Pop Ecoli TMF

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CETESB PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRONIZADO - POP SQ PR/LB-126

Assunto
DETERMINAO DE ESCHERICHIA COLI PELA TCNICA DE MEMBRANA FILTRANTE
EM GUAS SUPERFICIAIS BRUTAS - SQ PR/LB-126
1 - OBJETIVO
Este Procedimento Operacional visa descrever o mtodo de determinao de Escherichia coli (E. coli) pela
tcnica de membrana filtrante com aplicao na avaliao da qualidade microbiolgica de guas superficiais
brutas.
2 - DEFINIES
E. coli: principal bactria do subgrupo dos coliformes termotolerantes, sendo de origem exclusivamente
fecal. Dentre os coliformes, E. coli a nica bactria que possui a enzima -D glicuronidase, requerida
para a hidrlise do 5-bromo-6-cloro-3-indolil--D-glicurondeo.
5-bromo-6-cloro-3-indolil--D-glicurondeo: substrato utilizado no meio gar mTEC modificado para
diferenciao de E. coli dos outros coliformes termotolerantes.
3 - PROCEDIMENTOS
3.1 - PRINCPIO DO MTODO
Esta tcnica baseia-se na filtrao de volumes adequados de gua, atravs de membrana filtrante com
porosidade adequada. As bactrias ficaro retidas na superfcie da membrana, a qual ento transferida
para uma placa de Petri, contendo o meio de cultura seletivo e diferencial (gar mTEC modificado), com
posterior incubao a 35 0,5C durante 2 horas, seguida de um perodo de 22-24 horas a 44,5 0,2C.
Aps esse perodo, efetua-se a contagem das colnias tpicas de E. coli que crescem neste meio com
colorao vermelha ou magenta.
3.2 - INTERFERNCIAS
3.2.1 - A contaminao microbiolgica ou qumica de frascos de coleta, vidraria, gua de diluio, meios de
cultura e quaisquer outros materiais utilizados na anlise, poder interferir nos resultados.
Para a lavagem, preparo e esterilizao dos materiais utilizados devem ser seguidos os procedimentos
especficos descritos na Norma CETESB M1.001.
Para o preparo e esterilizao dos meios de cultura e solues devem ser observados os procedimentos
que constam da SQ IOT/LB 295 e da SQIOT/LB 296.
O desempenho operacional correto por parte dos tcnicos, durante as vrias etapas da anlise, deve ser
observado para garantir as condies adequadas de assepsia e evitar possveis problemas de
contaminao microbiolgica.
3.3 - MATERIAIS
3.3.1 - Aparelhagem
3.3.1.1 - Suporte mltiplo para porta-filtros (Manifold) Millipore (IOT/LB- 040).
3.3.1.2 - Porta-filtro de vidro, plstico autoclavvel ou ao inoxidvel, para membranas de 47 mm de
dimetro.
3.3.1.3 - Incubadora microbiolgica a 35 0,5C (SQ IOT/LB- 046 e SQ IOT/LB-231) .
3.3.1.4 Incubadora jaqueta d' gua a 44,5C 0,2C (SQ IOT/LB-395) ou banho-maria (SQ IOT/LB-
043) a 44,5C 0,2C.
3.3.1.5 - Microscpio estereoscpico binocular - ampliao de 10-15 dimetros (SQ IOT/LB- 041 ou
SQ IOT/LB-392).
3.4 - VIDRARIA
3.4.1 - Frascos Kitasatos com capacidade mnima de 4 L.

3.4.2 - Provetas graduadas de 100 mL, verificadas quanto ao erro volumtrico atravs de pesagem de
acordo com a SQ IOT/LB- 065.
Elaborado por Aprovado por: Verso Vigncia Folha

ELP EL/PDPQ 8 18/11/2014 Cpia Impressa no controlada 1/9
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3.5 - OUTROS MATERIAIS
3.5.1 - Pipetas de poliestireno estreis descartveis de 10 mL e 5 mL com graduao de 1/10 mL e de 2mL

e 1 mL com graduao de 1/100 mL, verificadas quanto ao erro volumtrico atravs de pesagem de
acordo com a IOT/LB-065.
3.5.2 - Membranas filtrantes de acetato de celulose ou mistura de acetato de celulose e nitrato de celulose
com 47 mm de dimetro e 0,45 m de porosidade, brancas, quadriculadas e estreis.
3.5.3 - Pinas de ao inoxidvel, com as extremidades arredondadas e lisas.
3.5.4 - Alas de inoculao de fio de nquel-cromo, platina-irdio ou platina ou palitos de madeira (cerca de
25 cm) estreis descartveis.
3.5.5 - Bicos de Bunsen ou similar.
3.5.6 - Estantes para tubos de ensaio.
3.5.7 Garrafo de polipropileno reforado para vcuo com capacidade de cerca de 10L.
3.6 - MEIOS DE CULTURA E SOLUES
A preparao dos meios de cultura e solues descritos a seguir, consta da IOT/LB-295 e da IOT/LB-296.
3.6.1 gar mTEC modificado.

3.6.2 gar nutriente.
3.6.3 Caldo triptona e soja concentrao simples.
3.6.4 gar citrato Simmons .
3.6.5 Caldo triptona 1% .
3.6.6 Caldo EC.
3.6.7. - gar m-Endo LES.
3.6.8 - gua de diluio.
3.6.9 Reativo de oxidase.
3.6.10 Reativo de Kovacs.
3.7 - PROCEDIMENTO
3.7.1 - Identificar a amostra a ser analisada, de acordo com a SQ IOT/LB- 056 (Recebimento, armazenagem
e manuseio de amostras destinadas ao setor de microbiologia e parasitologia) e definir os volumes e
diluies da mesma a serem filtrados, em funo de sua procedncia, o que pode implicar em um maior ou
menor nvel de contaminao.
3.7.2 - Antes de iniciar o exame, desinfetar a bancada de trabalho, usando como desinfetante lcool etlico a
70%.
3.7.3. - Dispor sobre a mesma o seguinte material:
3.7.3.1 - porta-filtro(s) previamente esterilizado(s), adaptado(s) ao suporte de filtrao (Manifold), que
conectado a um frasco Kitasato, que por sua vez conectado a um frasco Kitasato de proteo e e
este fonte de vcuo;
NOTA: Como alternativa aos frascos Kitasato, pode-se utilizar um garrafo de polipropileno reforado
para vcuo provido de tampa com sistema de enchimento.
3.7.3.2 - placas de Petri, contendo o meio "gar mTEC modificado", identificadas com o nmero da
amostra e o volume a ser filtrado;
3.7.3.3 - pina com as extremidades mergulhadas em lcool etlico contido em um bquer;
3.7.3.4 - bicos de Bunsen, para manter o ambiente assptico e efetuar a flambagem das pinas
utilizadas;
3.7.3.5 - provetas graduadas estreis, com a abertura recoberta com papel alumnio, identificadas
com o nmero da amostra;
3.7.3.6 - gua de diluio contida em bales, erlenmeyers ou frascos de polipropileno de 1000mL e
em frascos para diluio.
3.7.3.7 - membranas filtrantes de ster e nitrato de celulose (ou ster de celulose somente) com 47
mm de dimetro e 0,45 m de porosidade, brancas, quadriculadas e estreis.
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3.8 - PREPARAO DO PORTA-FILTROS
3.8.1 - retirar a parte superior do porta-filtro e, com as extremidades de uma pina previamente flambadas e
resfriadas, colocar uma membrana filtrante estril, sobre a parte inferior do porta-filtro.
3.8.2 - acoplar a parte superior do porta-filtro parte inferior, tomando cuidado para no danificar a
membrana.
3.9 - CONTROLE DE CONTAMINAO DOS PORTA-FILTROS
3.9.1 - para o controle de contaminao de cada porta-filtro usado, efetuar a filtrao de um volume de 100
mL de gua de diluio estril antes da filtrao das amostras e aps a filtrao de 10 amostras.
3.9.2 - proceder conforme o item 3.11, descrito adiante.
3.9.3 - o registro dos resultados obtidos em relao a presena de crescimento bacteriano (nmero de
colnias) efetuado utilizando-se o formulrio especfico do controle de contaminao de porta-filtros.
3.10 - PREPARAO DA AMOSTRA PARA FILTRAO:
3.10.1 - Para volumes iguais ou superiores a 10 mL:

3.10.1.1 - homogeneizar a amostra por agitao manual, inclinando o frasco (formando um ngulo de
aproximadamente 45 entre o brao e antebrao) agitando vigorosamente; repetir a operao no
mnimo 25 vezes; e
3.10.1.2 - distribuir os volumes requeridos da amostra em provetas graduadas estreis, previamente
identificadas e proceder filtrao conforme descrito no item 3.11.
3.10.2 - Para volumes inferiores a 10 mL:
3.10.2.1 - homogeneizar a amostra conforme j descrito e, com o auxlio de uma pipeta estril, retirar
o volume desejado e adicionar a um frasco contendo 90 mL de gua de diluio (este volume servir
apenas de suporte para que as possveis bactrias existentes na amostra se distribuam
uniformemente na superfcie da membrana ao ser efetuada a filtrao).
3.10.2.2 - homogeneizar e proceder filtrao conforme descrito no item 3.11.
3.10.3 - Para volumes (diluies) decimais:
3.10.3.1 - Preparao das diluies da amostra:
3.10.3.1.1 - identificar cada frasco de gua de diluio estril com o nmero da amostra e a
diluio que dever conter;
3.10.3.1.2 - homogeneizar a amostra conforme j descrito, e com o auxlio de uma pipeta
estril de 10 mL, retirar o volume de 10 mL e adicionar a um frasco contendo 90 mL de gua
de diluio e homogeneizar. Esta ser a primeira diluio (10-1), sendo que 1 mL da mesma
corresponde ao volume de 0,1 mL da amostra;
3.10.3.1.3 - preparar a diluio 10-2, repetindo o procedimento do item anterior, com a
transferncia de um volume de 10 mL da diluio 10-1 para um frasco contendo 90 mL de
gua de diluio com posterior homogeneizao, sendo que 1 mL dessa diluio
corresponde ao volume de 0,01 mL da amostra;
3.10.3.1.4 - preparar as diluies seguintes da mesma forma, at a maior diluio definida
em funo do nvel de contaminao da amostra.
3.10.3.2 - Preparao dos volumes das diluies para filtrao
3.10.3.2.1 - Com o auxlio de uma pipeta estril, retirar o volume de 1 mL de cada diluio e
adicionar a um frasco contendo 90 mL de gua de diluio (este volume servir apenas de
suporte para que as possveis bactrias existentes na amostra se distribuam uniformemente
na superfcie da membrana ao ser efetuada a filtrao);
3.10.3.2.2 - homogeneizar e proceder filtrao conforme descrito no item 3.11.
3.11 - FILTRAO DA AMOSTRA
3.11.1 - verter cuidadosamente o volume da amostra a ser examinado no porta-filtro, evitando que a gua
respingue sobre as bordas superiores do mesmo.
3.11.2 - ligar o sistema ou bomba de vcuo e proceder filtrao.
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3.11.3 - aps a filtrao, enxaguar o porta-filtro duas vezes, com pores de 20-30 mL de gua de diluio,
para evitar a reteno de alguma bactria nas paredes internas do mesmo.
3.11.4 - desligar a vlvula de controle de vcuo do porta-filtro, ao finalizar a operao. Evitar a secagem
excessiva da membrana filtrante, desligando o vcuo imediatamente aps o trmino do processo de
filtrao.
3.11.5 - separar a parte superior do porta-filtro e, com uma pina, cujas extremidades foram flambadas e
resfriadas, retirar com cuidado a membrana. Acoplar novamente a parte superior do porta-filtro inferior.
3.11.6 - obedecendo aos cuidados de assepsia, colocar cuidadosamente a membrana, com a superfcie
quadriculada voltada para cima, na superfcie do meio de cultura contido na placa de Petri, devidamente
identificada com o nmero da amostra e o volume filtrado.
NOTA: Ao transferir a membrana para a superfcie do meio de cultura, observar que toda a rea da membrana deve
ficar completamente aderida ao meio. Para isso, segurando a membrana pelas bordas (fora da rea de filtrao) com as
extremidades da pina previamente flambadas e resfriadas, coloc-la sobre o meio de cultura e efetuar um movimento
giratrio da mesma, para permitir uma boa adeso. Se ocorrer a formao de bolhas entre a membrana e meio de
cultura, sempre com a extremidade da pina flambada e resfriada, levantar a borda da membrana mais prxima bolha
para elimin-la, pois as bolhas impedem o contato das bactrias com o meio de cultura, dificultando, ou mesmo
impedindo seu crescimento (Figura 1).
Figura 1 - Colocao da membrana filtrante na superfcie do meio de cultura
3.11.7 - tampar a placa de Petri.

3.11.8 - lavar novamente o porta-filtro com gua de diluio como j descrito e proceder a filtrao do
prximo volume da amostra ou da prxima amostra.1.
3.11.9 - aps as filtraes, incubar as placas de Petri contendo as membranas, em posio invertida a 35
0,5oC durante 2 horas, e em seguida a 44,5 0,2C em banho-maria na incubadora jaqueta d'gua durante
22 a 24 horas. Se for utilizado o banho-maria, acondicionar as placas de Petri em sacos plsticos bem
fechados.
3.11.10 - aps o perodo de incubao e com auxlio de um microscpio estereoscpico (com iluminao
fluorescente, colocada em direo a mais prxima possvel da perpendicular em relao ao plano da
1 Os porta-filtros devem estar estreis no incio de cada srie de filtraes e, se houver um intervalo de 30 minutos entre
uma filtrao e outra, os mesmos devem ser esterilizados novamente, ou substitudos por outros estreis, para evitar uma
contaminao acidental.
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membrana), efetuar a contagem das colnias tpicas de E.coli que apresentam colorao vermelha ou
magenta (rosa escuro).
3.12 - LEITURA
3.12.1 - os limites ideais para a contagem de colnias tpicas de E.coli em gar mTEC modificado situam-
se entre 20 a 80, sendo que a contagem total (colnias tpicas e atpicas) deve ser inferior a 200. Para essa
contagem, observar a Figura 2.
Figura 2 - Modelo para contagem das colnias: o crculo interior indica a rea de filtrao e as linhas
pontilhadas indicam a seqncia a ser seguida na contagem
3.12.2 - selecionar para leitura apenas aquele(s) volumes que tiver(em) fornecido contagem de colnias
tpicas dentro dos limites de 20 a 80.
3.12.3 - se a contagem em todos os volumes filtrados for inferior a 20 colnias tpicas, no considerar o
limite mnimo e efetuar a leitura em todas as placas correspondentes aos volumes filtrados da amostra.
3.12.4 - quando todos os volumes filtrados (soma dos volumes maior ou igual a 100 mL) no apresentarem
crescimento bacteriano, isto , contagens iguais a zero, expressar o resultado segundo o item 3.13.4 .
3.12.5 - quando a estimativa visual do total de colnias tpicas no menor volume filtrado for superior a 200,
ou quando houver crescimento em toda a rea de filtrao da membrana, sem colnias bem definidas
(crescimento confluente), a contagem no efetuada (ver item 3.13.5 para expresso dos resultados).
NOTA: Nesses casos ser avaliada a possibilidade de recoleta da amostra e seleo de volumes mais adequados para
filtrao.
3.13 - CLCULO E EXPRESSO DOS RESULTADOS
3.13.1 - A densidade de E. coli determinada atravs da tcnica de membrana filtrante expressa como:
Unidades formadoras de colnias de E. coli por 100 mL ou UFC de E. coli/100 mL
3.13.2 - A partir da contagem das colnias tpicas vermelhas ou magentas, selecionar a placa que
apresentar contagens dentro da faixa ideal (20 - 80) e calcular a densidade de E. coli atravs da aplicao
da seguinte frmula:
N de colnias tpicas
E. coli /100 mL = x 100
Volume filtrado da amostra (mL)
NOTAS:
a) Quando mais de uma placa apresentar contagem dentro da faixa ideal (20 - 80), ser selecionada a placa referente
ao maior volume filtrado ou a placa que apresentar melhor distribuio de colnias com caractersticas tpicas.

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b) Quando nenhuma placa referente aos volumes filtrados apresentar contagem dentro da faixa ideal (20 - 80), ser
selecionada a placa com contagem mais prxima desses limites ou a placa que apresentar melhor distribuio de
colnias com caractersticas tpicas.
c) Amostras com maior nvel de turbidez podem apresentar interferncias ou inibio de crescimento no(s) maior(es)
volume(s) filtrado(s). Nesses casos, sero consideradas as placas referentes aos menores volumes que no
apresentarem esse problema.
3.13.3 - Quando as contagens forem inferiores a 20 colnias tpicas em todos os volumes filtrados, efetuar
a contagem nas placas correspondentes aos volumes filtrados (total de 100 mL) e calcular a densidade em
100 mL atravs da seguinte frmula:
soma dos totais de colnias tpicas

E. coli/100 mL = x 100
soma dos volumes correspondentes s contagens (mL)
3.13.4 - Quando os volumes filtrados fornecerem contagens iguais a zero, expressar o resultado como:
Unidades formadoras de colnias de E. coli/100 mL: < 1.
3.13.5 - Quando a contagem no for efetuada devido ao grande nmero de colnias (> 200) ou a
crescimento confluente no menor volume filtrado, estimar a densidade em 100 mL atravs da seguinte
frmula:
> 200
E. coli/100 mL = x 100
menor volume filtrado (mL)
Expressar o resultado como:

Unidades formadoras de colnias de E. coli/100 mL: > valor obtido.
NOTA: Esse resultado somente ser relatado quando no for possvel a recoleta da amostra para filtrao de volumes
menores.
3.14 - REGISTRO DOS RESULTADOS
3.14.1 - O registro dos resultados efetuado no caderno de Registro de Resultados Analticos gua
Bruta / Tcnica de Membrana Filtrante.
3.14.2 - Os resultados das leituras so registrados na coluna N de colnias / volume filtrado.
3.14.3 - O resultado de n de colnias por volume selecionado inserido no sistema Winlims, de acordo
com o procedimento SQ PR/LB-119, obtendo-se o resultado final por 100 mL de amostra.
3.14.4 - Os resultados finais so registrados na coluna UFC (Unidade formadora de colnia) /100mL
3.14.5 - Os resultados so validados no sistema Winlims, de acordo com o procedimento SQ PR/LB-119,
sendo que o tcnico responsvel por essa ao dever registr-la no campo Observaes do caderno de
registro de resultados, colocando a sua rubrica e a data.
3.14.6 - Com a finalidade de verificar a correo dos clculos efetuados pelo sistema Winlims, uma amostra
ser anualmente verificada atravs de clculo manual.
3.15 - PROCEDIMENTO DE VERIFICAO PARA CONTROLE DE QUALIDADE
A verificao para E. coli das colnias de colorao vermelha ou magenta recomendada como controle de
qualidade e fornecimento de dados para uma avaliao do desempenho do mtodo em relao s amostras
ambientais analisadas.

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Esta verificao deve ser realizada em amostras positivas a cada dois meses.
3.15.1 - Selecionar um nmero mnimo de 20 colnias tpicas (10 colnias de duas amostras diferentes)
bem isoladas no gar mTEC modificado, para serem submetidas ao procedimento de verificao.
3.15.2 - Reisolar cada colnia selecionada em placa de gar m-Endo LES atravs de espalhamento em
estrias.
3.15.3 - Identificar tubos de gar nutriente e caldo triptona e soja (TSB) de tal modo que cada colnia
reisolada corresponda a um tubo de cada meio.
3.15.4 - Com auxlio de uma agulha de inoculao, devidamente flambada e resfriada, transferir um inculo
de cada colnia tpica para um tubo de gar nutriente e para um tubo de caldo triptona e soja simples (TSB)
e incub-los a 35 0,5C por 24 h.
3.15.5 - Aps incubao, transferir um inculo do crescimento de cada tubo de gar nutriente com uma
agulha de inoculao de platina e depositar na superfcie de um pedao de papel de filtro, previamente
colocado no fundo de uma placa de Petri e umedecido com uma soluo recm preparada do reativo de
oxidase. Se ocorrer uma reao, que evidenciada pelo desenvolvimento de colorao azul intensa no
local onde foi depositada a cultura em aproximadamente 15 segundos, o teste positivo e se nenhuma ou
discreta reao se desenvolver, o teste negativo.
NOTA: Controle positivo com cultura de Pseudomonas aeruginosa e controle negativo com cultura de E. coli so
previamente testados para avaliao do reativo de oxidase.
3.15.6 - Transferir um inculo do crescimento de cada tubo de caldo de soja e triptona simples (TSB) para
tubos de gar citrato Simmons, caldo triptona 1% e caldo EC.
3.15.6.1- Incubar o gar citrato Simmons e o caldo triptona 1% a 35 0,5C por 48 h.
3.15.6.2 - Incubar o caldo EC a 44,5 0,2C em banho-maria ou incubadora jaqueta de gua por
24h.
NOTA: O nvel da gua do banho-maria deve estar acima do nvel superior do meio EC no tubo.
3.15.6.3. Adicionar 1 a 2 gotas do reativo de Kovacs na cultura de 48 h do caldo triptona 1% e

agit-lo suavemente. O teste de indol considerado positivo se houver o desenvolvimento de uma
colorao vermelha intensa na camada alcolica na superfcie do caldo.
3.15.6.4. As colnias que produzirem gs no meio EC, forem indol positivas, oxidase negativas e
no utilizarem o citrato (isto , o meio continua com a colorao verde) so confirmadas como E.
coli.
3.15.7 - De forma alternativa ou como complementao da verificao, pode-se utilizar sistemas de
identificao para Enterobacteriaceae (ex: API20E).
3.15.8 - O registro dos resultados obtidos, referentes verificao das colnias efetuado utilizando-se o
formulrio especfico (E. coli - verificao de colnias - gar mTEC modificado).
3.16 - GARANTIA DA QUALIDADE
3.16.1 - Os meios de cultura utilizados so submetidos a testes de controle de qualidade para avaliao de
esterilidade e especificidade. Esses procedimentos esto descritos na IOT/LB- 052 e no PR/LB-017,
respectivamente.
NOTA 1: Os nmeros de lotes so registrados juntamente com os resultados analticos para permitir o
rastreamento de qualquer possvel problema.
NOTA 2: Quando mais de um lote de meio de cultura for utilizado em uma sequncia de amostras
registradas na mesma folha do caderno de resultados, necessrio que seja registrado em quais amostras
foram utilizados os respectivos lotes.
3.16.2 - O procedimento de verificao de colnias tpicas (item 3.15) realizado como controle de
qualidade do mtodo e seus resultados devem ser avaliados sistematicamente .

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3.16.3 - Os tcnicos que executam a anlise so submetidos a testes de avaliao de contagem de colnias
tpicas. Uma mesma placa contada por vrios tcnicos, sendo que a diferena entre as contagens deve
estar dentro do limite de 10%. Este teste deve ser realizado com uma frequncia mnima mensal.
3.16.4 - Caso os resultados dos testes de controle de contaminao dos porta filtros (item 3.9), revelarem a
presena de crescimento bacteriano, ser feita uma avaliao quanto possibilidade de cancelamento da
srie de filtraes realizadas com esses porta-filtros e da recoleta dessas amostras para novas anlises.
3.16.5 - Controle de preciso do mtodo:
3.16.5.1 - Quinze amostras so analisadas em duplicata, em dias diferentes.
NOTA: A avaliao da preciso ser feita a partir das duplicatas que apresentarem contagens dentro da
faixa de 20 a 80 colnias por placa.
3.16.5.2 - Calcular as diferenas em logaritmo base 10 de cada duplicata de resultado (R).
3.16.5.3 - Calcular a mdia desses valores (Rmdio) e o critrio de preciso (3,27. Rmdio).
3.16.5.4 - Construir uma carta controle com os valores de R obtidos e indicar o critrio de preciso
3,27.Rmdio como valor limite.
3.16.5.5 - Mensalmente, no mnimo, analisar uma amostra em duplicata e se forem obtidas
contagens dentro da faixa de 20 a 80 colnias, calcular o R e indicar o resultado na carta controle
construda.
3.16.5.6 - Se o resultado obtido estiver acima do limite (3,27.Rmdio), a variabilidade considerada
excessiva (resultado insatisfatrio). Nesse caso, a causa deve ser identificada e tomada a devida
ao corretiva.
3.16.5.7 - A cada nova srie de 15 amostras analisadas em duplicata com resultados satisfatrios,
recalcular o critrio de preciso e construir uma nova carta controle.
3.16.6 A estimativa de incerteza realizada de acordo com o procedimento SQ PR/LB-117.
3.16.7 Ensaios de proficincia por comparao interlaboratorial so realizados de acordo com o
planejamento anual estabelecido pela gerncia do laboratrio e registrado no formulrio Plano anual de
participao em ensaios de proficincia e os resultados so submetidos a uma anlise crtica de acordo
com procedimento SQ PR/LB-142.
4 - REGISTROS
Controle de contaminao de porta-filtros (A4-00449).

Resultados analticos gua bruta/tcnica de membrana filtrante.(A4-00462)
Avaliao de contagem de colnias.(S712)
E. coli - verificao de colnias - gar mTEC modificado.(S755)
Plano anual de participao em ensaios de proficincia (S1167)
5 - HISTRICO DE REVISO
constitudo pelo conjunto das alteraes processadas sobre o documento normativo de referncia.
Essas alteraes sero identificadas por um trao vertical na margem esquerda do documento, ao lado do item
alterado.
As verses contero apenas as alteraes correspondentes.
6 - ANEXOS
No aplicvel
7 - REFERNCIAS
American Public Health Association. Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater.
Standard
Methods on line (acessado em outubro de 2014). Section 9213.3b, 2007. Washington. APHA, AWWA, WEF.
8 - DOCUMENTOS COMPLEMENTARES
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UNITED STATES ENVIRONMENTAL PROTECTION AGENCY. Method 1603: Escherichia coli (E. coli) in water
by membrane filtration using modified membrane-thermotolerant Escherichia coli Agar (Modified m-TEC), EPA
821-R-02-023, setembro 2002.
Bordner R., J. A. Winter, P. V. Scarpino (eds.). 1978. Microbiological Methods for Monitoring the Envrionment:
Water and Wastes, EPA-600/8-78-017. Office of Research and Development, USEPA.
CETESB. Lavagem, preparo e esterilizao de materiais em Laboratrio de Microbiologia. So Paulo, Norma
Tcnica M1.001, 1986. 23p.13.3.
Incubadora microbiolgica Heraeus SQ IOT/LB-046.
Incubadora microbiolgica Revco BOD 50a 14 SQ IOT/LB-231.
Suporte mltiplo (Manifold) para porta-filtros SQ IOT/LB-040.
Banho maria Precision Scientific SQ IOT/LB-043.
Incubadora jaqueta d' gua SQ IOT/LB-395.
Microscpio estereoscpico binocular SQ IOT/LB-041.
Microscpio estereoscpico Marte SQ IOT/LB-392
Recebimento, armazenamento e manuseio de amostras destinadas ao Setor de Microbiologia e Parasitologia
SQ IOT/LB-056.
Teste de esterilidade para materiais e meios de cultura SQ IOT/LB-052.
Verificao do erro volumtrico de provetas e pipetas graduadas Mohr para utilizao em anlises
microbiolgicas SQ IOT/LB-065.
Estimativa de incerteza em anlises microbiolgicas SQ PR/LB-117
Teste de especificidade dos meios de cultura para as anlises de indicadores microbiolgicos SQ PR/LB-017.
Meios de cultura e solues uso geral nos laboratrios de Microbiologia e Parasitologia SQ IOT/LB 295.
Meios de cultura e solues uso no laboratrio de indicadores microbiolgicos SQ IOT/LB-296
Anlise crtica de certificados e relatrios do Setor de Microbiologia e Parasitologia SQ PR/LB-142

Cod.: SO023V09 30/01/2009

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CETESB PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRONIZADO - POP SQ PR/LB-126

3.1 - PRINCPIO DO MTODO

3.4.1 - Frascos Kitasatos com capacidade mnima de 4 L.

Elaborado por Aprovado por: Verso Vigncia Folha

CETESB PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRONIZADO - POP SQ PR/LB-126

3.5 - OUTROS MATERIAIS

3.5.1 - Pipetas de poliestireno estreis descartveis de 10 mL e 5 mL com graduao de 1/10 mL e de 2mL

3.6 - MEIOS DE CULTURA E SOLUES

3.6.1 gar mTEC modificado.

CETESB PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRONIZADO - POP SQ PR/LB-126

3.8 - PREPARAO DO PORTA-FILTROS

3.9 - CONTROLE DE CONTAMINAO DOS PORTA-FILTROS

3.10 - PREPARAO DA AMOSTRA PARA FILTRAO:

3.10.1 - Para volumes iguais ou superiores a 10 mL:

3.11 - FILTRAO DA AMOSTRA

CETESB PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRONIZADO - POP SQ PR/LB-126

Figura 1 - Colocao da membrana filtrante na superfcie do meio de cultura

3.11.7 - tampar a placa de Petri.

CETESB PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRONIZADO - POP SQ PR/LB-126

3.13 - CLCULO E EXPRESSO DOS RESULTADOS

Elaborado por Aprovado por: Verso Vigncia Folha

CETESB PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRONIZADO - POP SQ PR/LB-126

soma dos totais de colnias tpicas

Expressar o resultado como:

3.14 - REGISTRO DOS RESULTADOS

3.15 - PROCEDIMENTO DE VERIFICAO PARA CONTROLE DE QUALIDADE

Elaborado por Aprovado por: Verso Vigncia Folha

CETESB PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRONIZADO - POP SQ PR/LB-126

3.15.6.3. Adicionar 1 a 2 gotas do reativo de Kovacs na cultura de 48 h do caldo triptona 1% e

3.16 - GARANTIA DA QUALIDADE

Elaborado por Aprovado por: Verso Vigncia Folha

CETESB PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRONIZADO - POP SQ PR/LB-126

Controle de contaminao de porta-filtros (A4-00449).

CETESB PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRONIZADO - POP SQ PR/LB-126

Elaborado por Aprovado por: Verso Vigncia Folha

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