Deteco molecular de Helicobacter pylori e correlao

com exame histopatolgico e teste de urease1

NATAL RN
2016
 Deteco molecular de Helicobacter pylori e correlao
com exame histopatolgico e teste de urease1

Resumo

Introduo

O Presente artigo tem como objeto de estudo principal a verificao da frequncia

percentual de infeco por H. pylori pela deteco molecular do gene ureA e compara com o
metodo histopatolgico e teste de urease (Pacheco, 2007).
Segundo (Pacheco, 2007), acreditava-se que a causa de gastrite, lcera gstrica
duodenite e lcera duodenal estava relacionado ao desequilibrio entre o mecanismo de
secreo acida e Defesa do hospedeiro. Entretanto, em 1982 Marshall & Warren pela
primeira vez consegue isolar a bacttia Helicobacter pylori de um paciente com gastrite
crnia. Revolucionando a gastroenterologia Pacheco (2007 apud KODAIRA et al., 2002).
H. pylori, bactria gram-negativa, microaerfila com capacidade de colonizar mucosa
gstrica humana e causar gastrite aguda, gastrite crnica e lcera pptica. Pacheco (2007 apud
PARSONNET et al., 1991; NOMURA et al., 1994; Nilsson et al., 1996). uma bactria que
tem distribuio universal, com cerca de 60% da populao global acometida,
Acredita-se que, a origem do cncer gstrico esta envolvido com uma seria de eventos
que inclui infeco por H. pylori levando gastrite crnica, atrofia da mucosa e metaplasia
intestinal Pacheco (2007 apud THOMAZINI et al., 2006). E que est intimamente associado a
fatores ambientais, ocasionando uma serie de processos inflamatrios podendo esta
relacionados a condies pr-neoplsicas, como indicam vrios estudos. Pacheco (2007 apud
LADEIRA et al., 2003).
Para Pacheco (2007 apud LADEIRA, 2003), se observa que em paciente que
apresentam cncer gastrico tem seu risco elevado se analisa indivduos infectados por H.
pylori e com histria de cncer gstrico familiar.
O homem principal reservatorio para H. pylori o homem, tendo como forma de
transmio de pessoa para pessoa so as vias fecal-oral e oral-oral Pacheco (2007 apud
BITTENCOURT, et al. 2006). Tendo altas taxas de prevalncia em indivduos que vivem em
condies de aglomerao humana (KODAIRA et al., 2002).
Para Pacheco (2007 apud Bromberg, 2006), pases desenvolvidos apresenta uma taxa
de 25% a 50% de sua populao infectada e quem em pases subdesenvolvimento, a infeco
acomete cerca de 70% a 90% da populao dependendo do local.
O cluster da urease de H. pylori composto de vrios genes: ureA e ureB seguidos por
uma possvel seqncia promotora e ureI, ureE, ureF, ureG e ureH.
Quando se fala em diagnostico da H. pylori o exame histopatolgico ainda padro
quando se fala em diagnostico, tem sensibilidade e especificidade dependente da experincia
do patologista Pacheco (2007 apud METZ et al., 1998; PACHECO et al., 2001).
Para Pacheco (2007 apud GRAHAM; QURESHI, 2001), estudos revelam que testes
rpidos de urease realizados demonstrou que a sensibilidade e especificidade de diferentes
testes estavam entre 95% e 100%.
A deteco por PCR (Reao em Cadeia da Polimerase) de genes da urease de H.
pylori pode ser utilizada para estabelecer a presena da bactria na mucosa gstrica (Pacheco ,
2007).
Apesar de mtodos moleculares no serem muito usados na pratica clinica so
considerados muito especficos e sensveis, apresentam a vantagem de diagnostica a presena
de genes ligados virulncia ou mutaes conferindo assim a resistncia a antibiticos
Pacheco (2007 apud MATSUKURA et al., 1995; MAEDA et al., 1997; BJORKHOLM et al.,
1998; VAN DOORN et al., 1998; YAMAOKA et al., 1999; PACHECO et al., 2001).

Metodos

Os casos apresentados so diagnosticados por profissional medico atravs da

realizao da endoscopia, coleta amostra da mucosa gstrica obtida da regio do antro do
estmago, acondicionado em tubo esterilizados contendo SOLUO tampo TE pH 8,0 e
armazenados a -20C at extrao de DNA.

Teste Rpido de urease

O teste possui alta concentrao de uria, levando em conta que a bactria H. pylori
produtora da enzima urease se presente na amostra atua sobre a uria do meio produzindo
CO2 e amnia, elevando o pH do meio, constatando a reao pela mudana de cor no
indicador de pH de amarelo para rosa, reao positiva. Visando preservar a especificidade,
devendo ocorre leitura em no mximo 8 horas. Pacheco (2007 apud GRAHAM; QURESHI,
2001).

Exame Histopatolgico

O mtodo empregado a incluso em parafina e as coloraes utilizadas foram

Hematoxilina-eosina e Carbol-fucsina Pacheco (2007 apud GRAHAM; QURESHI, 2001).

Extrao de DNA de Helicobacter Pylori de

amostra de biopsia gstrica humana

A amostra descongelada, cortada e colocada em tubo em banho no gelo. Extrai-se o

DNA pelo mtodo de isotiocianato de guanidina com base em protocolos de extrao de RNA
e suspenso em soluo Tampo TE pH 8,0 Pacheco (2007 apud AUSUBEL & FREDERICK,
1991).

Amplificao por PCR

A identificao de H. pylori realizada pela deteco do gene ureA que est presente
em todas as linhagens da bactria.
Os ciclos de amplificao consistiam em: 2 min a 94C para o 1 ciclo, 1 min a 94C,
1 min a 43C (PCR para ureA), 1 min a 72C para os prximos 40 ciclos e 7 min a 72C para
o ltimo ciclo. O material amplificado foi analisado em gel de agarose 1% corado com
brometo de etdeo.

Eletroforese em gel de poliacrilamida

Ps amplificao o material caracterizado em gel de poliacrilamida a 6% e corado

pelo mtodo da prata (SAMBROOK et al, 1989). Em seguida as imagens so reveladas e
foram foto documentadas.
Resultados

A comparao da sensibilidade e especificidade do exame histopatolgico e do teste rpido de

urase em relao PCR para o gene de deteco da enzima urease de H. pylori (ureA) est
representada na tabela 3.
A presena de H. pylori foi determinada pela deteco do produto de amplificao do
gene ureA de 411pb (Pacheco, 2007).
Para (Pacheco, 2007), os testes empregados e correlacionados com PCR foram h
muito padronizados e so utilizados na prtica clnica e laboratorial com grande frequncia
para tanto, a PCR que um teste praticamente recente mas com grandes vantagens, uma
nova tcnica que vem se dispondo a servio da identificao deste patgeno to importante.
A possibilidade de se fazer a avaliao da presena do microrganismo por mtodos
moleculares permite tambm a investigao de segmentos de genes de importncia clnica e
epidemiolgica, pois o genoma da bactria conhecido(Pacheco, 2007).
A infeco por H. pylori est associada ao desenvolvimento de doenas importantes e
por este motivo, existe grande interesse em se fazer um diagnstico fidedigno para que a
classe mdica possa definir esquemas de preveno e erradicao da infeco (Pacheco,
2007).
 Referncia Bibliogrfica

PACHECO, J Deteco molecular de Helicobacter Pylori e correlo com exames

histopatologico e teste deurease. 2007. 7 f. Tese (Mestrado em Biologia) Instituto de
Ciencias Biologicas, Universidade Federal de Goias, Goinia. 2007.