UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA

SELVA
FACULTAD DE RECURSOS NATURALES RENOVABLES
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA EN RECURSOS NATURALES
RENOVABLES

Practica N 05

FISICA DE LA MATERIA VIVA

CURSO : BIOLOGIA

DOCENTE : BIgo. CESAR GOZME SULCA

ALUMNO : OZORIAGA MALPARTIDA, Ricardo

GRUPO : II

MESA : IV

SEMESTRE : II - 2017

TINGO MARA PER

Agosto - 2017
 I. INTRODUCCION

El hombre en su afn de llegar siempre ms lejos en la

investigacin de la naturaleza de lo que los lmites de sus rganos sensoriales le
imponen, hombre ha construido mltiples instrumentos que le han permitido
acceder all donde los sentidos no podan penetrar. El microscopio hizo posible
conocer los mundos de dimensiones nfimas, entre ellos la clula, base de la vida
y por lo tanto poder diferenciar una clula normal de una patolgica El
microscopio es un instrumento fundamental en cualquier laboratorio de anlisis
biolgico, como en los anlisis bioqumicos y microbiolgicos.

En su mayor parte los microorganismos son demasiado pequeos

para observarse a simple vista: protozoos, algas, hongos, bacterias y virus.

Estos microorganismos difieren en caractersticas tales como forma

de nutricin, estructura, tamao, composicin entre otros aspectos; es por ello
que se emplea el estudio microscpico el facilita notablemente la observacin;
principalmente en las bacterias se facilita al tratarlas con colorantes o tintes los
cuales facilitan tambin la observacin de ciertas estructuras celulares.

Los preparados se realizan generalmente con agua destilada,

glicerina o simplemente agua corriente (un medio liquido), la utilidad es simple,
observar alguna estructura u organismo "in vivo. En este informe vamos a
utilizar microscopios y los mtodos de tincin para distinguir la estructura
intracelular de algunos microorganismos.

1.1. Objetivo general:

Conocer el uso y la importancia del microscopio.

Aprender elaborar preparaciones microscpicas.

Aprender a preparar coloraciones microscpicas

1.2. Objetivos especficos:

Aprender a manejar correctamente el microscopio. Hacer

montaje de muestras y observar muestras.

As mismo reconocer las bacterias y otros organismos a

travs de la tincin de los mismos.

Aprender a realizar preparaciones microscpicas con mayor

profesionalidad.
 II. REVISION DE LITERATURA

2.1. El microscopio

HEALEY (1980) Indica que, un microscopio es un dispositivo

encargado de hacer visibles objetos muy pequeos. El microscopio compuesto
consta de dos lentes (o sistemas de lentes) llamados objetivo y ocular. El objetivo
es un sistema de focal pequea que forma una imagen real e invertida del objeto
(situado cerca de su foco) prxima al foco del ocular. ste se encarga de formar
una imagen virtual de la anterior ampliada y situada en un punto en el que el ojo
tenga fcil acomodacin (a 25cm o ms). Dada la reducida dimensin del objeto,
se hace imperioso el recolectar la mayor cantidad de luz del mismo, utilizando
sistemas de concentracin de la energa luminosa sobre el objeto y diseando
sistemas que aprovechen al mximo la luz procedente del objeto.

2.1.1. Partes de un microscopio ptico:

Ocular: lente situada cerca del ojo del observador. Capta y ampla
la imagen formada en los objetivos.

Objetivo: lente situada en el revlver. Ampla la imagen, es un

elemento vital que permite ver a travs de los oculares.

Condensador: lente que concentra los rayos luminosos sobre la

preparacin.

Diafragma: regula la cantidad de luz que llega al condensador.

Foco: dirige los rayos luminosos hacia el condensador.

 Tubo: es la cmara oscura que porta el ocular y los objetivos.
Puede estar unida al brazo mediante una cremallera para permitir el enfoque.

Revlver: Es el sistema que porta los objetivos de diferentes

aumentos, y que rota para poder utilizar uno u otro, alinendolos con el ocular.

Tornillos macro y micromtrico: Son tornillos de enfoque, mueven

la platina o el tubo hacia arriba y hacia abajo. El macro mtrico permite
desplazamientos amplios para un enfoque inicial y los micromtricos
desplazamientos muy cortos, para el enfoque ms preciso. Pueden llevar
incorporado un mando de bloqueo que fija la platina o el tubo a una determinada
altura.

Platina: Es una plataforma horizontal con un orificio central, sobre

el que se coloca la preparacin, que permite el paso de los rayos procedentes
de la fuente de iluminacin situada por debajo. Dos pinzas sirven para retener el
portaobjetos sobre la platina y un sistema de cremallera que permite mover la
preparacin. Puede estar fija o unida al brazo por una cremallera para permitir el
enfoque.

Brazo: Es la estructura que sujeta el tubo, la platina y los tornillos

de enfoque asociados al tubo o a la platina. La unin con la base puede ser
articulada o fija.

Base o pie: Es la parte inferior del microscopio que permite que

ste se mantenga de pie.

2.1.2. Microscopios actualmente:

1. Microscopio ptico
2. Microscopio simple
3. Microscopio de luz ultravioleta
4. Microscopio de fluorescencia
5. Microscopio petrogrfico
6. Microscopio de campo oscuro
 7. Microscopio de contraste de fases
8. Microscopio de luz polarizada
9. Microscopio confocal
10.Microscopio compuesto
11.Microscopio electrnico
12.Microscopio electrnico de transmisin
13.Microscopio electrnico de barrido
14.Microscopio de iones en campo
15.Microscopio de sonda de barrido
16.Microscopio de efecto tnel
17.Microscopio de fuerza atmica
18.Microscopio virtual
19.Estereomicroscopio

2.2. Preparaciones microscpicas:

El estudio requiere del empleo de mtodos de fijacin y conservacin

de los tejidos que detengan los procesos degenerativos postmortem.

Algunos de estos mtodos se conocen hace ms de 3000 aos

(embalsamamiento en Egipto), no obstante, los pasos ms importantes se dieron
luego de la introduccin de la formalina y otras soluciones conservadoras, junto
con la utilizacin de soluciones coloreadas polimerizables en los territorios
vasculares, que favorecieron su uso con fines docentes y de investigacin
(Weiglein, 2002).

Hagens (1979) manifiesta que la conservacin denominada

plastinacin, en el cual el agua y lpidos presentes en las clulas y tejidos
mediante la impregnacin forzada de polmeros curables de silicona, resina
epoxica o polister que endurecen dando como resultado la obtencin piezas
anatmicas secas, inodoras y durables.
 Para el estudio histolgico e histopatolgico es necesario que las
estructuras a analizar conserven al mximo las caractersticas morfolgicas de
las clulas y tejidos. La fijacin de las glndulas salivales mayores para anlisis
microscpico se realiza habitualmente por inmersin.

Por otra parte, el proceso de inclusin en parafina descrito para la

tcnica histolgica convencional, tiene como fundamento la necesidad de aportar
la rigidez necesaria al bloque de tejido para que pueda ser cortado en el
micrtomo. En el caso de las piezas plastinadas, la rigidez aportada por el
polmero, permitira la obtencin de segmentos de grosores adecuados para el
examen de las caractersticas microscpicas del tejido.

2.2.1. Preparaciones en fresco:

Consiste en observar los microorganismos vivos que puede haber

en la muestra de estudio y la presencia de otros elementos, como son leucocitos,
clulas, eritrocitos, cristales, etctera, que puedan ser de gran ayuda en la
valoracin de las muestras.

Es una tcnica fcil de realizar, en la que la muestra a examinar se

sita entre un portaobjetos y cubreobjetos. Si la muestra proviene de una
muestra slida, se debe de emulsificar en una gota de agua destilada o solucin
salina; si el material es lquido, se deposita directamente entre el porta y
cubreobjetos.

Permiten observar los organismos suspendidos en un lquido en

condiciones de vida normal, sin sufrir alteraciones ocasionadas por algunos
colorantes; permite apreciar la movilidad, los cambios citolgicos durante el
proceso de divisin celular y en la formacin deesporas.

La observacin microscpica constituye la primera etapa del estudio

de los microorganismos y tambin del diagnstico microbiolgico ya que permite
conocer algunas caractersticas de los microorganismos, como ser: forma,
disposicin o agrupacin, presencia o ausencia de estructuras (cpsulas,
esporas, flagelos), movilidad, etc...
 2.2.2. Exmenes en preparaciones coloreadas:

Las tcnicas de coloracin permiten la observacin morfolgica con un mejor

contraste que en el examen en fresco, as como la observacin de estructuras
celulares.

2.2.3. Preparacin del frotis:

La extensin de la muestra sobre el portaobjetos se har de diferentes formas,

dependiendo de la procedencia de la muestra a examinar. Si es lquida, se
deposita una pequea cantidad del material en el centro del portaobjetos y se
extiende con otro portaobjetos hasta conseguir una capa fina y homognea.

Si el material de estudio es slido, se emulsificar en una gota de agua destilada

o solucin salina estril, colocado en el centro del portaobjetos, y se extiende de
la misma forma que una muestra lquida.

2.2.4. Secado:

Una vez realizado el frotis, debemos dejar secar al aire la preparacin, cuando
est seca la superficie pasa de ser brillante a mate; para acelerar el secado se
puede calentar ligeramente la parte inferior del portaobjetos (sin quemar).

2.2.5. Fijado:

La fijacin es el ltimo paso antes de proceder a la tincin, y tiene como objetivo

no permitir que la muestra de estudio se pierda (o se barra) en el proceso de
tincin.
En frotis hematolgicos no se requiere de fijacin debido a que existe una
coagulacin rpida de las albminas citoplasmticas; o si el material a teir
posee abundante material celular, se recomienda fijar con alcohol metlico
despus de secar la preparacin.

Los frotis de origen microbiolgicos se deben de fijar con calor suave, pasando
el portaobjetos sobre una llama, tras la fijacin es muy importante esperar que
se enfre antes de proceder a realizar cualquier procedimiento de tincin.

2.2.6. Tincin:

Consiste en cubrir la preparacin con uno o varios colorantes de forma

secuencial durante un tiempo determinado, si adiciona el colorante en un frotis
sin enfriar, puede provocar la precipitacin del colorante y la visualizacin de
artefactos que pueden confundir en el proceso de observacin al microscopio.

Despus de la tincin, la preparacin se lava con agua, procurando que el chorro

no caiga con fuerza sobre la preparacin, y finalmente se seca al aire o mediante
absorcin con papel.

2.3. Coloraciones microscpicas:

Un colorante se define como una sustancia capaz de dar color a

clulas, tejidos, fibras, etctera. De acuerdo con su origen, se pueden dividir en:
colorantes naturales, los cuales son extrados de plantas o animales, y
colorantes artificiales, que son aquellos de minerales procesados y manipulados
en el laboratorio.
 Qumicamente, el colorante est constituido de un componente
cromforo y un auxcromo. El cromforo es todo grupo aislado, covalente e
insaturado, que tiene una absorcin caracterstica en la regin ultravioleta o
visible; dicho de otra forma, es la capacidad que tiene la molcula para que sus
electrones absorban energa o luz visible, se exciten y emitan diversos colores
de acuerdo con la longitud de emitida como resultado del cambio en el nivel
energtico. Cabe mencionar que esta longitud de onda corresponde al rango de
espectro visible. Los cromforos se pueden presentar en dos formas
fundamentales: en sistemas conjugados pi o complejos metlicos. Los
cromforos son principalmente grupos funcionales con dobles y triples enlaces
carbono-carbono, anillos aromticos, grupos carbonilos, imino, diazo, nitro y
enlaces entre carbono-y (y es un tomo con pares libres).Los aux- cromos son
grupos funcionales o radicales que constituyen una molcula y poseen carga
parcial positiva; tienen la funcin de intensificar la formacin de color mediante
la accin de grupos de tomos no saturados; su funcin es desplazar a los
cromforos hacia longitudes de ondas largas para aumentar la intensidad. Los
siguientes grupos funcionales son considerados auxcromos: grupo metilo,
halgenos, hidroxi, alcoxi y amino. Aunque los microorganismos vivos se pueden
observar directamente en fresco al microscopio ptico, la mayora de las veces
es necesario teirlos para que, por medio del uso de colorantes, sea mucho ms
fcil su identificacin; adems, la presencia de ciertas estructuras, as como su
reaccin a determinadas tcnicas, nos permite clasificar a las bacterias. As
pues, los colorantes tienen las siguientes funciones:

- Permiten hacer visibles a los objetos microscpicos y transparentes.

- Revelan su forma y tamao.
- Muestran la presencia de estructuras internas y externas.
- Producen reacciones qumicas especficas.

2.3.1. Tincin de Gram:

La tincin de Gram se basa en colocar como colorante primario
cristal violeta, el cual tiene afinidad con el peptidoglicano de la pared bacteriana.
Posteriormente, se coloca Lugol, el cual sirve como mordiente e impide la salida
del cristal violeta por la formacin de un complejo cristal violeta yodo que satura
los espacios del peptidoglicano de la pared bacteriana. En seguida, se coloca
una mezcla de alcohol-acetona, la cual deshidrata la pared bacteriana y cierra
los poros de la misma, tambin destruye la membrana externa de las bacterias
Gram negativas debido a que sta es soluble a la accin de solventes orgnicos,
como la mezcla de alcohol acetona. Las bacterias Gram positivas, al contener
una gran cantidad de peptidoglicano, retienen con mayor fuerza este complejo,
mientras que las Gram negativas no lo pueden retener por tener menos cantidad
de peptidoglicano. Por ltimo, se coloca safranina, la cual funciona como un
colorante secundario o de contratincin y sirve para teir las bacterias que no
pudieron retener el complejo cristal violeta-yodo. Hay bacterias de un mismo
gnero que pueden observarse en la misma muestra como Gram positivas y
como Gram negativas, a este evento se le llama tincin Gram variable
secundaria a alteracin en nutrientes, temperatura, pH o concentracin de
electrolitos.

2.3.2. Tincin diferencial: Mtodo cido resistente (ZIEHL-NEELSEN):

Las paredes celulares de ciertos parsitos y bacterias contienen

cidos grasos (cidos miclicos) de cadena larga (50 a 90 tomos de carbono)
que les confieren la propiedad de resistir la decoloracin con alcohol-cido,
despus de la tincin con colorantes bsicos. Por esto se denominan cido-
alcohol resistente. El frotis se tie durante unos 5 min con Fucsina fenicada
aplicando calor suave. Lavar con agua. Decolorar con alcohol etlico 95% con un
3% de ClH concentrado. Lavar y teir durante 30-60 seg con Azul de Metileno
(color de contraste). Lavar y secar.

2.3.3. Tincin diferencial para revelar estructuras celulares. Mtodo de

Wirtz:
Algunos gneros bacterianos, entre los que destacan Clostridium y
Bacillus, producen en su interior formas de resistencia denominadas esporas. Se
producen cuando las condiciones ambientales son desfavorables (agotamiento
de los nutrientes, temperaturas extremas, radiaciones, compuestos txicos, etc.)
formndose una espora por cada forma vegetativa. Al finalizar el proceso de
esporognesis, la clula vegetativa se lisa y libera la espora al exterior. Cuando
el ambiente es favorable, la espora germina generando una nueva forma
vegetativa. La capacidad de germinar perdura durante aos.
La tincin especfica de esporas requiere dos colorantes:
- Verde malaquita: capaz de teir las esporas en caliente.
- Safranina: colorante de contraste que tie las formas vegetativas.
Las endosporas, tras la primera tincin, no perdern el colorante en el lavado
con agua, y s lo harn las formas vegetativas, que quedarn teidas con el
segundo colorante.
 III. MATERIALES Y METODOS

3.1. Lugar de ejecucin.

El presente trabajo se realiz en la biblioteca nacional de la

Universidad Nacional Agraria de la Selva, Tingo Mara Hunuco

El recorrido para llegar al lugar de ejecucin del presente trabajo es

por la carretera central Av. Universitaria Km 1.5 carretera central Hunuco,
Coordenadas (9 19 03 S 75 59 48 O) en el laboratorio de microbiologa.

3.2. Materiales y equipos.

3.2.1. Materiales:

lamina cubreobjetos
Lamina cubreobjetos
una lanceta
Alcohol Algodn
Bistur
Pinza
Receta medica
Piojos o pulgas
Hoja del rbol de copa de oro
Sangre humana
Semen
Bandeja
Mechero
Separata
 Lapicero y lpiz
Palito de molda dientes
Mucosa labial
Cebolla
Sarros dental
Colorantes (azul metileno, verde malaquita, safranina, cristal
violeta)

3.2.2. Equipos:

Laptop, celulares, impresora, Cmara fotogrfica

3.3. Metodologa:
 IV. RESULTADOS

4.1. El microscopio

En la experimentacin que se realiz en el laboratorio, se tuvo

como primero el uso del microscopio, de acuerdo con las observaciones
respectivas se aprecia en el rea de campo de las muestras: las letras o palabras
que fueron de un recetario teniendo una imagen de microscpica a un aumento
a macroscpica viendo as una infinidad de tejidos entrecruzados en los
objetivos de 5X-10X, a continuacin se realiz con insectos diminutos
observando en un objetivo de 5X toda el cuerpo entero de los insectos diminutos
y en el objetivo de 10X se obtuvo una imagen macroscpica observando las
partes internas de dichos insectos y para finalizar se realiz la observacin de
clulas epiteliales de la hoja de copa de oro dando objetivos de 5X- 10X dando
observacin de micromtricas a micromtricas , en el aumento se observ las
clulas epiteliales en conjunto y la aparicin de estomas en el envs de la hoja
donde cual se realiza el intercambio gaseoso, ingreso de agua y en otro caso
nutrientes.

4.2. Preparaciones microscpicas

En las preparaciones microscpicas teniendo en cuenta que se da

en fresco y en seco ,como en resultado se obtuvo cuatro observaciones en el
microscopio tal cual se obtuvo muestras: el semen humano teniendo una
preparacin en fresco donde se tuvo objetivos de 10X dando un aumento de
100X ,realizando una muestra macroscpica, dando una observacin de
espermatozoides en movimiento en la cual constituidas de sus partes;
posteriormente se realio con la muestra de mucosa labial observada en el
microscopio en un objetivo de 10X-40X y en un aumento macroscpico de 100X-
400X ,observando asi la membrana celular, citoplasma y el nucleo; al finalizar
se realiz con la muestra de sangre teniendo como en observacin de los
eritrocitos con el objetivo de 10X, llegando a ver la forma d un glbulo rojo y
entre algunos los leucocitos.

4.3. Coloraciones microscpicas

En las coloraciones microscpicas se tuvo como resultado dos muestras,

primero de coloracin simple de la cebolla donde se observ el Allium Capa
teniendo como objetivo 10X-40X, se observ las clulas epiteliales
conglomeradas en coloracin cristal violeta teniendo algunas partes visibles tal
cual fueron: pared celular, citoplasma y ncleo; posteriormente se realiz con la
coloraciones GRAM en la muestra del sarro dentario con un objetivo de 10X-
40X ; en dicho aumento de micromtrico a micromtrico se visualiz bacterias
GRAM+ teniendo una forma de puntos negros en conglomeraciones y otros en
separaciones de las bacterias.
V. CONCLUSIONES