Factores que afectan la actividad de la ficina.

Efecto del pH.

La actividad de las enzimas depende mucho de la concentracin de iones de

hidrgeno del medio, ya que esto afecta el grado de ionizacin de los aminocidos

del sitio activo, del sustrato, o del complejo enzima-sustrato.

Efecto de la temperatura.

Como sucede con la mayora de las reacciones qumicas, la velocidad de las

enzimas aumenta con la temperatura, pero slo en el intervalo en que la enzima

es estable y retiene su capacidad cataltica; en casos extremos, cuando se

incrementa mucho la temperatura, se favorece la desnaturalizacin y

consecuentemente esta protena pierde su capacidad catalizadora.

Efecto acuoso.

La actividad acuosa es un factor que influye en la funcin enzimtica. Los

alimentos se deshidratan para evitar el crecimiento microbiano; sin embargo, an

en estas condiciones, perdura la accin de muchas enzimas. Las verduras y las

frutas deshidratadas estn sujetas a reacciones de deterioro cuando no se

inactivan sus enzimas con un tratamiento escalonado; estas trasformaciones

suceden debido a que el sustrato est en contacto muy directo con la enzima.

Efecto de los metales pesados.

Los metales pesados como mercurio, plata y plomo, inhiben la accin enzimtica,

mientras que el calcio, magnesio, sodio, potasio, hierro y zinc, actan como

agentes activadores de muchas otras. Este efecto activador se debe

probablemente a que forman parte del sitio activo a que se requieren para la

creacin del complejo enzima-sustrato, o que ayudan a mantener la conformacin

tridimensional.

FICINA La ficina es una enzima, una cisteinilproteinasa, aislada del ltex de

algunas especies y variedades de higueras e higos, siendo una de las proteasas

vegetales mejor conocidas. Es un buen ejemplo de productos naturales cuyo

estudio fue promovido por su empleo previo en medicina popular. En este caso la

primera referencia etnofarmacolgica de su utilizacin es la referente a algunos

nativos de Amrica Central y Sudamrica que obtenan ltex de la higuera para el

tratamiento de ciertas parasitosis intestinales.

ANTECEDENTES ETNOFARMACOLOGICOS Ficina constituye un buen ejemplo

de productos naturales cuyo estudio fue promovido por el conocimiento previo de

su empleo en medicina popular. En este caso la primera referencia

etnofarmacolgica existente es el uso que hacan algunos nativos de Amrica

Central y Sudamrica del ltex que obtenan de la higuera (Ficus m., Moraceae)

en el tratamiento de ciertas parasitosis intestinales 1. Robbins 2 tiene el mrito de

haber establecido la relacin de causalidaci entre el efecto antihelmntico

observado y la presencia de actividad proteoltica en el l- tex de Flcus laurffolla **,

Este hallazgo le sugiri extender el estudio sobre los posibles efectos proteolticos

(hidrlisis de la gelatina) y antihelmnticos (digestin de Ascarls provenientes de

intestino de cerdo) a otras quince especies de Flcus y a especies de otros gneros

de Moraceae (Artocalpus foret, Broslmum allcastmm,

MECANISMO DE ACCION Y CENTRO ACilVO DE LA ENZIMA Los primeros

estudios bioqumicos sobre el mecanismo de accin hidroltico comienzan con el

trabajo de Winnick et al. 6, quienes establecen de manera concluyente que ficina

es una proteasa sulfhidrilo-dependiente. Varios aos despus Cohen 7 inicia la

caracterizacin de la enzima determinando que se trata de una protena bsica (pI

= 9,O) y comprobando que la estabilidad de la enzima en relacin con el pH

depende fuertemente de la presencia de cistena en el medio de reaccin. Liener 8

es el primero en llevar a cabo un cuidadoso anlisis de la naturaleza del grupo

activo de la enzima, confirmando que se trata de una proteinasa ciste- nica con un

nico grupo -SH activo por molcula, an cuando advierte que la misma contiene

al menos otro grupo ti01 y una unin disulfuro no esenciales para la actividad

proteoltica. En un estudio posterior en el que el centro activo es bloqueado con

1%-iodoacetato (el iodoacetato es un inhibidor especfico de proteinasas

cistenicas), Wong y Liener 9 proponen la secuencia aminoacdica que debera

corresponder a la vecindad del sitio activo, que refleja una notoria similitud con la

que propuesta por Light et al. 10 para el centro activo de papana (Figura 1) y que

reforzara la hiptesis de Lowe y Williams 11 de que ambas proteasas deberan

tener el mismo mecanismo de accin, donde el intermediario cataltico sera un

compuesto acil-enzima en el que el grupo sulfhidrilo esencial se encontrara

acilado. Y podran haber originado tan dispares resultados. Una explicacin

posible podra estar relacionada con la existencia de mltiples formas moleculares

de la enzima, cada una de ellas con una diferente secuencia en el centro

cataltico. La otra posibilidad es que Metrione et al. 12 hubieran determinado la

secuencia que contiene al grupo ti01 inactivo. Ambas alternativas fueron

consideradas por Friedenson y Liener 14 con resultados negativos, quienes

atribuyeron los resultados obtenidos por aquellos autores a la posibilidad de que,

en las condiciones en que fue realizada la experiencia, el grupo -SH activo hubiera

reaccionado con uno de los puentes disulfuro que existen en la molcula formando

un nuevo puente disulfuro y liberando un grupo ti01 inactivo, cuya secuencia

aminoacdica podra ser la que determinaron los autores cuestionados. Al estudiar

el efecto del pH sobre la hidrlisis de sustratos sintticos tales como BAEE (a-N-

benzoil-L-arginina etil ster) y BAA (a-N-benzoil-L-argininamida) en una fraccin

activa (Ficina D) obtenida de Rcus carica var. Kadota, Kramer y Whitaker 15

determinan que la hidrlisis es dependiente de grupos cuyos valores de pK

sugieren que en el centro activo de la enzima se hallan involucrados un grupo

sulfhidrilo y un grupo carboxilo. En base a esos resultados, Whitaker 16 confirma

posteriormente que en la clsica ecuacin que interpreta el mecanismo de accin

de las cisteinil-proteasas (1) el paso de la acilacin es el que controla la velocidad

de la reaccin y que la constante que determina la velocidad de ese paso (kd

depende de la existencia de dos grupos con valores aparentes de pK igual a 4,74

(grupo carboxilo) y 8,44 (grupo sulfhidrilo).