn2+, S 2+,

Fe 2+, CH4)

51
La concentracin y composicin de la comunidad microbiana y la tasa de

transformacin de contaminantes est influenciada por diversos factores:

I. Necesidad de nutrientes: El metabolismo microbiano est orientado a la

reproduccin de los organismos y stos requieren que los constituyentes

qumicos se encuentren disponibles para su asimilacin y sintetizacin. Los

nutrientes principalmente requeridos son el fsforo y el nitrgeno. Por lo

general suele haber en el suelo una concentracin de nutrientes suficiente,

sin embargo, si estos no se encontrasen en el rango normal se puede

adicionar mayor cantidad al medio (Maroto y Rogel, 2001). El rango normal

de C:N:P depende del sistema de tratamiento a emplear, siendo de modo

habitual 100:10:1.

II. pH del suelo: afecta significativamente en la actividad microbiana. El

crecimiento de la mayor parte de los microorganismos es mximo dentro de

un intervalo de pH situado entre 6 y 8. As mismo el pH tambin afecta

directamente en la solubilidad del fsforo y en el transporte de metales

pesados en el suelo. La acidificacin o la reduccin del pH en el suelo se

puede realizar adicionando azufre o compuestos del azufre (Maroto y

Rogel, 2001).

III. Temperatura: generalmente las especies bacterianas crecen a intervalos de

temperatura bastante reducidos, entre 15 y 45 C (condiciones mesfilas),

52
 decreciendo la biodegradacin por desnaturalizacin de las enzimas a

temperaturas superiores a 40 C e inhibindose a inferiores a 0 C (Maroto

y Rogel, 2001).

IV. Humedad: los microorganismos requieren unas condiciones mnimas de

humedad para su crecimiento. El agua forma parte del protoplasma

bacteriano y sirve como medio de transporte a travs del cual los

compuestos orgnicos y nutrientes son movilizados hasta el interior de las

clulas. Un exceso de humedad inhibir el crecimiento bacteriano al reducir

la concentracin de oxgeno en el suelo. El rango vara en funcin de la

tcnica (Maroto y Rogel, 2001).

V. Estructura qumica del hidrocarburo: la inherente biodegradabilidad de un

hidrocarburo depende, en gran medida, de su estructura molecular. Siendo

los parmetros que ms van a afectar la halogenacin, la existencia de

ramificaciones, la baja solubilidad en el agua y la diferente carga atmica

(Maroto y Rogel, 2001).

La mayora de estos descubrimientos sobre el metabolismo de la biodegradacin

de hidrocarburos fueron realizados en laboratorios acadmicos. Luego gracias al

esfuerzo de profesionales trabajando en la industria petrolera misma, as como en

empresas dedicadas a la restauracin ambiental, se implementaron estos

descubrimientos en el campo (Maroto y Rogel, 2001).

53
Fitorremediacion

El proceso de fitoremediacin busca contener, estabilizar, secuestrar-adsorber,

asimilar, reducir, degradar, metabolizar o mineralizar los contaminantes

hidrocarburos, pesticidas, metales pesados, sales, solventes clorados, entre

otros presentes en el suelo, agua subterrnea o sedimentos a travs de

especies vegetales con caractersticas especiales (Hutchinson, 2001).

Inicialmente, el trmino de fitorremediacin se asoci al uso de plantas capaces de

bioconcentrar niveles inusuales de metales en sus tejidos. La mayor parte de ellas

estn constituidas por pequeas plantas herbceas que se desarrollan en zonas

metalrgicas naturales o en depsitos. Hoy en da, las investigaciones en

fitorremediacin se encaminan no slo al tratamiento de contaminantes

inorgnicos (metales, metaloides, haluros y radionucleidos), sino tambin al

tratamiento de contaminantes orgnicos (50); algunas especies de plantas

probadas con xito en la fitorremediacin de suelos contaminados con

hidrocarburos del petrleo son: Zea mays L., Panicum maximun Jacq., Paspalum

virgatum L., Echinochloa polystachya H.B.K., Sorghum vulgare L., Phaseolus

vulgaris L., Phaseolus coccineus L., Chamaecrista nictitans (L.) Moench.,

Brachiaria brizantha (Hochst. ex A. Rich) Stapf., Triticum aestivum L., Hordeum

vulgare L., entre otras. (Revista Latinoamericana de Microbiologa vol 48. Abril -

Junio de 2006).

54
En la rizsfera rea de la planta que comprende la raz y los tres milmetros que

la rodean se libera oxgeno y ms de 100 exudados azucares, cidos

alifticos, aminocidos, cidos aromticos, compuestos fenlicos, cidos grasos,

esteroides y enzimas (las cuales facilitan a las bacterias fraccionar las molculas

de los contaminantes) que sumados a la humedad y caractersticas del suelo

crean condiciones ideales para el desarrollo de bacterias y hongos que intervienen

en la biodegradacin de contaminantes (Martnez, 2007).

Los diferentes niveles de descontaminacin por fitoremediacin dependern de la

interaccin suelo-planta-contaminante. El anlisis y muestreo de estos tres

elementos son parte de la primera etapa donde se caracteriza el terreno afectado

por sus propiedades, qumicas y biolgicas (op. cit).

En la planta se examina el tipo de especie, el abastecimiento para cubrir la zona

contaminada, el tipo y profundidad de raz mientras ms contacto tenga con el

txico aumenta la eficiencia, requerimientos climticos, tasa de transpiracin y

crecimiento son preferibles las que tienen ciclos de vida corta porque limpian

ms rpido (Martnez, 2007).

Por otro lado, la informacin del contaminante nos permite decidir si se usa la

fitoremediacin como alternativa primaria o final para descontaminar el suelo. En

este se mide sorcin, biodisponibilidad, solubilidad, presin de vapor, Constante

de Henry, distribucin, fuente y concentracin si la toxicidad es alta, la

55
fitoremediacin se usara al final para pulir la descontaminacin despus de otro

proceso de remediacin (op. cit.).

De igual forma, para determinar si se requiere o no la fitoremediacin se evala el

volumen de suelo contaminado, las condiciones climticas, hidrogeologa y la

direccin del agua fretica, tomando en cuenta la normatividad ambiental a travs

de un estudio de diagnstico del sitio con base a la legislacin ambiental aplicable,

por ejemplo la NOM-138-SEMARNAT/SS-2003, donde se indican las

especificaciones de la caracterizacin y los lmites mximos permisibles de

hidrocarburos (Martnez, 2007).

Aplicaciones de la fitorremediacin

Puede aplicarse eficientemente para tratar suelos contaminados con compuestos

orgnicos como benceno, tolueno, etilbenceno y xilenos (BTEX); solventes

clorados; HAP; desechos de nitrotolueno; agroqumicos clorados y

organofosforados; adems de compuestos inorgnicos como Cd, Cr (VI), Co, Cu,

Pb, Ni, Se y Zn (Sellers, 1999). Se ha demostrado tambin su eficiencia en la

remocin de metales radioactivos y txicos de suelos y agua.

Especies como el lamo, sauce, pasto alemn, maz, rbano, mimosa, festuca,

alfalfa, frijol, girasol, cebada, soya, crisantemo, trbol, entre otras estn sealadas

56
por referencias bibliogrficas como degradadoras de hidrocarburos. Para la

extraccin de metales se utilizan el girasol, colza, sorgo, lirio acutico, etctera.

El proceso de fitoremediacin tiene como beneficios mejorar las condiciones del

suelo, optimizar la calidad de agua fretica, evitar la erosin elica e hdrica,

brinda servicios ambientales tiles para cualquier ecosistema restauracin,

provee el hbitat para especies silvestres, favorece la captura de CO 2, es de bajo

costo y puede combinarse con otras tecnologas de remediacin. Mxico cuenta

con una amplia variedad biolgica de especies vegetales con las que puede

facilitar la estabilizacin de las condiciones del ambiente y promover su

mejoramiento a travs de prcticas de conservacin del suelo.

La fitodescontaminacin (cuadro 3) es el proceso por el cual la concentracin de

contaminantes del suelo se reduce a niveles tolerables a travs de la accin de las

plantas, su microflora asociada y de las tcnicas agronmicas apropiadas. A su

vez, comprende los siguientes procesos:

Fitoextraccin. Es el proceso por medio del cual, tanto los contaminantes

metlicos, como los contaminantes orgnicos del suelo, son absorbidos

directamente por las plantas e incorporados a su biomasa, que con posterioridad

ser recolectada para su destruccin (Torres y Zuluaga, 2009). (Fig. 5).

57
Fitovolatilizacin. Proceso por el cual las plantas y la actividad microbiana

asociada, a travs de enzimas especializados, pueden transformar, degradar y

finalmente volatilizar los contaminantes desde el suelo. La volatilizacin puede

producirse tanto desde el sistema radicular como desde la parte superficial del

suelo (Torres y Zuluaga, 2009) (Fig. 5).

Fitodegradacin. Es el proceso mediante el cual las plantas toman el

contaminante y lo metabolizan transformndolo en un material sin riesgos para el

medio natural (Fig. 5).

Rizodegradacin. Es el proceso por medio del cual las races de las plantas, su

microflora asociada y/o los productos excretados destruyen el contaminante en la

zona radicular (op. cit.) (Cuadro 3).

58
 Fig. 5 Procesos de fitorremediacin

La fitoestabilizacin es el proceso que est encaminado al secuestro y

estabilizacin de los contaminantes en los suelos. Se utilizan plantas tolerantes al

contaminante, capaces de estabilizarlo mecnicamente, y por tanto impiden su

transporte a otros medios, incluyendo el agua subterrnea (op. cit.) (Cuadro 3).

59
Cuadro 3. Tipos de fitorremediacin.

PROCESO
TIPO CONTAMINANTE
INVOLUCRADO
Concentracin de metales
Cadmio, cobalto, cromo,
pesados en las partes
Fitoextraccin nquel, mercurio, plomo,
areas y cosechables de la
selenio y zinc.
planta.
Absorcin, precipitacin y
Cadmio, cobalto, cromo,
concentracin de los
nquel, mercurio, plomo,
metales pesados en las
Rizodegradacin selenio, zinc, isotopos
races de efluentes lquidos
radioactivos, compuestos
contaminados. Degradacin
fenlicos.
de compuestos orgnicos.
Las plantas tolerantes a
metales se usan para
Desechos mineros,
reducir la movilidad de los
Fitoestabilizacin componentes fenlicos y
mismos y evitar el pasaje a
clorados.
aguas subterrneas o al
aire.
Se usan exudados
radiculares para promover
Hidrocarburos derivados del
el desarrollo de
Fitoestimulacin petrleo y poliaromticos,
microorganismos
benceno, tolueno, etc.
degradativos (bacterias y
hongos).
Las plantas captan y
Mercurio, selenio y
modifican metales pesados
solventes clorados
Fitovolatilizacin o compuestos orgnicos y
(tetraclorometano y
los liberan a la atmosfera
triclorometano).
con la transpiracin.
Las plantas acuticas y
TNT, DNT, RDX,
terrestres captan,
nitrobenceno, nitrotolueno,
almacenan y degradan
Fitodegradacin atrazina, solventes
compuestos orgnicos para
clorados, DDT, pesticidas,
dar subproductos menos
fenoles y nitrilos, etc.
txicos o no txicos.

Tolerancia de las plantas a los contaminantes

Una caracterstica esencial en cualquier tecnologa de fitorremediacin es la

tolerancia de las plantas a los contaminantes, que se define como la capacidad

60
para resistir la acumulacin en sus tejidos de elevados niveles de compuestos

txicos. Para comprender el desarrollo de las plantas hipertolerantes es necesario

conocer las estrategias moleculares que adoptan para resistir los efectos txicos

de los contaminantes inorgnicos y orgnicos (Torres y Zuluaga, 2009).

Tolerancia a los metales pesados. La tolerancia a los metales pesados por las

plantas est limitada tanto por la admisin celular, como por la resistencia de los

metales una vez que han penetrado en las clulas.

Las estrategias empleadas por las plantas, para resistir los efectos txicos

causados por los metales pesados, se relacionan con los siguientes mecanismos:

Establecimiento de enlaces entre los metales y la pared celular.

Nivel de tolerancia por la membrana celular hacia los metales.

Reduccin del transporte por la membrana celular.

Flujo activo de metales desde las clulas hacia el exterior.

Nivel de tolerancia de los enzimas vegetales hacia los metales.

Compartimentacin o acumulacin del exceso de metales en rganos

subcelulares como son las vacuolas.

Quelacin del metal por ligandos orgnicos y/o inorgnicos (fitoquelatos).

Precipitacin del metal al formar compuestos de baja solubilidad.

61
Tolerancia a los contaminantes orgnicos. Las plantas muestran una variacin

considerable de su tolerancia hacia los contaminantes orgnicos; dos son los

mecanismos por los que las plantas pueden incrementar su resistencia a los

contaminantes orgnicos. El primero de ellos consiste en la transformacin de los

elementos txicos en la rizosfera, para ello la planta libera ms del 20% de su

fotosintato dentro del suelo en forma de exudado radicular. El fotosintato liberado

est constituido por una mezcla de azcares, alcoholes, fenoles, cidos orgnicos

y protenas que rpidamente son utilizados por las comunidades microbianas

existentes en la rizosfera. Estas poblaciones pueden ser, de 100 a 10.000 veces

mayores que las poblaciones presentes en la matriz del suelo, y se caracterizan

por presentar enzimas especficos capaces de metabolizar los contaminantes

orgnicos hacia formas menos txicas (Torres y Zuluaga, 2009).

El segundo mecanismo se produce una vez que los contaminantes han

atravesado el sistema radicular. En este caso, los elementos txicos pueden

seguir dos vas de transformacin, por un lado se trasladan hacia brotes y hojas

para, posteriormente, volatilizarse, y por otro pueden sufrir procesos de

metabolizacin hacia nuevas formas. Estos nuevos compuestos pueden

mineralizarse o pueden acumularse como nutrientes o como nuevos

contaminantes. La inclusin en rganos subcelulares y la formacin de otros

compuestos representan las principales vas para la desintoxicacin de

xenobiticos en plantas (Torres y Zuluaga, 2009).

62
 CAPTULO IV

REMEDIACIN DE SUELOS

CASOS DE APLICACIN Y ESTUDIO

Bermdez y colaboradores en 2011, en su estudio titulado Biorremediacin de

suelos contaminados con hidrocarburos en la zona costera de Punta

Majagua, describieron y evaluaron los resultados de la biorremediacin de 479

m3 de residuos petrolizados, contenidos en cuatro depsitos de combustible que

haban sido derramados en la zona costera, el diseo propuesto, se bas en el

uso de la tcnica de bioaumentacin, a partir de la aplicacin del Bioproducto

BIOIL-FC, consorcio bacteriano producido y patentado por el Centro de

Bioproductos Marinos de Cuba, cuya formulacin contiene un cultivo mixto de

bacterias extradas de la Baha de Crdenas, Matanzas, con un alto espectro de

degradacin de los hidrocarburos del petrleo, aplicndose 54,5 m3 del producto

en un fermentador industrial de 12000 L. Se realiz un muestreo inicial

registrndose valores superiores de 41880 mg/kg de hidrocarburos totales del

petrleo (HTP) con altas concentraciones de saturados, aromticos, resinas y

asfaltenos (SARA) y tres posteriores con una periodicidad de 45, 90 y 120 das a

partir de la aplicacin. Se obtuvo una concentracin media de 1884.57 mg/kg de

hidrocarburos totales a los 120 das con una tasa media de remocin de 94.8 %,

mientras que para SARA se reportaron valores de 94.6 %, 90.78 %, 86.99 % y

79.9 % respectivamente.

63
Ordaz, J., Martnez A., Ramos F.R., Snchez Daz L. Martnez A., Tenorio J.A. y

Cuevas-Daz M.C. en 2011 con su estudio Biorremediacin de un suelo

contaminado con petrleo mediante el empleo de bagazo de caa con

diferentes tamaos de partcula, realizaron pruebas de biorremediacin a nivel

microcosmos a un suelo arcilloso, contaminado con petrleo crudo, del sureste de

Mxico con una concentracin inicial de hidrocarburos totales del petrleo (HTP)

de 16000 ppm. Se utiliz como texturizante y enmienda al bagazo de caa. Se

utiliz suelo con 2 % de bagazo, con un ajuste de nutrientes (carbono, nitrgeno y

fsforo) a una relacin de 100/10/1. Se emple un diseo experimental factorial

fraccionado (por triplicado) en cultivo slido, los factores fueron (a dos niveles, + y

): bagazo (tamao de partcula de 0,84 mm y 4,76 mm), el contenido de humedad

(60 % y 90 %) y la temperatura de incubacin (28 C y 33 C). La mxima

remocin de HTP (30 %), despus de 20 das, se logr con un tamao de partcula

de 4,76 mm, con una humedad de 60 % y 28 C. Con esas condiciones se realiz

una cintica de remocin de HTP en cultivo slido durante 20 das, la toma de

muestras se realiz cada cinco das, finalmente la mxima remocin de HTP ( 28

%) se obtuvo al da 20. En este estudio se observ que a mayor tamao de

partcula se mejora la remocin de HTP del suelo.

Prez-Armendriz y colaboradores en el 2009 realizaron un trabajo denominado

Remocin por hongos filamentosos de los hidrocarburos de petrleo de un

suelo contaminado en el cual se estudi la remocin de hidrocarburos de

petrleo de un suelo contaminado [65,000 mg de hidrocarburos totales de petrleo

64
(HTPs)/kg de suelo], el cual haba estado expuesto a condiciones ambientales

tropicales por ms de 20 aos en el sureste de Mxico. Los experimentos se

llevaron a cabo en reactores de lote (60 mL), los cuales contenan un sustrato a

base de suelo contaminado y bagazo de caa de azcar como agente texturizante

(proporcin 80:20, peso/peso). Se inocularon reactores de lote, estriles y no

estriles, con suspensiones de esporas de Aspergillus niger, Penicillium glabrum,

y Cladosporium cladosporioides. Los HTP se determinaron al principio y al final de

los experimentos, mientras que la produccin y acumulacin de CO 2 se determin

por cromatografa de gases. Todas las especies fngicas estudiadas estuvieron

asociadas a la remocin de HTP, tanto en tratamientos estriles como no estriles.

Se observ un proceso de bioaumentacin debido al efecto sinrgico entre C.

cladosporioides y la poblaciones microbianas nativas bien adaptadas del suelo

contaminado, ya que la remocin ms alta de HTP (78.5 %) y mayor acumulacin

de CO2 (14.3 %) se registraron en este tratamiento no estril. En cambio, la

remocin ms baja de HTP se observ en la misma especie, pero en el

tratamiento estril (62.3 %), demostrando que la ausencia de microbiota nativa

adaptada redujo significativamente el metabolismo fngico (acumulacin de CO2:

9.1 %), as como la remocin de HTP. Se determin que los patrones de

acumulacin de CO2 y la remocin de HTP en los otros tratamientos pueden

relacionarse con competencia interespecfica entre el hongo filamentoso y la

microbiota nativa adaptada.

65
En el trabajo realizado por Ziga y colaboradores en el ao 2009 titulado

Especies fngicas involucradas en la remocin de hidrocarburos utilizando

grano verde de caf como texturizante cuyo objetivo fue identificar las

especies fngicas involucradas en la remocin de hidrocarburos, se determinaron

variables de respuesta como la produccin de CO2, remocin de hidrocarburos de

fraccin media (HFM), deteccin de oxalato de calcio por medio de titulacin

permanganimtrica y cuenta fngica de poblaciones hidrocarbonoclastas, para ello

se inici con la caracterizacin del suelo y se obtuvo como resultado una

concentracin de contaminacin inicial de 1213 mg de HFM por kg de muestra. Se

plantearon diferentes tratamientos durante 12 das obtenindose la remocin de

hidrocarburos en un 92 % y 94 %, respectivamente, adems de encontrarse que

los hongos con capacidad hidrocarburoclasta ms abundantes en el grano verde

de caf fueron Aspergillus flavus, Penicillium chrysogenum y Absidia corymbifera.

En el 2007, Ferrera-Cerrato y colaboradores con su trabajo denominado

Fitorremediacin de un suelo contaminado con combustleo usando

Phaseolus coccineus y fertilizacin orgnica e inorgnica fueron de los

primeros en reportar la fitorremediacin de hidrocarburos en suelo usando P.

coccineus. Se us suelo contaminado (SC) con combustleo (50 000 mg kg1) de

la localidad de Frijol Colorado, Veracruz, el rea afectada por el derrame fue

aproximadamente 100 m2. El suelo present pH 6.6, 0.1 % N, 25 g g1 P Olsen,

2.1 % materia orgnica (MO), y textura franca. Las unidades experimentales

66
fueron recipientes de cristal mbar rellenados con suelo (250 g por unidad)

usandose SC con combustleo y SNC que se prepararon as: la muestra

compuesta se dividi en tres partes, en una parte se aplic 5 % MO (FOrg;

vermicomposta de caf); en otra parte se aplic solucin nutritiva completa de

Long Ashton (Hewitt, 1966) que fue el tratamiento con fertilizacin inorgnica

(FInor); el suelo restante se mantuvo sin fertilizacin (NoF). La degradacin de

combustleo se determin a los 90 das, mediante extraccin y cuantificacin de

hidrocarburos de dos muestras compuestas de suelo de cada tratamiento,

obtenindose como resultado que usando las dos fertilizaciones se logra mayor

remocin a los 90 das de iniciado el proceso.

Otro estudio en el 2007 titulado Remocin de fenantreno por Azolla

caroliniana utilizando bioaumentacin con microorganismos

hidrocarbonoclastas realizado por Castro-Carrillo y colaboradores tuvo como

objetivo conocer la capacidad de crecimiento y remocin de fenantreno (FEN) por

el helecho Azolla caroliniana, utilizando bioaumentacin con Bacillus

stearothermophilus y Oscillatoria sp. De acuerdo a los resultados obtenidos en la

Fase I, se seleccion la colecta de Azolla que mostr mayor tolerancia a FEN. Se

inocul un consorcio con dos microorganismos degradadores de FEN, Bacillus

stearothermophillus y Oscillatoria sp. (BST+OSC). La bacteria B.

Stearothermophillus tiene la capacidad de producir un surfactante til en la

degradacin de hidrocarburos del petrleo. La cianobacteria Oscillatoria es fijadora

67
de N2 atmosfrico y tiene capacidad fotosinttica. De cada cultivo microbiano se

tomaron 5ml (109 clulas-ml1), para inocular las respectivas unidades

experimentales, las cuales tras un periodo de 49 das presentaron una remocin

del 80 % mostrando esta similitud en el proceso donde solo actuaron

microorganismos autctonos.

En el 2006 el trabajo de Rivera y colaboradores Fitorremediacin de suelos

con benzo(a)pireno mediante microorganismos autctonos y pasto alemn

Echinochloa polystachya (H.B.K.) Hitch, se realiz un experimento en

invernadero para tratar un suelo contaminado con (100 mg / kg de benzo(a)pireno

y cuatro diferentes tipos de inculos. A los 60 das las bacterias, hongos y el

consorcio bacterias-hongos presentaron las poblaciones mximas. La

biodegradacin del BaP a los 120 das fue significativamente mayor en suelo

rizosfrico inoculado con la asociacin bacterias-hongos, y fue determinada por

expectrofotometra Uv/visible a 381 nm y observndose que esta degradacin

removi hasta el 66.5 % del BaP.

De los Santos y colaboradores en el ao 2005 con el trabajo denominado

Aislamiento, identificacin y cintica de microorganismos degradadores de

hidrocarburos del petrleo, nativos de un suelo minero, aislaron cepas

capaces de utilizar diesel comercial como nica fuente de carbono, y de acuerdo

al mtodo sugerido por Cowan y Steel en 1982 de suelo minero contaminado con

68
hidrocarburos del petrleo. Se determinaron cinticas de crecimiento y

degradacin de hidrocarburos a nivel matraz (0.1L) y fermentador (6 L), utilizando

una solucin mineral y como fuente de carbono C16H34 al 1 %. Los principales

microorganismos encontrados durante el aislamiento, utilizando como nica fuente

de carbono el diesel, fueron una bacteria perteneciente al gnero Flavobacterium,

y un hongo del gnero Aspergillus. Las pruebas de caracterizacin cintica a nivel

matraz realizada a los microorganismos antes mencionados nos muestran que en

el caso de Flavobacterium, ste fue capaz de degradar un 60% de C16H34 en un

periodo de 39 horas y en el de Aspergillus, el C16H34 fue degrado a un 40% a los

13 das, adems demostraron que los microorganismos aislados e identificados

son capaces de crecer en simbiosis utilizando como fuente de carbono diesel

comercial, logrando un porcentaje cercano al 90 %. Reafirmndose as que

Flavobacterium y Aspergillus, son capaces de degradar hidrocarburos del petrleo

eficientemente en periodos de tiempo relativamente cortos.

Hernndez-Acosta y colaboradores 2003, con el trabajo Bacterias y hongos

hidrocarbonoclastas de rizsfera frijol y maz, en un suelo contaminado con

petrleo estudiaron la interaccin de bacterias y hongos hidrocarbonoclastas

(HCTs). Colectaron muestras de suelos rizosfricos de la leguminosa

Chamaecrista nictitans y del pasto Panicum sp., las cuales crecan en presencia

de petrleo crudo en suelos de Minatitln, Veracruz. A partir de suelos rizosfricos

de las plantas mencionadas, se prepararon diluciones y se realizaron siembras en

69
cajas de Petri, como fuente de carbono en los medios de cultivo se agreg 2 mL

de petrleo, como resultado de estos aislamientos de bacterias, tres se

clasificaron como Pseudomona sp. y dos como Agrobacterium sp. en lo referente

a los aislamientos de hongos, dos se identificaron como Trichoderma sp., uno

como Aspergillus sp. y el ltimo como Mucor sp. Se sembraron semillas de frijol

var. negro INIFAP y una colecta de maz criollo (MV06) y se aplicaron 5 mL de

inculo de bacterias HCTs con una carga de 5.0 x 1010 UFC mL-1 y 5 mL de

inculo de hongos HCTs con una carga de 4.0 x 108 UFC mL-1, despus el suelo

se reg con agua destilada estril. Gracias a estos tratamientos se descubri que

la rizsfera de maz permiti mayores tasas de degradacin en comparacin con

la rizsfera de frijol.

Hernndez A., E. Ferrera-Cerrato; R. Rodrguez. tambin en el 2003 con su

estudio Bacterias de vida libre fijadoras de nitrgeno atmosfrico en

rizsfera de frijol contaminada con queroseno, evaluaron la influencia del

queroseno sobre la capacidad de fijar N atmosfrico por BFNA y BFNA

hidrocarbonoclastas (HCs) establecidas en Phaseolus vulgaris L. Se consideraron

dos factores: presencia de planta (con y sin planta) y cuatro concentraciones de

queroseno (0, 500, 2,500 y 5,000 mg kg-1). En invernadero, se estableci un

diseo experimental completamente al azar que consisti de ocho tratamientos

con seis repeticiones. Se analizaron muestras de raz (para evaluar poblaciones

del rizoplano) y muestras de suelo (para evaluar poblaciones de rizsfera y suelo

sin planta) 19, 47 y 83 das despus del trasplante. Se estim la actividad de

70
reduccin de acetileno en BFNA-HCs para conocer su potencial en la fijacin de N

atmosfrico. La presencia del queroseno no afect drsticamente las poblaciones

de BFNA y BFNA-HCs; al evaluar la fijacin de N atmosfrico, se encontr que las

bacterias podan llevar a cabo esta funcin. Las mayores poblaciones fueron: para

BFNA (410 x 104 UFC g-1 raz) en el rizoplano en la concentracin 2500 mg kg-1

de queroseno y para BFNA-HCs (299 x 104 UFC g-1 suelo) en la rizsfera, en la

concentracin 500 mg kg-1 de queroseno.

Se aislaron 21 cepas de BFNA-HCs de las cuales 29 % mostr actividad de la

enzima nitrogenasa. Estos resultados muestran que las BFNA-HCs pueden ser

una opcin para biorremediar suelos contaminados por queroseno y que su

aplicacin inducir la incorporacin de N en los suelos afectados. En relacin con

lo anterior, Perez-Vargas y col. (2000) estudiaron la capacidad de las BFNA en la

utilizacin de queroseno como nica fuente de carbono y encontraron que stas

lograban reducir hasta en 75 % el total de los hidrocarburos del queroseno.

Supieron que este grupo de bacterias fijaba de 4 a 183 nmol N2 3E09-1 bacteria-1

d-1 (nanomoles de N atmosfrico fijado por un exponencial de bacterias 1 x 109

por da). Algunos reportes indican que las BFNA de vida libre se encuentran

ampliamente distribuidas en muchos ecosistemas de suelo (Knowles y Barriquio,

1999). Aos atrs (Bossert y Bartha, 1984) reportaron que los suelos

crnicamente contaminados con petrleo crudo son capaces de sostener

abundantes poblaciones de bacterias fijadoras de N atmosfrico de vida libre.

71
El suelo utilizado present las siguientes caractersticas fsicas y qumicas: pH,

8.3; conductividad elctrica, 0.18 dS m-1; materia orgnica, 0.41 %; N total,

0.04%; P Olsen, 16 mg kg-1; K intercambiable, 0.55 meq/100 g suelo; y textura

franco-arcilloso-arenosa. Se utilizaron macetas de plstico con capacidad de 4 kg

de suelo, las cuales no se perforaron para evitar la prdida del queroseno en el

momento del riego. El suelo no se esteriliz para asegurar la presencia de los

microorganismos que se encuentran de manera natural.

En el 2000, Margesin R. y Schinner F. con el trabajo Biorremediacion

(Atenuacion Natural y Bioestimulacion) de suelos contaminados por diesel

en un rea de esqu en los glaciares Alpinos, se utilizaron lismetros de campo

(mesocosmos) con pruebas sin fertilizacin y fertilizado (N-P-K). Durante tres

temporadas (Julio 1997- Septiembre 1999), se supervis los cambios en las

concentraciones de hidrocarburos en el suelo y los lixiviados as como los cambios

en los recuentos microbianos y su actividad, para lograr una reduccin significativa

en el nivel de aceite diesel. Al final de la tercera estacin de verano (despus de

780 das), el nivel inicial de contaminacin (2612 6 mg de hidrocarburos /g [peso

seco] de suelo) se redujo en 50 % y 70 % en el suelo no fertilizado y fertilizado,

respectivamente. Sin embargo, los niveles residuales de contaminacin (1296 y

774 mg de hidrocarburos /g [peso seco] de suelo en terreno no fertilizado y

fertilizado, respectivamente siguieron siendo elevadas.

72
La mayor parte de la prdida de hidrocarburos se produjo durante la primera

temporada de verano (42 % de prdida) en el terreno abonado y durante la

segunda temporada de verano (41 % de prdida) en el suelo sin fertilizar. En el

suelo fertilizado, todos los parmetros biolgicos (el nmero de microbios, la

respiracin del suelo y actividades lipasa y catalasa) fueron significativamente

mayores existiendo una correlacin significativa entre s, as como con la

concentracin de hidrocarburo residual, sealando la importancia de la

biodegradacin. El efecto de la bioestimulacin de los microorganismos

autctonos del suelo disminuy con el tiempo.

En el estudio titulado Biorremediacin de hidrocarburos de petrleo en suelo

contaminado mediante compostaje en biopilas hecho por Jrgensen K. S., J.

Puustinen1, A.-M. Suortti en 1998 se llev a cabo el compostaje de suelo

contaminado con aceite lubricante a una escala de 5 y 40 m 3 con astillas de

corteza de rbol como el agente de carga, dos inculos microbianos comerciales y

nutrientes aadidos (N, P, K) para las pruebas.

El compostaje de suelo contaminado con aceite diesel tambin se realiz en un

nivel de adicin de nutrientes y sin inculo. La tasa de degradacin del aceite

mineral fue ms rpida durante los primeros meses siguiendo una tpica curva

degradacin de primer orden. Durante 5 meses, el compostaje del aceite mineral

disminuy en todos las pilas con aceite de lubricacin de 2400 a 700 mg (kg peso

seco), que era aproximadamente el 70 % del contenido de aceite mineral. En

consecuencia, el contenido de aceite mineral en la pila con diesel de petrleo se

73
redujo en el suelo contaminado al 71 % de 700 a 200 mg (kg peso seco). En este

tipo de tratamiento con adicin de una gran cantidad de materia orgnica, la

actividad microbiana general, medida por la respiracin del suelo mejor.

Los nutrientes se aadieron como fertilizante seco rico en nitrgeno (Typpirikas,

Finlandia). El producto contena 26 % de N, 3 % de P, 3 % de K, 1,5 % S, 0,5 %

Mg, B 0,03 % y 0,0006 % de Se. Los compuestos de nitrgeno constaban de NH4-

N (54 %) y NO3-N (46 %). En las cuatro pilas de lubricacin del suelo

contaminadas de aceite, la adicin era aproximadamente 1 kg de fertilizante por

metro cbico de composta. En la pila de control no se han aadido nutrientes. En

una de las pilas (pila 5) la dosis era inicialmente dos veces mayor que en las otras

pilas. Adems, la mitad de la dosis original se aplic a la pila 5 despus de los 60

y 95 das. Los nutrientes se aadieron manualmente en la parte superior de las

pilas antes de la mezcla.

Para el compostaje de aceite lubricante fueron utilizados dos inculos comerciales.

Uno de ellos era un polvo seco que consiste en un cultivo mixto de bacterias

degradantes de petrleo, el nombre comercial PRC 107 DTX' (Interbio Inc.,

EE.UU., distribuido en Finlandia por Biocora Oy) y el otro, Oilbac' (Ecolution Oy,

Helsinki, Finlandia). Los inculos se aadieron manualmente en la parte superior

de las pilas justo antes de la primera mezcla.

74
Biorremediacion de suelos contaminados con hidrocarburos utilizando

bacterias antrticas sicrotolerantes trabajo elaborado por Lucas y

colaboradores muestran ensayos a campo en donde se evalu la eficiencia de la

bioestimulacin y la biomagnificacin sobre suelos antrticos contaminados en

forma aguda y crnica con hidrocarburos. En los sistemas con biomagnificacin,

se utilizaron como inculo, cepas y consorcios bacterianos sicrotolerantes aislados

de suelos con historia de contaminacin con Gas Oil. Se utilizaron las siguientes

cepas: ADH (Rhodococcus sp.), DM1-41 (Stenotrophomonas maltophilia), MP2-4

(Stenotrophomonas sp.), M10dp (Pseudomonas sp.) y los consorcios bacterianos

M10 y J13. Todas las cepas y consorcios tienen capacidad para utilizar distintos

hidrocarburos (alifticos y aromticos) como nica fuente de carbono y energa

(Bej y col. 2000; Mac Cormack, 1999; Margesin y Schinner 1997).

Se realizaron ensayos en diferentes escalas: microcosmos (Duarte da Cunha y

Ferreyra, 2000) de 0.25 kg en frascos, microcosmos de 3 kg en bandejas y

parcelas de 50 kg de suelo, todos expuestos a las condiciones ambientales

antrticas. Los suelos crnicamente contaminados se obtuvieron de las reas de

manejo de combustible de las bases Jubany y Marambio hoy base Carlini.

En todos los ensayos se observ que las condiciones climticas antrticas

producen una importante eliminacin abitica de los contaminantes que oscil

entre el 40 % y el 60 % de la carga inicial. Los ensayos en frascos mostraron que,

cuando el suelo prstino fue sometido a una contaminacin aguda con gasoil

75
existi una significativa respuesta de la microflora autctona (35 % de remocin

comparado con el control abitico). Sin embargo la presencia de un inculo

externo produjo una significativa reduccin en la concentracin final de los

contaminantes (81,1 % de remocin). Ensayos en bandejas utilizando suelo

contaminado con un hidrocarburo aromtico policclico (fenantreno) mostraron

resultados similares.

Cuando se analizaron suelos crnicamente contaminados en sistemas de

bandejas, la flora autctona fue muy efectiva en la remocin de hidrocarburos al

ser bioestimulada con N y P (81 % de remocin en 45 das). El sistema inoculado

con un consorcio bacteriano aislado del mismo suelo a biorremediar (M10) mostr

una remocin del 86 %, mientras que un consorcio aislado de un suelo distinto

(J13) mostr una baja eficiencia, similar a la mostrada por la flora autctona sin

bioestimular (62 %).

El estudio llamado Presencia de Azotobacter en la rizsfera de plantas

crecidas en suelos contaminados con hidrocarburos de Garca-Esquivel y

colaboradores se realiz con dos suelos rizosfricos. Los suelos se incubaron con

medio lquido durante 192 horas para promover el crecimiento de bacterias

fijadoras de nitrgeno, observando el crecimiento en todos los cultivos de dos o

tres tipos de colonias diferentes, todas Gram negativas y aerobias obligadas. En

los suelos con planta una de las colonias aisladas fueron mucoides, redondas, de

bordes lisos y de color beige, colonias caractersticas de bacterias pertenecientes

76
al gnero Azotobacter. Estas colonias se denominaron: 11KMO, 2-4MO, 3-1MO y

4-1MO, estos resultados reafirman la presencia de bacterias del gnero

Azotobacter en la rizsfera de plantas crecidas en suelos contaminados con

hidrocarburos. Adems se determin que estas cepas tienen la capacidad de fijar

nitrgeno atmosfrico utilizando una fuente de carbono convencional como es la

sacarosa y por otro lado el queroseno como nica fuente de carbono. Se trabaj

con un suelo sin plantas, tres suelos rizosfricos de pasto Alemn y un suelo

rizsferico de una planta de frijol que se incubaron con medio lquido de Rennie

(Rennie, 1981) en las siguientes condiciones: 150 r.p.m., y 28 C durante 7 das

para promover el crecimiento de bacterias fijadoras de nitrgeno. El aislamiento y

purificacin de bacterias se llev a cabo en cajas con medio de Rennie por la

tcnica de estra cruzada, incubndolas a 28 C durante 5 das, para la

determinacin del crecimiento en presencia de queroseno, se realizaron ensayos

en matraces Erlenmeyer, con medio de Rennie modificado, adicionando el

Queroseno en una concentracin final del 1 %, como resultados se obtuvo que la

remocin de queroseno por todas las cepas esta alrededor del 50 % y una prdida

del 12 % por factores abiticos. La menor remocin la present la cepa 2-4MO y la

mejor remocin la cepa 11KMO con un 64 % de remocin de queroseno.

77
Cuadro 3. Estudio de la efectividad de las tcnicas remediativas expuestas en los casos de estudio y aplicacin.

% t de
Aplicacin Tcnica org/planta H removido Localizac. Suelo Muestra Efectiva S/N
Remocin remocin
300 ml de
Planta Azolla
Fenantreno 60 solucin Similar
caroliniana c/ Bacillus
Fitorrem. Bioaumentacin mg/ l al 96 % Tabasco -- 80 % 49 d nutritiva con/sin
stearothermophillus y
pureza Yoshida + inoculacin
Oscillatoria sp.
60 mg
35 %
microflora
Gasoil Si C/ inculo
Biomagnificacin Bases de Muestra 20 autctona 45 d 0.25 kg
Fenantreno externo
Rhodococcus, Jubany / cm prof. 81 %
(contaminacin
Stenotrophomona y Marambio Suelo c/ inculo
aguda)
Pseudomonas prstino externo
Biorrem.
81 % flora
Si c/ f.
Bioestimulacin con autctona
Contaminacin autctona y
NyP 62% flora 3 kg
crnica bioestim.
autctona sin
estimulacin
Textura 5 ml de
Frijol + maz +
Migajn inculo de
Pseudomonas, 28 das testigo
arenosa pH 317.28 mg/kg bacterias +
Agrobacterium, Suelo de
Inculo en rizfera 7.8 pobre en 5 ml de
Fitorrem. Radiobacter, HTP Minatitln Frijol + maz +
de maz y frijol M.O, N, rico inculo de
Trichoderma, Veracruz bacterias
en P, I.C. 256.08mg/kg hongos +
Aspergillus, Mucor. 48 das
9.15 700 g de
Maz mayor
meq/100g suelo
5510 y 9760 90 das 3
1437 m de
mg/kg Si, cantidades
BIOIL FC bacterias A-5 Punta tierra
Bioaumentacin menores a
Biorrem. enriquecido con la cepa HTP Majagua divididos
con BIOIL 75% NOM y
CBM-225 (Cuba) en 4
COPET.
parcelas
3000 mg/kg 120 das
t de
Aplicacin Tcnica org/planta H removido Localizac. Suelo % Remocin Muestra Efectiva S/N
remocin
Aspergillus niger / P. 20 aos 78.5 % con 16 g de Si en
Bioaumentacin
glabiom / HTP 65 000 mg/kg contaminado tratamiento suelo, 4 g bioestimul.
Biorrem. tcnica estril y no Tabasco 25 das
suelo tipo Gleysol de bioaumen. bagazo de esteril, si no
estril.
mlico. caa, 1 ml se esteriliza

78
 Cladosporium Cladosporiod de esporas cae a 62.3 %
cladosporioides es y moos removido
nativos.
Fitorrem. pH 6.6, 0.1 %
Fertilizacin N, 25 g/g P 250 g suelo
orgnica e Phaseolus coccineus Frijol Olsen, 2.1 % + sol. Si, juntas
inorgnica para con hongos y bacterias Combustleo colorado, M.O. textura 90 das Mineral + ambas
estimulacin Planta en rizfera. Veracruz franca y 50 vermi- fertilizaciones
y moos. 000 mg /kg composta
hidrocarburo
Biorrem. Flavobacter
39 h
60% Matraz de Si en
Pruebas de Flavobacterium sp. Aspergillus 100 ml y consorcio, o
Diesel Suelo minero 13 dias
biodegradacin Aspergillus sp. 40% fermentad solo
Consorcio ores de 6 l Flavobacter
200 h
90%
Fitorrem. pH 8.3, 0.41
Bibliografa:
% M.O. 16 Si disminuy
Bact. vida libre fij. De N 75 % hubo
Sin esterilizar / mg /kg de P 4 kg de queroseno y
en rizfera de frijol mayor
estril, con planta Queroseno olsen textura 19-83 dias suelo + aumento
Phaseolus vulgaris degradacin
/sin planta franco plantas morg en
Frijol var. Michoacn microbiana
arcillo- rizfera
25000mg/kg
arenosa
Simbologa:
org: microorganismo

H removido: hidrocarburo removido.

t de remocin: tiempo de remocin.

Efectiva S/N: tcnica efectiva s o no.

NOM: Norma Oficial Mexicana

HTP: Hidrocarburos Totales del Petrleo

OILBAC: Marca registrada de consorcio bacteriano.

79
 % t de
Aplicacin Tcnica org/planta H removido Localizac. Suelo Muestra Efectiva S/N
Remocin remocin
Pruebas Azotobacter en pasto Queroseno , Tabasco Gleysol 64.5 % 5 das Suelo + Si
biodegradativas alemn y frijol var. petrleo mlico con medio
Tuxpeo 28715 mg/kg Rennie
de mod.
hidrocarburo Queroseno
Fitorremediacin

al 1% a 28
C
Inoculacin de Gleysol histi- 450 g suelo
suelo sdico c/ estril,
Trichoderma sp y
c/ bacteria- hongo 323 000 0.045 g
Paecilomycus sp en Si con
en pasto alemn mg/kg pH BaP para
pasto alemn consorcio
BENZO (A) PIRENO Tabasco 5.1, 28.3% 66.5 % BaP 120 DIAS alcanzar
(Echinochloa bacteria
M.O. 18.7% [100
polystachya (H.B.K.) hongo
arcilla y text. mg/kg ] 2
HITCH
Franco ml de
limosa inculo
Mezcla Aumenta al
Bagazo de caa,
Tamao de cambisol, par del
bacterias y hongos HTP 30 % 20 DIAS 16000 ppm
Biorremediacin

partcula lluvisol, tamao de

auctoctonos
vertisol partcula
Arena y
Eisgrarferner
Atenuacin natural Autctonas diesel grava 50 % 780 dias 2612 mc /g Si
glaciar
carbonosa
Arena y
Eisgrarferner
Bioestimulacin Autctonas diesel grava 70 % 780 dias 2612 mc/g Si
glaciar
carbonosa
Composteo x
OILBAC 33 % No
Biorremediacim

biopilas con inoculo

Composteo x
PRC 107 DTX Lubricante 47 % Si
biopilas con inoculo 3
Helsinki 145 das 80 m
Composteo x
33 % No
biopilas sin inoculo
Composteo x
Autctonas diesel 28 % No
biopilas con inoculo

80
TAXONOMA DE ALGUNOS DE LOS MICROORGANISMOS PROPUESTOS EN
LOS CASOS DE ESTUDIO CON BUENOS RESULTADOS EN LA REMOCIN
DE HIDROCARBUROS.

Bacillus stearothermophilus Oscillatoria

Reino Bacteria Reino Bacteria

Clase Bacilli Divisin Cyanobacteria
Orden Bacillales Clase Chroobacteria
Familia Bacillaceae Orden Oscillatorales
Gnero Bacillus Familia Oscillatoraceae
Especie stearothermophilus Gnero Oscillatoria
Catalogado por Donk, 1920

Rhodococcus Stenotrophomona

Reino Bacteria Reino Bacteria

Divisin Actinobacteria
Clase Actinobacteria
Orden Actinomycetales
Familia Nocardiaceae
Gnero Rhodococcus.
Catalogado por Zopf, 1891
Divisin Proteobacteria
Clase Gammaproteobacteria
Orden Xanthomonadales
Familia Xanthomonadaceae
Gnero Stenotrophomonas
Catalogado por Palleroni
y Bradbury 1993

Pseudomonas Agrobacterium

Reino Bacteria Reino Bacteria

Divisin Proteobacteria
Clase Gammaproteobacteria
Orden Pseudomonadales
Familia Pseudomonadaceae
Gnero Pseudomonas
Catalogado por Mugula, 1894
Divisin Proteobacteria
Clase Proteobacterias alfa
Orden Rhizobiales
Familia Rhizobiaceae
Gnero Rhizobium
Catalogado por H.J. Conn

81
Trichoderma Mucor

Reino Fungi Reino Fungi

Divisin Ascomycota Divisin Zygomycota
Clase Sordariomycetes Clase Zygomycetes
Orden Hipocreales Orden Mucorales
Familia Hypocreaceae Familia Mucoraceae
Gnero Trichoderma Gnero Mucor
Catalogado por Rifai, 1969 Catalogado por
G.W.Fresen

Aspergillus Penicillum

Reino Fungi Reino Fungi

Divisin Ascomycota Divisin Ascomycota
Clase Eurotiomycetes Clase Plectomycetes
Orden Eurotiales Orden Eurotiales
Familia Trichocomaceae Familia Eurotiaceae
Gnero Aspergillus Gnero Penicillium
Catalogado por Micheli, 1729 Catalogado por Link, 1809

Aspergillus niger Azotobacter

Reino Fungi Reino Bacteria

Divisin Ascomycota Divisin Proteobacteria
Clase Eurotiomycetes Clase Gammaproteobacteria
Orden Eurotiales Orden Pseudomonadales
Familia Trichocomaceae Familia Pseudomonadadeae
Gnero Aspergillus Gnero Azotobacter
Catalogado por Micheli, 1729

Cladosporium cladosporioides

Reino Fungi
Divisin Ascomycota
Clase Dothideomycetes
Orden Capnodiales
Familia mycosphaerellaceae
Gnero Cladosporium
Catalogado por Fresen 1952

82
 CAPTULO V

CONSIDERACIONES FINALES

El manejo inadecuado en las actividades de explotacin petroleras ha causado a

nivel mundial efectos ambientales dainos en el suelo al ocurrir un derrame. Para

ello se han empleado medidas correctivas que tienen como fin disminuir los

efectos colaterales de estos accidentes y alcanzar un nivel de toxicidad mnimo

para los seres vivos en contacto con dicho sitio impactado. La efectividad de una

tecnologa de remediacin est determinada por una variedad de factores que

interactan de manera compleja por lo que hay que considerar las propiedades del

contaminante, el suelo, los procesos qumicos y fsicos, as como los procesos

biolgicos que definen la actuacin de los microorganismos y plantas incluidos en

dichas tcnicas correctivas, adems es importante conocer el clima del lugar

donde est el sitio contaminado ya que la temperatura y precipitacin son de los

factores que tambin promueven o decrecen la eficiencia de las aplicaciones

remediativas.

Las tcnicas biorremediativas y de fitorremediacin, al principio se mostraron

controvertidas ya que no se tenan los conocimientos adecuados en sus

aplicaciones, no se conocan al principio de su aplicacin si eran costosas ni de

los tratamientos antes o despus que pudieran aumentar la efectividad. Las

primeras prcticas de biorremediacin se hicieron en Estados Unidos por las

compaas petroleras que para deshacerse de los lodos de perforacin los

83
depositaban en capas delgadas sobre el suelo, observndose al cabo de un

tiempo que estos eran descompuestos y el suelo presentaba una notoria

descontaminacin, es as como el uso de la bio-labranza marc los primeros

estudios sobre el manejo de contaminacin de suelos por biorremediacin.

Es importante sealar las implicaciones de las diferentes tcnicas remediativas, si

hablamos de una biorremediacin in situ o ex situ, la primera difiere de la segunda

ya que requiere de una caractertizacin minuciosa del lugar a descontaminar, ya

que se realiza en el sitio, es necesario conocer desde las propiedades del suelo,

como de la hidrologa del terreno y esto implica la intervencin de personal ms

capacitado. Este tipo de biorremediacin in situ, es muy til en zonas donde exista

una contaminacin profunda, incluye una modificacin de las condiciones del sitio

aunque puede resultar difcil en suelos arcillosos y donde el contaminante sea un

hidrocarburo con alta viscosidad. En cambio la biorremediacin ex situ puede

resultar un poco ms costosa que la primera, ya que se requiere de llevar a un

sitio especial el material a descontaminar aunque esto mejora el control de las

condiciones del tratamiento y es til para tratar contaminacin con diversos

materiales ya que se utiliza en contaminaciones superficiales.

84
La alta viscosidad y la baja solubilidad de algunos hidrocarburos como los

poliaromticos (HAPs) comprometen la eficacia de las tcnicas biorremediativas

ya que son difciles de remover, este mismo comportamiento tienen los metales

pesados que no son biodegradables y los hidrocarburos ligeros que por su bajo

peso molecular presentan propiedades de solvente, de manera que daan las

membranas celulares de las bacterias e impiden su desarrollo, por lo que la

biorremediacin o fitorremediacin en estos casos puede emplearse como pre-

tratamiento, seguido de otro mtodo de descontaminacin.

Tanto la biorremediacin como la fitorremediacin usan bacterias que usan a los

hidrocarburos como sustratos para obtener su energa, donde bacterias

autctonas del sitio y consorcios bacterianos comerciales son los ms empleados.

Usar bacterias nativas aisladas del mismo sitio a descontaminar puede resultar

ms beneficioso ya que tiene un cierto nivel de adaptacin a las condiciones y

puede resultar hasta ms barato, adems que el uso de un consorcio bacteriano

comercial tendra que llevar a cabo un estudio minucioso de la eficiencia de la

degradacin as como de las especificaciones de crecimiento para poder ser

aplicadas correctamente y as se efecte de manera correcta la medida correctiva.

Para aumentar la eficacia de la remediacin se ha implementado el uso de

acondicionadores como arena y cascaras para apoyar los procesos

degradativos, tambin el uso de aditamentos como soporte para evitar sucesos

85
que interrumpan o modifiquen las tcnicas, por ejemplo si se lleva a cabo una

biorremediacin por biopilas en un sitio donde las condiciones climticas son

lluviosas.

El potencial de las tcnicas de biorremediacin y fitorremediacin se demuestra en

los casos de estudio revisados en el presente trabajo donde se revela que, los

tratamientos usando consorcios microbianos (hongos bacterias) alcanzan

porcentajes de remocin que van del 30 al 90 % y teniendo como agentes

contaminantes variedades de hidrocarburos como queroseno, combustleo,

diesel, fenantreno y benzo (a) pireno.

En los ensayos de fitorremediacin se ha demostrado la obtencin de estos

valores de remocin (30 al 90 %) al usar consorcios microbianos inoculados en

las rizosferas de plantas como helechos, frijol, pastos, maz junto con

estimulaciones como fertilizaciones orgnicas e inorgnicas o bioproductos.

Las tecnologas de remediacin son variadas ya que cada una puede aplicarse

para un caso en especial de contaminacin sin embargo no hay que descartar que

si se presenta un sitio con caractersticas difciles se puede usar un tren de

tratamiento que consiste en la aplicacin de una combinacin de tcnicas

remediativas con el fin de asegurar la efectividad de la descontaminacin.

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