CROMATOGRAFIA EN PAPEL

(ANLISIS Y SEPARACIN DE PIGMENTOS DE LA ZANAHORIA)

DEIBY FERNANDO APARICIO ACEVEDO

2132927
ANDREA CAROLINA JAIMES TAMI
2142681
JHON DIEGO LOPEZ MORALES
2141462
DANIEL SALCEDO BETIN
2120126

Presentado a: JAIRO REN MARTINEZ

UNIVERSIDAD INDUSTRIAL DE SANTANDER

FACULTAD DE QUIMICA
JULIO 19 DEL 2015
 INTRODUCCION

En esta prctica se podr encontrar los diferentes pigmentos de la zanahoria al ser

afectada por la acidez de la adicin de vinagre, adems se utilizar el mtodo ms
comn para analizar y separar dichos matices, la cromatografa en papel. Tambin
se podr encontrar la definicin y el uso del anlisis de varianza (anova).

La cromatografa en papel desde su descubrimiento y aplicacin como mtodo de

separacin, es un instrumento importante para el anlisis cualitativo de sustancias
en soluciones, ya que pese a no ser una tcnica muy potente no requiere de ningn
tipo de materiales inasequibles.

En este procedimiento, el parmetro que determina el grado de avance de un soluto

se denomina factor de retencin, Rf. Se calcula como el cociente entre la distancia
recorrida por el soluto (vinagre) y la distancia recorrida por el solvente (mezcla de
heptano, metanol y agua). Por medio del procesamiento de estos datos para
rplicas de separaciones cromatogrficas hechas con diferentes niveles de la
variable, se busca establecer si el efecto es significativo. En caso de ser cierto, se
emplear la prueba de Tukey para seleccionar el nivel que proporciona la mejor
separacin de los pigmentos.
En estos casos la cromatografa es tan til que el ser humano mediante estudios
puede determinar en alguna muestra de anlisis forense, que sustancias o
elementos estaban contenidos, y hacer uso de esta informacin para usos propios.

OBJETIVOS

Reconocer la cromatografa como un instrumento, para la separacin de los

componentes de una solucin.

Identificar las caractersticas y los factores que en ella intervienen.

Calcular valores de R.f. del experimento y deducir el coeficiente de variacin.

Adquirir conocimiento de las destrezas necesarias para realizar separaciones

cromatogrficas al identificar las ventajas del anlisis de varianza (anova).
 MARCO TEORICO
La cromatografa es la tcnica de anlisis qumico utilizada para separar sustancias
puras de mezclas complejas. Fue descubierta por el botnico ruso, de origen
italiano, Mijal Tswett en 1906, pero su uso no se generaliz hasta la dcada de
1930. Tswett separ los pigmentos de las plantas (clorofila) vertiendo extracto de
hojas verdes en ter de petrleo sobre una columna de carbonato de calcio en polvo
en el interior de una probeta. A medida que la disolucin va filtrndose por la
columna, cada componente de la mezcla precipita a diferente velocidad, quedando
la columna marcada por bandas horizontales de colores, denominadas
cromatogramas; cada banda corresponde a un pigmento diferente.

La cromatografa comprende un conjunto de tcnicas que tienen como finalidad la

separacin de mezclas basndose en la diferente capacidad de interaccin de cada
componente en otra sustancia. De forma general, consiste en pasar una fase mvil
(una muestra constituida por una mezcla que contiene el compuesto deseado en el
disolvente) a travs de una fase estacionaria fija slida. La fase estacionaria retrasa
el paso de los componentes de la muestra, de forma que los componentes la
atraviesan a diferentes velocidades y se separan en el tiempo. Cada uno de los
componentes de la mezcla presenta un tiempo caracterstico de paso por el sistema,
denominado tiempo de retencin. Cuando el tiempo de retencin del compuesto
deseado difiere del de los otros componentes de la mezcla, ste se puede separar
mediante la separacin cromatografica.

En la cromatografa en papel, una muestra lquida fluye por una tira vertical de papel
adsorbente, sobre la cual se van depositando los componentes en lugares
especficos. El uso de la cromatografa est ampliamente extendido en el anlisis
de alimentos, medicinas, sangre, productos petrolferos y de fisin radiactiva.
El factor de retencin, Rf, para un producto qumico durante la cromatografa en
papel es una medida de hasta qu punto se mueve hacia arriba la placa en
respuesta al movimiento del disolvente. Puesto que el movimiento absoluto de la
sustancia qumica depende de hasta qu punto se le permite viajar al disolvente, los
valores de factores de retencin se calculan en relacin con el grado de movimiento
disolvente.
El Rf se calcula de la siguiente manera:

= =
distancia recorrida por la fase mvil
Cuando se desea hacer referencia a la relacin entre el tamao de la media y la
variabilidad de la variable, se utiliza el coeficiente de variacin y se halla de la
siguiente manera:

= 100% = 100%

El anlisis de varianza comnmente conocido como Anova, por las iniciales que se
obtienen del nombre en ingls (analysis of variance) se fundamenta en el estudio
de las varianzas. Como establece diferencia entre las medias poblaciones; es un
mtodo matico creado para probar la hiptesis de que las medias aritmticas de
ms de 2 grupos poblacionales son iguales.
El anlisis de varianza (ANOVA) de un factor nos sirve para comparar varios grupos
en una variable cuantitativa. Esta prueba es una generalizacin del contraste de
igualdad de medias para dos muestras independientes. Se aplica para contrastar la
igualdad de medias de tres o ms poblaciones independientes y con distribucin
normal. Supuestas n poblaciones independientes, las hiptesis del contraste son
siguientes:

1. H0: 1=2==k Las medias poblacionales son iguales

2. H1: Al menos dos medias poblacionales son distintas

Para realizar el contraste ANOVA, se requieren n muestras independientes de la

variable de inters. Una variable de agrupacin denominada Factor y clasifica las
observaciones de la variable en las distintas muestras.
Para saber si la hiptesis es nula utilizamos la estimacin entre muestras y dentro
de muestras:
Entre muestras

( )2
2 =
( 1)

Dentro de muestras

)2
(
2 =
( 1)

Suponiendo que la hiptesis nula es cierta, el estadstico utilizado en el anlisis de
varianza sigue una distribucin F de Fisher-Snedecor con h-1 y n-h grados de
libertad, siendo n el nmero de muestras y n el nmero total de observaciones que
participan en el estudio.

Formula de tukey

MATERIALES REACTIVOS
1. Zanahoria 1. Heptano
2. Rayador 2. Metanol
3. Colador 3. Vinagre
4. Mortero 4. Agua
5. Papel filtro
6. Vasos desechables
7. Capilares

PROCEDIMIENTO
Se toma la zanahoria y se raya en trozos muy finos, los cuales se introducen en el
mortero y con la ayuda de este se macera para obtener el extracto de este vegetal.
En un vaso se prepara la mezcla solvente que est compuesta por heptano-
metanol-agua (4:2:1) mL.
Despus se corta el papel filtro en 15 tiras de 2cm x 10cm para facilitar la
observacin de la cromatografa. Con ayuda de un capilar se toma el extracto de
zanahoria y este se aplica 10 veces a cada una de las tiras ya cortadas, as
concentrar la muestra para obtener mayor efectividad en la separacin de la
muestra.
Se elaborar tres niveles diferentes. El nivel A constituido por mezcla solvente
vinagre (3:1) mL, el nivel B por mezcla solvente vinagre (1:4) mL y el nivel C por
mezcla solvente vinagre (4:1) mL. En cada nivel se incluyen cinco tiras de papel
filtro ya concentradas y se observa despus de un determinado tiempo el efecto de
la solucin en el extracto de zanahoria.
Se toman datos, se registran y se analizan.
 RESULTADOS Y ANALISIS
La variable tiene efecto sobre la separacin cromatografa de los pigmentos
de la zanahoria?
Si, como se puede observar en los resultados de cada nivel, con una concentracin
distinta y los mismos reactivos. Hay diferencias honestamente significativas
aplicando la prueba de tukey entre los 3 niveles: A, B, C. Y como en los clculos, el
F que calculamos es mayor que el F critico de las tablas. Por tanto la hiptesis nula
(Ho) es falsa, la cual dice que las medias de los niveles son iguales y por tanto se
establece una hiptesis alternativa (H1) la cual nos dice que en al menos un nivel la
media de la variacin de la acidez difiere de las dems con un 95% de probabilidad.

Cules son las condiciones que produjeron la mejor separacin?

Como el resultado en donde hay una mejor separacin, es donde el valor absoluto
de las diferencias de los grupos sea grande, entonces hubo una separacin mucho
mayor en el nivel A en comparacin con el nivel B y esto de comprueba no solo en
los clculos en donde aplicamos la prueba de tukey para saber las diferencias
honestamente significativas entre los datos y se encontr que si haba diferencias
entre los niveles, sino tambin en la evidencia fotogrfica donde se encuentra la
separacin de los pigmentos de la zanahoria en el papel filtro. Y en ella se observa
que el papel filtro del nivel A se separ mucho ms eficiente que el mtodo B el
cual no se present una separacin de los pigmentos. Le seguira que la 2 mejor
separacin fue en el Nivel C que el B, pues el B no se present la separacin. En
cuanto al nivel A y C hubo una mejor separacin en el nivel A que en el nivel C pero
la diferencia entre la mejor separacin es pequea ya que puedo haber acabado
unos de los reactivos ms rpido (mezcla sln-vinagre), en otras palabras no habra
un equilibrio entre la relacin de la concentracin de la solucin y el vinagre para
que posiblemente en C separa ms los pigmentos de zanahoria, adems del posible
error de haber utilizado un papel filtro distinto en los nivel C.

Qumicamente se puede explicar del porque en cierta concentracin se obtuvo una

mayor separacin de la pigmentacin de la zanahoria. Se basa en el hecho de que
la zanahoria contiene carotenoides los cuales son un grupo numerosos de
pigmentos responsables de la coloracin de la zanahoria, los cuales a su vez
pertenecen a la clase de los polienos (compuesto orgnico que tiene ms de 2
enlaces dobles). Adems que los carotenoides se dividen en carotenos que son
hidrocarburos y las xantofilas que son sus derivados oxigenados. En el caso de la
zanahoria esta presenta una mayor cantidad de carotenos que de xantofilas. Los
carotenos son muy solubles en lpidos o solventes como hexano que fue uno de los
componentes de nuestra mezcla sln y ter de petrleo. Como son insaturados
poseen una estructura que est sujeta a numerosos cambios qumicos inducidos en
las condiciones de proceso ya que a medida que se saturan las cadenas dobles y
finalmente se rompen el color caracterstico desaparece.
 CONCLUSIONES
Despus de hacer la prctica se debi hallar el coeficiente de variacin para
saber si haba sido eficiente el procedimiento, el cual deba dar menos del
10% de error y as continuar con los dems clculos.

En las grficas hechas en Excel, se puede observar que no se hall un dato

anmalo que interfiera con los datos obtenidos en cada nivel.

Al tener una acidez dbil en la zanahoria esta no produjo gran cambio cuando
se introdujo en el nivel B, puesto que esta tena mayor cantidad de vinagre
(acidez fuerte); en cambio en el nivel A y C se not la diferencia debido a que
haba ms mezcla de solvente.

Al observar el anlisis de varianza realizado en Excel y al comparar el F

umbral hallado con el F crtico, se infiere que la hiptesis nula es falsa por el
hecho de que el F umbral es mayor que el F crtico, lo que da a entender que
las medias de los grupos difieren significativamente, lo cual se establece una
hiptesis alternativa con la prueba de Tukey, que impone las diferencias
honestamente significativas de las medias de cada grupo, y as encontrar en
que grupos se manifiestan.

BIBLIOGRAFIA
MILLER JAMES N. Estadstica y quimiometra para qumica analtica. 4
edicin.

http://es.scribd.com/doc/16675104/7-EXTRACCION-Y-SEPARACION-DE-
CAROTENOS-DE-LA-ZANAHORIA#scribd (Consultado 09/07/15)

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http://laboratoriosdequimicaorganica.bligoo.es/cromatografia-en-
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http://www.uv.es/innomide/spss/SPSS/SPSS_0702b.pdf (Consultado
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