11 Nmero de publicacin: 2 321 269

19 OFICINA ESPAOLA DE
PATENTES Y MARCAS
21 Nmero de solicitud: 200900177

51 Int. Cl.:

ESPAA C07C 59/08 (2006.01)

C12P 7/56 (2006.01)
B01D 61/00 (2006.01)
A23C 21/02 (2006.01)
B01D 61/02 (2006.01)
B01D 61/14 (2006.01)

12 PATENTE DE INVENCIN CON EXAMEN PREVIO B2

22 Fecha de presentacin: 16.01.2009
73 Titular/es: Universidad de Cantabria
Pabelln de Gobierno
Avda. de los Castros, s/n

43 Fecha de publicacin de la solicitud: 03.06.2009 39005 Santander, Cantabria, ES

Fecha de la concesin: 11.01.2010

72 Inventor/es: Otero Hermida, Jos Antonio;
Lena Lpez, Gumersindo y
Olav Mazarrasa, Mowinckel

45 Fecha de anuncio de la concesin: 26.01.2010

45 Fecha de publicacin del folleto de la patente:
74 Agente: No consta
26.01.2010

54 Ttulo: Procedimiento biotecnolgico de obtencin de cido lctico natural.

57 Resumen:
Procedimiento biotecnolgico de obtencin de cido lc-
tico natural que, a partir de la recuperacin del suero de
quesera o lactosuero, comprende las etapas de: fermen-
tacin del suero de quesera sin tener que hacer un ajuste
de pH, en la que se obtiene cido lctico, separacin di-
recta del cido lctico obtenido, procedente del caldo de
fermentacin, mediante una primera nanofiltracin (NF),
para obtener cido lctico permeado (nanofiltrado) y, a
continuacin, concentracin del cido lctico permeado
mediante una segunda nanofiltracin (NF), a fin de lograr
un cido lctico ms puro, con mayor valor aadido.
ES 2 321 269 B2

Aviso: Se puede realizar consulta prevista por el art. 40.2.8 LP.

Venta de fascculos: Oficina Espaola de Patentes y Marcas. P de la Castellana, 75 28071 Madrid
 ES 2 321 269 B2

DESCRIPCIN
Procedimiento biotecnolgico de obtencin de cido lctico natural.

5 Objeto de la invencin

La presente invencin se refiere a un procedimiento biotecnolgico de obtencin de cido lctico natural, el cual
se incluye dentro del campo de la industria alimentaria, especialmente, la del sector lcteo.

10 Antecedentes de la invencin

Un imperativo actual para cualquier industria, especialmente las del campo alimentario, es el tratamiento de las
aguas residuales procedentes de los procesos que en ellas existen as como tambin la disminucin de la cantidad
vertida de tales aguas en ros o emplazamientos naturales utilizados inadecuadamente como vertederos, con el fin de
15 contaminar lo menos posible el medio ambiente y reducir el impacto negativo sobre ste.

La industria quesera tiene entre sus principales objetivos la reduccin progresiva de ese impacto negativo como
consecuencia del vertido de aguas residuales con alta carga contaminante. Si se tiene en cuenta que, durante la fabrica-
cin de quesos, se producen aproximadamente 9 Kg de lactosuero/Kg de queso, en el cual la lactosa, con un porcentaje
20 de 4-4,5%, es el componente mayoritario, se podr entender que se necesitan procedimientos para aprovechar dicho
lactosuero y no verterlo. La lactosa, a su vez, es la responsable de las altas demandas qumica (DQO) y biolgica
(DBO) en los efluentes de los procesos de fabricacin de quesos.

Igualmente, dado el contenido apreciable de protenas y sales minerales en el lactosuero, son necesarios unos
25 procedimientos que recuperen esas protenas y sales minerales y lo transformen biolgicamente en hidrolizados de
lactosa y cido lctico, entre otros componentes.

El lactosuero o suero de quesera, fraccin lquida de la leche separada de la cuajada en la fabricacin de quesos, es
uno de los sustratos ms utilizados para la obtencin biolgica de cido lctico. Por ello, la transformacin del suero
30 de quesera o lactosuero en cido lctico permitir lograr dos objetivos: eliminar o reducir el impacto medioambiental,
debido a la elevada demanda qumica de oxgeno (DQO) y, al mismo tiempo, obtener un producto de elevado valor
aadido.

El cido lctico presenta dos ismeros pticamente activos (enantimeros): D(-) levorotatorio y L(+) dextrorro-
35 tatorio, siendo ste ltimo conocido tambin como cido lctico natural o fisiolgico, el cual slo puede obtenerse
segn dos rutas metablicas idnticas a las existentes en la naturaleza. Hay determinados microorganismos, tales co-
mo, Lactobacillus case o Lb. Delbrueckii, que pueden sintetizar uno de tales ismeros a partir de sustratos, tales como,
azcares, hidrolizados de materias amilceas, almidones procedentes de maz y patata, biomasa forestal hidrolizada,
hasta glucosa y sueros lcteos.
40
No obstante, el cido lctico tambin se puede producir mediante sntesis qumica, en la cual se producen mezclas
racmicas de las formas L(+) y D(-). Segn esta va, se parte de combustibles fsiles a fin de obtener acetaldehdo
como producto intermedio.

45 La produccin de cido lctico, a nivel mundial, se sita en torno a 90 000 Tm/ao, representando la va fermen-
tativa un 70%. Es sabido que el cido lctico es ampliamente utilizado en la industria alimentaria como acidulante,
conservante, acondicionador de piensos para animales, en la industria farmacutica, en preparados cosmticos, etc.

En la prctica, la obtencin de cido lctico por va fermentativa se realiza habitualmente mediante una fermen-
50 tacin con ajuste de pH. Para la metabolizacin de la lactosa por parte de las bacterias acidolcticas, es necesaria la
existencia de un pH ptimo. De ah que, en el procedimiento de fermentacin con ajuste de pH se realiza una neutra-
lizacin del medio en el que van a actuar las bacterias lcticas mediante la adicin de bases, lo cual implica un coste
aadido.

55 Adems, la neutralizacin del pH a lo largo de la fermentacin genera sales, tales como, lactatos, lo cual implica la
realizacin de un paso adicional para generar cido lctico, con el consecuente encarecimiento del coste de produccin.
Es decir, se tendra que ajustar y acondicionar previamente el pH entre 5-6, para que funcionen ptimamente los
microorganismos citados y, luego, continuar neutralizando el pH a lo largo de la fermentacin.

60 Descripcin de la invencin

A la vista de lo anterior, es necesario un procedimiento biotecnolgico que aproveche el lactosuero procedente de

la fabricacin de quesos, a fin de no verterlo al medio ambiente o minimizar la carga contaminante en el efluente y
que, al mismo tiempo, se realice sin tener que ajustar el valor de pH durante la fermentacin del lactosuero.
65
Segn un primer y nico aspecto, la presente invencin se refiere a un procedimiento de obtencin de cido lctico
natural que, partiendo de la recuperacin del suero de quesera o lactosuero y previa inoculacin de un cultivo de
bacterias lcticas, comprende las siguientes etapas:

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- fermentacin del suero de quesera sin ajuste de pH, a fin de obtener cido lctico,

- separacin directa del cido lctico que se va obteniendo en la fermentacin, mediante una primera membrana de
nanofiltracin o nanomembrana con un tamao de poro mayor, para obtener cido lctico permeado (nanofiltrado), y
5
- concentracin del cido lctico permeado mediante el paso de ste a travs de una segunda membrana de nano-
filtracin con un tamao de poro menor, para lograr un cido lctico concentrado, de mayor pureza y con ms valor
aadido.

10 Por tanto, a lo largo de la fermentacin queda excluido el ajuste del pH del caldo fermentativo con la adicin de
bases, evitndose la generacin de sales en forma de lactactos y las operaciones posteriores para regenerar el cido
lctico. Esto ltimo se traduce en un aumento significativo del coste de produccin.

Otra ventaja es que, con dicha separacin directa y selectiva del cido lctico producido y presente en el caldo de
15 fermentacin, se impide la inhibicin del proceso fermentativo por acumulacin de dicho cido y, consecuentemente,
un descenso no deseable del pH.

La separacin directa del cido lctico del caldo fermentativo se inicia cuando se alcanza un valor de pH igual a 5
en ese caldo fermentativo.
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En la separacin directa del cido lctico natural se emplea una primera membrana de nanofiltracin o nanomem-
brana que presenta una superficie ms uniforme y un tamao de poro mayor. Dicha nanomembrana es apta para separar
por filtracin aquellas molculas de bajo peso molecular, tal como, cido lctico, del caldo fermentativo.

25 A continuacin, para concentrar/purificar el cido lctico que ha permeado la primera nanomembrana, se emplea
una segunda membrana de nanofiltracin o nanomembrana con una superficie menos uniforme y un tamao de poro
menor.

Opcionalmente, tras la etapa de concentracin/purificacin a travs de la segunda nanomembrana, se somete al

30 cido lctico concentrado de mayor pureza a una etapa de smosis inversa.

Con el presente procedimiento se aportan dos soluciones prcticas y econmicas: separacin directa del cido
lctico obtenido sin ajuste de pH, a partir de la fermentacin del suero de quesera, y la concentracin posterior de
dicho cido lctico para obtener un producto ms concentrado, de elevado inters comercial, mediante un proceso de
35 nanofiltracin.

Ejemplo de realizacin de la invencin

Se parte de un volumen de 1000 litros de suero de quesera que se someti previamente a una microfiltracin a
40 temperatura ambiente y, luego, a un tratamiento trmico de pasterizacin, durante 30 min, para eliminar la carga mi-
crobiana. A continuacin, se realiza una suplementacin del suero con extracto de levadura (0,25 g/l). Dicho volumen
se introdujo en el tanque de fermentacin.

Previamente, se selecciona una cepa de Lactococcus lactis, Lactobacillus, u otras cepas productoras de cido
45 lctico natural, para preparar un cultivo, que posteriormente se inocula en el tanque de fermentacin.

El mtodo seleccionado para determinar el crecimiento bacteriano en el suero durante el transcurso de la fer-
mentacin, una vez inoculado el cultivo (4% v/v), es la medicin de la densidad ptica (480 nm) a travs de un
espectrofotmetro. El proceso de fermentacin alcanza un pH de 5 en torno a las 5 horas de iniciar la incuba-
50 cin.

El cido lctico se va produciendo en el tanque de fermentacin y, cuando el pH del caldo fermentativo alcanza el
valor de 5, comienza la extraccin de dicho cido a travs una primera membrana de nanofiltracin o nanomembrana.
Esta ltima tiene un menor rechazo nominal al cido lctico y, al mismo tiempo, una elevada retencin para los otros
55 productos contenidos en el tanque de fermentacin que actan como sustrato fermentativo.

En este caso se hace pasar un flujo de caldo fermentativo a travs de una membrana ultrafiltracin (UF), vol-
viendo el concentrado al tanque de fermentacin, y el ultrafiltrado (permeado) se hace pasar a travs de la primera
nanomembrana (NF), segn una presin y un caudal de trabajo determinados.
60
Se trabaja con presiones mximas de 60 atm (6079 KPa), a una temperatura mxima de 50C, preferiblemente, por
debajo de 50 atm (5066 KPa).

El cido lctico que permea la primera nanomembrana se somete posteriormente a una concentracin/purificacin
65 a travs de una segunda nanomembrana (NF) que presenta un tamao de poro menor (0,40 nm). Se utiliza una na-
nomembrana comercial que tiene mayor rechazo nominal para el cido lctico y al mismo tiempo una baja retencin
para las sales minerales. De esta manera, se logra un cido lctico de elevada pureza.

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Las membranas de nanofiltracin (NF) que aqu se emplean estn formadas por una pelcula activa de poliamida
sobre un soporte poroso de polisulfona.

A travs de este ejemplo, no limitativo del alcance de la invencin, se puede ver cmo se lleva a cabo el pro-
5 cedimiento de la invencin, en donde se obtiene un cido lctico ms puro, con mayor valor aadido y, por otro
lado, se consigue una disminucin significativa de la carga contaminante presente en los efluentes que proceden de la
fabricacin de quesos.

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REIVINDICACIONES
1. Procedimiento biotecnolgico de obtencin de cido lctico natural a partir de suero de quesera, con introduc-
5
cin preliminar de un inculo a base de bacterias lcticas, caracterizado porque comprende las siguientes etapas:

- fermentacin del suero sin ajuste de pH, en la que se obtiene cido lctico,

- separacin directa del cido lctico del caldo de fermentacin, a travs de una primera membrana de nanofiltracin
10
para obtener cido lctico como permeado (nanofiltrado), y

- concentracin posterior del cido lctico obtenido como permeado en la etapa anterior, mediante el paso de ste
a travs de una segunda membrana de nanofiltracin para obtener un cido lctico concentrado, de mayor pureza.

15
2. Procedimiento segn la reivindicacin 1, caracterizado porque la separacin directa del cido lctico del caldo
fermentativo se inicia cuando se alcanza un valor de pH igual a 5 en dicho caldo.

3. Procedimiento segn las reivindicaciones 1 y 2, caracterizado porque tras el paso a travs de la segunda mem-
brana se somete al cido lctico concentrado a una etapa de smosis inversa.
20
4. Procedimiento segn las reivindicacin 1, caracterizado porque el tamao de poro de la primera membrana de
nanofiltracin es de 0,43 nm y el de la segunda es de 0,40 nm.

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PATENTES Y MARCAS

21 N de solicitud: 200900177

22 Fecha de presentacin de la solicitud: 16.01.2009
ESPAA

32 Fecha de prioridad:

INFORME SOBRE EL ESTADO DE LA TCNICA

51 Int. Cl.: Ver hoja adicional

DOCUMENTOS RELEVANTES

Categora
56 Documentos citados Reivindicaciones
afectadas

A US 20080254165 A (RASHID PATEL, MATTHEW SANDRY, RICHARD SEGUIN) 1-4

16.10.2008, todo el documento.

A WO 9641021 A1 (CHRONOPOL, INC.) 19.12.1996, todo el documento. 1-4

A LI Y., SHAHBAZI A., WILLIAMS K., WAN C. "Separate and 1-4

concentrate lactic acid using combination of nanofiltration and
reverse osmosis membranes" Applied Biochemistry and
Biotechnology (marzo 2008) Vol. 174, No . 1-3, pginas 1-9;
ISSN 0273-2289; DOI 10.1007/s12010-007-8047-5. Todo el documento.

Categora de los documentos citados

X: de particular relevancia O: referido a divulgacin no escrita
Y: de particular relevancia combinado con otro/s de la P: publicado entre la fecha de prioridad y la de presentacin
misma categora de la solicitud
A: refleja el estado de la tcnica E: documento anterior, pero publicado despus de la fecha
de presentacin de la solicitud

El presente informe ha sido realizado


5 para todas las reivindicaciones  para las reivindicaciones n:
Fecha de realizacin del informe Examinador Pgina
18.05.2009 A. Garca Coca 1/4
 INFORME DEL ESTADO DE LA TCNICA N de solicitud: 200900177

CLASIFICACIN DEL OBJETO DE LA SOLICITUD

C07C 59/08 (2006.01)

C12P 7/56 (2006.01)
B01D 61/00 (2006.01)
A23C 21/02 (2006.01)
B01D 61/02 (2006.01)
B01D 61/14 (2006.01)

Documentacin mnima buscada (sistema de clasificacin seguido de los smbolos de clasificacin)

C07C, C12P, B01D, A23C

Bases de datos electrnicas consultadas durante la bsqueda (nombre de la base de datos y, si es posible, trminos de
bsqueda utilizados)

INVENES, EPODOC

Informe del Estado de la Tcnica (hoja adicional) Pgina 2/4

 OPININ ESCRITA N de solicitud: 200900177

Fecha de Realizacin de la Opinin Escrita: 18.05.2009

Declaracin

Novedad (Art. 6.1 LP 11/1986) Reivindicaciones 1-4 S

Reivindicaciones NO

Actividad inventiva Reivindicaciones 1-4 S

(Art. 8.1 LP 11/1986) Reivindicaciones NO

Se considera que la solicitud cumple con el requisito de aplicacin industrial. Este requisito fue evaluado durante la fase de
examen formal y tcnico de la solicitud (Artculo 31.2 Ley 11/1986).

Base de la Opinin:

La presente opinin se ha realizado sobre la base de la solicitud de patente tal y como ha sido publicada.

Informe sobre el Estado de la Tcnica (Opinin escrita) Pgina 3/4

 OPININ ESCRITA N de solicitud: 200900177

1. Documentos considerados:

A continuacin se relacionan los documentos pertenecientes al estado de la tcnica tomados en consideracin para la reali-
zacin de esta opinin.

Documento Nmero Publicacin o Identificacin Fecha Publicacin

D01 US 2008/0254165 A 16.10.2008
D02 WO 96/41021 A1 19.12.1996
D03 LI Y., SHAHBAZI A., WILLIAMS K., WAN C. 01.03.2008

2. Declaracin motivada segn los artculos 29.6 y 29.7 del Reglamento de ejecucin de la Ley 11/1986, de 20 de marzo,
de patentes sobre la novedad y la actividad inventiva; citas y explicaciones en apoyo de esta declaracin

La invencin, tal y como se recoge en las reivindicaciones 1-4 de la solicitud, es un procedimiento para la obtencin de cido
lctico natural a partir de suero de quesera, que consta de las siguientes etapas: (1) introduccin de un inculo a base de
bacterias lcticas, (2) fermentacin del suero sin ajuste de pH, (3) separacin del cido lctico mediante nanofiltracin (tamao
del poro de la membrana de 0.43 nm), (4) concentracin del cido lctico mediante nanofiltracin (tamao del poro de la
membrana de 0.40 nm), y una posterior etapa de smosis inversa.

El documento D01 divulga un procedimiento para obtener cido lctico como permeado, a partir de suero de quesera. El cido
lctico es separado y purificado mediante una combinacin de ultrafiltracin/microfiltracin y nanofiltracin. El cido lctico
es posteriormente concentrado mediante evaporacin, destilacin u smosis inversa (ver abstract, prrafos [0009]-[0012] y
ejemplo 2).

El documento D02 divulga un mtodo de recuperacin y purificacin de cidos orgnicos producidos en procesos de fermen-
tacin. El caldo de fermentacin es microfiltrado para formar un primer permeado, que es posteriormente sometido a nanofil-
tracin (tamao del poro de la membrana de 1 a 1.5 nm), para obtener un segundo permeado. El cido orgnico contenido en
este segundo permeado es concentrado mediante smosis inversa (ver pgina 6 lnea 8-pgina 7 lnea 4 y reivindicaciones
1-32).

El documento D03 divulga un proceso de separacin y purificacin de cido lctico, a partir de suero de quesera, usando una
combinacin de nanofiltracin y smosis inversa (ver abstract y figura 1).

Ninguno de los documentos del estado de la tcnica anterior a la solicitud, tomados solos o en combinacin revelan la invencin
definida en las reivindicaciones 1-4. Adems, en los documentos citados no hay sugerencias que dirijan al experto en la materia
hacia la invencin definida en las reivindicaciones 1-4. As, la invencin contenida en las reivindicaciones 1-4 es, con referencia
a los documentos D01-D03, nueva y se considera que implica actividad inventiva (art. 6.1 y 8.1 Ley 11/1986 de Patentes).

Informe sobre el Estado de la Tcnica (Opinin escrita) Pgina 4/4