Princpios bioticos aplicados aos estudos

ecotoxicolgicos aquticos
Josielma dos Santos Silva 1, Iolanda Karoline Barros dos Santos Rocha 2, Lucenilde Carvalho de Freitas 3, Natlia Jovita Pereira 4, Raimunda
Nonata Fortes Carvalho Neta 5

Resumo
A ecotoxicologia aqutica analisa os efeitos adversos dos poluentes qumicos na biota, utilizando-se de ani-
mais nos ensaios laboratoriais. Neste trabalho, objetivou-se analisar a adequao dos ensaios laboratoriais
realizados com organismos aquticos com base nos princpios dos 3R. Foram realizadas revises de 20 arti-
gos sobre ecotoxicologia aqutica, publicados no perodo de 2010 a 2014. A anlise verificou o nmero de
animais utilizados nos ensaios ecotoxicolgicos, aclimatao, aprovao da pesquisa por comit de tica e
uso de anestsicos. Os resultados indicam que os princpios de refinamento e substituio, do programa dos
3R, foram os que mais ocorreram nas pesquisas, porm a maioria delas no citou aprovao dos protocolos
experimentais por um comit de tica nem o uso de anestsicos nos organismos durante os experimentos. As
pesquisas publicadas indicam a necessidade de reduo do nmero de organismos nos bioensaios, bem como
a aplicao dos princpios bioticos na experimentao realizada com organismos aquticos.
Palavras-chave: Ecotoxicologia. Experimentao animal. Biotica. tica-Animais.

Resumen
Principios bioticos aplicados a los estudios ecotoxicolgicos acuticos
La ecotoxicologa acutica analiza los efectos adversos de los contaminantes qumicos en la biota, utilizando
animales en las pruebas de laboratorio. En este trabajo se tuvo como objetivo analizar la adecuacin de las
pruebas de laboratorio realizados con organismos acuticos basadas en los principios de las 3Rs. Se realizaron
revisiones en 20 artculos sobre Ecotoxicologa acutica, publicados en el periodo de 2010 a 2014. Se verific
el nmero de animales utilizados en las pruebas ecotoxicolgicas y en la aclimatacin. La investigacin fue
aprobada por el comit de tica y para la utilizacin de anestsicos. Los resultados indican que los principios
Refinamiento y Sustitucin, del programa de las 3Rs, fueron los ms encontrados en los estudios, pero que la
mayora no cit aprobacin de los protocolos experimentales por un comit de tica, ni para el uso de anes-
tsicos en los organismos durante los experimentos. Las investigaciones publicadas indican la necesidad de
reducir el nmero de organismos en las biopruebas, as como la aplicacin de los principios de la biotica en
la experimentacin realizada con los organismos acuticos.
Palabras-clave: Ecotoxicologa. Experimentacin animal. Biotica. tica-Animales.

Abstract
Bioethical principles applied to aquatic ecotoxicological studies
Aquatic ecotoxicology analyzes the adverse effects of chemical pollutants in the biota. The aim of this study

Artigos de pesquisa
was to analyze the adequacy of the laboratory trials with aquatic organisms, based on the principles of the
3Rs. Twenty articles on aquatic ecotoxicology published from 2010 to 2014 were reviewed. The numbers of
animals utilized in ecotoxicology trials, acclimatization, research approved by the committee on ethics and
utilization of anesthetics were verified. The findings indicate that the principles of refinement and repla-
cement, of the 3Rs program, were the most encountered in the research; while most did not cite approval
of experimental protocols by an ethics committee, nor the use of anesthetics on the organisms during the
experiments. The research published indicates a need to reduce the number of in the bio-trials, and to apply
principles of bioethics in experimentation with aquatic organisms.
Keywords: Ecotoxicology. Animal experimentation. Bioethics. Ethics-Animals.

1. Graduanda josielmasilva@hotmail.com.br 2. Graduanda iolanda.rbarros@gmail.com 3. Graduanda lucenildecf@hotmail.com

4. Graduanda natalia.jovita@hotmail.com 5. Doutora raifortes@gmail.com Universidade Estadual do Maranho, So Lus/MA, Brasil.

Correspondncia
Josielma dos Santos Silva Rua 6, quadra 92, bloco A, casa 3, Cidade Olmpica CEP 65058-501. So Lus/MA, Brasil.

Declaram no haver conflito de interesse.

http://dx.doi.org/10.1590/1983-80422015232079 Rev. biot. (Impr.). 2015; 23 (2): 409-18

409
 Princpios bioticos aplicados aos estudos ecotoxicolgicos aquticos
A ecotoxicologia descreve a relao entre os
poluentes qumicos, o ambiente em que so libe-
rados e os organismos que ali vivem. Estudos mais
aprofundados dessas substncias se fazem neces-
srios, a fim que de seus riscos potenciais possam
ser minimizados e medidas saneadoras possam ser
efetivadas, de modo a atenuar seus provveis im-
pactos 1. Logo, a ecotoxicologia apresenta-se como
ferramenta destinada a analisar a exposio dos
diversos xenobiontes ao meio em que foram inse-
ridos 2 e os efeitos adversos de poluentes exgenos
no ambiente e nos organismos aquticos3.
A avaliao ecotoxicolgica de extrema
importncia no controle, regulamentao e classifi-
cao das substncias txicas quanto a seu potencial
de risco ambiental. A identificao dos efeitos e a
avaliao da relao da dose-resposta so etapas
iniciais no processo de anlise do risco ambiental 4.
Muitos ensaios tambm so realizados com o pro-
psito de avaliar tanto a sensibilidade relativa de
organismos aquticos em relao a determinado
agente txico quanto a eficincia de diferentes m-
todos de tratamento de efluentes industriais5.
A biotica exige a conjuno de vrias discipli-
nas, visando correta utilizao dos conhecimentos
adquiridos pela cincia, bem como valores ticos e
fatos biolgicos. Sua primeira e mais conhecida linha
terica, a biotica principialista norteada pelos
princpios da beneficncia, da no maleficncia, da
autonomia e da justia 6. A beneficncia definida
como a anlise dos benefcios gerados ao indivduo
participante da pesquisa e posteriormente socie-
dade; a no maleficncia caracterizada por evitar
danos decorrentes do andamento do estudo, os
quais poderiam afetar o sujeito da pesquisa; a au-
tonomia definida como o respeito capacidade
de escolha do indivduo; e a justia est relacio-
Artigos de pesquisa
nada a uma distribuio equitativa dos benefcios
pelos seres 7. Em relao aos princpios propostos
pela Declarao Universal sobre Biotica e Direitos
Humanos (DUBDH) 8, benefcio e dano referem-se
maximizao de bens e minimizao de danos
aos indivduos do estudo e outros envolvidos; e
proteo do meio ambiente, da biosfera e da bio-
diversidade, caracterizada pela compreenso da
interdependncia entre seres humanos e outras for-
mas de vida.
Em muitos casos, os princpios da biotica
que incluem, alm da teoria do principialismo e da
DUBDH8, as ideias dos 3R, propostas pelos estudio-
sos Russell e Burch 9 no so observados quando
se trabalha com a maioria dos organismos utiliza-
dos em procedimentos, ou essas informaes no
Rev. biot. (Impr.). 2015; 23 (2): 409-18
410
so citadas nos artigos cientficos publicados. Alm
disso, as discusses bioticas propem diversas
metodologias alternativas, cujo desenvolvimento e
implantao nas instituies que utilizam animais
em trabalhos cientficos so processos complexos e
amplos10.
A utilizao de animais na pesquisa tem sido
razo de diversas discusses bioticas focadas no
nmero elevado de animais e no sofrimento causa-
do a eles. O programa dos 3R reduo (reduction),
refinamento (refinement) e substituio (replace-
ment) objetiva diminuir o nmero de animais,
minimizar sua dor, desconforto e proporcionar al-
ternativas para a substituio dos testes in vivo 10.
E, com base nos princpios dos 3 R, este trabalho
visou analisar a adequao de ensaios laboratoriais
realizados com organismos aquticos, em artigos
publicados entre 2010 e 2014.
A biotica e seus princpios
O termo biotica foi difundido pelo onco-
logista e bilogo norte-americano Van Rensselaer
Potter em seu livro Bioethics: bridge to future 11.
A disciplina foi criada com o objetivo de possibilitar
que as cincias biolgicas se tornassem mantene-
doras da qualidade e melhoria de vida das futuras
geraes 12. Com o avano das tecnologias, cresceu
a utilizao de animais em experimentos cientficos,
tornando necessria a ampliao das discusses ti-
cas acerca dessas pesquisas. Como j mencionado,
o zologo William M. S. Russell, juntamente com
o microbiologista Rex L. Burch, props em 1959 os
princpios dos 3 R, conhecidos como substituio
(replacement), reduo (reduction) e refinamento
(refinement) 13. Tais princpios redirecionaram os
trabalhos cientficos envolvendo pesquisa com ani-
mais para o uso de modelos alternativos, a fim de
reduzir no apenas a utilizao de animais em ex-
perimentos, mas tambm a dor e o sofrimento que
esses ensaios lhes causam14.
Historicamente, a discusso biotica este-
ve mais ligada a contextos mdicos, tanto que,
inicialmente, a formulao dos princpios ticos
norteadores da atividade cientfica se deu mais em
funo de estudos envolvendo seres humanos. Tal
concepo, mais tarde conhecida como teoria prin-
cipialista, moldada a partir de quatro princpios:
no maleficncia, beneficncia, justia e respeito
autonomia 15. A no maleficncia supe no fazer
mal ou evitar danos aos seres vivos; a beneficncia
refere-se realizao do bem e mxima reduo
http://dx.doi.org/10.1590/1983-80422015232079

do mal que se pode causar ao outro, reconhecendo
seus valores morais; a justia tem a equidade como
principal eixo, isto , todos devem ser atendidos da
mesma forma, e o respeito autonomia descrito
como a aceitao da autodeciso perante as si-
tuaes do meio16, entendendo autonomia como a
capacidade de escolha prpria do indivduo7.
Outro marco fundamental, relacionado com
a organizao e o direcionamento das questes
bioticas, foi a Declarao Universal sobre Bioti-
ca e Direitos Humanos, aprovada em outubro de
2005 pela Organizao das Naes Unidas para a
Educao, a Cincia e a Cultura (Unesco) 8. No do
cumento constam alguns princpios, como dignidade
humana e direitos humanos, autonomia e respon-
sabilidade individual, consentimento, privacidade
e confidencialidade, responsabilidade social e sa-
de. Alm disso, cabe ressaltar outro dois preceitos
contemplados na DUBDH, que so de particular
interesse da pesquisa cientfica: benefcio e dano,
referente maximizao de bens e minimizao de
danos aos participantes da pesquisa e a outros envol-
vidos; proteo do meio ambiente, da biosfera e da
biodiversidade, que pressupe a interdependncia
dos sujeitos humanos com as outras formas de vida.
Tais princpios so muito mais aplicados em
estudos vinculados aos seres humanos do que aos
animais das diferentes categorias taxonmicas,
razo pela qual ainda persistem inmeras questes
ticas a serem discutidas, entre as quais se inclui
uma, bastante pertinente a este artigo: ser que
esses princpios da biotica podem ser aplicados a
todos os grupos de organismos?
Os ensaios ecotoxicolgicos aquticos e a
biotica
Com a alta demanda por novos produtos
tecnolgicos e a contnua destruio dos recursos
naturais pelas aes antrpicas, vrios xenobiontes
tm sido incorporados ao meio por via direta ou indi-
reta, em fontes pontuais ou difusas17. Estudos sobre
esses seres podem ser conduzidos diretamente no
ambiente ou por bioensaios em laboratrio (testes
experimentais com metodologias distintas), regula-
dos, inclusive, por normas nacionais e internacionais
quanto utilizao de organismos bioindicadores
em testes desse tipo18. Os organismos aquticos so
usualmente utilizados em testes ecotoxicolgicos
por vrios motivos 19, entre eles os seus proces-
sos fisiolgicos, como nutrio e respirao, j que tido, foram objeto de anlise 20 artigos cientficos
muitos respiram pelas brnquias, que esto em con-
http://dx.doi.org/10.1590/1983-80422015232079
Princpios bioticos aplicados aos estudos ecotoxicolgicos aquticos
tato direto com a gua, o que pode carrear diversos
contaminantes para o interior desses organismos,
causando-lhes alteraes morfofisiolgicas20.
Para a identificao dessas mudanas morfo-
fisiolgicas (biomarcadores) nas espcies aquticas,
necessrio o uso de tcnicas laboratoriais capazes
de avaliar o grau de contaminao de uma rea
por certo poluente 21. Nesses bioensaios, poss-
vel verificar danos aos organismos (que morrem ou
ficam imveis), estimando-se a extenso de seus
impactos no ambiente e nos seres humanos 22. Os
principais organismos utilizados nesses estudos
so os peixes e os macroinvertebrados bentnicos,
como, por exemplo, crustceos do gnero Daphnia,
que so facilmente cultivados in situ e apresentam
caractersticas reprodutivas que satisfazem a finali-
dade desses estudos23. No caso dos peixes, entre as
espcies consideradas padro de referncia interna-
cional est a Danio rerio, principalmente porque o
sequenciamento de seu genoma semelhante aos
demais vertebrados, inclusive os seres humanos24.
Atualmente, a comunidade cientfica tem se
voltado para os aspectos ticos ligados pesquisa
com animais do filo Chordata (subfilo Vertebrata),
para a qual existe legislao brasileira especfica 25.
Existem tambm comits de tica que avaliam estu-
dos realizados com insetos e cefalpodos, mas sua
atuao ainda restrita, j que a legislao atual
prioriza os organismos sencientes, que abrangem os
animais vertebrados, cuja sencincia amplamente
reconhecida no meio cientfico 26; j os organismos
considerados no sencientes, entre os quais se in-
cluem os invertebrados, no recebem a mesma
proteo destinada aos seres sencientes27.
Na maioria das vezes, as pesquisas que
envolvem ensaios ecotoxicolgicos (ou com in-
vertebrados, ou com vertebrados) ocorrem sem
Artigos de pesquisa
aprovao dos comits de tica. Alm disso, muitos
pesquisadores da rea de ecotoxicologia aqutica
ainda mantm pouco contato com a biotica, seja
em sua formao inicial, seja em sua atuao labo-
ratorial. Essa situao necessita ser considerada e
alterada para que possa ter influncia positiva sobre
os resultados das pesquisas que chegam a ser publi-
cadas e que servem de referncia a novos trabalhos
na rea.
Diante do que foi at aqui exposto, objeti-
vou-se, neste trabalho, analisar a adequao dos
ensaios laboratoriais realizados com organismos
aquticos em artigos publicados no perodo de 2010
a 2014, baseado nos princpios dos 3R. Nesse sen-
publicados em 16 peridicos distintos, que abordam
Rev. biot. (Impr.). 2015; 23 (2): 409-18
411
 Princpios bioticos aplicados aos estudos ecotoxicolgicos aquticos

estudos ecotoxicolgicos com animais de diferentes
categorias taxonmicas, visando identificao dos
princpios bioticos aplicados experimentao ani-
mal mais difundidos entre os pesquisadores.
Percurso metodolgico
Este estudo reviso bibliogrfica, cujas infor-
maes foram coletadas em artigos cientficos sobre
os procedimentos realizados em ensaios ecotoxico-
lgicos aquticos produzidos entre os anos de 2010
e 2014. Foram analisados 20 artigos, a partir de bus-
ca definida sistematicamente nas bases de dados
cadastradas pela Coordenao de Aperfeioamen-
to de Pessoal de Nvel Superior (Capes) e Scientific
Electronic Library Online (SciELO), contendo os
seguintes descritores: ecotoxicologia; estudos
ecotoxicolgicos; biotica; tica.
Primeiramente, na organizao dos dados,
realizou-se a leitura dos resumos das 20 publicaes
cientficas selecionadas, a fim de identificar os obje-
tos de estudo dos trabalhos, priorizando os ensaios
ecotoxicolgicos 28,29. Foram observados pelo menos
um dos princpios bioticos em todos os 20 traba
lhos. A tcnica adotada pelas autoras na anlise de
contedo baseou-se na leitura dos trabalhos cien-
tficos escolhidos mediante o exame das principais
informaes, como nmero de animais utilizados nos
ensaios ecotoxicolgicos, fase de desenvolvimento e
aclimatao, origem dos organismos (in situ ou ex
situ) e pesquisa aprovada por comit de tica. Pela
anlise de contedo de cada trabalho, verificou-se a
adequao desses dados aos princpios dos 3R (repla-
cement, reduction e refinement) 13. O refinamento
foi analisado tendo-se como base a aclimatao, a
pesquisa aprovada pelo comit de tica, protoco-
los metodolgicos da ABNT (NBR 12713/2009 30 e
13373/2010 31), a utilizao de anestsicos. A tcnica
de identificao dos princpios bioticos de William
M. S. Russell e Rex L. Burch 9 foi a anlise de conte-
do temtico-categorial, envolvendo as seguintes
etapas: pr-anlise; explorao do material ou co-
dificao; tratamento dos resultados; inferncia e
interpretao. Na organizao dos dados referentes
s produes cientficas, foram utilizados softwares
estatsticos, a fim de obter o grfico e percentuais.
Os 20 trabalhos esto listados no Quadro 1, a seguir.

Quadro 1. Artigos publicados entre os anos de 2010 e 2014 e utilizados na reviso bibliogrfica deste estudo.
N Autores Nome do artigo Revista Ano
Rechenmacher C, Siebel AM, Goldoni
A multibiomarker approach in rats to
A, Klauck CR, Sartori T, Rodrigues MT, Brazilian Journal of
1 assess the impact of pollution on Sinos 2010
Rodrigues MAS, Gehlen G, Ardenghi Biology
River, Southern Brazil
PG, Silva LB28
Perquirere:
Avaliao da frequncia de microncleos
Revista do Ncleo
em eritrcitos perifricos de mandi-
2 Nepomuceno JC, Silva AC32 Interdisciplinar de 2010
amarelo (Pimelodus maculatus) do rio
Pesquisa e Extenso
Paranaba
do Unipam
Avaliao Ecotoxicolgica Utilizando
Bioensaios com Daphnia magna em gua 2010
Artigos de pesquisa

3 Brandolt TD, Lobo E 33

Barbola IF, Moraes MFPG, Anazawa
4 TM, Nascimento EA, Sepka ER,
Polegatto CM, Millo J, Schhli GS34
Morais AV, Cortez FS, Bretas ES,
5 O Mundo da Sade
Cesar E, Pereira CDS, Santos AR35
Mendes BG, Budziak D, Stolberg J,
Peixer ZI, Dalmarco JB, Simionatto
6 EL, Pedrosa RC, Felipe KB, Ogawa J,
Pegoraro C, Scheffer L, Besen MR,
Oliveira LJGG, Geremias R36
Tecno-Lgica
de lavoura de arroz no municpio de
Mostardas, RS, Brasil
Avaliao da comunidade de
macroinvertebrados aquticos como
Iheringia, Srie
ferramenta para o monitoramento de 2011
Zoologia
um reservatrio na bacia do rio Pitangui,
Paran, Brasil
Avaliao da qualidade ambiental do
rio Itaguar, Bertioga-SP, com base
2011
em testes de toxicidade e indicadores
microbiolgicos de balneabilidade
Estudo da qualidade das guas do
Revista de Cincias
rio Marombas (SC/Brasil), utilizando 2011
Ambientais
parmetros fsico-qumicos e bioensaios
Continua

Rev. biot. (Impr.). 2015; 23 (2): 409-18 http://dx.doi.org/10.1590/1983-80422015232079

412

N Autores
Holanda JN, Maciel AP, Santos RL37
7 2012
8 Damato M, Barbieri E38
Mannarino CF, Moreira JC, Ferreira
9 2013
JA, Arias ARL39
10 Mohr G, Lobo EA40
11 Gaspar N, Gago J, Repolho T, Lus O
12 Hernandez OD, Castro F, Paez M42
13 Canto T, Pich CT, Geremias R43
Sousa DBP, Almeida ZS, Carvalho-
14
Neta RNF44
Jacobowski AC, Zobiole NN, Padilha
15
PM, Moreno SE, Arruda EJ45
Rezende KFO, Santos RM, Santos
16 RM, Shimada JCB, Silva JRMC, Muniz
CASD46
Pereira DP, Santos DMS,
17 Carvalho Neta AV, Cruz CF,
Carvalho Neta RNF47
Benites LM, Doncato KB, Minho TS,
18
Perazzo GX48
Franco-Bernardes MF, Maschio LR,
19
Azeredo-Oliveira MTV, Almeida EA49
Nour EAA, Candello FP, Santos EMR,
20 Barretto AS, Domingues LM29
http://dx.doi.org/10.1590/1983-80422015232079
Princpios bioticos aplicados aos estudos ecotoxicolgicos aquticos
Concluso
Nome do artigo Revista Ano
Avaliao ecotoxicolgica da gua de Boletim do
lavagem da purificao de biodiesel de Laboratrio de
soja metlico utilizando Danio rerio como Hidrobiologia
organismo-teste
Estudo da toxicidade aguda e alteraes
metablicas provocadas pela exposio
do cdmio sobre o peixe Hyphessobrycon O Mundo da Sade 2012
callistus utilizado como indicador de
sade ambiental
Avaliao de impactos do efluente do
tratamento combinado de lixiviado de Cincia & Sade
aterro de resduos slidos urbanos e Coletiva
esgoto domstico sobre a biota aqutica
Avaliao da eficincia de um sistema
Revista Jovens
de tratamento da gua em pequena 2013
Pesquisadores
propriedade rural, utilizando bioensaios
Avaliao da toxicidade das lamas de cal
Revista da Unidade
sobre o ourio-do-mar
de Investigao do
41
Paracentrotus lividus (Lamarck, 1816). 2013
Instituto Politcnico
Perspectivas para novas aplicaes destes
de Santarm
resduos industriais
Bioacumulacin de mercurio en larvas de
Acta Biolgica
anuros en la zona afectada por la minera
Colombiana 2013
de oro en el ro Dagua, Buenaventura,
Valle del Cauca, Colombia
Bioensaios de toxicidade em percolados
no aterro sanitrio do municpio de Revista Biocincias 2013
Ararangu (Santa Catarina, Brasil)
Biomarcadores histolgicos em duas Arquivo Brasileiro de
espcies de bagres estuarinos da costa Medicina Veterinria 2013
maranhense, Brasil e Zootecnia
Efeito mutagnico do edetato de cobre Ecotoxicology and
([Cu(EDTA)]-2) livre e nanoencapsulado Environmental 2013
em camundongos e peixes Contamination EEC
Histopatologia das brnquias de tilpia do
Nilo Oreochromis niloticus, provenientes Atlas de Sade
2013
da represa Billings, rea de proteo Ambiental ASA
ambiental Boror-Colnia
Alteraes morfolgicas em brnquias de
Artigos de pesquisa
Oreochromis niloticus (Pisces, Cichlidae)
como biomarcadores de poluio Bioscience Journal 2014
aqutica na laguna da Jansen, So Lus,
MA (Brasil)
Avaliao do potencial mutagnico de
Cincia e Natura 2014
cobre da gua do rio Uruguai
Biochemical and genotoxic effects of a
Ecotoxicology and
commercial formulation of the herbicide
Environmental 2014
tebuthiuron in Oreochromis niloticus of
Contamination EEC
different sizes
Tratamento biolgico de formaldedo: Ecotoxicology and
toxicidade residual monitorada por Environmental 2014
bioensaios com Daphnia similis Contamination EEC
Rev. biot. (Impr.). 2015; 23 (2): 409-18
413
 Princpios bioticos aplicados aos estudos ecotoxicolgicos aquticos
Uso dos princpios da biotica nos ensaios
ecotoxicolgicos
Os dados obtidos nas anlises dos artigos cien-
tficos anteriormente elencados demonstram haver
certa preocupao dos autores com o programa dos
3R, j que a maioria dos trabalhos apresentava al-
gum tipo de informao relacionada ao cuidado com
os animais utilizados em estudos ecotoxicolgicos.
De acordo com esse programa, os conceitos encon-
trados foram refinamento, substituio e reduo
(Grfico 1), dos quais os dois primeiros apareceram
com maior frequncia.
ante o trabalho.
Grfico 1. Distribuio dos 3R em relao aos artigos
cientficos analisados.
8
7
Nmero de artigos
5 a reduo ou alvio da dor so consideradas apri-
4 Substituio
3 Reduo
2 Refinamento
1
0 tico aos animais 55. Alm das preocupaes ticas,
2010 2011 2012 2013
Em relao ao nmero de animais usados nos
procedimentos ecotoxicolgicos, 4 artigos no ci-
taram a quantidade de animais, porm os demais
trabalhos (16) apresentaram essa informao. A
maioria dos trabalhos analisados (14) utilizou en-
tre 11 e 50 indivduos nas pesquisas; todavia, 4
trabalhos utilizaram entre 300 e 18.473 exem-
plares. Somente 1 artigo cientfico utilizou at 10
indivduos, adequando-se ao conceito reduo do
programa 3 R 50. O grande nmero de organismos
usados em um experimento cientfico pode ser ex-
plicado pela ausncia de legislao que limite o uso
Artigos de pesquisa
de invertebrados em estudos cientficos24, haja vista
que esses estudos foram realizados com macroin-
vertebrados aquticos e semiaquticos. Esses tipos
de estudo, que usam milhares de indivduos, ainda
no contemplam o programa dos 3R 29,50.
At o presente momento, a preocupao
com os aspectos ticos concentra-se em ensaios
com animais do filo Chordata, subfilo Vertebrata.
Existem alguns grupos e comits de tica que
tambm avaliam estudos realizados em insetos e
cefalpodos. Tal fato, porm, ainda exceo. Em
funo disso, tambm podem ser usados, em lugar
dos animais vertebrados, organismos inferiores na
escala zoolgica, classificados como no protegidos,
caracterizando o conceito substituio. Exemplo
disso a utilizao de Daphnia pulgans, Artemia
Rev. biot. (Impr.). 2015; 23 (2): 409-18
414
salina e abelhas em estudos, principalmente de
ecotoxicologia 51. Dessa forma, 30% dos trabalhos
analisados que utilizaram espcies como Daphnia
similis, Daphnia magna, Ceriodaphnia dubia e
Artemia sp. foram avaliados como importantes no
item substituio do programa dos 3R.
Pouco mais da metade dos trabalhos analisa-
dos (53%) informou que foi realizada a aclimatao
dos organismos antes dos procedimentos ecotoxi-
colgicos, indicando que se observou o princpio do
refinamento, j que os animais foram mantidos em
condies que minimizaram sua dor e estresse 52.
Esse tipo de procedimento , inclusive, previsto pela
legislao brasileira 53. A aclimatao caracterizada
por duradouros ajustamentos fisiolgicos adaptati-
vos dos organismos, que resultam em aumento da
tolerncia a contnuas ou repetitivas exposies a
vrios estressores climticos, normalmente produ-
zidos sob condies de campo 54. A aclimatao e
moramentos no cuidado dos animais, j que os
pesquisadores devem saber como avaliar e mo-
nitorar a dor de modo a proporcionar tratamento
2014
a dor e o estresse dos animais acarretam variveis
indesejveis pesquisa, j que podem interferir sig-
nificativamente na interpretao dos resultados dos
estudos 56.
A utilizao de anestesia foi informada em
15% dos artigos analisados, indicando que se consi-
derou o princpio do refinamento, uma vez que essa
tcnica proporciona diminuio do sofrimento dos
organismos utilizados nos experimentos 52. Durante
a prtica de alguns procedimentos laboratoriais, os
animais so submetidos a variados tipos de dor e
sofrimento; logo, devem ser sedados e anestesiados
corretamente 57,58.
importante ressaltar que 20% dos traba
lhos cientficos realizados in situ coletaram sangue
perifrico para confeco de esfregaos em lmi-
nas, e, em seguida, os animais foram devolvidos ao
seu habitat. Pesquisas desse tipo que efetuam a
devoluo de todos os organismos ao ambiente,
beneficiando tanto os pesquisadores quanto os
animais pesquisados so desejveis porque dimi-
nuem os impactos sobre a fauna local e produzem
informaes mais fidedignas sobre a real situao
do habitat natural das espcies analisadas, o que
torna possvel trabalhar at mesmo com mamferos
e espcies ameaadas de extino 59.
Pouqussimos artigos (20%) citaram a aprova-
o de seu protocolo experimental por um comit
de tica institucional. A grande maioria dos traba
http://dx.doi.org/10.1590/1983-80422015232079
 Princpios bioticos aplicados aos estudos ecotoxicolgicos aquticos

lhos (80%) no informou tal aprovao, nem mesmo
destacou que a pesquisa envolvia larvas de esp-
cies que se classificavam na categoria de menor
preocupao pela International Union for Conser-
vation of Nature (IUCN), e somente 25% citaram o
uso de protocolos padronizados pela ABNT (NBR
12713/2009 30 e 13373/2010 31). Trabalhos cientfi-
cos envolvendo animais devem ser analisados por
um comit de tica, cuja funo orientar e revisar
protocolos, bem como ampliar os conhecimentos
sobre a conduta moral apropriada para com os ani-
mais 60. importante que o protocolo experimental
seja analisado quanto ao aspecto das metodologias
utilizadas, a fim de identificar os impactos causados
aos animais em relao a dor, sofrimento, confina-
mento, estresse e morte14.
Os pesquisadores tm a responsabilidade de
submeter seus protocolos de pesquisa a um comit
de tica que garanta a possibilidade de adaptar guias
de boas prticas que assegurem o bem-estar dos
organismos submetidos a estudo. O uso de esp-
cies animais em diferentes contextos (desde testes
ecotoxicolgicos at produo animal e gesto de po-
pulaes no mbito de programas de conservao)
merece a observao dos princpios da biotica 61,
a fim de que a cincia possa evoluir no sentido de
respeitar todas as formas de vida do planeta.
Consideraes finais
A discusso sobre metodologias e concei-
tos inovadores, introduzidos na pesquisa cientfica
com animais, tem sido crescente nas publicaes
cientficas nos ltimos anos. Todavia, nos trabalhos
publicados contendo resultados de testes ecotoxi-
colgicos em ambientes aquticos, ainda persistem
diversas questes que precisam ser debatidas, tais
como a necessidade concreta de aprovao dos
protocolos experimentais por comits de tica;
observao dos princpios bioticos atrelados s
metodologias laboratoriais; uso de anestesia para
minimizar o sofrimento dos animais; reduo do
nmero de organismos nos testes laboratoriais,
e adoo de mtodos alternativos utilizao de
animal, sem afetar necessariamente o resultado da
pesquisa. Discutir ideias bioticas fundamental,
e os princpios dos 3R devem ser considerados na
elaborao de projetos e nas prticas da pesquisa
cientfica atual na rea de ecotoxicologia aqutica.

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Participao dos autores Recebido: 13.1.2015

Artigos de pesquisa

Josielma dos Santos Silva contribuiu na confeco do mapa conceitual de elaborao do artigo, na
redao de todas as partes do texto e na reviso. Iolanda Karoline Barros dos Santos Rocha contribuiu Revisado: 24.3.2015
na leitura e anlise dos artigos de reviso e na elaborao do grfico. Lucenilde Carvalho de Freitas
Aprovado: 7.5.2015
contribuiu na leitura e anlise dos artigos de reviso e na redao da introduo. Natlia Jovita Pereira
contribuiu na leitura e anlise dos artigos de reviso e na elaborao do quadro. Raimunda Nonata
Fortes Carvalho Neta contribuiu na redao e reviso de todas as partes do texto.

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