Classificação ABO - Direta

PREFEITURA MUNICIPAL DE RIBEIRA DO POMBAL
CNPJ: 11.839.421/0001-27
LABORATRIO WILSON FERREIRA BRITO
Procedimento Operacional Padro Cdigo:
POP 001
Data de Emisso: rea: Folha: Data de Reviso:
20/03/2017 Laboratrio 1 de 8 20/03/2018
N. da Verso:
Classificao ABO Copia: 01
01
1. OBJETIVO
Descrever o procedimento correto para identificao dos antgenos do sistema ABO em
amostras de sangue de doadores e pacientes.
2. ABRANGENCIAS
Realizar tipagem ABO direta em pacientes candidatos a transfuso de sangue e bolsas de

sangue.
3. RESPONSABILIDADES
Atividades Responsabilidades
Registro de amostras, inspeo de Tcnicos de laboratrio
reagentes, realizao das provas pr Aux. De laboratrio
transfusionais.
Superviso das atividades Biomdica
4. DEFINIES
Baseia-se na existncia de dois fatores antignicos, contidos nos glbulos vermelhos e de

dois anticorpos correspondentes que existem naturalmente no soro sangneo.
5. TERMOS TCNICOS
Edta, - Anticoagulante utilizado para coleta do paciente.

Soro anti-A, anti-B. Anti-AB - Soros aglutinantes de cujas propriedades identificam
isoaglutininas presentes ou no na superfcie da hemcia.
6. PROCEDIMENTOS
6.1. PRINCPIO DO MTODO

Nome Formao
Elaborao Shelly Mirtis Cardoso de Oliveira Biomdica
Reviso Shelly Mirtis Cardoso de Oliveira Biomdica
Aprovao Shelly Mirtis Cardoso de Oliveira Biomdica
CNPJ: 11.839.421/0001-27
POP 001
20/03/2017 Laboratrio 2 de 8 20/03/2018
N. da Verso:
01
Aglutinao Direta em tubo.
A prova direta (Beth Vicent) consiste em reagir soros testes monoclonais anti-A, anti-B e
anti-AB contra glbulos vermelhos a serem testados, atravs de uma reao de aglutinao
direta em tubo, com o objetivo de detectar a presena dos antgenos glicopolissacardicos A
e/ou B na membrana desses glbulos.
6.2. MATERIAIS
6.2.1 Amostras
Sangue total sem anticoagulante ou colhido com EDTA.
NOTA:
1- S devero ser aceitas as amostras identificadas corretamente, ou seja, a amostra e

a requisio devem estar com a mesma identificao;
2- No sero permitidas abreviaes na amostra nem na requisio.
6.2.2 EQUIPAMENTOS
Centrfuga tipo sorolgica

Banho-maria a 37C.
Galerias.
Aglutinoscpio
Microscpio.
Pipetas sorolgica de 50l, 100l.
6.2.3 REAGENTES E MATERIAS COMPLEMENTARES
Soluo de cloreto de Sdio (NaCl) a 0,9% (Salina).

Tubos de hemlise 12x75mm.
Nome Formao
CNPJ: 11.839.421/0001-27
POP 001
20/03/2017 Laboratrio 3 de 8 20/03/2018
N. da Verso:
01
Ponteiras.
Compressa de gaze;
Caneta para retroprojetor.
Lminas;
EPIs.
Soro anti-A. pronto para uso, estvel at a data de validade prevista pelo
fabricante. Se conservada entre 2-8c, deve estar temperatura ambiente (18-25C)
no momento do uso;
Soro anti-B pronto para uso, estvel at a data de validade prevista pelo fabricante
se conservada entre 2 - 8C, deve estar temperatura ambiente (18-25c) no
momento do uso;
Soro anti-AB pronto para uso, estvel at a data de validade prevista pelo
fabricante se conservada entre 2 8C, deve estar temperatura ambiente (18-25C)
no momento do uso.
6.3 PROCEDIMENTOS PASSO A PASSO
6.3.1. PREPARO DA AMOSTRA
Receber a amostra do paciente com a respectiva solicitao mdica;

Conferir a identificao da amostra e da solicitao devidamente preenchida e
assinada pelo mdico;
Centrifugar a amostra para obteno do plasma (5 min a 3400rpm), separar o plasma
e identificar o tubo igual requisio;
6.4. FLUXOGRAMA
Identifica (quatro) tubos: o primeiro como anti-A, o segundo como anti-B e o terceiro
como anti-AB;
Colocar 1(uma) gota ou 50ul de cada anti-soro nos seus respectivos tubos j
identificados;
No quarto tubo preparar a suspenso de hemcias a serem testadas em torno de 5%
(uma gota de concentrado de hemcias +19 gotas de salina);
Nome Formao
CNPJ: 11.839.421/0001-27
POP 001
20/03/2017 Laboratrio 4 de 8 20/03/2018
N. da Verso:
01
Colocar uma gota ou 50ul da suspenso de hemcias em cada tubo (anti-A, anti-B e
anti-AB).
Tubo A Tubo B Tubo AB

Soro anti-A 1 gota *** ***
Soro anti-B *** 1 gota ***
Soro anti-AB *** *** 1 gota
Suspenso de hemcias 1 gota 1 gota 1 gota
Agitar os tubos suavemente e centrifugar por 15(segundos) a uma rotao de 3400

RPM ou sessenta segundos numa rotao de 1000rpm;
Ressuspender delicadamente o boto de hemcias e fazer a leitura da aglutinao
ou hemlise.
Interpretao dos resultados: realizada atravs da visualizao da aglutinao.
AGLUTINAO
Tipo sanguneo Soro anti-A Soro anti-B Soro anti-AB
A SIM NO SIM
B NO SIM SIM
AB SIM SIM SIM
O NO NO NO
Analisar os resultados e anotar todas as fases e concluso no mapa de bancada.
OBS. 1: Caso o tubo A apresente aglutinao inferior a 4 cruzes, proceder conforme POP
para investigao de sub-grupo.
OBS. 2: Na presena de resultados duvidosos ou discrepantes, lavar as hemcias de 4 a 6

vezes por 120 (segundos), a uma rotao de 3400 rpm, com salina e repetir procedimento.
Nome Formao
CNPJ: 11.839.421/0001-27
POP 001
20/03/2017 Laboratrio 5 de 8 20/03/2018
N. da Verso:
01
OBS. 3: Persistindo a discrepncia, solicitar nova amostra do paciente ou do doador e

repetir os testes.
OBS. 4: Persistindo a discrepncia consultar o pop de orientaes frente Discrepncia

ABO e Rh.
OBS. 5: No definindo o resultado do grupo ABO enviar a amostra para o Laboratrio de

imunohematologia especializado
7. CONTROLE DE QUALIDADE
Controle Externo-ANVISA- a freqncia de utilizao obedece ao cronograma de

envio do fabricante.
Controle Interno Validao conforme controle de qualidade.
8. LIMITAES DO MTODO
.Contaminao das amostras, reagentes e /ou matrias suplementares.

Amostras de sangue com tempo de coleta maior que o recomendado pode levar a
resultados mais fracos que os obtidos com amostras recentes.
Concentrao da suspenso de hemcias diferente da recomendada.
Tempo e /ou temperatura de incubao imprpria.
Centrifugao inadequada (tempo de centrifugao ou rotao abaixo do
recomendado) pode levar a um boto que se dispersa com facilidade.
Centrifugao excessiva pode levar a uma dificuldade maior de soltar o boto de
hemcias.
A ressuspenso das hemcias no fundo do tubo, aps a centrifugao, deve ser
delicada. Agitao muito vigorosa pode dispersar os aglutinados formados podendo
levar a resultados falso-negativos.
Sub-grupos muito fracos de A e B podem no ser detectados com estes reagentes.
Comparar os resultados obtidos na prova direta com os resultados da prova reserva.
Resultados iguais, classificao ABO validada.
Resultados discrepantes, no liberar sem soluo da discrepncia.
Nome Formao
CNPJ: 11.839.421/0001-27
POP 001
20/03/2017 Laboratrio 6 de 8 20/03/2018
N. da Verso:
01
9. Causas mais comum das discrepncias entre as Provas Direta e Reversa:

9.1. Erros Tcnicos
9.1.1 Uso incorreto de Reagentes (no observncia das instrues do Fabricante)
9.1.2 Utilizao de calor
9.1.3 Erro de identificao
9.1.4 Interpretao errnea dos resultados
9.1.5 Vidraria com resduos
9.1.6 Contaminao bacteriana das amostras ou reagente
9.1.7 Centrifugao com rotao inadequada
9.2. Problemas das Hemcias Testadas

9. 2.1 Formao em rouleaux (aumento de protenas sricas, presena de gelia de
Wharton nas hemcias do cordo, contaminao bacteriana, presena de aglutinina fria
inespecfica).
9.2.2 Transfuso recente ou transplante de medula ssea
9.2.3 Hemcias poliaglutinveis
9.2.4 Antgeno A ou B enfraquecidos ou suprimidos
9.2.5 Antgeno B adquirido
9.3. Problemas Existentes No Soro Testado

9.3.1 Altas concentraes de fibrinognio ou de protenas anormais e uso de drogas
provocando rouleaux
9.3.2 Anticorpos sricos reagido com outros antgenos presente nas hemcias (anti A1
em pacientes A2 ou A2B, Anti H em pacientes A1 ou A1B, auto anti I, outros anticorpos
frios).
9.3.3 Ausncia de anticorpos anti A e anti B em recm nascidos ou presena de
anticorpos maternos
9.3.4 Presena de anticorpos dirigidos contra constituintes das substncias
conservantes, meios de suspenso ou solues reagentes utilizadas.
9.3.5 Ausncia de anticorpos anti A e anti B em pacientes idosos ou debilitados e
imunossuprimidos ou imunodeficientes.
Nome Formao
CNPJ: 11.839.421/0001-27
POP 001
20/03/2017 Laboratrio 7 de 8 20/03/2018
N. da Verso:
01
9.3.6 Aps plasmaferese ou transfuso de substituio realizada com sangue ou plasma

de grupo sanguneo diferente, apesar de compatvel (no isogrupo).
10. Orientao pratica frente uma discrepncia entre Provas Direta e Reversa
1 Repetir a classificao direta e reversa, utilizado hemcias lavadas em soluo salina

0,9%.
2 Fazer um Auto Controle (soro do paciente x hemcias do paciente).
3 Caso as hemcias apresentem reao com A ou B realizar investigao de subgrupo.
4 Caso a discrepncia persista, repetir a prova reversa nas temperaturas de 15C 18C,
ambiente (20 C 24 C) e 37 C.
5 Pesquisar a presena de anticorpos irregulares sempre utilizando um Auto Controle.
6 Rever o diagnstico e a histria do paciente. No esquecer de verificar as possveis

causas de uma discrepncia.
7 Ainda existindo dvidas coletar nova amostra (para afastar erros tcnicos) repetir as
etapas anteriores e realizar tambm o Coombs Direto.
11. ANEXOS
Este item no se aplica ao documento.
Nome Formao
CNPJ: 11.839.421/0001-27
POP 001
20/03/2017 Laboratrio 8 de 8 20/03/2018
N. da Verso:
01
12. REGISTROS
Mapa de registro e validao de entrada das amostras;

Mapa de bancada.
Livro de Registro de Transfuso
13. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
ANVISA. Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria. Resoluo n 153 de 14 de junho

de 2004.
Prospecto do fabricante dos anti-soros: anti-A, anti-B e anti-AB (/Frasenius Kabi).
POPs Hemoba e SBAC.
Nome Formao

Classificação ABO - Direta

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Realizar tipagem ABO direta em pacientes candidatos a transfuso de sangue e bolsas de

Baseia-se na existncia de dois fatores antignicos, contidos nos glbulos vermelhos e de

Edta, - Anticoagulante utilizado para coleta do paciente.

6.1. PRINCPIO DO MTODO

Aglutinao Direta em tubo.

Sangue total sem anticoagulante ou colhido com EDTA.

1- S devero ser aceitas as amostras identificadas corretamente, ou seja, a amostra e

Centrfuga tipo sorolgica

6.2.3 REAGENTES E MATERIAS COMPLEMENTARES

Soluo de cloreto de Sdio (NaCl) a 0,9% (Salina).

6.3 PROCEDIMENTOS PASSO A PASSO

6.3.1. PREPARO DA AMOSTRA

Receber a amostra do paciente com a respectiva solicitao mdica;

Tubo A Tubo B Tubo AB

Agitar os tubos suavemente e centrifugar por 15(segundos) a uma rotao de 3400

Analisar os resultados e anotar todas as fases e concluso no mapa de bancada.

OBS. 2: Na presena de resultados duvidosos ou discrepantes, lavar as hemcias de 4 a 6

OBS. 3: Persistindo a discrepncia, solicitar nova amostra do paciente ou do doador e

OBS. 4: Persistindo a discrepncia consultar o pop de orientaes frente Discrepncia

OBS. 5: No definindo o resultado do grupo ABO enviar a amostra para o Laboratrio de

Controle Externo-ANVISA- a freqncia de utilizao obedece ao cronograma de

.Contaminao das amostras, reagentes e /ou matrias suplementares.

9. Causas mais comum das discrepncias entre as Provas Direta e Reversa:

9.2. Problemas das Hemcias Testadas

9.3. Problemas Existentes No Soro Testado

9.3.6 Aps plasmaferese ou transfuso de substituio realizada com sangue ou plasma

1 Repetir a classificao direta e reversa, utilizado hemcias lavadas em soluo salina

2 Fazer um Auto Controle (soro do paciente x hemcias do paciente).

3 Caso as hemcias apresentem reao com A ou B realizar investigao de subgrupo.

5 Pesquisar a presena de anticorpos irregulares sempre utilizando um Auto Controle.

6 Rever o diagnstico e a histria do paciente. No esquecer de verificar as possveis

Este item no se aplica ao documento.

Mapa de registro e validao de entrada das amostras;

13. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

ANVISA. Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria. Resoluo n 153 de 14 de junho

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