Spectrofotometria de absorbtie moleculara UV-VIS

CLASIFICAREA METODELOR SPECTRALE

1. Metode ale spectrometriei atomice (AES/OES)

a. Spectrometria atomica de emisie cu excitare in arc sau scanteie electrica, torta
b. Spectrometria atomica de emisie cu excitare in flacara (Flamfotometria)
c. Spectrometria atomica de emisie cu excitare in plasma cuplata inductiv. (ICP)
d. Spectrometria atomica de absorbtie in UV-VIS (SAA) (AAS/OAS)
e. Spectrometria atomica de florescenta (AFS)
f. Chemiluminiscenta
2. Metode ale spectrometriei moleculare
a. Spectrometria moleculara de absorbtie in UV-VIS
b. Spectrometria moleculara de absorbtie in IR
3. Metode ale spectrometriei electronice
4. Metode ale spectrometriei Rontgen (XRS)
5. Metode spectroelectrochimice
6. Metode de analiza suprafetelor. Microscopia electronica: TEM; SEM
7. Spectrometria de masa
8. Spectrometria de rezonanta magnetica nucleara (RMN)

Spectrofotometria este o ramur a spectroscopiei care se ocup cu msurarea

cantitativ a proprietilor de reflexie sau de transmisie ale unui material (substan) n funcie
de lungimea de und.
Termenul de spectrofotometrie este specific msurtorilor n care este utilizat
radiaia electromagnetic din spectrul infrarou (IR), vizibil (VIS) i ultraviolet (UV), ea fcnd
astfel parte din spectroscopia electromagnetic.

Principiu general
Unele substante (nemetale, metale, compusi ai acestora, substante organice) au
proprietatea de a forma cu reactivi specifici, n anumite conditii, compusi solubili colorati.
Intensitatea de culoare a compusului format, numit compus colorimetrabil, este direct
proportionala cu concentraia sa n anumite limite ale acesteia.
Metoda spectrofotometrica molecular se bazeaza pe determinarea (masurarea,
citirea) la un aparat numit spectrofotometru a absorbantei unei solutii colorate de o
concentratie anume, la o lungime de unda specifica, n domeniul ultraviolet (UV) sau vizibil
(VIS).
Orice determinare spectrofotometrica se caracterizeaza prin urmatoarele aspecte:
reactivul de culoare utilizat, adica reactivul care determina formarea unui compus
colorimetrabil prin reacie cu specia pe care dorim sa o determinam;
lungimea de unda la care se face determinarea, specifica pentru fiecare compus si
nominalizata n metoda;
1
 dimensiunea cuvei aparatului care se utilizeaza (drumul optic; de cele mai multe ori
este 1 cm).
n practic, metoda se bazeaz pe proprietatea de absorbie sau de transmisie a
compuilor chimici la diverse lungimi de und. Astfel, spectrofotometria este folosit att ca
metod calitativ pentru identificarea prezenei unei substane ntr-o soluie, ct i
cantitativ pentru identificarea concentraiei unei substane dintr-o soluie.
De asemenea, metoda poate fi utilizat pentru determinarea constantei de echilibru a
unei soluii. ntr-o reacie chimic, echilibrul chimic este starea n care ambii reactani i
produi sunt prezeni n concentraii care nu mai manifest tendina de modificare n timp. De
obicei, aceast stare se atinge cnd reacia direct are loc cu aceeai rat ca i reacia invers.
Ratele de conversie a reaciei directe i a celei inverse sunt diferite de zero dar, fiind egale, nu
exist modificri nete ale concentraiilor reactantului i produsului. Acest proces se numete
echilibru dinamic. Din punct de vedere spectrofotometric, determinarea concentraiilor
reactanilor i produilor ntr-o astfel de situaie, presupune msurarea luminii transmise de
ctre soluie.
Orice compus chimic absoarbe, transmite sau reflect lumin (radiaie
electromagnetic) n cadrul unui interval de lungimi de und. Aparatele destinate acestor
msurtori se numesc spectrofotometre.
Una dintre primele metode instrumentale aprute i utilizate frecvent n practica
laboratoarelor de analize chimice din zilele noastre este metoda bazat pe absorbia luminii
din domeniul vizibil (domeniu notat n literatura internaionala VIS). Se cunosc mai multe
variante importante pentru aceast metod: colorimetria, fotometria i spectrofotometria.
Colorimetria, una dintre tehnicile extrem de mult utilizate n practica analitic,
reprezint varianta n care intensitatea culorii probei se compar vizual sau instrumental, n
lumin alb, cu un set de soluii etalon - preparate n condiii absolut identice cu proba.
Aceasta este o metod subiectiv i mai puin selectiv, pentru c rezultatele depind
mult de persoana care execut analiza. Se remarc faptul c sensibilitatea maxim a ochiului
omenesc atinge maximul pentru domeniul 550-560nm (domeniul culorii verzi), lucru
important cnd compararea probei cu etalonul se face vizual. n aceast tehnic se pot realiza
msurtori, prin comparaie vizual, chiar n eprubet la lumina zilei, rezultnd analize chimice
cu exactiti mai slabe dect 1%. Cu ct exist mai multe soluii etalon, pentru comparaie, cu
att metoda este mai exact. Exist, dup cum am amintit i metode colorimetrice
instrumentale, obiective, dar acestea sunt tot mai puin folosite. n schimb se folosesc aparate
ieftine care utilizeaz metode colorimetrice bazate pe reacii executate pe hrtie de filtru, pe
substane aflate n stare adsorbit pe suporturi granulare - n cazul gazelor - i chiar pe reacii
de culoare n soluii.
Fotometria i spectrofotometria msoar instrumental lumina transmis de o soluie
colorat lucrnd cu o surs de lumin monocromatic. Cnd lumina incident este filtrat, prin
filtre optice, avnd un spectru mai larg, avem de a face cu o fotometrie iar cnd domeniul
filtrat este mai ngust (utiliznd monocromatoare) vorbim de spectrofotometrie. n ultima
variant, este posibil fixarea mai precis a lungimii de und la care se lucreaz. Cu ambele

2
variante se poate chiar trasa un spectru de absorbie, adic o curb, obinut prin msurarea
semnalului n funcie de lungimea de und a radiaiei incidente. n literatura de specialitate
uneori se folosete pentru ambele metode i denumirea de metod colorimetric (sau chiar
spectrocolorimetric), ceea ce uneori poate crea confuzii. n domeniul UV, ochiul omenesc
nepercepnd lumina, se utilizeaz doar spectrofotometria. ntruct principiile sunt identice iar
aparatele sunt n multe privine similare n cele dou domenii, n ultimul timp, n afar de
aparatele dedicate domeniului VIS sau a celor pentru UV, de multe ori se utilizeaz un singur
instrument pentru ambele intervale de lungimi de und, ceea ce a dus la denumirea din titlu.
Spectrofotometrul este un instrument capabil s msoare cu precizie cantitatea de
fotoni (intensitatea luminii) absorbit de trecerea lor printr-o prob (soluie). Astfel, se poate
determina indirect i cantitatea de substan (concentraia). n funcie de spectrul lungimilor
de und pe care le emite sursa de lumin, spectrofotometria are dou variante: UV/VIS
utilizeaz lungimi de und cuprinse ntre 185 400 nm (UV) i 400 750 nm (VIS). IR
utilizeaz lungimi de und cuprinse ntre 750 nm 1000 m.
Construcia instrumentelor are n general dou variante anume spectrofotometrele
monocanal, cu un singur drum optic i cele comparative, prevzute cu dou canale. n
spectrometrele comparative printr-o singur msurtoare, proba etalon cu cea de analizat se
compar utiliznd dou radiaii care-i au originea n aceeai surs (coerente).

Fig.1. Principalele parti componete ale unui spectrofotometru de absorbtie UV-VIS

1. Sursa
emite semnalul (radiatia)
semnalul emis trebuie sa fie o radiatie continua n domeniul ales;
semnalul trebuie sa fie constant
2. Monocromatorul
- are ca scop: separarea radiatiei policromatice ntr-una monocromatica
- este un dispozitiv de tip optic (prisme).

3. Cuvele pentru proba

Cuvele pentru proba trebuie sa satisfaca doua conditii principale:
materiale transparente n domeniul lungimii de unda utilizate;
grosimea trebuie sa fie reproductibila, constanta, cunoscuta, masurabila.
3
 ultraviolet - cuve din cuar ( 200 nm 400 nm)
vizibil cuve din sticla moale sau Pyrex ( 300 nm 2,5m)
Pentru domeniul ultraviolet cuvele sunt confectionate din cuart n timp ce pentru
domeniul vizibil sunt confectionate din cuart, sticla sau plastic.
n timp ce cuartul este transparent pe ntreg intervalul de lungimi de unda (UV si VIS),
sticla obisnuita si plasticul sunt ,,opace pentru radiatiile cu lungimi de unda mai mici de 350
nm. Ele pot fi folosite numai pentru domeniul vizibil al spectrului.
Deoarece cuvele din cuart sunt mai fragile si mult mai scumpe dect cele din sticla sau
plastic, trebuie manipulate cu mai multa atentie.
Cuvele din plastic pot fi utilizate numai pentru solventii care nu le dizolva sau
opacizeaza. Cuvele standard, utilizate n UV VIS, sunt paralelipipedice cu latura bazei de 1
cm si naltimea de 3 cm. Fetele prin care trece fascicolul luminos sunt slefuite. Celelalte doua
fete sunt neslefuite, n scopul facilitarii pozitionarii cuvelor. La manipularea cuvelor trebuie
evitata atingerea suprafetelor slefuite.
De obicei, cuvele sunt achizitionate n perechi, pentru a putea fi asigurata o identitate
perfecta n ceea ce priveste tipul de material, marimea etc.

4. Detectorii
fotomultiplicatoare, emulsii fotografice, termocuple, celule fotoconductive,
celule pneumatice si celule fotoelectrice n functie de domeniul spectrului.
n domeniul UV vizibil - fotocelule, celule fotomultiplicatoare, filme fotografice.
Un detector de radiaii absoarbe energia fotonilor recepionai i o transform ntr-o
cantitate msurabil, ca de exemplu nnegrirea unei plci fotografice sau un curent electric.
Orice detector trebuie s genereze un semnal care s poat fi corelat cantitativ cu intensitatea
radiaiei recepionate.
Zgomotul de fond al unui detector se refer la rspunsul detectorului, nregistrat chiar
n absena unei radiaii recepionate i la fluctuaiile aleatoare ale rspunsului detectorului.
Cerinele cele mai importante pentru un detector sunt:
1) sensibilitate mare i un zgomot de fond ct mai mic,
2) timp scurt de rspuns,
3) stabilitatea rspunsului n timp,
4) dependen liniar ntre rspunsul detectorului i intensitatea radiaiei recepionate. Este
preferat rspunsul electric al detectorului, care este mai uor de amplificat.

Detectori utilizai n domeniul UV i vizibil

n domeniul ultraviolet i vizibil, drept detectori de radiaii se pot utiliza detectori
fotoelectrici, detectori fotografici i, n domeniul vizibil, ochiul omenesc.
n aparatele moderne nu se mai utilizeaz ochiul omenesc drept detector de radiaii.
Detectorii fotografici nu sunt utilizai n spectrometria de absorbie, ei i gsesc utilizri n
spectrometria de emisie i vor fi prezentai la acel capitol.

Detectori fotoelectrici
Fotonii radiaiilor din domeniul ultraviolet i vizibil au o energie suficient pentru a
determina o emisie de electroni (efect fotoelectric) atunci cnd ei lovesc o suprafa tratat
cu anumii compui specifici. Absorbia acestui tip de fotoni poate determina de asemenea
4
pentru anumii semiconductori, deplasarea electronilor legai, neconductivi, n benzi
conductive. Ambele procese genereaz sau permit trecerea unui curent electric care este
funcie de intensitatea radiaiei absorbite.
Detectorii care funcioneaz pe baza acestor principii se numesc detector fotoelectrici.
Acetia sunt de urmtoarele tipuri: celule fotovoltaice, celule fotoemisive, celule
fotoconductive (fotodiode) i tuburi fotomultiplicatoare. Celulele fotovoltaice sunt cele mai
simple, la iluminare ele genereaz un curent electric care poate aciona direct, fr
amplificare, un instrument de msur. Rspunsul lor nu este prea stabil i timpul de rspuns
este destul de lung.
Celulele fotoemisive constau dintr-un tub de sticl vidat n care se gsesc un anod i un
catod fotoemisiv pe care cade radiaia a crei intensitate o msurm. ntre cei doi electrozi se
aplic o diferen de potenial. Electronii smuli din catod prin efect fotoelectric determin
trecerea curentului prin celul, la iluminarea acesteia.
Un tub multiplicator, prezentat n fig. 1.20, const dintr-un catod fotoemisiv i o
succesiune de electrozi (dinode) care prezint capacitatea emisiei secundare de electroni.
ntre electrozii adiaceni se aplic o diferen de potenial de ordinul 75-100 V. Radiaia
incident smulge fotoelectroni din catod. Electronii smuli sunt focalizai de cmpul
electrostatic i sunt accelerai spre primul electrod acoperit cu un compus (BeO, CsSb) care
permite emisia mai multor electroni pentru fiecare electron incident. Procesul se repet
pentru ceilali electroni. Electronii rezultai sunt colectai apoi de anod.
Tuburile fotomultiplicatoare prezint marele avantaj c permit o amplificare a
semnalului de ordinul 106, chiar n interiorul lor, amplificare ce poate fi reglat pe baza
diferenei de potenial dintre electrozi.
Celulele fotoconductive sunt de fapt semiconductori (germaniu dopat cu aur, telurur
de plumb, sulfur de plumb). Prin absorbia unor radiaii cu lungimi de und adecvate,
electronii semiconductorului sunt trecui n benzi conductive. Rezistena electric a celulei va
scdea, iar sub influena unei diferene de potential va avea loc o cretere accentuat a
curentului ce trece prin celul.
Tabel 1. Componentele unui spectrofotometru de absorbie n vizibil i n ultraviolet

Se poate remarca faptul c detectorii sunt identici iar cuva de cuar permite lucrul n
ambele domenii. Doar sursele difer. Prin nglobarea ambelor surse - lampa cu deuteriu i cea
cu wolfram - n acelai instrument, funcionnd consecutiv, s-a reuit realizarea
spectrofotometrelor UV-VIS.
Spectrofotometria UV/VIS este utilizat cel mai frecvent n chimia analitic pentru
determinarea cantitativ:
1) A soluiilor ce conin cationi ai metalelor tranziionale, majoritatea fiind colorate
(absorb radiaii electromagnetice din spectrul vizibil) datorit electronilor de pe orbitalii de tip
d care pot fi uor excitai fiind astfel determinai s execut tranziii cuantice. Culoarea
soluiilor ce conin astfel de cationi poate fi ns afectat de prezena unor anioni sau liganzi.

5
De ex. soluia de CuSO4 de culoare albastr deschis poate fi intensificat cu ajutorul
amoniacului care poate s schimbe maximul de absorbie.
2) A compuilor organici, n special aceia care manifest un nalt grad de conjugare
(sisteme cu orbitali p n care alterneaz legturi simple cu cele multiple i care, n general, scad
energia total a moleculei, crescndu-i astfel stabilitatea). De ex. ADN, ARN i proteinele
absorb radiaia electromagnetic mai ales din spectrul UV i foarte rar din cel vizibil. Pentru
aceste determinri, ca solvent, se folosete de cele mai multe ori etanolul pentru c absoarbe
mult mai puin dect apa.
Principiul spectrofotometriei UV/VIS se bazeaz pe legea Lambert-Beer. Aceast lege
prevede c: cantitatea de lumin absorbit de o soluie este expresia unei funcii exponeniale
a concentraiei i a lungimii de und n raport cu acea soluie.
Aceast lege reprezint legea de baz folosit n analizele sau determinrile
spectrofotometrice. S considerm o radiaie incident monocromatic, Io, care cade pe o
celul coninnd proba. Celula are lungimea l iar concentraia substanei ce absoarbe lumina,
c. Conform schiei din fig. 2, intensitatea final, I1, este mai mic dect cea iniial, Io n urma
absorbiei luminii, la trecerea prin celul.
Transmitanta T Absorbanta A
T = I1/I0 A = -ln(T)

Fig.2. Absorbtia luminii in cazul legii Lambrt-Beer

Dac lungimea l provoac o reducere cu un anumit procent a intensitii iniiale, Io, de
exemplu cu 50%, un nou strat de lungime l, egal cu primul, va aciona, conform legii Lamber-
Beer, n acelai mod, adic va diminua tot la jumtate noua radiaie incident. Se observ pe
diagrama din fig. 3 c graficul punctelor corespunztoare dimensiunilor celulei 1l, 2l, 3l, se
distribuie pe o curb exponenial. diagrama din fig. 3 c graficul punctelor corespunztoare
dimensiunilor celulei 1l, 2l, 3l, se distribuie pe o curb exponenial.
Aceast curb poate fi scris algebric ca o funcie:
I1 = I0e-kl

unde k este o constant. Ecuaia precedent reprezint una din formele legii lui
Lambert - Beer. Prin convenie, se numete transmitan fracia transmis, I a intensitii,
raportat la I0, prin cuva cu soluie, T, adic:
T = I1/I0

6
 Fig.3. Forma exponentiala a legii Lambert-Beer
iar legea Lambert - Beer mai poate fi scris i:
ln(I1/I0) = -kl
sau schimband semnul:
ln(I0/I1) = kl
Convenim de asemenea s numim absorban, notat A, logaritmul natural, cu semn
schimbat al transmitanei:
A = -ln(T)
Introducnd absorbana A, n ecuaia precedent, legea Lambert-Beer mai poate fi scris:
A = kl (6)
unde A este absorbana, k - coeficientul de absorbie iar l - lungimea parcurs de
lumin prin mediul colorat sau lungimea celulei.
Coeficientul de absorbie, k, s-a gsit c este proporional cu concentraia substanei
care absoarbe lumina, c adic k = const.c. n funcie de diversele moduri de exprimare ale
concentraiei, constanta k are valori diferite. n cazul exprimrii concentraiei n molL-1,
aceast constant se numete coeficient molar de extincie (sau de absorban), simbolizat
. n consecin forma cea mai utilizat dar i cea mai simpl a legii Lambert - Beer este:
A = lc
Din examinarea ecuaiei precedente se poate observa c dac l=1cm i C=1molL-1,
atunci avem: = A. Aadar, coeficientul molar de extincie reprezint absorbana unei soluii
de concentraie 1 mol/l dac lungimea celulei cu prob este 1 cm. Legea este riguros
respectat doar pentru o radiaie monocromatic. Deci, cu ct filtrul optic este mai ngust, ca
domeniu spectral, cu att liniaritatea dreptei se respect pe un domeniu mai larg de
concentraii. Dar un filtru cu domeniu spectral ngust las s treac puin lumin i
performanele metodei sunt condiionate i de performanele detectorului.
Domeniul de concentraii al metodei, pentru care se respect liniaritatea funciei
A=f(C), de fapt al valabilitii legii Lambert-Beer, din nefericire nu este prea larg.
n general, peste nivele de concentraie de 10-2 molL-1 curba de etalonare i modific
panta (de regul aceasta scade). De aceea, metoda este adecvat mai ales pentru soluii
diluate i nu este o metod potrivit pentru analize de componente majore (adic substane
aflate n concentraii de peste 10%) din orice fel de probe.
7
 Spectre de absorbie

Spectrele de absorbie reprezint dependena semnalului de lungimea de und, .

Exist mai multe variante de prezentare dar cea mai utilizat este varianta reprezentrii
absorbanei n funcie de lungimea de und: A = f(). Celelalte variante, mai puin utilizate -
numite toate spectre de absorbie - sunt T = f(), log A = f(), = f() sau log = f().
Ultimele dou servesc n special pentru caracterizarea speciilor moleculare ntruct nu
mai depind de condiiile experimentale n care se fac determinrile acestor spectre.
Fiecare substan are un spectru de absorbie caracteristic, ca form general, ca
domeniu spectral, ca numr de maxime (denumite picuri) precum i ca raporturi ntre
intensitile diverselor picuri. Caracteristicile unui spectru sunt redate pe fig. 4. Poziia picului
este caracterizat de valoarea sa maxim, max . Se numete maxim de absorbie att vrful
ca atare ct i lungimea de und care corespunde maximului. Pot exista unul sau mai multe
maxime de absorbie. Numrul de maxime precum i forma general a curbei, reprezint
caracteristica calitativ dup care se pot identifica substanele.

Fig.4. Caracteristicile maximului de absorbie

nlimea curbei i suprafaa ncadrat de curb reprezint caracteristici cantitative

care servesc la determinarea concentraiei substanelor din probe. Pentru a se nelege modul
de utilizare, pe fig.5. se gsesc reprezentate spectrele de absorbie pentru mai multe
concentraii (C1, C2, ... , C5) ale aceleiai substane n soluie, Co(NO3)2. Pentru lungimea de
und max = 610nm, valorile absorbanei s-au notat A1, A2, ..., A5. Acestea au fost
reprezentate n coordonate A, c i n conformitate cu legea Lambert-Beer, toate se nscriu pe
o dreapt.
Aceasta este curba de etalonare i servete la analiza cantitativ. Nu ntotdeauna
punctele se situeaz toate, n mod riguros, pe o dreapt deoarece intervin erori experimentale
i din acelai motiv, n practic, dreapta nu trece exact prin origine.

8
 Fig.5. Utilizarea Legii Lamber-Beer n practica analitic. n dreapta - curba de
absorbie la diferite concentraii ale soluiei apoase de Co(NO3)2. n stnga - curba de
etalonare avnd un maxim de absorbie la lungimea de und, max = 610 nm

Selectivitatea unui maxim de absorbie este dat de limea picului la baz (sau benzii
spectrale), notat X pe fig. 4, deoarece cu ct picurile sunt mai nguste se pot mai bine deosebi
dou substane cu spectre avnd aspecte apropiate. Tot pentru a se evita suprapunerile, n
cazul existenei mai multor maxime de absorbie, se prefer lucrul la maximele de absorbie
cu lungimile de und cele mai mari.
Calibrarea metodei pentru o anumit substan implic dou etape distincte:
1. Se determin maximul de absorbie al substanei respective fcnd un scanning a
lungimilor de und n concordan cu culoarea acesteia. Dac substana este incolor, se
identific o reacie de culoare specific acesteia i se analizeaz produsul colorat.
2. Se determin relaia dintre concentraia substanei luat n analiz (sau a produsului
rezultat dac e vorba de o reacie de culoare) i absorbie. Aceast determinare se face la
lungimea de und ce corespunde maximului de absorbie determinat la etapa 1.
OBSERVAII
Identificarea lungimii de und ce manifest absorbie maxim trebuie realizat pe o
prob a crei concentraie nu determin la aceast lungime de und o absorbie mai mare de
1. Valorile convenabile pentru absorbie sunt situate ntre 0,1 i 1. Peste aceast valoare
efectul de umbrire al particulelor poate modifica corectitudinea rezultatelor. Aceast situaie
implic concentraii prea mari n care particulele componente ale soluiei, fiind prea
apropiate, se pot afla una n spatele celeilalte i nu contribuie la absorbie. De aceea, pentru
o substan oarecare, identificarea acestei concentraii se face prin ncercri.

Pregatirea probelor

Concentratiile solutiilor pot fi estimate facind apel la legea lui Lambert-Beer. Tinind
cont ca l=1cm rezulta A= c. Deoarece, de obicei, A=2 pentru majoritatea spectrometrelor
UV-VIZ este necesara alegerea concentratiei de lucru in asa fel incit maximele de absorbtie sa
ramina in scala aparatului. Concentratia probei depinde de valorile . Acestea pot varia in
limite destul de largi (intre 100-10000).

9
 Solventii utilizati trebuie sa fie ,,transparenti in domeniul investigat. In domeniul
vizibil poate fi utilizat orice solvent incolor. In domeniul ultraviolet, utilizarea solventilor este
conditionata de transparenta.
Solventii cei mai utilizati pentru domeniul UV sunt compusi ce contin legaturi .
Solventii utilizati trebuie sa fie de puritate avansata. Regiunea UV este foarte sensibila
si prezenta unor impuritati cu valori _ mari poate afecta semnificativ spectrul.
Solventul afecteaza, de asemenea, lungimea de unda la care apar maximele de
absorbtie. Acest aspect este determinat de faptul ca multe tranzitii electronice conduc la
aparitia unor stari excitate care sunt mai polare decit starea fundamentala. In aceste conditii
solventii polari stabilizeaza starea excitata intr-o masura mai mare decit solventii nepolari. In
consecinta, diferentele de energie intre starea fundamentala si cea excitanta vor fi mici la
utilizarea solventilor polari decit la utilizarea celor nepolari.

Analiza chimic cantitativ

Analiza chimic cantitativ n spectrofotometria de absorbie se bazeaz pe legea

Lambert-Beer. Se utilizeaz o curb de calibrare (etalonare): A = f(C), trasat pentru probe de
concentraii cunoscute, n aceleai condiii cu cele de analizat, evident lucrndu-se cu aceeai
celul i la o lungime de und ct mai riguros monocromatic. Se alege un domeniu de
concentraii, pe care se pregtesc 5-8 probe cunoscute i, dup trasarea dependenei A = f(C),
grafic (fig 6) sau analitic, se poate trece la analiza cantitativ.
Domeniul pe care curba de etalonare este perfect liniar nu este foarte larg (de cel
mult o decad de concentraii). De aceea metoda nu poate funciona dect strict pe domeniul
pentru care a fost trasat i, cel mai corect, pe poriunea de la jumtatea dreptei. Se fac mai
multe citiri. Cu ct eroarea la determinarea absorbanei este mai mic cu att eroarea de
determinare a concentraiei va fi mai cobort.
Panta curbei este decisiv n mrimea erorii. Dac aceasta este foarte mic, eroarea la
determinarea concentraiei va crete. De aceea, soluiile foarte colorate duc automat la erori,
datorit aplatizrii curbei la concentraii ridicate i ca urmare coninuturile nu pot fi
determinate exact, recurgndu-se la diluri. Dac diluia este prea mare apare o cretere a
erorii tocmai datorit dilurii, mai precis datorit limitelor determinrilor exacte ale
volumelor, lucru ce trebuie avut n vedere. n concluzie, concentraiile soluiilor msurate
trebuie s fie relativ joase.

Fig.6. Analiza cantitativ: pe baza valorii Ax, msurate, se calculeaz valoarea cx

10
 n afar de condiiile de mai sus mai trebuie inut cont de urmtoarele reguli practice,
foarte importante pentru respectarea legii lui Lambert-Beer i totodat pentru obinerea de
rezultate analitice corecte:
soluiile trebuie s fie limpezi (fr suspensii) i s nu fie fluorescente;
n soluiile supuse msurtorilor nu trebuie s se petreac transformri fotochimice
sau reacii cu oxigenul din aer;
substana de analizat nu trebuie s dea asociaii, cu compoziii variabile, cu solventul;
punctele trebuie s se situeze ct mai riguros pe aceeai dreapt i prelungirea
dreptei s treac ct mai aproape punctul de coordonate (0,0);
absorbana msurat pentru proba necunoscut, Ax, trebuie, pe ct posibil, s se
situeze pe poriunea din mijloc a domeniului punctelor de etalonare.
Se mai poate utiliza legea lui Lambert-Beer i pentru determinarea concentraiei a
dou specii diferite, de exemplu M i N, din aceeai soluie. n mod obinuit se utilizeaz dou
lungimi de und diferite, 1 i 2 dar pentru oricare dintre acestea: Atotal = AM + AN.
Cu alte cuvinte msurnd la 1 absorbana amestecului, notat A1 i la 2, absorbana
A2, se obine:
A1 = M1cMl + N1CNl respectiv,
A2 = A2CMl + B2CNl
adic un sistem de dou ecuaii cu dou necunoscute - concentraiile CM i CM. Prin
rezolvarea algebric a sistemului de ecuaii aprut, se pot obine valorile acestora, deci se pot
calcula concentraiile necunoscute.

Analiza chimic calitativ se bazeaz pe compararea spectrelor de absorbie ale

substanelor sau materialelor n domeniul UV-VIS, adic 180-1100nm cu spectre cunoscute.
Acest procedeu permite identificarea unui anumit numr de specii chimice, dar numai pentru
acele substane care absorb n acest domeniu. n chimia organic, de exemplu, absorb n acest
domeniu perechile de electroni de valen angajai n legturi i precum i perechile de
electroni neparticipani. Pentru c n cursul acestor tranziii apar modificri ale polaritii
legturii respective, aceste spectre au primit numele de spectre cu transfer de sarcin. Fiecare
tranziie are asociat o lungime de und caracteristic (unde va aprea un maxim) i un
coeficient molar de absorbie, , corespunztor. Acestea se datoreaz unor salturi ale
electronilor de valen, adic a electronilor situai pe straturile exterioare ale atomilor angajai
n legturi chimice. n fig. s-au reprezentat schematic acele salturi ale electronilor de valen
care dau spectrele electronice, comparativ cu nivelele implicate n spectrele de rotaie sau de
vibraie. Scara energiilor este logaritmic, diferenele ntre valorile numerice ale tranziiilor
electronice i celelalte tranziii fiind mult mai mari dect cele reprezentate pe figur.
n substanele formate din molecule covalente se cunosc aa-numitele grupri
cromofore sau auxocrome, care sunt grupri de atomi care dau ntregii molecule calitatea de
a absorbi lumina - n cazul de fa, n domeniul UV-VIS. Legat de cele amintite anterior, o
grupare cromofor reprezint locul din molecul unde-i au originea tranziiile electronice. Sa
mai introdus i termenul de cromogen care constituie ansamblul dintr-un schelet molecular
pe care se gsesc grefai mai muli cromofori. Pentru o serie de molecule, toate avnd legate
acelai cromofor, poziia i intensitatea benzilor de absorbie rmn n mare aceleai. Mai

11
mult, dac o molecul conine mai multe grupe cromofore izolate, mai exact separate ntre
ele prin cel puin dou legturi simple, se poate observa suprapunerea efectelor individuale.
Cnd nu este posibil analiza unor specii chimice, direct, din cauza lipsei culorii
acestora, se pot provoca reacii care dau compui colorai, prin apariia unor grupri
cromofore, pe baza crora se pot analiza anumite substane n prezena altora, realizndu-se
astfel, pe cale chimic, o selectivitate metodei.
Dac un anumit compus nu absoarbe n domeniul vizibil, dar n urma unei reacii
chimice, se introduce n molecul o grupare cromofor, n noua substan, aceast grupare va
absorbi lumina, n vizibil sau UV i va putea fi analizat cantitativ. Aceast reacie este o reacie
de culoare. Cnd reacia de culoare este ea nsi una selectiv reacia poate servi i la
identificarea calitativ a compusului incolor.

SPECTROMETRIA DE EMISIE I ABSORBIE

Natura radiaiei electromagnetice. Spectrul electromagnetic.

Radiaia electromagnetic este o form de energie radiant care prezint proprieti

att de und ct i de particul. Dei undele i particulele par s fie incompatibile, natura
radiaiei electromagnetice, ca i comportarea electronilor, nu poate fi explicat dect pe baza
dualitii particul-und.
Proprieti de und. Dup cum se vede din fig. 2, o und electromagnetic are o
component electric i una magnetic. Cele dou componente oscileaz n planuri
perpendiculare unul fa de altul i fa de direcia de propagare a radiaiei.

Fig. 7. O und electromagnetic.

O und electromagnetic este caracterizat de lungimea de und i de frecven.
Lungimea de und este distana dintre dou puncte corespunztoare de pe curb (fig. 2).
Frecvena, , reprezint numrul de uniti de lungimi de und care trec printr-un anumit
punct, n unitatea de timp. Frecvena se exprim n hertzi (Hz), cicli pe secund sau s-1.
Lungimea de und i frecvena sunt raportate la viteza luminii prin relaia:
= c/n
unde c este viteza luminii n vid (2,9976 1010 cm/s) i n este indicele de refracie (raportul
vitezei luminii n vid i al vitezei sale n mediul respectiv). n unele cazuri este mai avantajos
de a folosi numrul de und, , care reprezint numrul de lungimi de und pe 1 cm. Se
exprim n cm-1.
12
 Intensitatea undei electromagnetice, I, reprezint energia care trece prin unitatea de
suprafa n unitatea de timp i este dat de relaia:

Proprieti de particul. Pentru a descrie modul n care interacioneaz radiaia

electromagnetic cu materia, este util de a imagina fasciculul de radiaii ca o succesiune de
fotoni (un tren de fotoni). Energia fiecrui foton este proporional cu frecvena radiaiei i
este dat de relaia:
E = h = hc / n

unde E este energia fotonului n ergi, este frecvena radiaiei electromagnetice n hertzi, h
este constanta lui Planck, 6,624 10-27 ergs i n este indicele de refracie al mediului.

Spectrul electromagnetic

Radiaiile electromagnetice care sunt de interes pentru chimie variaz de la radiaiile

care au energie foarte mare, la undele radio ce au energie foarte mic. Prin spectru
electromagnetic se neleg radiaiile de toate lungimile de und cuprinse n acest interval.
n tabelul 1 se prezint, n funcie de lungimile de und, frecvene i
energie, radiaiile ce constituie spectrul electromagnetic, tipurile de tranziii ce pot avea loc i
metodele de analiz corespunztoare. Diferitele regiuni ale spectrului constituie domeniile
spectrale, pentru fiecare domeniu utilizndu-se un anumit tip de aparat pentru a genera sau
detecta radiaii, de exemplu: infrarou, raze X, vizibil etc. ntre domeniile spectrale nu sunt
limite nete, ci limite difuze, fiind, de fapt, o ntreptrundere a acestora. Fiecrui domeniu
spectral i corespund interacii specifice ale radiaiei cu proba de analizat.

13
 Tabel 2. Domeniile spectrului electromagnetic, tipuri de tranziii ce pot avea loc i metodele
de analiz corespunztoare

Absorbia, emisia i difuzia molecular a radiaiei

La interacia moleculelor cu un fascicul de radiaii pot s aib loc mai multe fenomene
dintre care discutm urmtoarele:
Absorbia radiaiei
n urma absorbiei de energie se poate modifica direcia sau mrimea momentului de
dipol electric al moleculei care interacioneaz. Vor avea loc tranziii ntre stri energetice de
rotaie, vibraie sau electronice, al cror studiu constituie baza spectrometriei moleculare.
Emisia radiaiei
Din strile excitate aprute n urma interaciei moleculelor cu radiaii
electromagnetice, o parte dintre acestea pot reveni la stri cu energie mai mic prin emisie de
energie. Acesta constituie fenomenul de fluorescen i fosforescen.
Difuzia radiaiei i difuzia combinat a radiaiei (efectul Raman)
Prin spectrometrie molecular optic se nelege de obicei spectrometria electronic
i de vibraie i este studiat prin metode ale spectrometriei de emisie i de absorbie n
domeniul UV, vizibil i infrarou (abreviat IR) al spectrului.

14
 n urma absorbiei radiaiei de ctre molecule pot avea loc tranziii nsoite de o
modificare a momentului magnetic al electronilor sau nucleelor, de studiul acestor fenomene
ocupndu-se spectrometria de rezonan magnetic.
Pentru energii mari ale radiaiei absorbite poate s aib loc o ionizare sau o
fragmentare a moleculelor, separarea i identificarea moleculelor ionizate sau a fragmentelor
acestora constituind baza spectrometriei de mas.
n continuare vom discuta absorbia, emisia i difuzia molecular a radiaiilor n
domeniul UV, vizibil i IR al spectrului, principiile spectrometriei de rezonan magnetic i ale
spectrometriei de mas urmnd s fie discutate n capitol separate.
Absorbia radiaiei electromagnetice de ctre molecule este mult mai complex dect
absorbia de ctre atomii individuali. Starea energetic a unei molecule include componente
electronice, de vibraie i rotaie. Toate aceste componente energetice sunt cuantificate.
Diferenele de energie ntre nivelurile electronice moleculare sunt mult mai mari dect
ntre strile de vibraie i diferenele de energie ntre strile de vibraie sunt semnificativ mai
mari dect ntre strile de rotaie. n mod obinuit, la absorbia radiaiei electromagnetice de
ctre molecule, aceasta interacioneaz prin componenta sa electric. Pentru ca radiaia s
poat fi absorbit, ea trebuie s aib energia egal cu diferena ntre dou niveluri energetice
ale moleculei i n plus, tranziia molecular trebuie s fie nsoit de o modificare a poziiei
centrului ei electric, a momentului de dipol. Numai astfel, molecula poate interaciona cu
componenta electric a radiaiei electromagnetice.
Energiile necesare pentru a provoca tranziii ntre stri energetice ale electronilor din
orbitalii moleculari sunt cele mai mari i corespund domeniului vizibil, 400-800 nm i UV 100-
400 nm.

APARATURA UTILIZAT N SPECTROMETRIA DE ABSORBIE N DOMENIILE UV si VIS

Principiile optice i electronice pe baza crora funcioneaz spectrometrele utilizate n
domeniul ultraviolet, vizibil i infrarou sunt, n general, aceleai. Totui, sunt unele diferene
importante n ceea ce privete componentele specific ale acestora i aceasta n funcie de
domeniile spectrale n care sunt utilizate. Frecvent se execut operaia de fotometrare. Prin
fotometrare se nelege determinarea raportului intensitilor a dou radiaii sau o funcie a
acestui raport. Aparatele folosite se numesc fotometre.
n spectrometria de absorbie se msoar raportul dintre intensitatea radiaiei
transmise de prob i a radiaiei incidente. Dac radiaia folosit are o band spectral foarte
ngust, este practice monocromatic, aparatele respective se numesc spectrofotometre sau,
folosind o denumire mai general, spectrometre.
n fig. 8 se prezint schema bloc a unui spectrometru de absorbie. Prile eseniale
sunt: 1) surs stabilizat de radiaii electromagnetice, 2) monocromator, care separ radiaiile
n funcie de lungimea de und, 3) celule transparente care conin proba de analizat i proba
de referin, 4) detector, 5) sistemul de evaluare.
Celula ce conine proba este plasat de obicei dup monocromator pentru
instrumentele care opereaz n domeniul UV i vizibil, pentru a diminua o eventual
descompunere sau fluorescen a probei datorit radiaiilor cu energie mare neseparate din
fasciculul incident. Pentru instrumentele n IR, proba este plasat naintea monocromatorului

15
pentru a permite o mai bun focalizare a radiaiei pe detector i a reduce cantitatea de radiaie
parazit.
n fig. 9 se prezint schematic sursele spectrale, sistemele de separare a radiaiilor,
detectorii de radiaii i materialele pentru celule, ferestre sau lentil utilizate la construcia
spectrometrelor care opereaz n UV, vizibil i IR. Schema bloc a unui spectrometru de emisie
difer de schema unui spectrometru de absorbie prin aceea c lipsete compartimentul ce
conine celula cu proba de analizat i de referin. Proba constituie ea nsi sursa de radiaii,
radiaii care trec prin monocromator, ajung la detector, iar rspunsul detectorului este redat
de sistemul de evaluare.

Fig.8. Schema bloc a unui spectrometru de absorbie.

Fig. 9. Domenii de utilizare ale surselor, sistemelor de separare i detectorilor de radiaii folosii
n spectrometria de absorbie n UV, vizibil i IR. Materiale folosite pentru celule etc.
16
 Surse de radiaii utilizate n spectrometria de absorbie molecular
Aceste surse constau dintr-un material care este excitat la stri cu energie ridicat
printr-o descrcare electric la tensiune mare sau prin nclzire electric.
Prin revenirea materialului la stri cu energie mai mic sau la starea fundamental are loc o
emisie de radiaie electromagnetic. Unele materiale au niveluri energetice att de
numeroase i care sunt att de apropiate unele de altele nct radiaia emis se prezint ca o
radiaie continu ntr-un anumit domeniu de lungimi de und.
Pentru domeniul UV al spectrului, cele mai utilizate surse sunt lmpile de
hidrogen sau deuteriu. Ele sunt lmpi cu descrcare n gaze i emit o radiaie
continu n domeniul 180-350 nm.
Pentru domeniul vizibil i infrarou apropiat se utilizeaz lmpi cu filament de wolfram,
filament care este alimentat de o surs stabilizat de curent continuu. Radiaia continu emis
este n domeniul 350-2500 nm.

Sisteme de separare a radiaiilor n funcie de lungimea de und

Separarea radiaiilor de mai multe lungimi de und ale unei surse n benzi nguste sau
chiar n radiaii monocromatice se poate face utiliznd filtre sau monocromatoare.
Filtrele sunt de absorbie sau interfereniale. Filtrele de absorbie permit selectarea
unei anumite benzi spectrale prin absorbia radiaiilor de alte lungimi de und. Absorbia se
realizeaz de ctre substane colorate fixate n gelatin, sticl, material plastic sau care sunt
sub form de soluie.
Un filtru este caracterizat prin limea efectiv a benzii ce reprezint domeniul de
lungimi de und pentru care transmitana este cel puin jumtate din valoarea maxim.
Filtrele colorate permit transmiterea radiaiilor cu o lime a benzii spectrale efective
cuprins n mod obinuit ntre 20 i 50 nm.
Filtrele interfereniale constau din unul sau mai multe straturi alturate de dielectric
transparent acoperite pe ambele fee cu un film metalic semitransparent i parial reflectant
de obicei argint. Grosimea stratului de dielectric este bine determinat, fiind de , 1 sau 3/2
din lungimea de und a radiaiei transmise; o parte din radiaie va trece prin filtru neafectat,
iar o alt parte va suferi mai nti o reflecie ntre cele dou straturi de film metalic ce acoper
dielectricul. Cele dou radiaii vor interfera constructiv sau distructiv. Va fi transmis numai
radiaia cu lungimea de und ce permite o interferen constructiv.
Lrgimea efectiv a benzii spectrale transmise de filtrele interfereniale este de
ordinul 5-10 nm iar pentru cele cu un numr mare de straturi poate ajunge chiar la fraciuni
de nm.
Monocromatoarele separ radiaiile policromatice n funcie de lungimea de und
permind obinerea unor radiaii cu o band spectral foarte ngust, practice
monocromatic.
Componentele unui monocromator sunt:
1) o fant de intrare prin care ptrunde radiaia monocromatic de la surs,
2) un colimator cu una sau mai multe lentile, sau cu o oglind concav,
3) un sistem de dispersie, prism sau reea de difracie care separ radiaiile n funcie de
lungimea de und,
4) un sistem de focalizare alctuit din una sau mai multe lentile, sau o oglind concav
5) o fant de ieire care izoleaz banda spectral dorit blocnd toate celelalte radiaii.

17
 Banda efectiv a radiaiei ce prsete monocromatorul depinde n principal de
elementul dispersiv utilizat i de lrgimea fantelor att de la intrarea ct i de la ieirea
acestuia. Folosirea unor fante nguste izoleaz benzi spectrale nguste, practic
monocromatice. Dar acestea limiteaz i intensitatea radiaiei ce ajunge la detector, care nu
poate funciona satisfctor dect peste o anumit valoare a energiei primite. Limea minim
a benzii spectrale este deci limitat de sensibilitatea detectorului. Se mresc de obicei limile
fantelor pn la o valoare satisfctoare att din punct de vedere al lrgimii benzii spectrale
ct i a funcionrii n bune condiii a detectorului. Un optim se obine la egalitatea celor dou
fante.
Sistemele de dispersie sunt caracterizate de: dispersia unghiular, dispersia liniar i
puterea de rezoluie. Dispersia unghiular este dat de raportul d/d, d fiind unghiul pe
care l fac ntre ele dou radiaii ce prsesc sistemul de dispersie i d fiind diferena de
lungime de und dintre ele.
Dispersia liniar se definete n planul de focalizare al spectrului fiind data de raportul
dl/d, dl fiind distana ntre dou linii spectrale i d diferena de lungime de und dintre ele.
Puterea de rezoluie este dat de raportul /d, fiind lungimea de und medie a dou linii
spectrale plasate alturat i pentru care se mai obine o imagine distinct i d diferena dintre
lungimile de und ale acestor linii. Drept elemente de dispersie se utilizeaz prisme i reele
de difracie.
Prisme. Dispersia n prism se realizeaz datorit variaiei indicelui de refracie al
radiaiilor n funcie de lungimea de und. Frecvent, indicele de refracie scade cu lungimea
de und, deci unghiul de deviere al radiaiei este mai mare la lungimi de und mai mici. n fig.
10 se prezint modul n care se realizeaz separarea unei radiaii policromatice colimate, cu
ajutorul unor prisme.
Dispersia unghiular a prismei este mai mare pentru lungimile de und apropiate de
benzile sale de absorbie. Dac materialul unei prisme absoarbe radiaii din domeniul UV,
dispersia crete cu scderea lungimii de und. n domeniul IR prismele absorb de obicei radiaii
la lungimi de und mai mari i n mod corespunztor dispersia crete cu lungimea de und.
Utilizarea unei prisme ntr-un montaj de tip Littrow (fig. 10 B) prezint avantajul unui
grad mai mare de dispersie, i n plus, este evitat dubla refracie atunci cnd se folosete un
material anizotropic, cum este cuarul. Oglinda din montajul de tip Littrow poate fi constituit
dintr-un material metalic dispus chiar pe prism (dup cum se vede din fig. 10 B).
Materialele din care sunt realizate prismele depind de domeniul spectral n care
acestea se utilizeaz. Ele trebuie s fie transparente i s aib o dispersie suficient de mare.
Pentru domeniul UV se utilizeaz prisme din cuar sau dioxid de siliciu topit, care sunt
transparente pn la aproximativ 200 nm. Fluoritul (CaF2) este transparent pn la 125 nm
putnd fi utilizat n ultravioletul de vid. Pentru domeniul vizibil i IR apropiat prismele se fac
din sticl de diferite caliti.

Fig. 10. Dispersia unei radiaii policromatice de ctre o prism: A) cu un unghi de 60o; B) de
ctre o prism Littrow.

18
 Reele de difracie. Reelele de difracie pot fi prin transmisie sau prin reflexie. n fig.
11 se prezint drumul parcurs de radiaii n cazul unei reele de difracie prin reflexie.
Suprafaa reelei este puternic reflectorizant i prezint un mare numr de anuri
(zgrieturi) echidistante, n mod obinuit 600-2000 pe mm, n funcie de domeniul spectral n
care se utilizeaz.Radiaiile reflectate de reeaua de difracie sufer un fenomen de
interferen pozitiv sau negativ n funcie de lungimea de und a acestora i de diferena de
drum strbtut. Diferena de drum este dat de diferena BC AD = d(sin i sin ). Totui,
este considerat un unghi negative astfel c diferena de drum este d(sin i + sin ).
Pentru o interferen constructiv a radiaiei reflectate este necesar ca:
n=d( sin i + sin )
unde n este un numr ntreg. O radiaie de o anumit lungime de und care este reflectat de
o reea de difracie pentru un unghi de inciden i, poate suferi o interferen constructiv
pentru mai multe unghiuri , formndu-se astfel spectre de diferite ordine. Cele mai intense
radiaii
Separarea radiaiilor se face prin rotirea reelei de difracie. n faa fantei de ieire a
monocromatorului fiind aduse radiaiile de diferite lungimi de und ce aparin spectrului de
ordinul 1.
Reelele de difracie prezint, spre deosebire de prisme, o dispersie unghiular liniar
pe ntreg domeniul de lungimi de und utilizat, ceea ce constituie un avantaj.

Fig. 10. Drumul parcurs de radiaii pentru o reea de difracie prin reflexie.

Detectorii de radiatii

Un detector de radiaii absoarbe energia fotonilor recepionai i o transform ntr-o

cantitate msurabil, ca de exemplu nnegrirea unei plci fotografice sau u curent electric
Orice detector trebuie s genereze un semnal care s poat fi corela cantitativ cu intensitatea
radiaiei recepionate.
Zgomotul de fond al unui detector se refer la rspunsul detectorului nregistrat chiar
n absena unei radiaii recepionate i la fluctuaiile aleatoare al rspunsului detectorului.
Cerinele cele mai importante pentru un detector sunt: 1) sensibilitate mare un
zgomot de fond ct mai mic, 2) timp scurt de rspuns, 3) stabilitatea rspunsulu n timp, 4)
dependen liniar ntre rspunsul detectorului i intensitatea radiaie recepionate. Este
preferat rspunsul electric al detectorului, care este mai uor de amplificat.
Sisteme de evaluare
19
 Semnalul electric furnizat de un detector poate fi msurat fr amplificare, dar de cele
mai multe ori este necesar o amplificare a acestuia.
Se poate citi direct valoarea semnalului msurat pe scala instrumentului de msur,
sau instrumentul de msur poate aciona numai ca instrument de nul, realizndu-se o
compensare a semnalului dat de detector fie pe cale electric (cu ajutorul unui
poteniometru), fie pe cale optic (cu ajutorul unei pene optice sau a unei diafragme
reglabile); n acest caz, mrimea se msoar n uniti de compensare pe scala
poteniometrului sau a sistemului optic.
n aparatele moderne sistemul de evaluare se bazeaz n mare msur pe utilizarea
calculatoarelor care pot prelua semnalul de la amplificator, l compar cu semnalele
corespunztoare ale unor probe etalon, stocate n memorie, iar apoi ne dau direct datele
analitice.

Sisteme monofascicul i cu dou fascicule utilizate n spectrometria de Absorbie

Dei toate aparatele spectrometrice de absorbie au prile componente prezentate n

fig. 8, totui sunt multe deosebiri ntre ele, depinznd de productor, domeniul spectral
pentru care a fost concepute, rezoluia acestora etc. Fr a intra n detalii, vom discuta n
continuare numai modurile generale de operare ale unui spectrometru de absorbie.

Sisteme monofascicul

Un fascicul de radiaii de la o surs ptrunde n monocromator, unde este dispersat de

prism sau reea. Prin rotirea sistemului de separare a radiaiilor, n faa fantei de ieire a
monocromatorului sunt focalizate radiaii de diferite lungimi de und. n cazul spectrometriei
de absorbie, nainte de a ajunge la detector, radiaiile trec prin proba de analizat. Absorbia
radiaiei de ctre prob se determin fie msurnd intensitatea fasciculului transmis n
prezena i absena probei, fie fa de o prob de referin (de comparaie) care conine de
obicei toi componenii probei cu excepia aceluia a crui absorban o msurm.
In cazul spectrometriei de emisie radiaiile emise de prob sunt separate de
monocromator iar apoi ajung direct la detector unde li se msoar intensitatea.
Avantajele spectrofotometrelor cu un singur canal
pret mic
usurinta de operare
lungimile de unda se pot selecta usor
Dezavantajele spectrofotometrelor cu un singur canal
apar variaii ale intensitatii luminii deci erori la determinarea absorbtiei;
daca fasciculul de lumina nu este strict monocromatic apar abateri de la legea
generala a absorbtiei (legea Bouguer Lambert Beer);
transmisia respectiv absorbanta masurata nu reprezinta valori "adevarate" pentru
ca se obtin doar pentru proba nu pentru solutia ca atare;
modificarile solventului sau ale lungimii de unda cauzeaza variatii n determinari;
nu se pot nregistra spectrele de absorbtie.

20
 Sisteme cu dou fascicule
n instrumentele cu dou fascicule se realizeaz cu ajutorul unui dispozitiv optic o
separare a radiaiilor provenite de la surs n dou fascicule. Un fascicul este trecut prin proba
de referin, iar cellalt prin proba de analizat. Intensitile celor dou fascicule sunt apoi
comparate, fie continuu, fie alternativ, de mai multe ori pe secund. Astfel, n cazul
instrumentelor cu dou fascicule are loc o compensare a fluctuaiilor intensitii sursei, a
rspunsului detectorului i a amplificrii, msurndu-se numai diferena celor dou semnale.
n fig. 11 se prezint schema unui instrument cu dou fascicule ce funcioneaz pe baza
principiului prezentat:

Fig. 11. Schema unui spectrometru cu dou fascicule

Fasciculele de radiaii ce trec prin proba de referin i proba de analizat ajung

alternativ la detector la intervale de timp care depind de frecvena de rotaie a oglinzilor.

21
 Instrumentul nregistreaz raportul celor dou semnale. Dac intensitatea celor dou
fascicule este identic, amplificatorul nu genereaz nici un semnal. Atunci cnd cele dou
intensiti sunt diferite, semnalul amplificat poate aciona un servomotor care pune n micare
un nregistrator poteniometric; acesta este astfel calibrat nct s ne indice transmitana sau
absorbana corespunztoare probei de analizat. Cu ajutorul unui dispozitiv mecanic ce rotete
sistemul de dispersie i totodat deplaseaz banda de hrtie a nregistratorului se poate
obine spectrul de absorbie al probei. Aparatele cu dublu fascicul permit obinerea ntr-un
timp scurt a spectrului de absorbie al probei.
Avantajele spectrofotometrelor cu dublu canal
se efectueaza o corecie pentru modificari ale intensitatii luminii;
viteza mai mare de operare;
compensare automata pentru variaia intensitatii luminii ale celor doua fascicule;
se pot efetua nregistrari ale spectrelor de absorbtie daca se modifica progresiv lungimea
de unda la care se face determinarea;
Dezavantajele spectrofotometrelor cu dublu canal
cost mai mare;
viteza relativ mica de nregistrare a spectrelor de absorbtie.

In ultimii ani s-au realizat progrese foarte mari in construcia de aparatur analitic.
Spectrometrele moderne cu unul sau dou fascicule sunt controlate de un calculator care
uureaza foarte mult operarea acestora, spectrele de absorbie sau valorile msurate fiind
afiate pe monitor.

Corelarea spectrelor electronice de absorbie cu

structura molecular

Spectrele de absorbie molecular n domeniul vizibil i UV se datoresc tranziiei unor

electroni din orbitali moleculari de legtur sau nelegtur aflai n stare fundamental, n
orbitali moleculari de antilegtur care corespund unor stri excitate. Energiile electronilor
din strile moleculare fundamentale i sterile excitate sunt determinate de structura
moleculei. Peste tranziiile electronice se suprapun tranziii ntre stri energetice de vibraie
i rotaie. Din acest motiv, spectrele obinute au maxime de absorbie late.
Poziia benzilor de absorbie electronic este caracteristic unei anumite dispoziii a
electronilor n molecul. Spectrul va fi determinat ns n primul rnd de ntreaga structur a
moleculei i mai puin de prezena unor anumite legturi. Informaiile calitative i structurale
date de un spectru molecular n domeniul vizibil i ultraviolet sunt mult mai reduse dect cele
oferite de un spectru n domeniul IR.
n domeniul spectral cuprins ntre 200 i 800 nm, cele mai obinuite tranziii sunt cele
de la un orbital sau n la orbitali de antilegtur *, notate cu * i n *.
Termenii uzuali folosii la discutarea spectrelor electronice sunt: cromofor, auxocrom;
efecte: batocromic, hipsocromic, hipercromic i hipocromic.
Cromoforii sunt grupri de atomi care absorb radiaii din ultravioletul apropiat, >
200 nm sau din domeniul vizibil, atunci cnd ei sunt legai de un schelet neabsorbant saturat
care nu posed electroni neparticipani (de exemplu un lan de hidrocarbur). Cei mai muli
cromofori au legturi duble sau triple.

22
 Auxocromii sunt grupri de atomi, ca de exemplu -OH, -NH2, -Cl etc., care au electroni
de valen de nelegtur (neparticipani) i care nu absorb radiaii la > 200 nm (prezint ns
absorban intens n UV ndeprtat, prin tranziii n *).
Atunci cnd un auxocrom este ataat la un cromofor, banda de absorbie a
cromoforului se deplaseaz de obicei la lungimi de und mai mari (efect batocromic) i are loc
o intensificare a absorbiei, efect hipercromic (crete valoarea absorbtivitii molare , la
max).
Efectul auxocromic este determinat aparent de interacia electronilor de nelegtur,
electroni liberi de valen, cu norul de electroni delocalizai, ca urmare stabilizndu-se starea
excitat *.
Efectul hipsocromic const n deplasarea benzilor de absorbie la lungimi de und mai
mici, iar efectul hipocromic n micorarea absorbiei radiaiei (micorarea lui , la o anumit
lungime de und).
Benzile de absorbie mai intense corespund unor tranziii cu probabilitate mai mare,
*, iar benzile de intensitate mai mic sunt datorare unor tranziii cu probabilitate mai
redus. Moleculele cu doi sau mai muli cromofori izolai, de acelai tip, separate prin mai
multe legturi simple, vor absorbi radiaia practic la aceeai lungime de und ca i moleculele
cu un singur cromofor. Intensitatea absorbiei va fi ns proporional cu numrul
cromoforilor.
Cnd doi cromofori sunt separai printr-o legtur simpl, apare conjugarea
electronilor, ceea ce duce la o schimbare important a spectrului de absorbie.
n sistemele conjugate, distribuia electronilor este delocalizat pe cel puin patru
atomi ceea ce determin o descretere n energia tranziiilor *. Absorbia radiaiei va
crete datorit unei probabiliti mai mari a tranziiei. Pe msur ce lungimea sistemelor
conjugate crete, benzile de absorbie se deplaseaz la lungimi de und mai mari. De exemplu,
compuii carotenoizi prezeni n plante conin un mare numr de duble legturi alchenice
conjugate. -carotenul (cu o structur asemntoare cu a dou molecule de vitamina A1
cuplate cap la cap) este un carotenoid cu 11 duble legturi conjugate. Maximul su de
absorbie, foarte intens, datorat unei tranziii *, este complet deplasat n domeniul
vizibil, max = 451 nm, max = 13800 L mol-1cm-1 (tranziia * apare pentru etilen la
165 nm).

Fig.12. Tranzitii electronice si spectre UV-VIS pentru molecule

23
 Titrri spectrometrice

Toate titrrile implic transformarea unor specii chimice n altele, de aceea gradul de
avansare al unei titrri poate fi urmrit i prin msurarea absorbanei soluiei n cursul
procesului de titrare. Deoarece ceea ce se urmrete este de fapt variaia absorbanei i nu
valoarea absolut a acesteia, erorile care pot aprea datorit refleciei, refraciei sau difuziei
radiaiei de ctre pereii celulei sau de ctre prob sunt diminuate.
Prin folosirea unei reacii chimice de dozare crete mult specificitatea determinrii,
aceasta deoarece vor interfera, n general, numai acele substane (mai reduse la numr) care
intervin n reacia de dozare i mai puin cele care pot absorbi radiaia.
Se poate efectua o titrare spectrometric cu condiia ca substana care se titreaz,
substana format n timpul titrrii, sau titrantul s prezinte proprieti absorbante
caracteristice. n aceste cazuri, curba de titrare spectrometric (care se obine prin
reprezentarea absorbanei n funcie de volumul de titrant) const din dou segmente de
dreapt, punctul lor de intersecie corespunznd volumului de echivalen.
S considerm o reacie general de titrare:
A+TC
unde A este specia titrat, T titrantul i C compusul format n reacia de titrare..
n fig. 13 se prezint aspectele curbelor de titrare spectrometric ce se pot obine n
funcie de proprietile absorbante ale lui A, T i C.

Fig. 13. Curbe de titrare spectrometric pentru reacia A + T C. (a) absoarbe

numai A; (b) absoarbe numai T; (c) absoarbe numai C; (d) A nu absoarbe dar
absorbtivitatea molar a lui C este mai mare dect a lui T; (e) A nu absoarbe dar
absorbtivitatea molar a lui T este mai mare dect cea a lui C; (f) C nu absoarbe

Pentru a obine corect cele dou segmente de dreapt dintr-o curb de titrare, este
necesar ca legea Lambert-Beer s se respecte. Pentru exactitatea mai mare a determinrilor
se poate face o corecie a absorbanei msurate, innd seama de diluarea probei n cursul
procesului de titrare.

24