PRACTICA DE LABORATORIO N 11

EXTRACCION CASERA DEL ADN

I.- OBJETIVO:

Utilizar unas sencillas tcnicas para poder extraer el ADN del tomate y ajo
Observar la estructura fibrilar del ADN
Establecer la relacin entre el proceso de extraccin y propiedades quimico-fisicas
del ADN

II.- RESULTADOS:

El ADN se forma como una especie de grumo o algodn blanco

Tubo de ensayo (Tomate): la coloracin presenta rojiza, fragmentos de ADN en la

parte Central.

ADN

Tubo de ensayo de (ajos): la coloracin que presenta amarillento

palido, donde tambin podemos apreciar pequeas muestras de ADN.

ADN

III.- DESARROLLO DE LA PRCTICA:

Cortar la muestra vegetal en cuadraditos (tomate y ajo). Triturar la muestra con un

poco de agua destilada en un mortero. As se rompern clulas y otras quedaran
expuestas a la accin del detergente
 Mezclar en un recipiente limpio 5 ml del triturado celular con 10 ml del tampn frio
y agitar vigorosamente durante al menos 3 minutos.

Retirar 5 ml del caldo molecular a un tubo de ensayo y aadir con una pipeta 10
ml de alcohol etanol enfriado a 0C. se debe dejar escurrir lentamente el alcohol
por la cara interna del recipiente, teniendo este inclinado, el alcohol quedara
inclinado flotando sobre el tampn

Se introduce la punta de una varilla estrecha hasta justo debajo de la separacin

entre el alcohol.

Remover la varilla la varilla hacia delante y hacia atrs y poco a poco se irn
enrollando los fragmentos de mayor tamao de ADN. Pasando un minuto retirar la
varilla atravesando la capa del alcohol con lo cual el ADN quedara adherido a su
extremo con el aspecto de un algodn mojado.
IV.- CUESTIONARIO:

1Cules son las propiedades del ADN?

El ADN es un largo polmero formado por unidades repetitivas, los nucletidos. Una doble
cadena de ADN mide de 22 a 26 angstroms (2,2 a 2,6 nanmetros) de ancho, y una
unidad (un nucletido) mide 3,3 (0,33 nm) de largo. Aunque cada unidad individual que
se repite es muy pequea, los polmeros de ADN pueden ser molculas enormes que
contienen millones de nucletidos. Por ejemplo, el cromosoma humano ms largo,
el cromosoma nmero 1, tiene aproximadamente 220 millones de pares de bases.
En los organismos vivos, el ADN no suele existir como una molcula individual, sino como
una pareja de molculas estrechamente asociadas. Las dos cadenas de ADN se enroscan
sobre s mismas formando una especie de escalera de caracol, denominada doble hlice.
El modelo de estructura en doble hlice fue propuesto en 1953 por James
Watson y Francis Crick (el artculo Molecular Structure of Nucleic Acids: A Structure for
Deoxyribose Nucleic Acid fue publicado el 25 de abril de 1953 en Nature), despus de
obtener una imagen de la estructura de doble hlice gracias a la refraccin por rayos X
hecha por Rosalind Franklin. El xito de este modelo radicaba en su consistencia con las
propiedades fsicas y qumicas del ADN. El estudio mostraba, adems, que
la complementariedad de bases poda ser relevante en su replicacin, y tambin la
importancia de la secuencia de bases como portadora de informacin gentica. Cada
unidad que se repite, el nucletido, contiene un segmento de la estructura de soporte
(azcar + fosfato), que mantiene la cadena unida, y una base, que interacciona con la otra
cadena de ADN en la hlice. En general, una base ligada a un azcar se
denomina nuclesido y una base ligada a un azcar y a uno o ms grupos fosfatos recibe
el nombre de nucletido.
Cuando muchos nucletidos se encuentran unidos, como ocurre en el ADN, el polmero
resultante se denomina polinucletido.
Componentes

Timina:
En el cdigo gentico se representa con la letra T. Es un derivado pirimidnico con
un grupo oxo en las posiciones 2 y 4, y un grupo metil en la posicin 5. Forma
el nuclesido timidina (siempre desoxitimidina, ya que solo aparece en el ADN) y
el nucletido timidilato o timidina monofosfato (dTMP). En el ADN, la timina siempre
se empareja con la adenina de la cadena complementaria mediante 2.

Citosina:
En el cdigo gentico se representa con la letra C. Es un derivado pirimidnico, con
un grupo amino en posicin 4 y un grupo oxo en posicin 2. Forma
el nuclesido citidina (desoxicitidina en el ADN) y el nucletido citidilato o
(desoxi)citidina monofosfato (dCMP en el ADN, CMP en el ARN).

Adenina:
En el cdigo gentico se representa con la letra A. Es un derivado de la purina con
un grupo amino en la posicin 6. Forma el nuclesido adenosina (desoxiadenosina
en el ADN) y el nucletido adenilato o (desoxi)adenosina monofosfato (dAMP, AMP).
 Guanina:
En el cdigo gentico se representa con la letra G. Es un derivado prico con un
grupo oxo en la posicin 6 y un grupo amino en la posicin 2. Forma el nucletido
(desoxi)guanina y el nucletido guanilato o (desoxi)guanina monofosfato (dGMP,
GMP).

2.- qu diferencias y semejanzas existen entre el material gentico bacteriano y el

de una clula humana?

GENTICA BACTERIANA:

Se producen por la presin ambiental sobre las bacterias, pero no afecta al genoma.
Son de alta frecuencia. Afectan a toda la poblacin bacteriana sometida a la
modificacin ambiental.
Son reversibles; cuando cesa la causa, retornan al estado primitivo.
No son hereditarias, porque no se modifica el ADN.

Tipos:

Morfolgicas; Bacilos cortos y mviles se convierten en bacilos largos e inmviles

debido al agotamiento de nutrientes).
Cromgenas.
Enzimticas; algunas bacterias producen enzimas en presencia de determinados
sustratos, por ejemplo, penicilinas en presencia de penicilina.
Patognicas; Bacterias que producen toxinas segn el ambiente en el que crecen.
As Corynebacterium slo lo hace si dispone de hierro en el medio..
Sensibilidad a antibiticos; hay bacterias que son sensibles en determinadas
condiciones pero no lo sern en otras.

GENOTIPO BACTERIANO. VARIACIONES GENTICAS

Elementos Genticos Esenciales:

El material gentico bacteriano est formado por ADN, una molcula compuesta por
unidas repetitivas de nucletidos.

Este ADN conforma el genoma bacteriano, pero tambin posee elementos extra
cromosmicos como plsmidos, transpones e integrones.
Las dos funciones del material gentico son replicacin ( duplicar su material gentico
para posterior herencia a su progenie) y expresin ( determina las caractersticas
observables, el fenotipo).
Poseen ARN de transferencia y ribosomas tambin.
CELULA HUMANA

Se define a la clula como la unidad morfolgica y funcional de todo ser vivo. De hecho,
la clula es el elemento de menor tamao que puede considerarse vivo. Como tal posee
una membrana de fosfolpidos con permeabilidad selectiva que mantiene un medio
interno altamente ordenado y diferenciado del medio externo en cuanto a su composicin,
sujeta a control homeosttico, la cual consiste en biomolculas y
algunos metales y electrolitos. La estructura se automantiene activamente mediante
el metabolismo, asegurndose la coordinacin de todos los elementos celulares y su
perpetuacin por replicacin a travs de un genoma codificado por cidos nucleicos. La
parte de la biologa que se ocupa de ella es la citologa.

Caractersticas estructurales

Contienen un medio interno acuoso, el citosol, que forma la mayor parte del volumen
celular y en el que estn inmersos los orgnulos celulares.
Poseen material gentico en forma de ADN, el material hereditario de los genes, que
contiene las instrucciones para el funcionamiento celular, as como ARN, a fin de que
el primero se exprese.17
Tienen enzimas y otras protenas, que sustentan, junto con otras biomolculas,
un metabolismo activo.
Existen dos grandes tipos celulares:

Procariotas que comprenden las clulas de arqueas y bacterias.

Eucariotas, divididas tradicionalmente en animales y vegetales, si bien se incluyen
adems hongos y protistas.

DIFERENCIAS Y SEMEJENZAS

Diferencias: En las clulas humanas el material gentico est organizado en 23 pares de

cromosomas, las bacterias slo poseen uno. El DNA bacteriano es circular, el de los
humanos lineales. El nmero de genes contenidos en el DNA humano es muy grande a
diferencia del bacteriano. Las bacterias pueden adquirir nuevos genes a travs de
plsmidos, los humanos no. El DNA humano sufre pocas mutaciones gracias a las
enzimas de reparacin, el de las bacterias sufre constantes mutaciones ya que carecen
de dichas enzimas.

Semejanzas: Ambos estn constituidos por desoxirribonucletidos (A, T, C, G), las bases
se aparean de la misma forma A-T, C-G. Los aminocidos estn codificados por el mismo
triplete (un triplete es una serie de tres bases que dictan un aminocido especfico, p. ej.
AUG = Metionina).

3.-Qu proceso de extraccin es ms simple?

Extraccin simple: de esta forma se dividen las sustancias acorde al sistema de

extraccin que se utilice. La tcnica se basa en el grado de solubilidad de un compuesto
en un lquido en particular, por ejemplos, si tenemos una sal disuelta en un disolvente
orgnico y agregamos uno acuoso como agua entonces la sal desaparecer del
disolvente orgnico y se disolver en la fase acuosa.
En otro supuesto caso podemos encontrar dos disolventes no miscibles agitamos la
mezcla con una sustancia que tenga la propiedad de poder dividirse entre los dos
lquidos. Despus de haber dejado reposar la sustancia se separarn dos fases lquidas y
as obtenemos concentraciones de soluto que son independientes del volumen de sus
fases

4.- Cul es la fuente de ADN de la sangre?

La sangre es una fuente excelente de ADN. ste est presente en los glbulos blancos (o
leucocitos), pero no en los glbulos rojos humanos (eritrocitos o hemates), pues stos
carecen de ncleo. Una mancha de sangre del tamao de una moneda pequea,
correspondiente a unos 50 microlitros, tiene suficiente ADN para un anlisis tpico de
VNTR.

Semen: el ADN de la cabeza de los espermatozoides es habitualmente la fuente ms

importante de ADN como prueba del delito en casos de ataque sexual. Cinco microlitros
de semen contienen aproximadamente la misma cantidad de ADN que 50 de sangre.
Para liberar el ADN de las cabezas de los espermatozoides se requieren mtodos de
extraccin especiales. En consecuencia, las muestras de ataque sexual se puede extraer
de forma diferencial: la primera extraccin proporciona principalmente el ADN de clulas
epiteliales de la vctima, mientras que la segunda extraccin rinde principalmente ADN
del semen. Ntese la diferencia entre las fracciones "femenina" y "masculina" de la
prueba del delito en el problema 4 del grupo 1 y en los 7 y 8 de este grupo 2.

La saliva contiene material celular. Se puede extraer ADN, para su anlisis, a partir de
marcas de mordisco, colillas de cigarrillo, sellos de correo pegados en el sobre o cierres
engomados de sobre. De hecho, el famoso delincuente estadounidense "Unabomber" fue
acusado en parte con las pruebas del ADN obtenido de una carta-bomba que envi pero
no lleg a explotar.

El folculo capilar de la base del cabello humano contiene material celular rico en ADN.
Para poderlo usar en anlisis de ADN, el cabello debe haber sido arrancado --los cabellos
que caen por rotura no contienen ADN.
Tejidos Cualquier tejido del cuerpo que no se haya degradado es una fuente potencial de
ADN.

El hueso es una de las mejores fuentes de ADN a partir de restos humanos

descompuestos. Incluso cuando la carne se ha descompuesto, a menudo se puede
obtener ADN del hueso desmineralizado.

Los dientes pueden ser tambin una fuente excelente de ADN, mucho despus de que el
resto del cuerpo se haya descompuesto.
Orina: la orina no contiene por s misma ADN, pero puede contener clulas epiteliales,
que s tienen ADN. Sin embargo, la mayora de personas sanas no excretan clulas
epiteliales en su orina.

5.- cul es la funcin de los siguientes compuestos en el proceso de extraccin?

ETANOL:

Propiedad
Tanto el etanol y el isopropanol mezcla bien (son miscibles con) agua, pero tienen
constantes dielctricas menos agua, lo que significa que su capacidad para proteger las
cargas positivas y negativas en la solucin y mantenerlos separados es mucho ms
pobre. La constante dielctrica del agua, por ejemplo, es 78,5, mientras que la constante
de etanol es 24,3. ADN est cargado negativamente, entonces es atrado a los iones
positivos en solucin tal como potasio o sodio. El etanol tiene una menor capacidad de
agua para mantener los iones con carga positiva y la parte de ADN.
Funcin del etanol en el proceso de extraccin
El etanol, limpia el ADN de otras biomolculas por un proceso llamado "precipitacin". En
este proceso, el etanol hace que el ADN se deshidrate, es decir, pierda contacto con las
molculas de agua que lo rodean, y lo asla de la solucin acuosa para dejarlo libre de
impurezas. Adems, con la ayuda de sales de sodio, por ejemplo NaCl, facilitas este
aislamiento de ADN y su separacin por centrifugacin.
 DETERGENTE:
Detergente (5 ml): rompe la membrana plasmtica de la clula, permitiendo as que su
contenido quede sin proteccin. El detergente disuelve los lpidos y las protenas de la
clula; rompe las uniones que mantiene la estructura de la membrana. Cuando el
detergente entra en contacto con la clula, captura los lpidos y las protenas.

CLORURO DE SODIO (Na CL)

Funcin de cloruro de sodio en la extraccin del ADN
El sodio tambin puede estar en forma de acetato de sodio. Como el hidrxido de
sodio, el acetato de sodio se usa para separar el ADN plsmido del ADN
cromosmico, pero por medio de un mecanismo muy diferente y en una parte diferente
del procedimiento de extraccin de ADN.

Las cadenas simples del ADN linear son insolubles en sales altas. Se precipitan y
forman un slido. Aadir acetato de sodio a soluciones de detergentes con SDS forma
slidos de restos celulares as como ADN cromosmico linear. El ADN plsmido
circular no es insoluble en sales altas. El ADN plsmido permanecer en la solucin, y
de esa forma separa el ADN plsmido deseado del resto del ADN en la clula.

El hidrxido de sodio provee la solucin bsica para denaturar y abrir las cadenas de
ADN, tanto el plsmido como el cromosmico. Una vez que el ADN ya no es una
solucin alcalina, slo el ADN plsmido puede volver a cerrarse. Para poder separar el
ADN cromosmico abierto del ADN plsmido cerrado, se usa acetato de sodio para
precipitar selectivamente el ADN cromosomal y alejar otros restos celulares del ADN
plsmido de la doble cadena deseada.

6.- puede observar la doble hlice del ADN extrado?

Cada molcula de ADN est constituida por dos cadenas o bandas formadas por un
elevado nmero de compuestos qumicos llamados nucletidos. Esas cadenas forman
una especie de escalera retorcida que se llama doble hlice. Cada nucletido est
formado por tres unidades: una molcula de azcar llamada desoxirribosa, un grupo
fosfato y uno de cuatro posibles compuestos nitrogenados llamados bases: las
mencionadas a, g, t y c. la molcula de desoxirribosa ocupa el centro del nucletido y
est flanqueada por un grupo fosfato de un lado y una base por el otro. el grupo fosfato
est a su vez unido a la desoxirribosa del nucletido adyacente de la cadena. Estas
subunidades enlazadas desoxirribosa-fosfato forman los lados de la escalera; las bases
estn enfrentadas por parejas, "mirando", por decirlo as, hacia el interior y forman los
travesaos. los nucletidos de cada una de las dos cadenas que forman el ADN
establecen una asociacin especfica con los correspondientes de la otra cadena. Debido
a la afinidad qumica entre las bases, los nucletidos que contienen adenina se acoplan
siempre con los que contienen timina, y los que contienen citosina con los que contienen
guanina. Las bases complementarias se unen entre s por enlaces qumicos dbiles
llamados enlaces de hidrgeno.

V.- CONCLUSIONES:

Al realizar el procedimiento adecuadamente, resulta que las fibrillas de ADN

comenzaron a salir de un color blanco precipitado por sobre el alcohol (mezcla
homognea)

Al agregar etanol a la mezcla se logr que las cadenas de ADN subieran a la

superficie, ya que no es soluble en alcohol. Las molculas de ADN pudieron ser
percibidas, observndose como trozos de algodn en el alcohol.

Cuando se aadi detergente a la mezcla, este se encarg de romper la membrana

plasmtica de la clula y finalmente liberar el ADN.

Al agregar NaCL a la mezcla esta permite que las molculas de ADN se junten y se
observen en forma de grupos como se pudo obtener en esta experiencia

VI.- BIBLIOGRAFIA:

Lpez, A. 1999. Manual de Prcticas: Bioqumica y Biologa Molecular. 1 edicin.

Facultad de Medicina UNAM. Dpto. Bioqumica. Mxico DF. 136pp.

Curtis, H. 1996. Biologa. Sexta edicin. Ed. Mdica Panamericana. Buenos Aires
Argentina. 1167pp.