Manual de Prácticas Quimica Clinica II

BENMERITA UNIVERSIDAD AUTNOMA DE PUEBLA
VICERRECTORA DE DOCENCIA
DIRECCIN GENERAL DE EDUCACIN SUPERIOR
FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS
LICENCIATURA EN QUMICO FARMACOBILOGO
AREA: ANLISIS CLNICOS
ASIGNATURA: LABORATORIO QUMICA CLNICA II
CDIGO:
CRDITOS: 2
FECHA: OCTUBRE 2009
1
NIVEL EDUCATIVO: Licenciatura
NOMBRE DEL PROGRAMA
Licenciatura en Qumico Farmacobilogo
EDUCATIVO:
MODALIDAD ACADMICA: Presencial
NOMBRE DE LA
LABORATORIO QUMICA CLNICA II
ASIGNATURA:
UBICACIN: Nivel Formativo
CORRELACIN:
ASIGNATURAS
QUIMICA CLINICA I
PRECEDENTES:
ASIGNATURAS QUIMICA CLINICA III INTERPRETACION
CONSECUENTES: DIAGNOSTICA POR EL LABORATORIO
FUNDAMENTOS DE LA ELECTROFORESIS
CONOCIMIENTOS CONCEPTO ACIDO BASE VIAS
METABOLICAS DE LIPIDOS
PIPETEO,MANEJO DE
HABILIDADES Y
ESPECTROFOTOMETRO,TRABAJO EN
ACTITUDES
EQUIPO Y COLABORATIVO
RESPETO,RESPONSABILIDAD,TOLERANCIA
VALORES PREVIOS:
HONRRADES PUNTUALIDAD.
CARGA HORARIA DEL ESTUDIANTE
HORAS POR
NMERO
PERIODO
CONCEPTO DE
(PERIODO = 16
CRDITOS
SEMANAS)
32
HORAS TEORIA Y PRCTICA. (2 HP/Semana = 2
32)
HORAS DE PRCTICA PROFESIONAL 0 0
CRTICA
HORAS DE TRABAJO INDEPENDIENTE 0 0
TOTAL 32 2
2
M.C. HILDA ALICIA CARRASCO PERAL
AUTORES:
M.C. GONZALO GARZON GARCIA
M.C.JOSE MANUEL RODRIGUEZ LUNA
FECHA DE DISEO: OCTUBRE 2009
FECHA DE LA LTIMA
ACTUALIZACIN:
REVISORES:
SINOPSIS DE LA REVISIN Y/O
ACTUALIZACIN
PERFIL DESEABLE DEL PROFESOR (A) PARA IMPARTIR LA ASIGNATURA:
DISCIPLINA PROFESIONAL: Q.F.B. QBP Y QC
NIVEL ACADMICO: MAESTRIA Y/O DOCTORADO

EXPERIENCIA DOCENTE: CINCO AOS
EXPERIENCIA
CINCO AOS
PROFESIONAL:
3
PRESENTACIN GENERAL DEL PROGRAMA DE LABORATORIO:
a) El programa de laboratorio de Qumica Clnica II se encarga del desarrollo

y ejecucin de los anlisis qumico biolgicos, para el diagnstico, pronstico y
profilaxis de las enfermedades.
b) Se requiere de los conocimientos previos de las materias de biologa,

histologa, anatoma, bioqumica, qumica analtica, anlisis instrumental, fisiologa,
inmunologa, estadstica.
c) Durante este curso se abordarn las pruebas para valorar el metabolismo

de protenas y lpidos, as como la enfermedad metablica y padecimientos
cardiacos.
4
OBJETIVO GENERAL:
El objetivo del curso es que el alumno desarrolle las habilidades analticas y

de interpretacin de las diferentes pruebas del laboratorio para valorar el
metabolismo de protenas, lpidos, enfermedad metabolica y funcionamiento
cardiaco.
EVALUACIN.-
La asistencia al laboratorio ser del 100%
Participacin en seminarios y prcticas 20 %

Reportes individuales 20 %
Reportes por equipo 20 %
Reporte de casos clnicos 20 %
Evaluacin final prctica 20 %
Total 100 %
5
MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD
Elaborada en forma conjunta por la Secretaria de Salud y de Medio Ambiente y
Recursos Naturales, la norma oficial mexicana NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002,
Proteccin Ambiental - Salud Ambiental - Residuos Peligrosos Biolgico -
Infecciosos Clasificacin y Especificaciones de Manejo, fue publicada en el Diario
Oficial de la Federacin el 17 de Febrero del 2003 y sustituye a la NOM-087-ECOL-
1995.
Los RPBI se consideran como residuos peligrosos y como tal se debe establecer un
plan integral para su manejo, almacenamiento, transporte, tratamiento y disposicin
final.
PRINCIPALES MODIFICACIONES EFECTUADAS EN LA NOM-087-SEMARNAT-
SSA1-2002.
I. Criterios para considerar un residuo como RPBI
II. Nueva clasificacin de los RPBI
III. Cantidad de sangre o fluido corporal en los RPBI
IV. Niveles de los establecimientos generadores
V. Periodo de almacenamiento temporal de los RPBI en los
establecimientos generadores.
VI. Atribucin a la Secretaria de Salud, para la vigilancia de la norma.
I. Los lugares que ofrecen atencin mdica y los centros de

investigacin, son considerados establecimientos generadores
de materiales contaminados por agentes biolgico-infecciosos.
Estos desechos se denominan Residuos Peligrosos Biolgico-
Infecciosos (RPBIs), su manejo y disposicin inadecuados,
representa un riesgo para la salud del personal que labora en
estos sitios, as como para la salud de la poblacin aledaa,
ocasionando adems, el deterioro del medio ambiente. Los
6
microorganismos patgenos, virus, parsitos y priones
(estructuras proteicas) son ejemplos de agentes biolgicos-
infecciosos. Para que un microorganismo sea capaz de
producir enfermedad, es decir, que sea un Agente Biolgico-
Infeccioso, debe ocurrir lo siguiente: tener una concentracin
suficiente (inculo), estar en un ambiente propicio
(supervivencia), en presencia de una va de entrada en un
hospedero susceptible.
II. En la Nueva clasificacin, los RPBIs son:

1. La sangre y sus componentes nicamente en estado lquido.
2. Los cultivos de agentes biolgico-infecciosos generados en:
a. Los procedimientos de diagnstico e investigacin.
b. La produccin y el control de agentes biolgico-
infecciosos.
3. Los utensilios desechables usados para contener, transferir,
inocular y mezclar cultivos de agentes biolgico-infecciosos.
4. Los tejidos, rganos y partes que se extirpan o remueven
durante las autopsias, las cirugas o algn otro tipo de
intervencin quirrgica que no estn conservados en
solucin de formol.
5. Las muestras biolgicas empleadas en los anlisis clnicos
(excepto las muestras de orina y de excremento), y aquellas
usadas en los anlisis patolgicos.
6. En los centros de investigacin, los cadveres y las partes
de los animales que fueron inoculados con agentes entero
patgenos.
7
7. Los residuos no anatmicos:
a. Los recipientes desechables que contengan sangre
lquida.
b. Los materiales desechables que contengan fluidos y
secreciones corporales, provenientes de los pacientes
de quienes se sospechen o exista un diagnstico de
una enfermedad infecto-contagiosa como la
tuberculosis.
c. Los materiales de curacin empapados de sangre
lquida o de cualquier otra secrecin o lquido corporal.
d. Los materiales absorbentes utilizados en las jaulas de
los animales que hayan sido expuestos a agentes
entero patgenos.
8. Los materiales punzo cortantes desechables como las hojas
de bistur, las agujas de sutura y los estriles de catter. El
material de vidrio de laboratorio, que se haya roto al
momento de ser manipulado, se deber desinfectar o
esterilizar y ya no se considerar como RPBIs, por lo que
se podr disponer posteriormente como residuo municipal.
La disposicin general para el desecho de RPBIs en el laboratorio
queda de la siguiente manera:
TIPO DE ESTADO
ENVASADO COLOR
RESIDUO FISICO
Recipientes
Sangre Lquidos Rojo
hermticos
Cultivos y
cepas de Bolsas de
Slidos Rojo
agentes polietileno
infecciosos
8
Bolsas de
Patolgicos Slidos Amarillo
polietileno
Residuos no Bolsas de
Slidos Rojo
anatmicos polietileno
Recipientes
Objetos
Slidos rgidos Rojo
punzocortantes
polipropileno
III. Para que un material de curacin se considere como RPBIs,

debe ser desechable y estar goteando, chorreando o
escurriendo sangre o cualquier lquido corporal contemplado
en la norma.
IV. Niveles de los Establecimientos Generadores
NIVEL I NIVEL II NIVEL III

Establecimientos de
atencin mdica hasta
con 5 camas e
instituciones de Unidades hospitalarias Unidades hospitalarias
investigacin con de 6 hasta 60 camas. de ms de 60 camas.
excepcin de los
sealados en el Nivel
III.
Centros de produccin
Laboratorios clnicos y Laboratorios clnicos y
e investigacin
bancos de sangre que bancos de sangre que
experimental en
realicen anlisis de 1 a realicen anlisis de 51
enfermedades
50 muestras al da. a 200 muestras al da.
infecciosas.
Bioterios que se
Laboratorios clnicos y
dediquen a la
Unidades hospitalarias bancos de sangre que
investigacin con
psiquitricas. realicen anlisis a ms
agentes biolgico-
de 200 muestras al da.
infecciosos.
Establecimientos que Establecimientos que
Centros de toma de
generen de 25 a 100 generen ms de 100
muestras para anlisis
kilogramos al mes de kilogramos al mes de
clnicos.
RPBIs. RPBIs
V. Perodo de almacenamiento temporal de los RPBIs en los
establecimientos generadores.
9
NIVEL I NIVEL II NIVEL III
30 das mximos 15 das mximos 7 das mximos de
de almacenamiento de almacenamiento almacenamiento
temporal. temporal. temporal.
No requiere de
Si requiere de rea Si requiere de rea
rea especfica
especfica para el especfica para el
para el
almacenamiento almacenamiento
almacenamiento
temporal. temporal.
temporal.
Se podrn ubicar
Deber cumplir con Deber cumplir con
los contenedores
las las
especficos para los
especificaciones especificaciones
RPBIs* en el lugar
establecidas en la establecidas en la
ms apropiado
NOM-087- NOM-087-
dentro de sus
SEMARNAT-SSA1- SEMARNAT-SSA1-
instalaciones, de
2002, para el rea 2002, para el rea
manera tal que no
de almacenamiento de almacenamiento
obstruyan las vas
temporal. temporal.
de acceso.
*Los contenedores pueden ser plsticos o metlicos, con sealamiento del smbolo
universal de RPBIs y no mezclarlos con la basura municipal.
VI. Atribucin a la Secretaria de Salud. Corresponde a la Secretaria de salud

regular y vigilar el equipamiento, instalacin y funcionamiento de los
servicios mdicos que son los principales generadores de los RPBIs, por
ello participa complementariamente con la SEMARNAT en la regulacin
y vigilancia de la norma, para lo cual se estableci en el cuerpo de la
misma, la disposicin de crear las Bases de Colaboracin que

firmarn ambas dependencias y que sern publicadas en el
Diario Oficial de la Federacin, en las que se especificarn los
puntos de la norma que vigilarn cada una de ellas.
10
CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES DEL CURSO DE LABORATORIO
No.
SEMANA NOMBRE DE LA PRCTICA PGINA
PRCTICA
1 1 Presentacin y NOM 087-SEMARNAT

Seminario de introduccin al laboratorio de qumica
2 2
clnica
3 3 Determinacin de protenas totales sricas 13
4 4 Determinacin de albumina srica 13
Seminario y resolucin de casos clnicos de

5 5 17
proteinograma
6 6 Determinacin de a colesterol srico 20
7 7 Determinacin de triglicridos sricos 20
8 8 Determinacin de lpidos totales sricos 20
9 9 Determinacin de colesterol HDL, LDL y VLDL 27
10 10 Determinacin de glucosa, IMC, PC y TA 35
11 11 Determinacin de LDL-col y fibringeno 44
12 12 Determinacin de CK total srica 51
13 13 Determinacin de CK total srica y CK-MB srica 54
14 14 Seminario de troponinas y homocistena
15 15 Resolucin de casos clnicos
16 16 Evaluacin final
11
PRACTICA 3 y 4
DETERMINACION DE PROTEINAS SERICAS TOTALES Y

ALBUMINA
INTRODUCCION:
La mayora de protenas plasmticas se sintetizan en el hgado, exceptuando
a las inmunoglobulinas que se forman en las clulas plasmticas del bazo, los
ndulos limfticos y la mdula sea.
Las dos causas generales de alteraciones de la protena total srica son cambios
de volumen de agua plasmtica y cambios en la concentracin de una o varias
protenas sricas.
La hiperproteinemia puede ser debida a deshidratacin (aporte insuficiente de agua,
vmitos o diarreas severos, enfermedad de Addison, cetoacidosis diabtica) o a un
aumento en la concentracin de protenas especficas (inmunoglobulinas en
infecciones, mieloma mltiple).
La hipoproteinemia se puede producir a causa de una hemodilucin (sndromes de
retencin salina y las infusin intravenosa masiva), por un defecto en la sntesis
proteica (malnutricin severa, enfermedad heptica crnica, malabsorcin
intestinal) o por prdidas excesivas debidas a enfermedad renal crnica o
quemaduras severas .
OBJETIVO GENERAL:
El alumno realizara la determinacin de protenas totales por el mtodo de
Biuret, como prueba diagnostica en la alteracin de su sntesis y degradacin, as
como la perdida por va renal.
12
MATERIAL Y METODOS:
FUNDAMENTO DEL MTODO PARA PROTEINAS

La protena presente en la muestra reacciona con los iones cobre (II) en medio
alcalino, originando un complejo coloreado que se cuantifica por espectrofotometra.
MUESTRAS
Suero y plasma heparinizado recogido mediante procedimientos estndar.
PROCEDIMIENTO
1. Pipetear en tubos de ensayo:
Blanco Patrn Muestra

Agua destilada 20 L --------- ----------
Patrn Protena -------- 20 L ---------
Muestra -------- -------- 20 L
Reactivo 1,0 mL 1,0 mL 1,0 mL
2. Agitar bien y dejar los tubos durante 10 minutos a temperatura ambiente.
3. Leer la absorbancia (A) del Patrn y de la Muestra frente al Blanco a 545 nm. El
color es estable durante al menos 2 horas.
CLCULOS
La concentracin de protena en la muestra se calcula a partir de la siguiente frmula
general:
A Muestra
___________ x C Patrn = C Muestra
A Patrn
VALORES DE REFERENCIA
13
60-78 g/L
FUNDAMENTO DEL MTODO PARA ALBUMINA

La albmina presente en la muestra reacciona con el verde de bromocresol en
medio cido, originando un complejo coloreado que se cuantifica por
espectrofotometra.
MUESTRAS
Suero o plasma (EDTA, heparina o citrato) recogido mediante procedimientos
estndar.
PROCEDIMIENTO
Patrn Albmina -------- 10 L --------
Muestra -------- -------- 10 L
Reactivo 1,0 Ml 1,0 mL 1,0 mL
2. Agitar bien y dejar los tubos durante 1 minuto a temperatura ambiente.
3. Leer la absorbancia (A) del Patrn y de la Muestra a 630 nm frente al Blanco. El

color es estable durante al menos 30 minutos.
CLCULOS
La concentracin de albmina en la muestra se calcula a partir de la siguiente
frmula general:
A Muestra
A Patrn
14
Recin nacidos, 2 a 4 dias 28-44 g/L

4 dias a 14 aos 38-54 g/L
Adultos 35-50 g/L
> 60 aos 34-48 g/L
BIBLIOGRAFA
1. Doumas BT, Watson WA and Biggs HG. Albumin standards and the
measurement of serum albumin with bromocresol green. Clin Chim Acta 1971: 31:
87-96.
2. Tietz NW. Clinical guide to laboratory tests, 2nd ed. Saunders Co, 1991.
3. Young DS. Effects of drugs on clinical laboratory tests, 4th ed. AACC Press,
1995.
4. Friedman and Young. Effects of disease on clinical laboratory tests, 3th ed.
AACC Press, 1997.
15
PRACTICA 5
ELECTROFORESIS DE PROTENAS
INTRODUCCION:
Se designa como electroforesis a la migracin de una micela coloidal a travs

de un medio de dispersin, cuando acta una fuerza electromotriz. Si se usa una
solucin buffer con un pH superior al punto isoelctrico de las protenas a separar,
puede obtenerse su fraccionamiento. El primitivo mtodo de electroforesis libre de
Tiselius mostr que la movilidad de las fracciones proteicas dependen del tamao
molecular y de la carga elctrica. As la albmina de menor tamao molecular se
mueve con ms rapidez siguiendo en orden de velocidad las globulinas, las alfas,
betas, el fibringeno (en plasma) y las globulinas.
La electroforesis de zona, permiti la generalizacin de los mtodos
electroforticos y su aplicacin en el laboratorio de anlisis clnicos. En este tipo de
electroforesis se utiliza un medio estabilizado como soporte para el buffer. Puede
utilizarse como soporte el papel, el acetato de celulosa seco o gelatinizado, el gel
de agar, agarosa, almidn, gel de acrilamida, etc.
En la electroforesis de zona por lo comn se observan 5 fracciones, la ms
andica es la albmina, luego le siguen , siendo sta la ms catdica.
OBJETIVO:
Que el alumno aplique el mtodo electrofortico al estudio de las protenas

plasmticas.
MATERIAL Y MTODO
Reactivos.- Equipo.-
Soln buffer pH 8.6 Cmara de Electroforesis
16
Ponceau-S Fuente de Poder
Ac. Actico 5% Aplicador
Metanol Parrilla
Ac.actico glacial
Membranas de acetato de celulosa
MATERIAL POR SECCIN. MATERIAL POR EQUIPO:

1 probeta de 100 ml 1 tubo Vacutainer rojo
3 cajas Petri soporte, aguja y torniquete
20 tiras de papel filtro 4x10 cm 1 tubo 7X100
1 pip. Pasteur c/chuzo
TCNICA:
1) Se principia a remojar la membrana de acetato de celulosa en la soln buffer,
durante 15 60 min., deslizando el borde de la membrana debajo de la superficie
de la soln poco a poco y sin interrupcin hasta que quede sumergida
completamente.
2) Verter 70 ml de soln buffer en cada electrodo de la cmara, y colocar una tira

de papel filtro en cada borde de los electrodos ponindolas en contacto con la
soln buffer.
3) Colocar en los pozos de la base toma-muestras el suero, y alimentar el aplicador

descendindolo en los pozos 3 o 4 veces y eliminar esta primera muestra. Volver
a alimentar el aplicador y dejarlo preparado.
4) Quitar el exceso de buffer a la membrana de acetato de celulosa, con ayuda de

papel filtro, e inmediatamente aplicar la muestra manteniendo el aplicador
firmemente contra la membrana durante 10 seg.
17
5) Colocar la membrana en la cmara, fijndola con un portaobjetos a cada lado
del electrodo. Tapar la cmara y conectar a la fuente de poder 180 Voltios
durante 15 min.
6) Retirar la membrana de la cmara y proceder a colorearla con Ponceau-S

durante 10 min.
7) Llevar a la membrana a una serie de baos. Primeramente con ac. actico al 5%

durante 5 min., para quitar el exceso de colorante.
8) Colocar en bao con metanol durante 5 min, para deshidratar la membrana.
9) Colocar en bao de soln aclaradora (metanol-ac. actico) durante 5 min.
10) Secar la membrana a temperatura ambiente o a 70 C por 2 min.
BIBLIOGRAFA:
1. Richterich R., Colombo J:P:, Qumica Clnica. Teora, Prctica e interpretacin,

Ed. Salvat. Barcelona.
18
PRACTICA 6, 7 y 8
DETERMINACION DE LIPIDOS TOTALES, COLESTEROL Y

TRIGLICERIDOS
INTRODUCCIN:
Los lpidos constituyen un grupo heterogneo de sustancias insolubles o

poco solubles en agua, s en solventes orgnicos como ter, cloroformo, benzal,
ter de petrleo, etc. En general los lpidos del organismo se distribuyen en: las
clulas en el citoplasma y material de reserva. En la sangre circulante estn unidos
a las protenas plasmticas por lo que constituyen las lipoprotenas. Estas
lipoprotenas tienen como funcin principal posibilitar el desplazamiento de los
lpidos exgenos y endgenos entre el hgado, el tejido graso y otros rganos de la
economa.
Las lipoprotenas se estudiaron separndolas por mtodos salinos,

precipitacin con antisueros especficos, electroforesis, ultracentrifugacin o
cromatografa. La clasificacin ms frecuente se basa en el procedimiento
electrofortico, y reciben diferentes nombres: Quilomicrones (QM) constitudos a
partir de TG exgenos en su mayor proporcin, y que transportan las grasas del
intestino hacia el corazn por medio de los vasos linfticos. Las preLP (VLDL) se
constituyen predominantemente a partir de TG endgenos. Las LP (LDL)
transportan la mayor parte del colesterol, y abastecen a todas las membranas
celulares de los tejidos perifricos. Las LP (HDL) en cuya composicin predominan
las protenas y los fosfolpidos, y transportan el colesterol al hgado en donde es
metabolizado y excretado, de donde se considera un factor de proteccin contra el
acmulo de colesterol.
Debido a lo anterior la cuantificacin de lpidos totales, colesterol total, C-
HDL, CLDL, triglicridos y una electroforesis son de gran ayuda para la
identificacin de las diferentes dislipoproteinemias.
19
OBJETIVO:
Que el alumno efecte diversas determinaciones de lpidos que le ayuden a

identificar la presencia de dislipoproteinemia.
MATERIAL Y MTODOS
REACTIVOS: EQUIPO:
Equipo para lpidos totales Centrfuga
Equipo para triglicridos enzimticos Espectrofotmetro
Equipo para colesterol enzimtico Celdas de espectrofotmetro
Algodn y alcohol
Material por Seccin: Material por Equipo:

3 pip. 10 ml 1 gradilla
2 pip. 5 ml 2 tubos de rosca grandes
1 pip. 2 ml 5 tubos 10X100 pyrex
7 pip. 1 ml 7 tubos de 10X100
7 pip. O.1 ml 1/100 2 tubos 16X150 pyrex
1 tubo Vacutainer rojo
soporte, aguja y torniquete
1 pip. Pasteur c/chuzo
FUNDAMENTO DEL METODO PARA LIPIDOS TOTALES:

Los lpidos insaturados reaccionan con el acido sulfrico formando un ion
carbonio que reacciona con el carbonilo de la fosfovainillina produciendo un
complejo de color rosa, que es estabilizado por resonancia. La intensidad del color
del complejo es proporcional a la concentracin de los lpidos en el suero.
MUESTRAS:
Suero, plasma (EDTA).
20
METODO:
1.- Marcar tres tubos de ensayo con las letras MMA (mezcla, muestra, acida), MPA
(mezcla, patrn acida) y B (blanco) y proceder como sigue:
B MMA MPA
Muestra ----------- 0.1 ml -----------
Patron ----------- --------- 0.1 ml
Acido sulfrico conc. ----------- 2.0 ml 2.0 ml
2.- Mezclar bien y poner en bao de agua hirviendo durante 10 minutos.
3.- Colocar 5 minutos en bao de agua fra. Proceder como sigue:

B Muestra Patron
MMA ----------- 0.1 ml -----------
MPA ----------- ----------- 0.1 ml
Acido sulfrico conc. 0.1 ml ----------- -----------
Reactivo de color 2.5 ml 2.5 ml 2.5 ml
4.- Mezclar bien con Vortex e incubar a 37 C durante 15 minutos. Determinar las
absorbancias de la muestra y del patrn a 540 nm igualando a cero con el blanco.
El color es estable por 15 minutos.
CALCULOS:
A Muestra
A Patrn
LIMITES DE REFERENCIA:
En ayuno 400-1000 mg/dl
21
FUNDAMENTO DEL MTODO PARA TRIGLICERIDOS
Los triglicridos presentes en la muestra originan, segn las reacciones acopladas
descritas a continuacin, un complejo coloreado que se cuantifica por
espectrofotometra.
Triglicridos + H2O Glicerol + cidos grasos
Glicerol + ATP Glicerol 3 P + ADP
Glicerol 3 P + O2 Dihidroxiacetona P + H2O2
2 H2O2 + 4 Aminoantipirina + 4 - Clorofenol Quinonaimina + 4 H2O
MUESTRAS
Suero o plasma recogidos mediante procedimientos estndar.
PROCEDIMIENTO
1. Atemperar el Reactivo a temperatura ambiente.
Patrn Triglicridos ----------- 10 L -----------
Muestra ----------- ----------- 10 L
3. Agitar bien e incubar los tubos durante 15 minutos a temperatura ambiente (16-
25C) o durante 5 minutos a 37C.

22
CLCULOS
La concentracin de triglicridos en la muestra se calcula a partir de la siguiente
frmula:
A Muestra
A Patrn
Hasta 150 mg/dL Bajo

150-199 mg/dL Dudoso
200-499 mg/dL Alto
> 500 mg/dL Muy alto
FUNDAMENTO DEL MTODO PARA COLESTEROL TOTAL

Tanto el colesterol libre como el esterificado presentes en la muestra originan, segn
las reacciones acopladas descritas a continuacin, un complejo coloreado que se
cuantifica por espectrofotometra.
Colesterol esterificado + H2O Colesterol + cido graso
Colesterol + O2 + H2O Colestenona + H2O2
2 H2O2 + 4 Aminoantipirina + Fenol Quinonaimina + 4 H2O
MUESTRAS
El colesterol en suero o plasma es estable 7 das a 2-8C. Pueden utilizarse como
anticoagulantes la heparina, EDTA, oxalato o fluoruro.
23
PROCEDIMIENTO
Patrn Colesterol ----------- 10 l -----------
Muestra ----------- --------- 10 L

CLCULOS
La concentracin de colesterol en la muestra se calcula a partir de la siguiente
frmula:
A Muestra
A Patrn
Los siguientes valores discriminantes universales han sido establecidos por el US
National Cholesterol Education Program y tambin aceptados en otros paises para
la evaluacin del riesgo de enfermedad de las arterias coronarias.
Hasta 200 mg/dL = 5,2 mmol/L Optimo

200-239 mg/dL = 5,2-6,21 mmol/L Moderado
> 240 mg/dL = > 6,24 mmol/L Elevado
24
BIBLIOGRAFA
1. Allain CC, Poon LS, Chan CSG, Richmond W and Fu PC. Enzymatic
determination of total serum cholesterol. Clin Chem 1974; 20: 470-475.
2. Meiattini F, Prencipe L, Bardelli F, Giannini G and Tarli P. The 4-

hydroxybenzoate/4- aminophenazone chromogenic system used in the enzymic
determination of serum cholesterol. Clin Chem 1978; 24: 2161-2165.
3. National Cholesterol Educarion Program Expert Panel. Third report of the National
Cholesterol Education Program (NCEP) Expert Panel on Detection, Evaluation,
andTreatment of High Blood Cholesterol in Adults (ATP III). NIH Publication.
Bethesda: National Heart, Lung, and Blood Institute; 2001.
4. Young DS. Effects of drugs on clinical laboratory tests, 4th ed. AACC Press, 1995.
25
PRCTICA 9
DETERMINACIN DE COLESTEROL HDL, LDL y

VLDL
INTRODUCCION:
Las HDL participan en la captacin del colesterol de los tejidos y en su

transporte hacia el hgado donde se elimina en forma de cidos biliares.
Existe una correlacin positiva entre concentraciones bajas de HDL-colesterol en
plasma y la incidencia de aterosclerosis, base del infarto de miocardio y accidentes
cerebrovasculares.
Existen diversos estados patolgicos o influencias ambientales asociados con
niveles reducidos de HDL: enfermedades hepatocelulares agudas o crnicas,
hiperalimentacin intravenosa, malnutricin severa, diabetes, anemia crnica,
alteraciones mieloproliferativas, enfermedad de Tangier, analfalipoproteinemia,
estrs agudo, algunos medicamentos y el tabaco.
Las LDL son las principales lipoproteinas que transportan colesterol heptico hacia
los tejidos.
Existe una correlacin positiva entre concentraciones elevadas de LDL-colesterol
en plasma y la incidencia de aterosclerosis, base del infarto de miocardio y
accidentes cerebrovasculares.
Existen diversos estados patolgicos o influencias ambientales asociados con
niveles elevados de LDL: nefrosis, diabetes, obesidad, algunos medicamentos y el
tabaco.
26
OBJETIVO:
El alumno ejecutar la tcnica para la determinacin de colesterol HDL, LDL

y VLDL sricos y evaluar si se encuentras dentro o fuera de los lmites biolgicos
de referencia para un probable diagnstico de dislipidemia.
MATERIAL Y REACTIVOS
FUNDAMENTO DEL MTODO PARA COLESTEROL HDL
Las lipoprotenas de muy baja densidad (VLDL) y de baja densidad (LDL) presentes
en la muestra, precipitan en presencia de fosfotungstato y iones magnesio. El
sobrenadante contiene las lipoprotenas de elevada densidad (HDL), cuyo colesterol
se cuantifica espectrofotomtricamente mediante las reacciones acopladas
descritas a continuacin:
col. esterasa
col. oxidasa
peroxidasa
FUNDAMENTO DEL MTODO PARA COLESTEROL LDL
Las lipoprotenas de baja densidad (LDL) presentes en la muestra, precipitan en

presencia de polivinil sulfato. La concentracin de colesterol LDL se calcula por
diferencia entre los valores de colesterol en el suero y en el sobrenadante obtenido
tras la precipitacin. El colesterol se cuantifica espectrofotomtricamente mediante
las reacciones acopladas descritas a continuacin.
27
col. esterasa
col. oxidasa
peroxidasa
PREPARACIN DE LOS REACTIVOS

Tanto el Reactivo como el Patrn estn listos para su uso.
EQUIPO ADICIONAL
Centrfuga de sobremesa
Bao de agua a 37C (opcional)
Analizador, espectrofotmetro o fotmetro para lecturas a 500 20 nm
MUESTRAS
PROCEDIMIENTO
Precipitacin
1. Pipetear en un tubo de centrfuga:
Muestra 0,2 mL
Reactivo (A) (kit de Colesterol HDL) 0,5 Ml
2. Agitar bien y dejar durante 10 minutos a temperatura ambiente.
3. Centrifugar durante 10 minutos a un mnimo de 4.000 r.p.m.
4. Recoger con cuidado el sobrenadante.
28
Colorimetra
5. Atemperar el Reactivo (kit de Colesterol) a temperatura ambiente.

Agua destilada 100 L ---------- ---------
Patrn Colesterol HDL (S) ----------- 100 L -----------
Sobrenadante muestra ----------- ------------ 100 L

Reactivo (A) (kit de Colesterol) 1,0 mL 1,0 mL 1,0 mL

CLCULOS
La concentracin de colesterol HDL en la muestra se calcula a partir de la siguiente
frmula general:
A Muestra
---------------- x C Patrn = C Muestra
A Patrn
Si se utiliza para calibrar el Patrn de Colesterol HDL suministrado:

x 52,5 = mg/dL colesterol HDL
x 1,36 = mmol/L colesterol HDL
29
Las concentraciones de colesterol de HDL varan considerablemente con la edad y
el sexo. El siguiente valor discriminante ha sido recomendado para identificar
indivduos con elevado riesgo de enfermedad coronaria.
Hasta 35 mg/dL = 0,91 mmol/L Elevado
> 60 mg/dL = > 1,56 mmol/L Bajo
REACTIVOS ADICIONALES PARA COLESTEROL LDL
Este reactivo precipitante debe ser utilizado junto con el Reactivo de Colesterol
contenido en cualquiera de los kits de Colesterol

El Reactivo est listo para su uso.
EQUIPO ADICIONAL
Bao de agua a 37C
MUESTRAS
Suero recogido mediante procedimientos estndar.
El Colesterol LDL en suero es estable 24 horas das a 2-8C.
PROCEDIMIENTO
Precipitacin
Muestra 0,4 mL
Reactivo (A) (kit de Colesterol LDL) 0,2 Ml
30
Colorimetra

Agua destilada 20 L ---------- ---------


31
CLCULOS
La concentracin de colesterol en el sobrenadante se calcula a partir de la siguiente
frmula
general:
A Muestra
A Patrn
Si se utiliza para calibrar el Patrn de Colesterol, incluido en el Kit de Colesterol:
x 200 x 1,5 = mg/dL colesterol en sobrenadante

x 5,18 x 1,5 = mmol/L colesterol en sobrenadante
La concentracin de colesterol LDL en la muestra se calcula:
colesterol LDL = colesterol total colesterol en sobrenadante

100-129 mg/dL = 2,59-3,34 mmol/L Casi ptimo
160-189 mg/dL = 4,14 -4,90-mmol/L Elevado
> 190 mg/dL = 4,92 mmol/L Muy elevado
32
BIBLIOGRAFA
1. Grove TH. Effect of reagent pH on determination of high-density lipoprotein

cholesterol by precipitation with sodium phosphotungstate-magnesium. Clin Chem
1979; 25: 560-564.
2. Burstein M, Scholnick HR and Morfin R. Rapid method for the isolation of

lipoproteins from human serum by precipitation with polyanions. Scand J Clin Lab
Invest 1980; 40: 583-595.
Cholesterol Education Program (NCEP) Expert Panel on Detection, Evaluation, and
Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (ATP III). NIH Publication. Bethesda:
National Heart, Lung, and Blood Institute; 2001.
6. Friedman and Young. Effects of disease on clinical laboratory tests, 3th ed. AACC
Press, 1997.
PRACTICA 10
33
INDICADORES DE SINDROME METABOLICO
INTRODUCCION
Aunque la medida de la presin arterial es hoy dia una exploracin rutinaria, siguen
siendo los resultados de la misma los que permiten diagnosticar la hipertensin,
independientemente de otras exmenes o tests de laboratorio. Su correcta
determinacin reviste, por tanto, gran importancia ya que una sobrestimacin de la
misma puede inducir un diagnstico errneo en un enfermo sano con la probable
aplicacin de un tratamiento innecesario.
La medida de la presin arterial deber ser, por tanto, realizada con un equipo
adecuado que garantice su exactitud y reproducibilidad tanto individual como
interindividual.
OBJETIVO
El alumno realizar la determinacin de Marcadores para determinar enfermedad

metabolica o no
Tcnica
La tcnica utilizada para la determinacin de la presin arterial se basa en la

interrupcin del flujo de sangre de la arterial braquial mediante la aplicacin de una
presin uniforme con un manguito inflable. Cuando la presin aplicada es mayor
que la presin arterial, el vaso se colapsa y el flujo se detiene no auscultndose
ningn ruido.
Al ir diminuyendo la presin del manguito, el flujo en el vaso se restaura originando

unos ruidos caractersticos del flujo turbulento que progresivamente pasa a flujo
laminar y que permiten el clculo de las presiones arteriales diastlica y sistlica.
34
Los ruidos que permiten dichos clculos se conocen como fases de Korotkoff:
Fase I: Indica que la presin del vaso ha soprepasado la presin externa. Es

un sonido abrupto, alto y progresivamente intenso.
Fase II: El sonido es ms claro, intenso y prolongado.
Fase III: el sonido continua alto y claro aunque empieza a percibirse un
murmullo que indica su prxima desaparicin
Fase IV: hay un prdida brusca de la intensidad del sonido que se hace
marcadamente apagado con un murmullo continuo. En ocasiones es lo ltimo
que se escucha
Fase V: Desaparicin total del sonido al restablecerse el flujo laminar.
Para la correcta medida de la presin arterial se debern tomar las siguientes

precauciones:
el manguito inflable deber ser de las dimensiones adecuadas para rodear el

perimetro del brazo exactamente. Existen multitud de "tallas" de manguitos
de tal forma que puede elegirse el ms apropiado para cada enfermo. Incluso
existen manguitos de un solo uso para uso enfermos infecciosos. El
estetoscopio se colocar en la parte inferior
el manguito ser inflado rpidamente hasta que su presin sobrepase la PAS
estimada, lo que se puede comprobar por la desaparicin del pulso radial.
Desde este nivel de presin se comienza a desinflar el manguito de forma
lenta y progresiva.
Cuando la presin arterial y la del manguito se igualan, en cada sstole la
presin es capaz de superar ligeramente la presin externa. Esto se traduce
en la aparicin del pulso y de un sonido intenso que accompaa cada onda
de pulso.
A medida que se desinfla el manguito van apareciendo las distintas fases de
Korotkoff hasta desaparecer en la fase V.
35
Factores que influyen
Para que las medidas de la presin arterial sean reproducibles por otro observador,
es necesario estandarizar el procedimiento, teniendo en cuenta los factores que
influyen:
Ambiente: el local donde se realice la medida deber ser lo ms tranquilo

posible, sin ruidos y con una temperatura e iluminacin agradables.
Paciente: el paciente deber permanecer en reposo durante 5 minutos antes
de efectuar la medida de la presin, sentado confortablemente en un silln
adecuado con el brazo a explorar relajado y apoyado, con la palma hacia
arriba. El brazo debe estar descrubierto.
Observador: los profesionales que realizan las medidas de la presin arterial
debern tener un entrenamiento similar. Debern estar familiarizado con el
sonido del estetoscopio y tener la capacidad de discriminar sonidos
correspondientes a las fases de Korotkoff. En particular, los ruidos de las
fases IV y V deben ser perfectamente discriminados.
Equipos
El equipo preciso para la medida de la presin arterial est constitudo por el

estetoscopio, el esfingomanmetro y el manguito.
Estetoscopio:
los sonidos arteriales son bien transmitidos y sern bien percibidos si se

coloca sobre la arteria humeral, en el pliegue del codo.
Esfigomanmetro:
puede ser de mercurio, aneroide u oscilomtrico:
36
o de mercurio: consiste en un cubeta que contiene mercurio conectada
a un tubo vertical de cristal con un extermo abierto por donde sube el
mercurio al inflar el manguito. El tubo est calibrado entre 0 y 300 mm
. El sistema va conectado mediante un tubo de goma al mecanismo
de inflado que consiste en una pera y una vlvula que regula el paso
del aire hacia el sistema o hacia el exterior. Deber estar en posicin
vertical sobre una mesa horizontal o mejor an colgado de una pared.
o aneroide: se trata de un mecanismo a resorte que se moviliza a una
presin determinada y de forma proporcional a la misma, desplazando
una aguja en una esfera graduada en mm de Hg. Aunque vienen
calibrados de fbrica, son sensibles a la temperatura y humedad y se
deben recalibrar cada 6 meses
o oscilomtrico: es un aparato electrnico basado en el anlisis de la
onda de pulso. Algunos equipos que llevan este tipo de
esfingomanmetro pueden ser muy sofisticados, siendo programables
y permitiendo el inflado automtico del manguito. Incluso algunos se
han desarrollado como perifricos para conectar a un PC. En los ms
sencillos y baratos, el inflado es manual. La fiabilidad de estos
aparatos ha sido bien establecida, lo que los hace ideales para la toma
domiciliaria de la PA.
Manguito:
el maguito consta de una cmara de caucho infable situada en el interior de

una funda de tela que la engloba y que permite un abombamiento en su parte
interna. Las dimensiones del mismo son crticas, ya que un brazal demasiado
ancho dar valores anormalmente bajos de la PA, mientras que uno
demasiado estrecho dar valores ms altos.
Se han comercializado numeros tipos de manguitos para adultos y nios,

multiusuarios o para pacientes individuales. Las tallas ms usuales se
muestran en la tabla 2.1
37
DETERMINACION DE INDICE DE MASA DE CINTURA
El ndice cintura-cadera (IC-C) es una medida antropomtrica especfica para

medir los niveles de grasa intraabdominal, relaciona el permetro de la cintura
con el de la cadera (en centmetros) y dependiendo del resultado se estima si hay
cierto riesgo cardiovascular.
La OMS establece unos niveles normales de 0,8 en mujeres y 1 en hombres,

valores superiores indicaran obesidad abdominovisceral, lo cual se asocia a
un riesgo cardiovascular aumentado. Este parmetro es un buen indicativo para
ir vigilando tu salud cardiovascular de manera sencilla, si tus niveles se salen de los
valores normales ve tomndote en serio empezar con una vida saludable, mejor
prevenir que curar.
Adems esta medida es complementaria al ndice de Masa Corporal (IMC), ya que

el IMC no distingue si el sobrepeso se debe a retencin de lquidos, hipertrofia o
similar. De este modo el medir el IMC y el IC-C nos aproximar mejor a conocer
nuestra situacin respecto al peso y riesgo cardiovascular.
38
DETERMINACION DE GLUCOSA EN SANGRE
INTRODUCCION:
En el laboratorio clnico el metabolismo que el organismo lleva a cabo sobre

los carbohidratos consumidos y producidos en l, se refleja en la concentracin que
la glucosa alcanza a nivel srico. Por tal motivo sta determinacin es una de las
ms importantes a nivel del laboratorio clnico ya que permite definir el estado basal
de dicho proceso.
La glucosa es la principal fuente de energa del organismo. La insulina,

producida en las clulas de los islotes del pncreas, facilita la entrada de glucosa
en las clulas de los tejidos. Una deficiencia de insulina o una disminucin de su
actividad ocasiona un aumento de la glucosa en sangre.
Se encuentran concentraciones elevadas de glucosa en suero o plasma en
pacientes con diabetes mellitus (dependiente de insulina o no dependiente de
insulina) y con otras condiciones o sndromes. La hipoglucemia puede darse como
respuesta al ayuno, o bien puede ser debida a frmacos, venenos, errores
congnitos del metabolismo o gastrectoma previa.
El diagnstico clnico no debe realizarse teniendo en cuenta el resultado de un nico
ensayo, sino que debe integrar los datos clnicos y de laboratorio (1).
OBJETIVO:
El alumno ejecutar la tcnica para la determinacin de glucosa srica y

evaluar si se encuentras dentro o fuera de los lmites biolgicos de referencia.
MATERIAL Y REACTIVOS
FUNDAMENTO DEL MTODO
39
La glucosa presente en la muestra origina, segn las reacciones acopladas
descritas a continuacin, un complejo coloreado que se cuantifica por
espectrofotometra.
Glucosa + O2 + H2O Glucnico + H2O2
Tanto el Reactivo como el Patrn estn listos para su uso.
EQUIPO ADICIONAL
Bao de agua a 37C
MUESTRAS
Suero o plasma recogidos mediante procedimientos estndar. El suero o plasma
deben separarse de los elementos celulares lo antes posible para evitar la glucolisis.
La adicin de fluoruro sdico a la muestra de sangre previene la glucolisis.
PROCEDIMIENTO

2. Pipetear en tubos de ensayo: (Nota 1)

Patrn (S) 10 L
Muestra 10 L
Reactivo (A) 1,0 mL 1,0 mL 1,0 mL
25C) o
durante 5 minutos a 37C.
40
CLCULOS
La concentracin de glucosa en la muestra se calcula a partir de la siguiente frmula
general:
A Muestra
A Patrn
Si se utiliza para calibrar el Patrn de Glucosa suministrado

x 100 = mg/dL glucosa
x 5,55 = mmol/L glucosa
Suero y plasma:
Neonato, prematuro 25-80 mg/dL = 1,39-4,44 mmol/L
Neonato, a trmino 30-90 mg/dL = 1,67-5,00 mmol/L
Nios, adultos 70-105 mg/dL = 3,89-5,83 mmol/L
BIBLIOGRAFA
1. Trinder P. Determination of glucose in blood using glucose oxidase with an
alternative oxygen acceptor. Ann Clin Biochem 1969; 6: 24-27.
3. National Diabetes Data Group: Classification and diagnosis of diabetes mellitus
and other categories of glucose intolerance. Diabetes 1979; 28:1039-1057.
Press, 1997.
41
PRACTICA 11
DETERMINACION DE LDL-C Y FIBRINOGENO
REACTIVOS ADICIONALES PARA COLESTEROL LDL
Este reactivo precipitante debe ser utilizado junto con el Reactivo de Colesterol
contenido en cualquiera de los kits de Colesterol

El Reactivo est listo para su uso.
EQUIPO ADICIONAL
Bao de agua a 37C
MUESTRAS
Suero recogido mediante procedimientos estndar.
El Colesterol LDL en suero es estable 24 horas das a 2-8C.
PROCEDIMIENTO
Precipitacin
Muestra 0,4 mL
Reactivo (A) (kit de Colesterol LDL) 0,2 Ml
42
Colorimetra

Agua destilada 20 L ---------- ---------


CLCULOS
La concentracin de colesterol en el sobrenadante se calcula a partir de la siguiente
frmula
general:
A Muestra
A Patrn
43
Si se utiliza para calibrar el Patrn de Colesterol, incluido en el Kit de Colesterol:
x 200 x 1,5 = mg/dL colesterol en sobrenadante

x 5,18 x 1,5 = mmol/L colesterol en sobrenadante
La concentracin de colesterol LDL en la muestra se calcula:
colesterol LDL = colesterol total colesterol en sobrenadante

100-129 mg/dL = 2,59-3,34 mmol/L Casi ptimo
160-189 mg/dL = 4,14 -4,90-mmol/L Elevado
> 190 mg/dL = 4,92 mmol/L Muy elevado
BIBLIOGRAFA
1. Grove TH. Effect of reagent pH on determination of high-density lipoprotein

cholesterol by precipitation with sodium phosphotungstate-magnesium. Clin Chem
1979; 25: 560-564.
2. Burstein M, Scholnick HR and Morfin R. Rapid method for the isolation of

lipoproteins from human serum by precipitation with polyanions. Scand J Clin Lab
Invest 1980; 40: 583-595.
Cholesterol Education Program (NCEP) Expert Panel on Detection, Evaluation, and
44
Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (ATP III). NIH Publication. Bethesda:
National Heart, Lung, and Blood Institute; 2001.
Press, 1997.
DETERMINACION DE FIBRINOGENO
INTRODUCCION
Para la conversin del valor en segundos a mg/dl de fibringeno sirve
la tabla adjunta al estuche. Los valores indicados en sta son vlidos
slo para el reactivo de fibringeno con el mismo nmero de control y
para los analizadores indicados.
La conversin (para la dilucin 1 + 9) es posible en el intervalo de 5
40 seg. El intervalo de precisin ptimo (825 seg) est marcado por
dos lneas negras. Si se requiere una determinacin ms exacta fuera
de este intervalo ptimo, se recomienda repetir el test con otra dilucin.
Si el tiempo de coagulacin es inferior a 8 seg, se repite el test con
la dilucin de 1 + 19 y se multiplica el resultado obtenido por 2. Si el
tiempo de coagulacin es superior a 25 seg, se repite el test con una
dilucin de 1 + 4 1 + 1. Con una dilucin de 1 + 4, dividir el valor
obtenido por 2, con una de 1 + 1 dividir por 5.
Observaciones
Un inhibidor de la heparina, aadido al reactivo, permite la
determinacin tambin en pacientes bajo tratamiento con heparina.
45
OBJETIVO
El alumno realizar la determinacin de Marcadores para determinar enfermedad
metabolica o no
Extraccin de sangre venosa

La estasis venosa debe hallarse entre la presin sistlica y diastlica
y no debe durar ms de un minuto. La estasis repetida de la misma vena no es
posible antes de haber transcurrido 10 minutos.
Se recomienda emplear jeringas de un solo uso con solucin estril
de citrato sdico (0,11 mol/l). Hay que observar estrictamente las
proporciones de mezcla de citrato sdico y sangre de 1 + 9. La velocidad de la
extraccin se elige de manera que no se presente una depresin demasiado alta en
la jeringa.
Obtencin del plasma
Inmediatamente despus de la extraccin, mezclar bien la sangre y
trasladarla a un tubo de centrfuga, evitndose la formacin de espuma. Centrifugar
15 min. a aprox. 2500 g. Efectuar la centrifugacin en el plazo de 2 horas despus
de la extraccin de sangre. A continuacin, pipetear el sobrenadante.
Estabilidad de la muestra
4 horas a 1525C (a partir del momento de la extraccin de sangre)
Dilucin de plasma
Diluir una parte de plasma citratado con nueve partes de la solucin
tampn, pH 7,35.
Mtodo de determinacin
Pipetear en un tubo de ensayo:
Muestra o plasma de control diluidos 0,2 ml
Incubar 1 min a 37C
Reactivo de Fibringeno (2025C) 0,2 ml
Con la adicin del reactivo de fibringeno, disparar el cronmetro y determinar el
comienzo de la coagulacin.
46
* La determinacin del fibringeno con el Fibrintimer requiere la adicin de caoln.
Disolver el contenido del frasco 1 con 1,8 ml de agua bidest. y aadir 0,2 ml de una
suspensin de caoln (p. ej. del Reactivo PTT, Ref. 126 551 524 298).
Evaluacin
la tabla adjunta al estuche. Los valores indicados en sta son vlidos
slo para el reactivo de fibringeno con el mismo nmero de control
y para los analizadores indicados.
La conversin (para la dilucin 1 + 9) es posible en el intervalo de 5 40 seg. El
intervalo de precisin ptimo (825 seg) est marcado por
dos lneas negras. Si se requiere una determinacin ms exacta fuera
de este intervalo ptimo, se recomienda repetir el test con otra dilucin.
Si el tiempo de coagulacin es inferior a 8 seg, se repite el test con
la dilucin de 1 + 19 y se multiplica el resultado obtenido por 2. Si el
tiempo de coagulacin es superior a 25 seg, se repite el test con una
dilucin de 1 + 4 1 + 1. Con una dilucin de 1 + 4, dividir el valor obtenido por 2,
con una de 1 + 1 dividir por 5.
Observaciones
Un inhibidor de la heparina, aadido al reactivo, permite la determinacin tambin
en pacientes bajo tratamiento con heparina.
FUNDAMENTO DE LA TECNICA
Plasmas de control
Para el control de calidad se pueden emplear:
los plasmas de control contenidos en el estuche (normal, frasco 3,y patolgico,
frasco 4),
PreciClot I/II (normal, patolgico)
PreciClot I/II (normal)
PreciClot II/I (patolgico)
47
Preparacin de los plasmas de control normal y patolgico
Disolver el contenido de un frasco de plasma de control con exactamente 0,5 ml de
agua bidest. La solucin no se debe agitar y debe debe agitar y debe reposar por lo
menos 30 min antes del uso. El plasma de control se trata como plasma citratado
normal.
Estabilidad: 2 horas a 425C
Estabilidad: 1 mes a 20C.
Dilucin del plasma
Plasma de control normal: diluir 1 + 9 con solucin tampn.
Plasma de control patolgico: diluir 1 + 9 1 + 4 con solucin tampn.
Mtodo de determinacin
La determinacin se efecta segn el esquema de al lado. Evaluacin
la tabla adjunta al estuche. Con una dilucin de 1 + 4, dividir por 2 el valor indicado
en la tabla.
Valores tericos para los plasmas de control
Los valores exactos para los plasmas de control se toman de la hoja
adjunta a los estuches. Son vlidos slo para el nmero de control correspondiente.
Valor normal
200400 mg/dl o resp. 2,04,0 g/l
Bibliografa
Clauss A. Acta haemat 1957;17:237.
Paar D. Blut 1971;23:1.
PRACTICA NMERO 12
DETERMINACIN DE CREATINA QUINASA
48
INTRODUCCIN:
La creatina quinasa (CK) desempea una importante funcin en el msculo
proporcionando ATP, cuando el msculo se contrae, a partir de ADP y utilizando
creatina fosfato como reservorio de fosforilacin.
La CK srica procede fundamentalmente del msculo y su concentracin
depende de una serie de variables fisiolgicas (sexo, edad, masa muscular,
actividad fsica y raza).
La concentracin srica de CK se encuentra notablemente elevada en pacientes
con algunas de las enfermedades del msculo esqueltico (distrofia muscular,
miositis, polimiositis, hipertermia maligna, trauma, rabdomiolisis aguda), del sistema
nervioso central (enfermedad cerebrovascular aguda, isquemia cerebral, sndrome
de Reye) y de el tiroides (hipotiroidismo). Se observan concentraciones elevadas de
CK al cabo de 3-6 horas de un infarto de miocardio alcanzando valores mximos a
las 24-36 horas. La concentracin vuelve a la normalidad en 3-4 das debido a que
la enzima es eliminada rpidamente del plasma. El diagnstico clnico no debe
realizarse teniendo en cuenta el resultado de un nico ensayo, sino que debe
integrar los datos clnicos y de laboratorio.
OBJETIVO:
El alumno realizar la determinacin de CK como un indicador enzimtico de
confirmacin de diagnostico de Infarto agudo al miocardio.
MATERIAL Y MTODOS:
La creatina quinasa (CK) cataliza la fosforilacin del ADP por el fosfato de creatina,
obtenindose creatina y ATP. La concentracin cataltica se determina, empleando
las reacciones acopladas de la hexoquinasa y glucosa-6-fosfato deshidrogenasa, a
partir de la velocidad de formacin del NADPH, medido a 340 nm.
Fosfato de creatina + ADP Creatina + ATP

ATP + Glucosa ADP + Glucosa - 6 - fosfato
49
Glucosa - 6 - fosfato + NADP Gluconato - 6 - fosfato + NADPH + H
MUESTRAS
Suero recogido mediante procedimientos estndar
PROCEDIMIENTO
1. Precalentar el Reactivo de Trabajo y el instrumento a la temperatura de
reaccin.
2. Pipetear en una cubeta:
Muestra 50 L Reactivo de Trabajo 1,0 mL
3. Mezclar e insertar la cubeta en el fotmetro. Poner el cronmetro en marcha. 4.

A los 3 minutos, anotar la absorbancia inicial y efectuar nuevas lecturas cada
minuto durante3 minutos.
5. Calcular el incremento de absorbancia por minuto promedio (A/min).
CLCULOS
A/min x 3333 = U/L
25C 10-65 U/L
30C 15-105 U/L
37C 38-174 U/L
BIBLIOGRAFA
1. IFCC methods for the measurement of catalytic concentration of enzymes. Part
7: IFCC method for creatine kinase. JIFCC 1989; 1: 130-139.
2. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd edition. Burtis CA, Ashwood ER. WB
Saunders Co., 1999.
50
Press,1997.
PRACTICA NUMERO 13
51
DETERMINACION DE CREATINA QUINASA TOTAL E ISOENZIMA
CK-MB
INTRODUCCIN:
La creatina kinasa esta compuesta de 2 cadenas polipeptdicas, denominadas
B (de cerebro) y M (de msculo), que dan origen a los tres isoenzimas dimricos:
MM (CK-1), MB (CK-2) y BB (CK-3).
Los porcentajes de la actividad de CK-MB srica respecto a la actividad CK total
suele ser inferior al 6%. Sin embargo, estos valores aumentan al 10 a 30% despus
de un infarto de miocardio dependiendo de la extensin de tejido miocrdico
afectado y de la localizacin del infarto. No obstante, pueden encontrarse ndices
bajos de CK-MB srica tras un infarto de un miocardio previamente sano. Por
consiguiente, el diagnstico de infarto de miocardio debe basarse en la historia
clnica y otros datos, junto con la magnitud de la elevacin de CK-MB y su perfil en
el tiempo.
OBJETIVO:
El alumno determinar la CK-total y CK-MB como indicadores enzimticos de la
confirmacin y seguimiento de un Infarto al miocardio.
MATERIAL Y METODOS.
La creatina quinasa (CK) cataliza la fosforilacin del ADP por el fosfato de creatina,
obtenindose creatina y ATP. La concentracin cataltica se determina, empleando
las reacciones acopladas de la hexoquinasa y glucosa-6-fosfato deshidrogenasa, a
partir de la velocidad de formacin del NADPH, medido a 340 nm.

52
MUESTRAS
Suero recogido mediante procedimientos estndar
PROCEDIMIENTO
1. Precalentar el Reactivo de Trabajo y el instrumento a la temperatura de
reaccin.
2. Pipetear en una cubeta:
3. Mezclar e insertar la cubeta en el fotmetro. Poner el cronmetro en marcha. 4.

A los 3 minutos, anotar la absorbancia inicial y efectuar nuevas lecturas cada
minuto durante3 minutos.
5. Calcular el incremento de absorbancia por minuto promedio (A/min).
CLCULOS
A/min x 3333 = U/L
25C 10-65 U/L
30C 15-105 U/L
37C 38-174 U/L

Un anticuerpo especfico inhibe las dos subunidades M de la CK-MM (CK-3) y la nica
subunidad M de la CK-MB (CK-2), lo que permite la medicin de la subunidad B de la de la
CK- MB (asumiendo la ausencia de CK-BB o CK-1)
. La concentracin cataltica de CK-B, que corresponde a la mitad de la actividad CK-MB, se
determina empleando las reacciones acopladas de la hexoquinasa (HK) y glucosa-6-fosfato
deshidrogenasa (G6P-DH), a partir de la velocidad de formacin del NADPH, medido a 340
nm.
53
PROCEDIMIENTO
1. Precalentar el Reactivo de Trabajo y el instrumento a 37C.
2. Pipetear en un tubo de ensayo:
3. Mezclar bien e incubar inmediatamente a 37C. Poner en marcha el cronmetro.

4. Leer la absorbancia (A) a 340 nm exactamente a los 5 minutos (A 5)
y a los 10 minutos (A 10) de incubacin.
CLCULOS
La concentracin de CK-MB en la muestra se calcula a partir de la siguiente frmula:
A 10 A 5 x 1651= U/L
Se han descrito valores discriminantes de alrededor de 25 U/L = 417 nkat/L para el infarto
agudo de miocardio. No obstante, es preferible emplear el lmite del ndice de CK-MB del
6% de la concentracin de CK total valor discriminante.
BIBLIOGRAFA
1. IFCC methods for the measurement of catalytic concentration of enzymes. Part
7: IFCC method for creatine kinase. JIFCC 1989; 1: 130-139.
2. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd edition. Burtis CA, Ashwood ER. WB
Saunders Co., 1999.
54
Press,1997.
55

Manual de Prácticas Quimica Clinica II

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AREA: ANLISIS CLNICOS

ASIGNATURA: LABORATORIO QUMICA CLNICA II

FECHA: OCTUBRE 2009

CARGA HORARIA DEL ESTUDIANTE

PERFIL DESEABLE DEL PROFESOR (A) PARA IMPARTIR LA ASIGNATURA:

DISCIPLINA PROFESIONAL: Q.F.B. QBP Y QC

NIVEL ACADMICO: MAESTRIA Y/O DOCTORADO

a) El programa de laboratorio de Qumica Clnica II se encarga del desarrollo

b) Se requiere de los conocimientos previos de las materias de biologa,

c) Durante este curso se abordarn las pruebas para valorar el metabolismo

El objetivo del curso es que el alumno desarrolle las habilidades analticas y

La asistencia al laboratorio ser del 100%

Participacin en seminarios y prcticas 20 %

I. Los lugares que ofrecen atencin mdica y los centros de

II. En la Nueva clasificacin, los RPBIs son:

III. Para que un material de curacin se considere como RPBIs,

IV. Niveles de los Establecimientos Generadores

NIVEL I NIVEL II NIVEL III

VI. Atribucin a la Secretaria de Salud. Corresponde a la Secretaria de salud

misma, la disposicin de crear las Bases de Colaboracin que

1 1 Presentacin y NOM 087-SEMARNAT

4 4 Determinacin de albumina srica 13

Seminario y resolucin de casos clnicos de

7 7 Determinacin de triglicridos sricos 20

8 8 Determinacin de lpidos totales sricos 20

9 9 Determinacin de colesterol HDL, LDL y VLDL 27

10 10 Determinacin de glucosa, IMC, PC y TA 35

11 11 Determinacin de LDL-col y fibringeno 44

12 12 Determinacin de CK total srica 51

13 13 Determinacin de CK total srica y CK-MB srica 54

14 14 Seminario de troponinas y homocistena

15 15 Resolucin de casos clnicos

DETERMINACION DE PROTEINAS SERICAS TOTALES Y

FUNDAMENTO DEL MTODO PARA PROTEINAS

Blanco Patrn Muestra

2. Agitar bien y dejar los tubos durante 10 minutos a temperatura ambiente.

FUNDAMENTO DEL MTODO PARA ALBUMINA

2. Agitar bien y dejar los tubos durante 1 minuto a temperatura ambiente.

3. Leer la absorbancia (A) del Patrn y de la Muestra a 630 nm frente al Blanco. El

Recin nacidos, 2 a 4 dias 28-44 g/L

Se designa como electroforesis a la migracin de una micela coloidal a travs

Que el alumno aplique el mtodo electrofortico al estudio de las protenas

MATERIAL POR SECCIN. MATERIAL POR EQUIPO:

2) Verter 70 ml de soln buffer en cada electrodo de la cmara, y colocar una tira

3) Colocar en los pozos de la base toma-muestras el suero, y alimentar el aplicador

4) Quitar el exceso de buffer a la membrana de acetato de celulosa, con ayuda de

6) Retirar la membrana de la cmara y proceder a colorearla con Ponceau-S

7) Llevar a la membrana a una serie de baos. Primeramente con ac. actico al 5%

8) Colocar en bao con metanol durante 5 min, para deshidratar la membrana.

9) Colocar en bao de soln aclaradora (metanol-ac. actico) durante 5 min.

10) Secar la membrana a temperatura ambiente o a 70 C por 2 min.

1. Richterich R., Colombo J:P:, Qumica Clnica. Teora, Prctica e interpretacin,

DETERMINACION DE LIPIDOS TOTALES, COLESTEROL Y

Los lpidos constituyen un grupo heterogneo de sustancias insolubles o

Las lipoprotenas se estudiaron separndolas por mtodos salinos,

Que el alumno efecte diversas determinaciones de lpidos que le ayuden a

Material por Seccin: Material por Equipo:

FUNDAMENTO DEL METODO PARA LIPIDOS TOTALES:

2.- Mezclar bien y poner en bao de agua hirviendo durante 10 minutos.

3.- Colocar 5 minutos en bao de agua fra. Proceder como sigue:

Triglicridos + H2O Glicerol + cidos grasos