Prctica 8: Efecto de las coenzimas sobre la actividad

enzimtica
Gardea Dagostino, Hctor Antonio. 128994. Licenciatura en Biologa
INTRODUCCION como si de un sustrato ms del enzima
se tratase. Cuando se analiza la
Algunos enzimas necesitan para
estructura qumica de muchos
llevar a cabo su actividad cataltica de la
coenzimas se comprueba que tienen
concurrencia de una o ms sustancias
formando parte de ella a alguna de las
de naturaleza no proteica que reciben el
sustancias conocidas como vitaminas.
nombre de cofactores. No debe
Existe pues una clara relacin entre
entenderse que los cofactores son
vitaminas y coenzimas. (Widman, 1999)
sustancias que meramente potencian la
actividad enzimtica sino que, en En 1907. Gabriel Bertrand propuso
determinados enzimas, son el trmino coenzima, para referirse a las
absolutamente imprescindibles para que molculas orgnicas, de naturaleza no
sta se realice. En ausencia de cofactor protenica, necesarias para la actividad
el enzima resulta catalticamente de las enzimas, que formaban parte de
inactivo y recibe el nombre de la cozimasa, descubierta por Harde y
apoenzima; la combinacin de Young.Tradicionalmente las coenzimas
apoenzima y cofactor da el holoenzima se clasifican en dos grupos, segn la
catalticamente activo. Existen dos tipos fuerza con que se unen a su enzima,
de cofactores enzimticos: los iones coenzimas libres, que se pueden
metlicos y las coenzimas. (Lehninger, separar por dilisis, y grupos
1991) prostticos, que no se pueden separar
por dilisis debido a que estn unidos
Cuando el cofactor es una sustancia
con enlaces covalentes. Sin importar el
orgnica de naturaleza no proteica
grupo a que pertenezcan, la funcin de
recibe el nombre de coenzima. Los
las coenzimas es la misma, transportar
coenzimas actan generalmente como
grupos qumicos o equivalentes
transportadores intermediarios de
reductores entre molculas diferentes.
grupos funcionales, de determinados
Usando como criterio su funcin, las
tomos o de electrones, los cuales son
coenzimas se clasifican como enzimas
transferidos de una sustancia a otra en
de oxidoreduccin, cuando transportan
la reaccin enzimtica global. A veces
equivalentes reductores, y coenzimas
las coenzimas se hallan ntimamente
de transferencia, cuando transportan
unidos a la molcula proteica
grupos qumicos. En ambos casos, las
constituyendo un verdadero grupo
coenzimas son transformadas en una
prosttico. En otros casos la unin es
reaccin, y regeneradas en otra, como
dbil y el coenzima acta en realidad
se ilustra en la Figura 1. (Velasquez, 15minutos, ulteriormente se recuper el
2009). sobrenadante. Se pesaron 5g de
musculo de res, este se cort en
pedazos pequeos y posteriormente se
coloc en un mortero fro y se le aadi
10mL de solucin salina NaCl 0.9%.
Enseguida se macero con el mortero, se
pas la mezcla a un tubo de ensayo y
se dej reposar durante 5minutos.
Despus se centrifugo a 3,000RPM
durante 10 minutos y se recuper el
sobrenadante.
OBJETIVOS
Se utilizaron 4 tubos de ensayo los
Conocer la importancia y la cuales fueron etiquetados del 1 al 4, a
funcin que tienen las coenzimas los cuales se les aadi lo sealado en
sobre la actividad enzimtica la tabla 1.
Observar en cuanto a colores las
Tubo 1 2 3 4
diferencias presentes entre las
reacciones que tenan coenzima KCl 0.5% 1mL 1mL 1mL 1mL
y enzima o ambas, segn sea el
caso. Lactato 1mL 1mL - 1mL
de Na
METODOS
Azul de 0.3mL 0.3mL 0.3mL 0.3mL
Obtencin de la Coenzima NAD y metileno
preparacin de enzima LDH
H2O 1mL - 1mL 1mL
Se pesaron en una balanza granataria destilada
sobre una bandeja de plstico 3g de
Coenzima - 1mL 1mL -
carne de res, posteriormente esta se NAD
cort en trozos pequeos.
Posteriormente se coloc un mechero Enzima 1mL 1mL 1mL -
de busen y un tripe con un vaso de LDH
precipitado con 14mL de agua a hervir, Tabla 1. Contenido de los tubos de ensayo
enseguida se colocaron a ebullicin los puestos a prueba enzimtica con la enzima
trozos de carne previamente pesados LDH y la coenzima LDH.
durante 5 minutos. Una vez pasado este Posteriormente se mezclaron y se les
lapso se pas a un mortero y se aadi 1 mL de aceite mineral,
macero. Luego se pas el contenido a 2 enseguida se incubaron en un bao de
tubos de ensayo, los cuales se H2O a 37C. Ulteriormente se
centrifugaron a 3,000 RPM durante observaron en intervalos de tiempo.
RESULTADOS

TIEMPO
TUBO 30 60 90 120

1
+ ++ ++ +++

2
+ ++ ++ ++

3
0 0 0 0

4
(CONTROL)
- - - -

TABLA 1. Tabla de cruces de decoloracin segn el tiempo de incubacin

El tubo 4 fue el control, por lo que no poda presentar ningn cambio al no tener
ni enzima ni coenzima para hacer reaccin enzimtica.
En el tubo 3 no se observaron cambios de decoloracin significativos
Una + representa poca decoloracin, ++ media y +++ notorio cambio.
TIEMPO 0: No se observo ningn cambio en ninguno de los tubos.
Fotografa 1. Tubo de nuestro equipo a los 30 minutos.

FOTOGRAFIA 4. Tubo de
Fotografa 2. Tubo de nuestro equipo a los 60 minutos
nuestro equipo a los 90
minutos.

Fotografa 3. Tubos de nuestro equipo a los 120 minutos.

DISCUSION apoenzima al que estn unidos. Muchos
coenzimas son vitaminas, lo cual
De acuerdo a Voet en el 2006,
significa que no pueden ser sintetizados
Normalmente sufren reacciones de
por el organismo y deben ser
oxidacin, reduccin y transferencia de
incorporados en la dieta como tales o
grupos qumicos. Las coenzimas sufren
como sustancias transformables en
las transformaciones qumicas
vitaminas, es decir, provitaminas. Estos
necesarias para la catlisis enzimtica
resultados los comparamos con los
evitando que la enzima las sufra. De
obtenidos observando claramente que
este modo la enzima queda intacta y
cuando se presento la coenzima fue
puede llevar a cabo otro ciclo de
fcil identificar los diferentes tonos de
reacciones simplemente cambiando la
colores de azul que se iban
coenzima. En el metabolismo, las
presentando conforme el tiempo de
coenzimas estn involucradas en
incubacin pasaba. El tubo control
reacciones de transferencia de grupos
donde no hay nada de cambios al no
(como la coenzima A y la adenosina
tener ninguna de las dos sustancia, el
trifosfato (ATP)), y las reacciones redox
tubo 3 pudo haber afectado las
(como la coenzima Q10 y la
cantatidades o el manejo que se utilizo
nicotinamida adenina dinucletido
en ese, adems de que este no tenia
(NAD+)). Las coenzimas se consumen y
lactato.
se reciclan continuamente en el
metabolismo; un conjunto de enzimas CONCLUSION
aade un grupo qumico a la coenzima
Se logro observar e identificar la accin
y otro conjunto de enzimas lo extrae.
que tiene la coenzima y la enzima con
Por ejemplo, las enzimas como la ATP
el sustrato en los diferentes tubos con
sintasa fosforilan continuamente la
las diferentes combinaciones que se
adenosina difosfato (ADP),
hicieron al respecto en el experimento.
convirtindola en ATP, mientras que
enzimas como las quinasas
desfosforilan el ATP y lo convierten de
nuevo en ADP. Estas difieren de las
apoenzima en que es de bajo peso
molecular y no es de naturaleza
proteica aunque s es orgnico. Es el
responsable del tipo de reaccin
enzimtica que realiza el enzima. Por
esta circunstancia, el nmero de
coenzimas no es muy elevado ya que
pueden ser comunes a muchos enzimas
unindose a diferentes apoenzimas,
desempeando todos ellos la misma
accin enzimtica y, sin embargo,
siendo especficos para las distintas
reacciones enzimticas segn el
REFERENCIAS
Widman FK. Enzimas sricas de
importancia para el diagnstico.
En Widman FK Interpretacin
Clnica de pruebas de
laboratorio. Barcelona: JIMS,
1981. p323-338.
Lehninger Albert L. Principios de
Bioqumica. Ed. Omega,
S.A./Barcelona, 1991. Cap9
Enzimas. p209-216.
Velsquez, M; Ordorica, M.
(2009). Termodinmica, Cintica
y Enzimas
D. Voet y J.G. Voet, Bioqumica.
Ediciones Panamericana, 2006
Lehninger. Principios de
Bioqumica , 4 Ed.D.L.Nelson y
M. M. Cox. Ediciones Omega,
S.A. 2006