DEPARTAMENTO

DE QUMICA
OBTENCIN DE BIODIESEL POR VA ENZIMTICA

Mdulo: Generacin y recuperacin de energa/ Reactores Tema: Biocombustibles

qumicos/ Ensayos fsicos
Laboratorio: Qumica industrial Duracin (horas): 9

Contenido
Pulsar F9 para rehacer el ndice (ttulos y pginas)

OBJETIVO ....................................................................................................................................................... 2
FUNDAMENTO TERICO ................................................................................................................................ 2
MATERIALES, REACTIVOS, INSTRUMENTOS ................................................................................................... 5
Materiales ...................................................................................................................................................... 5
Reactivos........................................................................................................................................................ 5
Instrumentos ................................................................................................................................................. 6
PROCEDIMIENTO ........................................................................................................................................... 6
RESULTADOS ................................................................................................................................................ 11
OBSERVACIONES .......................................................................................................................................... 11
APLICACIONES, UTILIDAD DE LA PRCTICA .................................................................................................. 12

Este recurso ha sido subvencionado por el Ministerio de Educacin, Cultura y Deporte a travs de la convocatoria de ayudas para el diseo y
aplicacin de proyectos de mejora del aprendizaje del alumnado por agrupaciones de colaboracin profesional entre centros sostenidos con
fondos pblicos de diferentes comunidades o ciudades. Creado bajo la licencia Creative Commons tipo by-sa por tiempo indefinido. Todas
las actuaciones descritas en este documento comprometen exclusivamente a los autores del mismo.

AUTORES Alba Souto, Anta Solloso, Aurelia Rivero, Irene Derungs, Maribel Bares, Rosa Rojo, Jess Serna
1 de 12| P g i n a
 OBTENCIN DE BIODIESEL POR VA ENZIMTICA

OBJETIVO

En esta prctica se pretende alcanzar los siguientes objetivos:

1. Que el alumno sintetice biodiesel mediante catlisis enzimtica a partir de aceites usados y/u
otras grasas animales o vegetales.

2. Que el alumno analice las propiedades fsico-qumicas del producto obtenido.

FUNDAMENTO TERICO

El biodiesel es un biocombustible lquido formado por una mezcla de steres monoalqulicos de cidos
grasos de cadena larga (fatty acid methyl esters, FAME) producido a partir de aceites vegetales, como por
ejemplo la colza, el girasol, la soja, el maz , aceites vegetales reciclados o grasas animales.

La fuente de aceite vegetal ms comn suele ser el aceite de colza, debido a que es la planta con mayor
rendimiento de aceite por hectrea, aunque tambin se pueden utilizar aceites usados de cocina, en cuyo
caso, la materia prima es muy barata pues se trata de un residuo.

La reaccin qumica implicada en la obtencin de biodiesel se denomina transesterificacin y consiste en

combinar el aceite (normalmente aceite vegetal ) con un alcohol de cadena corta, normalmente metanol
o etanol, generando steres monoalqulicos de cidos grasos y, como residuo, glicerina que puede ser
aprovechada por la industria cosmtica, entre otras.

Para acelerar este proceso se pueden emplear catalizadores homogneos como por ejemplo NaOH, KOH
o H2SO4, o catalizadores heterogneos como xidos metlicos, carbonatos o enzimas.

La reaccin general de transesterificacin es la siguiente:

La catlisis bsica requiere operar a temperaturas de en torno a 60C y permite obtener biodiesel con
unos rendimientos de entre 60-90%. Una de las desventajas de la va alcalina es la dificultad para
transesterificar cidos grasos libres (AGL) presentes en gran cantidad en aceites vegetales y aceites

2 de 12 | P g i n a
 OBTENCIN DE BIODIESEL POR VA ENZIMTICA

usados, lo cual hace necesario un tratamiento previo que reduzca la cantidad de AGL y evita la
saponificacin durante la reaccin. 1

En la actualidad, la catlisis enzimtica se propone como un proceso interesante debido a que se obtienen
productos ms puros, se opera a temperaturas inferiores (35-40C), se evita la formacin de jabones, se
evita el empleo de catalizadores qumicos que afecten al medio ambiente, evita la neutralizacin cida y
se puede recuperar el catalizador para ser reutilizado en un nuevo ciclo. Aunque desde el punto de vista
econmico la catlisis bsica sigue siendo competitiva frente a la enzimtica, en los ltimos aos se ha
conseguido mejorar las condiciones del proceso acortando los tiempos de reaccin y se ha abaratado el
coste de las enzimas de tal manera que se plantea como una alternativa viable de ser utilizada a escala
industrial.

El biodiesel aparece regulado en el Real Decreto 61/2006, de 31 de enero, por el que se determinan las
especificaciones de gasolinas, gasleos, fuelleos y gases licuados del petrleo y se regula el uso de
determinados biocombustibles.

La composicin y propiedades de este producto estn definidas en la norma UNE-EN 14214:2013,

exceptuando el ndice de yodo, cuyo valor mximo queda establecido en 140.2

Desde el punto de vista del inters comercial del biodiesel, tambin denominado FAME, es importante
destacar que ste es utilizado como aditivo en una proporcin de hasta el 5% en el disel comercial para
motores convencionales segn la norma UNE-EN 590:2014. Existe la posibilidad de emplear mayores
concentraciones de biodiesel, sin embargo es necesario adaptar los motores a dichas mezclas.

Cules son las ventajas y los inconvenientes de este biocombustible?

Las ventajas del biodiesel frente al disel convencional son:

Se trata de una fuente de energa de origen renovable.
Se reduce el consumo de combustibles fsiles.
Favorece el desarrollo de poblaciones rurales.
Su combustin es entre el 40% y el 80% menos contaminante que el disel convencional debido a
que las molculas contienen tomos de oxgeno que ayudan a una combustin ms limpia,
adems no es txico ya que no emite xidos de azufre y es biodegradable y la presencia de
inquemados en los humos es menor.
Se trata de un producto fcilmente biodegradable y no txico (no contiene Hidrocarburos
aromticos policclicos).
Buena capacidad lubrificante y mayor punto de inflamacin, por lo que es ms seguro.
Es el nico combustible no contaminante alternativo a los motores disel.
Como principales desventajas de este combustible:

1
L. E. Moreno Muoz, Produccin de biodiesel de pin (Jatropha curcas) y palma africana (Elaeis guineensis) con
dos enzimas derivadas de Candida antartica - AGI-2013-037.pdf. [En lnea]. Disponible en:
http://bdigital.zamorano.edu/bitstream/11036/1808/1/AGI-2013-037.pdf . [Accedido: 10-ene-2014].

2
BiodieselSpain.com, Microsoft Word - Documento4 - norma_en_14214.pdf. [En lnea]. Disponible en:
http://www.biodieselspain.com/articulos/norma_en_14214.pdf . [Accedido: 10-ene-2014].

3 de 12 | P g i n a
 OBTENCIN DE BIODIESEL POR VA ENZIMTICA

Su coste todava no lo hace competitivo frente al disel convencional.

Es menos estable a la oxidacin, un inconveniente respecto a su almacenamiento.
Posee peores propiedades en fro, aunque se puede modificar aadiendo un aditivo.
Sus propiedades solventes hacen que pueda ablandar y degradar ciertos materiales como el
caucho natural y el poliuretano, por lo que es necesario adaptar los motores antes de emplear
biodiesel en un vehculo.

Factores que afectan al proceso de transesterificacin mediante catlisis enzimtica: 3

Temperatura de la reaccin: El rango de temperaturas ms adecuado para la lipasa seleccionada

est entre 45 y 60C, con rendimientos dependiendo del tipo de aceite entre 60 y 90%,
respectivamente.

Relacin molar alcohol: aceite vegetal: La relacin estequiomtrica de la reaccin requiere una
relacin molar 3:1 alcohol: aceite, sin embargo es necesario aadir un exceso de alcohol para
evitar la reversibilidad de la reaccin en este tipo de catlisis. Dependiendo de la enzima se
pueden elevar las relaciones molares, aunque una relacin elevada de disolvente puede inhibir las
enzimas.

Tipo de alcohol: el rendimiento de la reaccin depende la lipasa y el alcohol. La lipasa C. antrctica

es ms eficiente con alcoholes secundarios segn la bibliografa.

Solvente: Para mejorar la solubilidad del aceite en el alcohol y debido al recubrimiento de la

enzima por la glicerina se utilizan en solventes como hexano, terbutanol, acetona y ter de
petrleo. Sin embargo esto aumenta los costes de produccin del producto y purificacin del
disolvente.

Biocatalizador: Los catalizadores inmovilizados favorecen el aumento del rendimiento y acorta los
tiempos de reaccin. La concentracin del biocatalizador tambin es crtica pues una
concentracin muy elevada no va ligada a un aumento del rendimiento sino que incluso puede
causar lo contrario. Para la lipasa Novozyme 435 se emplean concentraciones de entre 3-10% en
masa.

Tiempo de reaccin: Es otro parmetro crtico ya que un aumento del tiempo de reaccin
aumenta los costes de produccin y no est asociado a un aumento del rendimiento.

Intensidad de mezclado: Es muy importante agitar desde el inicio de la reaccin debido a la

inmiscibilidad de las fases: aceite, metanol, enzima. Es un parmetro crtico en el escalado de la
reaccin y diseo del proceso. Se recomienda velocidades de 150-200 rpm para no afectar la
estructura de la lipasa. Cuando la lipasa est inmovilizada se puede aumentar la velocidad ya que

3
A. F. Rojas Gonzlez, E. Girn Gallego, y H. G. Torres Castaeda, Variables de operacin en el proceso de
transesterificacin de aceites vegetales... [En lnea]. Disponible en:
http://www.redalyc.org/html/643/64312498004/index.html . [Accedido: 10-feb-2014].

4 de 12 | P g i n a
 OBTENCIN DE BIODIESEL POR VA ENZIMTICA

aumenta la transferencia de masa en el soporte y disminuye la saturacin de los poros respecto a

la glicerina.

Contenido de cidos grasos libre y humedad: un contenido elevado en AGL y humedad est
asociado con el aumento del proceso de saponificacin, que no es deseable. En algunas lipasas se
requiere una interfase agua-aceite para iniciar la actividad.

MATERIALES, REACTIVOS, INSTRUMENTOS

Materiales

Matraces de fondo redondo de dos bocas de 500 mL

Refrigerante Liebig

Soporte metlico con nuez y pinza metlica.

Barrita agitadora magntica

Pesasustancias

Esptula

Montaje de filtracin a vaco:

Trompa de vaco

Matraz Kitasatos

Embudo Bchner

Papel de filtro

Decantacin:

Embudo de decantacin

Matraz Erlenmeyer

Eliminacin de disolvente y densidad:

Matraz de fondo redondo de 250 mL

Picnmetro

Reactivos

Aceite vegetal (oliva, girasol o aceite usado)

5 de 12 | P g i n a
 OBTENCIN DE BIODIESEL POR VA ENZIMTICA

Lipase acrylic resin from Candida antarctica 5,000 U/g, recombinant, expressed in Aspergillus
niger (Sinnimo: Novozyme 435) 4

Alcohol de cadena corta (Metanol, etanol, propanol)

Agua desionizada

Instrumentos

Placa calefactora con agitacin magntica y bloque de calentamiento con sonda de temperatura
IKA.

Rotavapor

Nota: Para el escalado de la reaccin se emplea un reactor con agitacin y manta calefactora (Condiciones
del experimento en desarrollo)

PROCEDIMIENTO

Preparacin previa del aceite:

En el caso de emplear aceite reciclado de fritura es necesario filtrar a
gravedad para eliminar restos slidos que pueda presentar el aceite. A
continuacin se seca el aceite calentando a 100C para eliminar el agua.

4
2014-12576-01_Biocatalysis-Product-Sheet-Immobilised-Lipases-2.pdf. [En lnea]. Disponible en:
http://www.novozymes.com/en/solutions/biopharma/Brochures/Documents/2014-12576-01_Biocatalysis-Product-
Sheet-Immobilised-Lipases-2.pdf . [Accedido: 8-ene-2015].

6 de 12 | P g i n a
 OBTENCIN DE BIODIESEL POR VA ENZIMTICA

Preparacin previa del enzima:

Se rehidrata la enzima con el mismo disolvente empleado en la reaccin (metanol).

Puesta en marcha del experimento a pequea escala:

Se montaron en paralelo dos experimentos simultneos con las condiciones de ensayo descritas a
continuacin:

Materia prima Aceite de girasol usado

Biocatalizador (%p/p) Novozyme 435: 5% (3 gramos de enzima por 60 gramos de aceite)
Temperatura 50C
Tiempo (h) 24 h (control reaccin a intervalos)
Agitacin (rpm) 200

Experimento 1:
Relacin volumen aceite: metanol 7:10
Relacin molar aceite: metanol 1:12
Masa (g) Volumen (mL) Moles (*)
Aceite 60 70 0,2
Metanol 79 100 2,5

7 de 12 | P g i n a
 OBTENCIN DE BIODIESEL POR VA ENZIMTICA

Experimento 2:
Relacin volumen aceite: metanol: 7:20
Relacin molar aceite: metanol: 1:25
Masa (g) Volumen (mL) Moles (*)
Aceite 60 70 0,2
Metanol 150 200 5,0

(*) Para calcular los moles de aceite se tom como peso molecular medio Pm aceite~280g/mol segn la
proporcin de linoleico/oleico (componentes mayoritarios del aceite de girasol).

Toma de muestras:
Se toman muestras a distintos tiempos para posteriormente analizar la evolucin de la reaccin en el
tiempo.

El tiempo total de reaccin para ambos experimentos fue de 6 horas.

8 de 12 | P g i n a
 OBTENCIN DE BIODIESEL POR VA ENZIMTICA

Filtracin a vaco:
El producto de la reaccin se filtra a vaco con el objetivo de recuperar la enzima para posteriormente
lavarla y reutilizarla (mximo 7 ciclos).

Separacin de fases:
Se obtiene una mezcla con dos fases bien diferenciadas que se separan en un embudo de decantacin. La
fase orgnica es una mezcla de metanol, biodiesel y posibles restos de aceite de partida, diglicridos y
monoglicridos (productos intermedios de la reaccin). En la fase acuosa se observa cierta cantidad de
jabones en forma de espumas en la interfase.

Eliminacin del disolvente:

Se elimina el disolvente de la fase orgnica (metanol) en el
rotavapor, obteniendo por una parte el biodiesel que ser
analizado mediante CG-MS e infrarrojo y el metanol que ser
recuperado para volver a emplearlo en un nuevo ciclo de
experimentos.

9 de 12 | P g i n a
 OBTENCIN DE BIODIESEL POR VA ENZIMTICA

Determinacin de pH:

Para evaluar el pH del producto obtenido se emple papel indicador de pH.

Determinacin de la densidad con picnmetro:

Determinacin de la viscosidad con viscosmetro Cannon-Fenske:

10 de 12 | P g i n a
 OBTENCIN DE BIODIESEL POR VA ENZIMTICA

Determinacin del ndice de refraccin con refractmetro ABBE:

Cromatografa de gases acoplada a espectrometra de masas:

Finalmente se introduce 1 mL de cada una de las fases orgnicas en un vial y se enva al laboratorio de
anlisis y control para realizar los ensayos en el CG-MS con el objetivo de determinar si el producto
obtenido es biodiesel y conocer los metil esteres que lo componen.

RESULTADOS

MUESTRAS Densidad Viscosidad ndice de

pH Rendimiento
(T= 20C) (g/mL) (cP) Refraccin
M1
6 0,8838 1392,87 1,4740 67 %
(condiciones de reaccin 1)
M2
6 0,8888 1393,06 1,4745 68 %
(condiciones de reaccin 2)

Las muestras intermedias de reaccin no fueron representativas por lo que no se han podido extraer
conclusiones de inters en CG-MS.

OBSERVACIONES

Para la puesta en marcha del reactor y del rotavapor consulta los manuales correspondientes.

11 de 12 | P g i n a
 OBTENCIN DE BIODIESEL POR VA ENZIMTICA

APLICACIONES, UTILIDAD DE LA PRCTICA

Otras prcticas asociadas:

Comparacin de dos mtodos de obtencin de un biocombustible: catlisis bsica con NaOH vs

catlisis enzimtica.

Anlisis de las propiedades del biodiesel obtenido mediante dos metodologas de preparacin
distintas: pH, densidad, viscosidad, CG-MS e infrarrojo.

Ampliacin de conocimientos:

Se puede llevar a cabo la purificacin de este biocombustible empleado resinas tipo Amberlite BD10DRY
(Rohm and Haas Company - DOW). Este mtodo permite eliminar glicerina, catalizador y jabones del
producto final de la catlisis bsica.

https://utahbiodieselsupply.com/images/amberlite/amberlite.pdf

http://www.ags.rs/dow/pdf/Biodiesel_BD10DRY_userguide_sep08.pdf

12 de 12 | P g i n a