TECNICAS DE CULTIVO - CARACTERISTICAS

INTRODUCCION

Los microorganismos se denominan ubicuo (aire, comida, bebidas, etc.). El microbilogo debe ser
capaz de identificar a los microoganismos. Si hay moho u otros microbios que no sean bacterias.
CRECIMIENTO MICROBIANO

Los microbios requieren condiciones adecuadas de incubacin como nutrientes, productos qumicos,
temperaturas, etc. Si las condiciones son correctas, los microbios son capaces de multiplicarse y
formarn colonias.
El estudiante de microbiologa debe aprender el vocabulario del microbilogo. Los trminos
utilizados en este laboratorio se emplean en el manual de bergey de bacteriologa sistemtica.

MATERIALES PARA LAS TECNICAS DE CULTIVO

CULTIVOS
(1) Cultivo de TSB de Bacillussubtilis
(1) TSB cultivo de Streptococcusbovis o Streptococcusequi
(1) TSB cultivo de Staphylococcusaureus
(1) TSB cultivo de Proteus mirabilis
(1) tubo TSB
(2) placas TSA
(1) portaobjetos de microscopio
INSTRUMENTOS

Asa de inoculacin
Quemador de Bunsen
Huelguista
Reactivos de tincin de Gram
Botella de agua
Alfiler de ropa
OBJETIVOS

Estudiar el crecimiento de organismos del caldo, para que la identificacin se utilizara colonias
patrones.
Demostrar los procedimientos de inoculacin adecuados para los caldos y las placas.
Reforzar los procedimientos de tincin de Gram.
Aprender el procedimiento adecuado para extender las placas y demostrar esta

FORMAS DE CULTIVO

CALDO DE CULTIVO

Las bacterias, cuando se suspenden en caldo, pueden causar turbidez, las bacterias forman un anillo
en la parte superior conocida como una pelcula, las que se hunden en el tubo que convierten en
sedimento y los que flotan se denominan serpentinas.
PLACAS DE CULTIVO

Una colonia aislada se utiliza mejor para fines descriptivos tal como se ven en una placa de agar:
Caractersticas

TAMAO - dimetro de la colonia medida en mm o cm

FORMA DE LA COLONIA ENTERA - circular, rizide, puntiforme, irregular, lenticulado

BORDE O MARGEN - lobatos, enteros, ondulados, filamentosos, erosa

ELEVACIN - elevado, plano, umbonato, convexo, pulvinate, crateriforme

ANILLOS SUPERFICIALES - arrugados, speros, concntricos, opacos, cerosos, brillantes, etc.

COLOR: rojo, crema, blanco, amarillo, ninguno, etc.

SOLUBILIDAD EN AGUA - teido soluble en agua la colonia y el agar ONo soluble en agua solo
se colorea la colonia.
OPACIDAD: transparente, translcido, opaco.
OLOR - putrefaccin, afrutado , etc.
PREPARACION DE UN MEDIO DE CULTIVO EN PLACA PETRI.

PROCEDIMIENTO TEORICO

El proceso requiere de una inoculacin del cultivo (CEPA). El asa es inflamado y enfriado, despus de girar la
placa 90 grados. El bucle se flamea, se enfra y la placa vuelve a girar y se propagan las bacterias. A veces se
utilizan placas de dispersin cuando se necesitan reacciones de ensayo.
TECNICA DE CULTIVO

Se coloca un hisopo estril en el cultivo y luego se aplica a una placa con medios. La tcnica de extensin
requiere que toda la superficie del medio se cubra con inculo. Se usan giros de 90 grados, tal como se usan
en la tcnica de la placa de rayas. Asegrese de ir todo el camino hasta los bordes de la placa.

PROCEDIMIENTO 1 - ORGANISMOS GRAM TINCIN

1. Obtener 1 cultivo de TSB de S. aureus, P. mirabilis, B. subtilis o S.bovis.

2. Obtener una lamina y proceder a la tincin de Gram, usted puede poner 2 muestras por lamina.
3. Registre las conclusiones a continuacin.
Staphylococcusaureus- Bacillussubtilis
Streptococcusbovis (o equi) - Proteus mirabilis

PROCEDIMIENTO 2 - DESCRIBIENDO PATRONES DE CRECIMIENTO EN CALDO, Y EN PLACAS DE AGAR

1. Obtenga 1 tubo TSB estril y 1 placa TSA estril.

2. flamea el lazo de inoculacin.

3. Abrir 1 tubo TSB no inoculado e inocular con los organismos del Procedimiento 1. Flamea el labio del
tubo antes y despus de la inoculacin, as como el asa de inoculacin.
4. Abra una placa TSA no inoculada, y usando el organismo # 3, siembra con el mtodo cuadrante.
Flamea el labio del tubo antes y despus de la inoculacin, as como el asade inoculacin.
5. Incubar a 35C durante 24-48 horas. Asegrese de que las placas estn boca abajo. Es la forma
apropiada para incubar
Recuperar todos los pliegues, caldos y platos.
Observe las placas/tubos y utilizar las tcnicas microbiolgicas(Consulte el libro de laboratorio).

Staphylococcusaureus:
Caldo
Plato
Bacillus subtilis
Caldo
Plato
Proteus mirabilis:
Caldo
 Plato
Streptococcusbovis (o equi):
Caldo
Plato

Procedimiento 3 - Preparacin de una plancha (trabajo en grupos de 2)

Obtener una placa de TSA y un tubo TSB del organismo del Procedimiento # 2.
Preparar una placa separadora de cada uno segn las tcnicas descritas.
Incubar durante 48 horas a 35C.
Segunda sesin:

Observe el crecimiento uniforme en la placa, extendindose hasta los bordes.

 CULTIVATION TECHNIQUES - CHARACTERISTICS
INTRODUCTION

Microorganisms are called ubiquitous (air, food, beverages, etc.). The microbiologist must be able to identify
microoganisms. If there is mold or other microbes other than bacteria.

MICROBIAL GROWTH

Microbes require proper incubation conditions such as nutrients, chemicals, temperatures, etc. If the conditions
are correct, the microbes are capable of multiplying and forming colonies.

The microbiology student must learn the vocabulary of the microbiologist. The terms used in this laboratory are
used in the bergey manual of systematic bacteriology.

MATERIALS FOR CULTURAL TECHNIQUES

CROPS

(1) Culture of Bacillus subtilis TSB

(1) TSB cultivation of Streptococcusbovis or Streptococcus
(1) TSB culture of Staphylococcus aureus
(1) TSB cultivation of Proteus mirabilis
(1) TSB tube
(2) TSA plates
(1) microscope slide

INSTRUMENTS

Inoculation handle
Bunsen burner
Striker
Gram staining reagents
Water bottle
Clothes pin

OBJECTIVES

Study the growth of broth organisms, so that the identification will use standard colonies.
Demonstrate proper inoculation procedures for broths and plaques.
Strengthen Gram staining procedures.
Learn the proper procedure to extend the plates and demonstrate this

FORMS OF CULTIVATION

CROPS
Bacteria, when suspended in broth, can cause turbidity, bacteria form a ring at the top known as a film, those that
sink into the tube that convert to sediment and those that float are called serpentines.

CULTIVATION PLATES
An isolated colony is best used for descriptive purposes as seen on an agar plate:
Characteristics

SIZE - colony diameter measured in mm or cm

FORM OF THE WHOLE COLONY - circular, rhizoid, punctate, irregular, lenticulate

EDGE THE MARGIN - lobate, whole, wavy, filamentous, erosa

 ELEVATION - high, flat, umbonate, convex, pulvinate, crateriform

SURFACE RINGS - wrinkled, rough, concentric, opaque, waxy, shiny, etc.

COLOR: red, cream, white, yellow, none, etc.

SOLUBILITY IN WATER - water soluble dye colony and agar O No soluble in water only the colony is colored.

OPACITY: transparent, translucent, opaque.

ODOR - putrefaction, fruity, etc.

PREPARATION OF A MEANS OF CULTURE IN PETRI PLATE.

THEORETICAL PROCEDURE

The process requires inoculation of the crop (CEPA). The handle is inflamed and cooled, after turning the plate 90
degrees. The loop is flashed, cooled and the plate rotates again and the bacteria are propagated. Dispersion plates
are sometimes used when assay reactions are needed.

CULTIVATION TECHNIQUE

A sterile swab is placed in the culture and then applied to a plate with media. The extension technique requires that
the entire surface of the medium be covered with inoculum. Turns of 90 degrees are used, as used in the striping
plate technique. Be sure to go all the way to the edges of the plate.

PROCEDURE 1 - GRAM TINCIN ORGANISMS

1. Obtain 1 cultuve of TSB from S. aureus, P. mirabilis, B. subtilis or S.bovis.

2. Get a sheet and proceed to Gram staining, you can put 2 samples per sheet.
3. Record the findings below.
Staphylococcus aureus- Bacillus subtilis
Streptococcusbovis (the equi) - Proteus mirabilis 1.

PROCEDURE 2 - DESCRIBING PATTERNS OF GROWTH IN BOIL, AND IN AGAR PLATES

2. Obtain 1 sterile TSB tube and 1 sterile TSA plate.

1. Flame the inoculation loop.
2. Open 1 TSB tube not inoculated and inoculate with the organisms of Procedure 1. Flame tube lip before and after
inoculation, as well as inoculation loop.
3. Open an uninoculated TSA plate, and using organism # 3, plant with the quadrant method. Flame the tube's lip
before and after inoculation, as well as asade inoculation.
4. Incubate at 35 C for 24-48 hours. Make sure the plates are upside down. It is the appropriate way to incubate

Recover all creases, broths and dishes.

Observe the plates / tubes and use the microbiological techniques (Consult the laboratory book).
Staphylococcus aureus:
Broth
Plate
Bacillus subtilis
Broth
Plate Proteus mirabilis:

Broth

Plate

Streptococcus bovis (or equi):

Broth

Plate

Procedure 3 - Preparation of an iron (work in groups of 2)

Obtain a TSA plate and a TSB tube from the body of Procedure # 2.

Prepare a separator plate of each according to the techniques described.

Incubate for 48 hours at 35C.

Second session: Notice the uniform growth on the plate, extending to the edges.