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VITAE, REVISTA DE LA FACULTAD DE QUMICA FARMACUTICA

ISSN 0121-4004 Volumen 15 nmero 1, ao 2008.


Universidad de Antioquia, Medelln, Colombia. pgs. 123-131

DETERMINACIN DE LAS CONDICIONES DE


MICROENCAPSULACIN DE UN BACULOVIRUS
ENTOMOPATGENO MEDIANTE COACERVACIN
CON EUDRAGIT S100
DETERMINATION OF THE BASIC CONDITIONS FOR MICROENCAPSULATION
OF AN ENTHOMOPATHOGENIC BACULOVIRUS BY MEANS OF COACERVATION
USING EUDRAGIT S100

Laura F. VILLAMIZAR R. 1, Fleming MARTNEZ R.2*

Recibido: Noviembre 19 de 2007 Aceptado: Marzo 18 de 2008

RESUMEN
La microencapsulacin por coacervacin consiste en el recubrimiento de micropartculas con una pelcula
polimrica, la cual es obtenida por la precipitacin del material polimrico disuelto en el medio dispersante.
El presente trabajo pretende estudiar la coacervacin con el copolmero del cido metacrlico Eudragit
S100 y su uso potencial para el desarrollo de microcpsulas de un baculovirus entomopatgeno del
gusano cogollero del maz, Spodoptera frugiperda. Se estudia la solubilidad del polmero en 16 solventes
orgnicos y la compatibilidad de stos con el principio activo (baculovirus). Teniendo en cuenta los
solventes compatibles se seleccionan parejas de solventes-no-solventes con las que se evalan cuatro
relaciones de volumen, tres concentraciones de polmero y cuatro velocidades de adicin de los no-
solventes. Se seleccionan las parejas: etanol-heptano, etanol-hexano, acetona-heptano y acetona-hexano,
como concentracin de polmero 0,50 % p/v y como relacin de volmenes 1:3, por presentarse la aparente
formacin de una fase de coacervado. El sistema consistente en acetona-hexano a una velocidad de 1,0
mL/min, es seleccionado como el ms promisorio por producir una separacin lenta del polmero y el
depsito uniforme de ste sobre el baln, comportamiento que podra permitir la microencapsulacin
del ncleo requerido.
Palabras clave: Eudragit S100, coacervacin, microencapsulacin, baculovirus, Spodoptera frugiperda

ABSTRACT
Microencapsulation by coacervation consists in the coating of microparticles by depositing a polymeric
film on them. This process is carried out by the precipitation of the polymer dissolved in the dispersing
medium. The present work pretends to study the coacervation of a methacrylic acid copolymer (Eudragit
S100) and their potential use in the development of microcapsules containing an entomopathogen
baculovirus of corn armyworm Spodoptera frugiperda. The polymer solubility in 16 solvents, as well
as the compatibility of them with the baculovirus is studied. By considering the compatible solvents,

1 Laboratorio de Control Biolgico, Centro de Biotecnologa y Bioindustria, Corpoica, Tibaitat, Cundinamarca


2 Grupo de Investigaciones Farmacutico-Fisicoqumicas, Departamento de Farmacia, Facultad de Ciencias, Universidad Nacional de
Colombia, Bogot D.C., A.A. 14490.
* Autor a quien se debe dirigir la correspondencia: fmartinezr@unal.edu.co
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several couples of SolventNon-Solvent are selected, with which four volume ratios, three polymer
concentrations, and four Non-Solvent addition velocities are evaluate. The couples Ethanol-Heptane,
Ethanol-Hexane, Acetone-Heptane, and Acetone-Hexane are chosen. The values 0.50 % w/v and 1:3 are
chosen as polymer concentration and volumes ratio respectively, because they show the apparent formation
of a coacervate phase. Finally, the system Acetone-Hexane with velocity 1.0 mL/min is chosen as the
most promissory because this system produces a slow polymer separation and therefore, the formation
of a uniform film inside the balloon. These behaviors could allow the nucleus microencapsulation.
Keywords: Eudragit S100, Coacervation, Microencapsulation, Baculovirus, Spodoptera frugiperda

INTRODUCCION Las estrategias para inducir la coacervacin


dependen principalmente de las caractersticas
La microencapsulacin es un proceso de recubri- fisicoqumicas del polmero y del ncleo a re-
miento de sustancias slidas, lquidas o gaseosas con cubrir. La coacervacin puede ser inducida por
diferentes materiales, con miras a obtener partculas la adicin de un no-solvente; mtodo en el cual,
slidas de tamao micromtrico. Los productos la separacin de fases es inducida por la adicin
resultantes de este proceso tecnolgico reciben el lenta de un no-solvente sobre una solucin del
nombre de micropartculas, microcpsulas o polmero formador de cubierta, la cual contiene
microesferas, las cuales se diferencian en su forma suspendido el material que va a encapsularse. Se
y estructura interna; sin embargo, todas presentan entiende por no-solvente aquel disolvente que
como caracterstica comn el poseer un tamao de es miscible con el disolvente del polmero y en el
partcula inferior a 1,0 mm (1). cual el polmero es insoluble. A medida que se adi-
La microencapsulacin es ampliamente utilizada ciona el no-solvente se provoca la insolubilizacin
en el rea farmacutica y tambin en otros campos del polmero, el cual, a su vez, se va depositando
industriales, tales como el cosmtico y el alimenta- alrededor de las partculas presentes en suspensin.
rio (2). De forma similar, esta tecnologa ha incur- Al final del proceso, se aade un volumen elevado
sionado en los ltimos aos en campos tan diversos del no-solvente con la finalidad de endurecer las
como la agroqumica, para reducir la contaminacin microcpsulas (6).
ambiental generada por los plaguicidas, ya que al Los Eudragit son un grupo de polmeros deri-
encapsular los ingredientes activos de estos produc- vados del cido metacrlico, que estn disponibles
tos se puede controlar su liberacin, aumentando en diferentes formas inicas (6). La solubilidad del
as su eficacia y persistencia, y adems, reduciendo Eudragit S100 es pH-dependiente, siendo alta-
las cantidades liberadas al ambiente (3). Para fines mente soluble a valores de pH alcalino, debido a
prcticos, los mtodos de microencapsulacin se la neutralizacin de los grupos carboxilo (Figura
clasifican en tres grupos, esto es, fsicos, qumicos 1) con la respectiva formacin de la sal (7), y por
y fisicoqumicos (4). Dentro de los mtodos fisico- lo tanto, exhibiendo el carcter de polielectrolito
qumicos se destaca la coacervacin, definida como aninico en solucin.
la separacin de un coloide muy solvatado en dos
fases lquidas, una de las cuales contiene una alta
proporcin de coloide (capa de coacervado) y la otra,
una baja proporcin (1). De otro lado, si hay partcu-
las slidas insolubles, o gotas de lquido inmiscibles
suspendidas en el medio, las gotas de coacervado
formadas pueden ser adsorbidas en la superficie de
las partculas dispersadas. Cuando el coacervado Figura 1. Estructura molecular de las unidades de
se deposita en la superficie, envuelve el ncleo con repeticin del Eudragit S100 con m = 1 y n = 2.
una pelcula fluida y viscosa del polmero (micro- Diferentes tipos de Eudragit han sido amplia-
encapsulacin). La pelcula fluida es posteriormente mente utilizados en la elaboracin de micropar-
endurecida y solidificada para formar una cpsula tculas que permiten la liberacin de principios
dura alrededor del ncleo (5). activos a nivel intestinal, evitando la inactivacin
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de frmacos en el estmago, por ejemplo, en la El contenido de cada pozo se utiliz para evaluar
preparacin de micropartculas que permiten la la actividad viral mediante un bioensayo siguiendo
administracin oral de pptidos y protenas (5); la metodologa descrita por Tmez et al. (9). El trata-
stas, en particular, han generado un gran inters miento testigo positivo consisti en virus purificado
para el desarrollo de sistemas de administracin no expuesto a ningn solvente y se cont con un
oral de insulina (8). testigo absoluto en el que las larvas no recibieron
El presente trabajo pretendi determinar algunas ningn tratamiento.
condiciones tiles para el desarrollo de una tcnica El diseo experimental se hizo completamente
de microencapsulacin de un baculovirus entomo- al azar. Los resultados de mortalidad al da 7 fue-
patgeno del gusano cogollero del maz Spodoptera ron corregidos con respecto al testigo, utilizando
frugiperda, mediante la coacervacin con el copol- la frmula de Schneider-Orelli (10), sometidos a
mero del cido metacrlico Eudragit S100. un anlisis de varianza (ANAVA) y a una prueba
de comparacin de medias de Tukey con una
MATERIALES Y MTODOS confiabilidad del 95 % (11).
Comportamiento del Eudragit S100 frente
Materiales a diferentes solventes orgnicos
En esta investigacin se utilizaron Eudragit Se pesaron 0,050 g de polmero y se adiciona-
S100 de Rhm GmbH; dimetilsulfxido R.A., ron en tres tubos de ensayo con 6,0 mL de cada
butanol R.A. y tolueno R.A. (Sigma); etanol R.A., uno de los 16 solventes. Los tubos de ensayo tapa-
heptano R.A., etilenglicol R.A. (Merck); acetona rosca con los diferentes tratamientos se taparon y
R.A., xileno R.A., n-hexano R.A., cloruro de me- se ubicaron en una gradilla sumergida en un
tileno R.A. y alcohol i-amlico R.A. (J.T. Baker); bao termostatado Linderberg/blue SWB1122A
metanol R.A. (Mallinckrodt); cloroformo R.A. (22,0 1,0 C). Pasados 10 minutos los tubos
(Chemicol); benceno R.A. (RPE); n-propanol R.A. se agitaron mediante inversiones manuales y se
(Fisher); dietilter R.A. (Proanalysis). observ el comportamiento de la dispersin, ade-
ms se ley la absorbancia de cada muestra en un
Determinacin de la compatibilidad del espectrofotmetro Milton Roy Spectronic 601, a
virus con solventes orgnicos una longitud de onda de 650 nm (12). Los solventes
Con miras a seleccionar solventes orgnicos que que slo produjeron el hinchamiento del polmero
no afectaran la actividad del virus y que pudieran fueron clasificados como no-solventes. As mis-
ser utilizados en el proceso de microencapsulacin, mo, se consideraron no-solventes, aquellos con
se realiz un estudio de compatibilidad. Para tal fin, los que se obtuvo una absorbancia superior a 0,010,
muestras de 0,010 g del virus purificado liofilizado as como todos aquellos con los que se obtuvo una
fueron dispensadas en 16 tubos Eppendorf de 500 L. absorbancia inferior a 0,010, pero en los cuales se
En cada tubo se adicionaron 20 L de cada solvente observaron slidos en suspensin.
y se agitaron mediante inversin manual durante 30
Determinacin de la concentracin del pol-
minutos a una temperatura de a 20,0 1,0 C. Pos-
mero y de la relacin solventeno-solvente
teriormente, los tubos fueron centrifugados en una
microcentrfuga Eppendorf Centrfuga 5415 a 14000 Se evaluaron las diferentes parejas de solven-
rpm durante 30 minutos. El sobrenadante se elimin te-no-solvente determinadas previamente utili-
y el sedimento correspondiente a las partculas virales zando diferentes concentraciones del polmero y
fue lavado dos veces con 500 L de agua destilada relaciones de solventes (13). Las concentraciones
estril. El sedimento fue resuspendido en 50 L de de polmero evaluadas fueron 0,25, 0,50 y 0,75
agua y a partir de dicha suspensin viral se prepar %, combinadas con las relaciones de solvente-
una suspensin ajustada a una concentracin de no-solvente: 1:1, 1:2, 1:3 y 1:4 respectivamente,
1 x 1010 cuerpos de inclusin por mL. Se colocaron 10 obtenindose as un total de 12 tratamientos para
L de cada suspensin viral en uno de los pozos de cada pareja de solventes.
una microplaca de 96 pozos de fondo plano, adicio- La dispersin del polmero en el solvente
nando a cada pozo 10 L de una solucin de sacarosa correspondiente a cada tratamiento se adicion
al 4,0 % y colorante azul de alimentos al 1,0 %. en un baln de fondo redondo con un agitador
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magntico de 1 cm de longitud. El baln se ubi- no presentaron cambio en su coloracin parda y


c sobre una plancha magntica Velp Scientifica turbia original (la cual se debe a las partculas virales
F20540162 con una velocidad de agitacin de 200 en suspensin), lo que fue confirmado mediante
rpm. El no-solvente fue adicionado por goteo a una observacin en el microscopio de luz (400X). Para
velocidad de 3,0 mL/min utilizando una bomba todos los tratamientos se observ que los cuerpos
peristltica Watson Murlow 5058. Durante todo de inclusin se mantuvieron en suspensin despus
el tiempo de adicin del no-solvente se registraron de los 30 minutos de exposicin a cada solvente, sin
cualitativamente los cambios en el aspecto de la evidenciarse cambios significativos en su tamao
dispersin coloidal. y morfologa. Dicha cubierta, posiblemente evit
el contacto directo de los viriones constituidos
Determinacin de la velocidad de adicin
por la nucleocpside y el ADN con los solventes,
del no-solvente
protegindolos de cualquier efecto detrimental de
Se evaluaron cuatro velocidades de adicin stos sobre las unidades infectivas. As como lo re-
del no-solvente, esto es, 1,0 mL/min, 3,0 mL/min, portaron Moraes et al (14) y Caballero et al (15), los
5,0 mL/min y 8,0 mL/min. Para tal fin se prepararon CIs brindan proteccin a los viriones, debido a que
10 mL de solucin del polmero a la concentracin son insolubles en agua, excepto bajo condiciones
escogida, en el solvente seleccionado, en un baln extremadamente alcalinas, y resistentes a la putre-
de fondo redondo con agitacin magntica a 200 faccin y desintegracin por agentes qumicos, y
rpm. Se adicion por goteo el no-solvente seleccio- tambin a tratamientos fsicos como la congelacin,
nado, utilizando diferentes velocidades de adicin la desecacin o la liofilizacin, caractersticas que
segn el tratamiento, hasta obtener la relacin de les confieren persistencia en el medio.
solventeno-solvente determinada previamente. Los baculovirus son muy estables desde el punto
Durante todo el tiempo de adicin del no-solvente de vista fisicoqumico debido a la presencia y com-
se registraron cualitativamente los cambios en el posicin del CI. Otros virus tambin han demostra-
aspecto de la dispersin coloidal. do ser estables frente a compuestos orgnicos; ste
es el caso de los rotavirus, los cuales son funcionales
RESULTADOS Y DISCUSIN en un rango de pH entre 3 y 9 y las partculas virales
son estables por meses a temperaturas cercanas a los
Determinacin de la compatibilidad del 40 C y an a 200 C en condiciones particulares.
virus con solventes orgnicos La partcula completa mantiene su integridad y
La exposicin de las partculas virales a los 16 su infectividad cuando es tratada con diferentes
solventes orgnicos evaluados no afect su acti- solventes orgnicos tales como ter, cloroformo
vidad biocontroladora sobre larvas neonatas de o fren, lo que refleja la ausencia de lpidos en su
S. frugiperda. Con el virus expuesto a los solven- estructura. Pero pierde su infectividad al ser trata-
tes, as como con el virus no expuesto, se alcanz da con desinfectantes tales como formalina, cloro,
el 100 % de mortalidad de las larvas a los 8 das betapropiolactona y etanol al 95 %, quizs por la
post-inoculacin, y la prueba de comparacin de prdida de la capa externa (16, 17). Por el contrario,
medias de Tukey (P > 0,05) no detect diferencias virus como el de la rabia, que pertenece a la familia
significativas entre los porcentajes de eficacia pre- Rhabdoviridae, son rpidamente inactivados por el
sentados por dichos tratamientos. calor, los rayos ultravioleta, la desecacin, los sol-
Este resultado sugiere que el virus es compatible ventes orgnicos y la tripsina (18).
con los solventes evaluados y, por lo tanto, todos Comportamiento del Eudragit S100 frente
podran ser utilizados en el desarrollo de una tcnica a diferentes solventes orgnicos
de microencapsulacin por coacervacin. Dicha
compatibilidad podra deberse a que los baculo- Cuando el polmero fue adicionado sobre los
virus son virus ocluidos que presentan viriones solventes etanol, metanol, n-propanol, acetona y di-
embebidos en una matriz cristalina proteica, del metilsulfxido, las partculas slidas se depositaron
tipo poliedro, que constituye el conocido cuerpo en el fondo del tubo. Sin embargo, al realizarse la
de inclusin (CI). Esta cubierta proteica no fue agitacin del sistema, las partculas se redispersa-
en ningn caso solubilizada por los compuestos ron y desaparecieron rpidamente formando una
orgnicos. Esto se evidenci porque las muestras solucin blanca conocida como lechada, que se
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torn totalmente transparente (absorbancia < 0,01), por lo que se consider que el polmero fue soluble
en dichos solventes (Tabla 1).
Tabla 1. Valores de absorbancia del Eudragit S100 en diferentes disolventes orgnicos
Solvente Id. Rplica 1 Rplica 2 Rplica 3 Promedio Desv. Est.
Cloroformo 1 0,613 0,622 0,599 0,611 0,011
Tolueno 2 0,008 0,009 0,006 0,008 0,001
Benceno 3 0,009 0,005 0,006 0,007 0,002
Heptano 4 0,294 0,288 0,29 0,291 0,003
n-Hexano 5 0,129 0,136 0,148 0,138 0,009
Butanol 6 0,531 0,503 0,542 0,525 0,020
Etilenglicol 7 0,079 0,088 0,093 0,087 0,007
ter dietlico 8 0,344 0,367 0,357 0,356 0,011
Alcohol isoamlico 9 0,420 0,467 0,423 0,437 0,026
Cloruro de metileno 10 0,091 0,096 0,071 0,086 0,013
Xileno 11 0,004 0,002 0,002 0,003 0,001
Metanol 12 0,002 0,000 0,002 0,001 0,001
Etanol 13 0,006 0,002 0,003 0,004 0,002
Acetona 14 0,000 0,000 0,001 0,000 0,000
Dimetilsulfxido 15 0,006 0,003 0,006 0,005 0,001
Propanol 16 0,032 0,042 0,039 0,038 0,005

La disolucin de un polmero es un proceso lento 0,010. Sin embargo, sobre las paredes de los tubos se
que puede tener lugar si las fuerzas intermoleculares observ una capa de partculas slidas transparentes,
polmero-polmero son superadas por las fuerzas de correspondientes al polmero con cierto grado de
interaccin polmerosolvente (19). Se considera que hinchamiento y no se produjo lechada, lo que indica
la disolucion de un polmero puede llevarse a cabo que dichos solventes iniciaron la solvatacin, pero
por dos mecanismos, dependiendo de factores como posiblemente requieren ms tiempo para disolver
el peso molecular del mismo, el solvente empleado y al Eudragit S100 y, por lo tanto, para alcanzar el
la temperatura, entre otros (20). El comportamiento equilibrio; por esta razn, stos ltimos se podran
observado con los solventes etanol, metanol, n-pro- considerar como solventes pobres. El compor-
panol, acetona y dimetilsulfxido podra deberse a un tamiento observado con estos solventes se puede
mecanismo de disolucin denominado de rajado atribuir a un segundo mecanismo de disolucin, en
o agrietado (cracking mechanism, en ingls), en el cual el solvente posiblemente tiene que difundir
el cual no se produce el hinchamiento del polmero. dentro del polmero, produciendo el hinchamiento
ste se agrieta rpidamente cuando las partculas del mismo en la interfase, lo que se detect como una
entran en contacto con solventes molecularmente pe- capa con aspecto de gel, mecanismo que se desarrolla
queos y muy buenos solventes para el polmero. Su principalmente con solventes pobres (20). Con el
alta velocidad de difusin y poder de hinchamiento transcurso del tiempo, posiblemente una cantidad
causan un rpido aumento en la presin interna del mayor de solvente podra haber penetrado en el
polmero, de manera que ste se fractura antes de que polmero aumentando la fase de hinchamiento hasta
la matriz pueda relajarse mediante el hinchamiento alcanzar la completa disolucin, pero este efecto no
gradual (21). Dicho agrietamiento y rompimiento fue detectado ya que la evaluacin cualitativa y la
catico de las partculas podra estar relacionado con medida de la absorbancia se realizaron nicamente
el cambio en el color del sistema antes de alcanzarse a los 10 minutos despus de montado el sistema.
el equilibrio o completa disolucin. Estas diferencias en los mecanismos de diso-
Con benceno, tolueno y xileno, las partculas de lucin de los polmeros estn relacionadas con el
polmero desaparecieron al entrar en contacto con tamao de las molculas de solvente, como lo sugi-
los solventes y la absorbancia obtenida fue menor a rieron Papanau et al (22), quienes encontraron que
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la velocidad de disolucin de un polmero del cido categoras para los posibles cambios en el sistema,
metacrlico, disminuy a medida que aument algunos de los cuales presentaron respuestas com-
el tamao molecular del solvente, posiblemente binadas: [SC] -Sin cambio: el sistema se mantuvo
porque a mayor tamao se tiene una menor veloci- homogneo y traslcido, sin cambio de color ni
dad de difusin del solvente dentro del polmero. aparicin de slidos; [L] -Lechoso: el sistema se
Con los solventes restantes (heptano, butanol, torn blanco lechoso y no se observan slidos en
cloroformo, ter dietlico, alcohol i-amlico cloruro suspensin; [P] -Precipitado: aparicin de polmero
de metileno y hexano) el polmero se sediment en el precipitado, que se ubic en una zona especfica
fondo del tubo en forma de partculas redispersables formando agregados, masas o hebras blancas de
mediante agitacin pero sin presentar disolucin y tamao variable, y finalmente, [D] -Depsito: el
se obtuvieron absorbancias de 0,290; 0,520; 0,610; polmero se deposit sobre las paredes del baln
0,350; 0,430; 0,090 y 0,140 respectivamente (Tabla formando una pelcula viscosa y traslcida.
1), que indican que el polmero no fue soluble en Independientemente del solvente evaluado, de la
estos compuestos. concentracin de polmero o de la relacin de sol-
Con base en los resultados, y teniendo en cuen- ventes, no se observ ningn cambio en la aparien-
ta que para la induccin de la coacervacin por el cia del sistema cuando el no-solvente adicionado fue
mtodo de adicin de un no-solvente se requiere el cloruro de metileno (Tabla 2). La no induccin
que la pareja de solventes sean totalmente miscibles de la separacin del polmero por la adicin de este
entre s, se seleccionaron como parejas solven- solvente podra sugerir que la acetona, el metanol y
teno-solvente: etanol-heptano, etanol-hexano, el etanol son tan buenos solventes para el Eudragit
etanol-butanol, etanol-cloruro de metileno, ace- S100 que requeriran una mayor adicin de cloruro
tona-heptano, acetona-hexano, acetona-butanol, de metileno para que el polmero se desolvate. Lo
acetona-cloruro de metileno, metanol-butanol y anterior tambin sugiere que el polmero podra
metanol-cloruro de metileno. presentar una mejor solubilidad en este solvente, la
cual posiblemente no se evidenci en el ensayo de
Determinacin de la concentracin del pol- solubilidad en solventes orgnicos realizado en el
mero y de la relacin solventeno-solvente presente trabajo, debido al corto tiempo de evalua-
Con el propsito de seleccionar un sistema que cin, o porque la solubilidad del polmero en este
permitiera la formacin de una fase de coacervado solvente es inferior a las concentraciones aparentes
con potencial para el recubrimiento de las partculas evaluadas en dicho ensayo. Tambin se ha demos-
virales, se evalu cualitativamente el comporta- trado que la adicin de una cantidad de no-solvente
miento de la solucin polimrica variando las pa- a un buen solvente, da como resultado un aumento
rejas solventeno-solvente, la relacin de volumen significativo de la solubilidad de algunos polmeros
entre los solventes, y el porcentaje de polmero. y, por lo tanto, no conduce a su precipitacin, debido
Considerando que el resultado obtenido es de a un efecto de plastificacin, como lo reportaron
carcter cualitativo, se definieron las siguientes Cooper et al (23) para el polimetil-metacrilato.
Tabla 2. Comportamiento del polmero utilizando diferentes parejas solventeno-solvente y relaciones de
volumen entre estos. [SC] Sin cambio, [L] Lechoso, [P] Precipitado, [D] Depsito.
Polmero 0,25 % Polmero 0,50 % Polmero 0,75 %
Solvente No-solvente
1:1 1:2 1:3 1:4 1:1 1:2 1:3 1:4 1:1 1:2 1:3 1:4
Butanol SC SC SC SC SC SC SC D SC SC SC D
Metanol
Cloruro de Metileno SC SC SC SC SC SC SC SC SC SC SC SC
Butanol SC SC SC SC SC SC SC D SC SC SC D
Hexano L L L L L L L, D L, D L L L, P P
Etanol
Heptano L L L L L L L, P P L P P P
Cloruro de Metileno SC SC SC SC SC SC SC SC SC SC SC SC
Butanol SC SC SC SC SC SC SC SC SC SC SC SC
Hexano L L L L L L L, D L, D L L D D
Acetona
Heptano L L L L L L L, D L, D L L L D
Cloruro de Metileno SC SC SC SC SC SC SC SC SC SC SC SC
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El butanol slo produjo, como respuesta, la Este mismo comportamiento se present con
formacin de una capa translcida y pegajosa en el la pareja de solventes etanol-heptano cuando la
fondo del baln, cuando se alcanz la relacin de concentracin de polmero fue 0,50 % y la rela-
solventes 1:4 con los solventes metanol y etanol, sin cin de solventes 1:3, y cuando la concentracin
observarse previamente un cambio en la coloracin de polmero fue 0,75 % para las relaciones de
del medio. solventes 1:2, 1:3 y 1:4.
Respecto a las parejas etanol-heptano, etanol- Se seleccionaron las parejas solventeno-sol-
hexano, acetona-heptano y acetona-hexano se vente: etanol-heptano, etanol-hexano, acetona-
encontr que antes de alcanzarse la relacin de heptano y acetona-hexano, como concentracin
solventeno-solvente 1:1, los sistemas presenta- de polmero 0,50 % y como relacin de volmenes
ron un cambio en su coloracin, observndose 1:3, por presentarse con estos tratamientos la
stos totalmente homogneos y de color blanco aparente formacin de una fase rica en polmero
lechoso, lo que indic el inicio de la desolvatacin (que se distingui por el color blanco), sin pro-
del Eudragit S100 . ducirse precipitacin, como se observ con el
Con la pareja etanol-hexano se observ la polmero al 0,75 % o con la relacin de solventes
formacin de agregados (precipitado) cuando 1:4 (Figura 2). Con estos tratamientos se procedi
el polmero se utiliz a la mayor concentracin a evaluar diferentes velocidades de adicin del
(0,75 %) y se alcanz la relacin de solventes 1:4. no-solvente.

Figura 2. Comportamiento de los sistemas solventeno-solvente. Polmero al 0,25 %: A. acetona-hexano,


B. etanol-hexano, C. etanol-heptano, D. etanol-butanol, E. tolueno-heptano. Con polmero al 0,50 %: F. acetona-
hexano, G. etanol-heptano, H. etanol-hexano, I. metanol-cloruro de metileno. Polmero al 0,75 %: J. acetona-heptano,
K. acetona-hexano, L. etanol-hexano, M. etanol-heptano.

Determinacin de la velocidad de adicin del rpida, producindose una precipitacin que dio
no-solvente origen a la formacin de agregados densos de un
Para todos los tratamientos evaluados, a me- tamao cercano a 3 mm.
dida que la velocidad de adicin del no-solvente Cuando se utiliz la menor velocidad (1,0 mL/min)
aument, la separacin del polmero fue ms el sistema inicialmente se torn lechoso para todos
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los tratamientos, lo que indica la formacin de una polmero, los cuales se precipitaron al fondo del
fase rica en polmero, que se mantuvo en equilibrio baln y aumentaron a medida que se sigui adi-
hasta llegar a una relacin solventeno-solvente cionando el no-solvente, hasta alcanzar la relacin
1:2, momento en el que se observ para el sistema 1:3 (Tabla 3).
etanol-heptano, la aparicin de hilos delgados de

Tabla 3. Respuesta observada al evaluar diferentes velocidades de adicin del no-solvente. [SC] Sin cambio, [L]
Lechoso, [P] Precipitado, [D] Depsito.

Velocidad de adicin del Relacin de volmenes de SolventeNo-solvente


Solvente No-solvente
No-solvente (mL/min)
1:1 1:2 1:3
1 L L D

3 L L L, D
n-Hexano
5 L L, P P

8 L P P
Etanol
1 L P P

3 L L L, P
Heptano
5 L P P

8 L P P

1 L L L, D

3 L L L, D
n-Hexano
5 L L L, D

8 L P P
Acetona
1 L L L, D

3 L L L, D
Heptano
5 L L L, D

8 L P P

En el caso de los tratamientos con acetona, los eficiente, que permita disponer del virus (principio
sistemas se mantuvieron lechosos sin observarse activo) requerido para el desarrollo de los ensayos
precipitacin hasta alcanzar la relacin de vol- de microencapsulacin con Eudragit S100, utili-
menes 1:3. Sin embargo, al desechar el contenido zando los diferentes parmetros determinados en
del baln para los dos no-solventes evaluados se este estudio.
observ que una cierta proporcin del polmero
se deposit sobre la superficie del baln formando CONCLUSIONES
una fina pelcula translcida. A partir de estos re-
sultados se seleccion el sistema acetona-hexano El presente trabajo permiti establecer algunas
con la velocidad 1,0 mL/min como el ms adecua- condiciones con potencial para desarrollar un
do, por producir una separacin lenta del polmero sistema de microencapsulacin de un nucleopo-
y, adems, el depsito uniforme de ste sobre el liedrovirus de S. frugiperda con el polmero pH
baln, sin inducir la precipitacin del mismo en dependiente Eudragit S100 mediante el mtodo
forma de agregados. de coacervacin. El sistema seleccionado fue el
Paralelamente al presente trabajo, en el La- siguiente: concentracin de polmero 0,50 %, la
boratorio de Control Biolgico del Centro de pareja de solventes acetona-hexano, la relacin de
Biotecnologa y Bioindustrias de CORPOICA se solventeno-solvente 1:3 y la velocidad de adicin
est desarrollando un sistema de produccin viral 1,0 mL/min.
DETERMINACIN DE LAS CONDICIONES DE MICROENCAPSULACIN DE UN BACULOVIRUS ENTOMOPATGENO ... 131

AGRADECIMIENTOS 9. Tamez P, Zamudio V, Martnez J, Rodrguez C, Tamez R,


Gmez R. Formulaciones granulares de baculovirus en com-
binacin con abrillantadores pticos para su empleo como
Los autores expresan su agradecimiento a la bioinsecticidas. Ciencia UANL 2006; 9(2): 149-156.
DIB de la Universidad Nacional de Colombia por 10. Ciba-Geigy S.A. Manual de Ensayos de Campo. Basilea; 1973.
el apoyo financiero, a Rhm GmbH y Almapal 11. Zar J. Biostatistical Analysis. 4a ed. New Jersey: Prentice Hall;
Colombia por la donacin del polmero, y al La- 1999.
12. Schmitt C, Snchez C, Thomas F, Hardy J. Complex coacervation
boratorio de Control Biolgico de Corpoica (Ti- between -lactoglobulin and acacia gum in aqueous medium.
baitat) por facilitar las instalaciones requeridas Food Hydrocolloids 1999; 13(6): 483-496.
para el desarrollo de esta investigacin. 13. Martn L, Vargas A, Barbosa H, Martnez F. Estudio de las
variables ms relevantes de un proceso de microencapsulacin
por coacervacin utilizando un polmero derivado del cido me-
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