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BIOFILMS

1. INTRODUCCION:

Los microorganismos por si solos, salvo en algunas ocasiones, no son capaces


de generar daos importantes en un organismo viviente porque son susceptibles
a los factores adversos del medio en que se encuentran. Sin embargo, estos
seres microscpicos han evolucionado de tal forma que logran organizarse y
convivir con especies diferentes, aprovechando los productos que se ofrecen
dentro de su comunidad ecolgica denominada biopelcula.

En muchas formas la biopelcula representa una estrategia de supervivencia,


pues son comunidades de microorganismos protegidos por sustancias
polimricas extracelulares (EPS) polianinicas fijadas a la superficie. Las EPS
pueden contener polisacridos, protenas, fosfolpidos, cidos nuclicos, cidos
teicoico y otras sustancias polimricas hidratadas 2, adems protegen a los
microorganismos que hacen parte de la biopelcula contra agentes
antimicrobianos, previenen al acceso de biocidas, toxinas, evitan la
deshidratacin, refuerzan la resistencia de la biopelcula al estrs ambiental y
permiten a los microorganismos capturar los nutrientes.

Las biopelculas cuentan con un sistema de canales que le permite establecer


un vnculo con el medio externo para hacer intercambio de nutrientes y
eliminar metabolitos de desecho.

Los requisitos para el crecimiento de la biopelcula son la presencia de


microorganismos y el sustrato; si alguno de estos no se encuentra disponible, la
biopelcula no se formar. La sinergia existente dentro de la comunidad
de la biopelcula, es el factor que permite que sta soporte condiciones
adversas y pueda sobrevivir .

Es importante considerar la formacin de biopelculas, ya que durante


las ltimas dcadas se han presentado tanto a nivel industrial 4, como
domstico y desafortunadamente en la mayora de los casos su
crecimiento y formacin es perjudicial, causando problemas como
corrosin, olores desagradables, taponamiento de tuberas, fallas de
equipos y deficiencia en la transmisin de calor, lo que resulta en
elevados costos de limpieza y mantenimiento
De otro lado, las biopelculas pueden ser benficas , como por ejemplo
el Bacillus subtilis y sus especies afines que son utilizados como
agentes de biocontrol antifngico en cultivos, como inhibidores de la
corrosin causada por bacterias en materiales como el acero y como
agentes de limpieza de un lugar contaminado, ya sea insitu o ex situ,
este ltimo conocido como biorremedicin.
Hoy en da el estudio de las biopelculas se hace cada vez ms extenso
y complejo. As, una mayor comprensin de los mecanismos utilizados
por los microorganismos en sus procesos de adhesin a las diferentes
superficies, proporcionara una base para el desarrollo de mejores
materiales, mtodos y estrategias que permitan remover, prevenir o
potenciar activamente la formacin de biopelculas, segn sea la
necesidad.

2. ANTECEDENTES HISTORICOS:

Los biofilms, tambin llamados biopelculas, fueron descritos por primera vez
en el siglo XVI por Antonie Van Leeuwenhoek, a consecuencia de haber
examinado la placa de sus propios dientes declarando haber observado unos
animlculos en un informe de la Royal Society de Londres:

The number of these animicules in the scurf of a man's teeth are so many that I
believe they exceed the number of men in a kingdom."

En 1964, Mitchell y Kevin Marshall examinaron los primeros estados de


formacin de biopelculas por bacterias y diferenciaron la adsorcin reversible e
irreversible, esta ltima constituyendo el primer estado de formacin de las
biopelculas [1]. Aunque las descripciones de las biopelculas han variado a
travs de los aos, las caractersticas fundamentales se han mantenido.
(Costerton, J. 1999)

Pero la teora general que describe el proceso de biopelcula no se promulg


hasta el ao 1978. Dicha teora se ha transformado y perfeccionado durante los
ltimos 25 aos, entendiendo hoy en da, que la gran mayora de los
microorganismos en la naturaleza se encuentran adheridos a superficies donde
crecen formando biopelculas o biofilms (Marsh, 2005); de hecho, los biofilms
constituyen el estado habitual de las bacterias en la mayora de los ecosistemas
naturales (Stoodley y col. 2002).

Todo ello establece la definicin de biofilm bacteriano en 2002, por Donlan


entendido como una comunidad ssil bacteriana inmersa en un medio lquido,
caracterizada por bacterias que se hallan unidas irreversiblemente a un substrato
o superficie, o unas a otras, que se encuentran embebidas en una matriz
extracelular polimrica producida por ellas mismas, y que muestran un fenotipo
alterado en cuanto al grado de multiplicacin celular o la expresin de sus
genes. (Costerton y col. 1999; Donlan, 2002).

Se tratan de un caso especfico de contaminacin microbiana. stos consisten


en agrupaciones de microorganismos que se acumulan en una interfase slido-
lquido (Tambin cabe la posibilidad que se establezcan en interfaces aire-lquido
o slido-aire) encontrndose rodeados por una matriz mucilaginosa provista de
molculas orgnicas, microbios y minerales. La matriz del biofilm en la que se
encuentran embebidas las clulas, es el material extracelular de carcter
adhesivo y gelatinoso, producido en su mayora por los propios microorganismos
y consiste en un conglomerado de diferentes tipos de biopolmeros conocidos
como Sustancias Polimricas Extracelulares (EPS) que constituyen el soporte
para la estructura tridimensional de dicho biofilm. La formacin de estas
biopelculas permite a las clulas una forma de vida completamente diferente del
estado planctnico, protegindolas de entornos adversos y facilitando su
supervivencia.

Estas conformaciones microbianas presentan caractersticas especficas como


su heterogeneidad, es decir, pueden estar formadas por una gran diversidad de
especies bacterianas pudindose encontrar tambin hongos, levaduras, algas e
incluso protozoos, su diversidad de microambientes, encontrndose en el mismo
biofilm microorganismos con distintas necesidades fisiolgicas (anaerobios,
aerobios, microaerobios, entre otros), resistencia a antimicrobianos, esto es
debido a la matriz de exopolisacridos que los protege y la capacidad de
comunicacin intercelular que realizan gracias al sistema que poseen llamado
quorum sensing que las convierte en complejos difciles de erradicar en los
ambientes donde se establece.

3. BIOFILMS: COMPOSICIN

Los biofilms o biopeliculas suponen un caso particular de contaminacin


microbiolgica, estn constituidos por agrupaciones de bacterias adheridas entre
si y a una superficie.
Estas bacterias se encuentran embebidas en una matriz gelatinosa y adhesiva
de naturaleza polimerica, generada por los propios microorganismos.
Un biofilm tpico se compone fundamentalmente de:
Agua
Microorganismos, que componen entre el 15 20% del volumen total del
biofilm.
La matriz extracelular de sustancia polimricas (EPS: exopolisacridos),
que supone entre un 75% y un 95% del volumen del biofilm maduro. Esta
matriz se compone de polisacridos, protenas, lpidos, minerales y ADN
de origen microbiano. En la matriz tambin podemos hallar sustancias de
origen no bacteriano como cristales de sales minerales, partculas de
corrosin y/o sedimento, o componentes sanguneos, asociados con los
iones metlicos y cationes bivalentes.

Los biofilms naturales son consorcios con mas de una especie. Cualquier
superficie puede servir como soporte, aunque algunas pueden ser mas
favorables que otras (microtopografia, hidrofobicidad, iones liberados, etc.)

Tiene forma de champion con torres, pedestales y canales para la circulacion


de agua. El crecimiento celular es rapido en la periferia de la estructura y lento
en el interior. Su porosidad es heterogenea.

Figura . Forma tridimensional de un biofilm


La capacidad de formacin de biofilm no parece estar restringida a ningn grupo
especfico de microorganismos y hoy se considera que bajo condiciones
ambientales adecuadas todos los microorganismos son capaces de formar
biofilms.

Aunque la composicin del biofilm es variable en funcin del sistema en estudio,


en general, el componente mayoritario del biofilm es el agua, que puede
representar hasta un 97% del contenido total. Adems de agua y de las clulas
bacterianas, la matriz del biofilm es un complejo formado principalmente por
exopolisacridos. En menor cantidad se encuentran otras macromolculas como
protenas, DNA y productos diversos procedentes de la lisis de las bacterias.

En los primeros trabajos sobre la estructura del biofilm, una de las cuestiones
que surga con mayor reiteracin era cmo las bacterias del interior del biofilm
podan tener acceso a los nutrientes o al oxgeno. Estudios realizados utilizando
microscopa confocal han mostrado que la arquitectura de la matriz del biofilm
no es slida y presenta canales que permiten el flujo de agua, nutrientes y
oxgeno incluso hasta las zonas ms profundas del biofilm. La existencia de
estos canales no evita sin embargo, que dentro del biofilm podamos
encontrarnos con ambientes diferentes en los que la concentracin de nutrientes,
pH u oxgeno es diferente. Esta circunstancia aumenta la heterogeneidad sobre
el estado fisiolgico en el que se encuentra la bacteria dentro del biofilm y
dificulta su estudio
4. ETAPAS EN EL PROCESO DE FORMACIN DEL BIOFILM:

La etapa inicial del proceso de formacin del biofilm es la adherencia sobre


la superficie. En bacterias Gram negativas (Pseudomonas aeruginosa, Vibrio
cholerae, Escherichia coli, Salmonella enterica) se ha visto que los flagelos,
las fimbrias de tipo I, IV y los curli son importantes para la etapa de adherencia
primaria. La motilidad parece que ayuda a la bacteria a alcanzar la superficie
y contrarrestar las repulsiones hidrofbicas. Sin embargo, aunque la motilidad
ayuda al proceso no parece ser un requisito esencial, pues muchas bacterias
Gram positivas inmviles como estafilococos, estreptococos y micobacterias
son capaces de formar biofilm. En el caso de las bacterias Gram positivas se
ha descrito la participacin de protenas de superficie (AtlE, Bap, Esp) en esta
primera etapa de adherencia primaria. Una vez que la bacteria se ha adherido
a la superficie, comienza a dividirse y las clulas hijas se extienden alrededor
del sitio de unin, formando una microcolonia similar a como ocurre durante
el proceso de formacin de colonias en placas de agar.

En una etapa posterior la bacteria comienza a secretar un exopolisacrido que


constituye la matriz del biofilm y forma unas estructuras similares a setas
(mushrooms) entre las cuales se observa la presencia de canales. La
composicin del exopolisacrido es diferente en cada bacteria y vara desde
alginato en P. aeruginosa, celulosa en S. typhimurium, un exopolisacrido rico
en glucosa y galactosa en V. cholerae, poly-N-acetilglucosamina en S. aureus,
etc. Adems, estudios recientes han puesto de manifiesto que incluso una misma
bacteria, dependiendo de las condiciones ambientales en las que se encuentre,
puede producir distintos exopolisacridos como componentes de la matriz del
biofilm. As, algunas cepas de P. aeruginosa son capaces de producir adems
de alginato un polisacrido rico en glucosa que forma una pelcula en la interfase
medio aire al que se ha denominado Pellican.

Finalmente, algunas bacterias de la matriz del biofilm se liberan del mismo para
poder colonizar nuevas superficies cerrando el proceso de desarrollo de
formacin del biofilm. La liberacin de las bacterias desde el biofilm es el proceso
que menos se conoce. En el caso de Staphylococcus aureus se ha descrito un
proceso de variacin de fase producido por la insercin reversible de un
elemento de insercin (IS256) en el interior del opern (icaADBC) responsable
de la sntesis del exopolisacrido del biofilm. El proceso de insercin del
elemento parece ocurrir aleatoriamente en la poblacin con una frecuencia de
10-6 y produce bacterias deficientes en la sntesis del exopolisacrido y por tanto
deficientes en la formacin del biofilm. Esto permite a la bacteria mantener un
pequeo porcentaje de la poblacin incapaz de sintetizar el exopolisacrido y
poder escapar del biofilm. Como la insercin es un proceso reversible, el salto
del IS desde el opern ica provocar una nueva variacin de fase. Otra
alternativa descrita en S. aureus consiste en la obtencin de variantes
deficientes en la formacin del biofilm debido a la eliminacin de una isla de
patogenicidad que contiene elementos esenciales para el proceso de formacin
del biofilm. En Actinobacillus actinomicetecomitans se ha descrito una actividad
enzimtica, denominada dispersina que degradan de forma especfica el
exopolisacrido de la matriz del biofilm. La presencia en distintos genomas de
hipotticas protenas (endoglucanasas), que podran ser responsables de una
funcin similar, sugiere que la degradacin controlada del exopolisacrido puede
representar un mecanismo controlado de liberacin de bacterias del biofilm.

5. CARACTERSTICAS DE LAS BIOPELCULAS

Adherencia: Se adhieren a diferentes superficies, ya sean blandas,


animadas e inanimadas. 1

Heterogeneidad: Lo que las hace organizaciones nicas que pueden estar


conformadas por bacterias, hongos y protozoos. 2

Diferentes microambientes (pH, tensin O2, concentracin de iones,


carbono, nitrgeno): Los microorganismos al ser variados dentro de esta
organizacin presentan diferentes microambientes. 3

Sistema circulatorio primitivo: La hidrodinmica juega un papel importante


en el desarrollo de la biopelcula pues estas organizaciones se desarrollan en
una interfase lquidos-slido donde la velocidad del flujo que lo atraviesa
influye en el desprendimiento fsico de los microorganismos. Adems, poseen
un sistema de canales que les permiten el transporte de nutrientes y
desechos; esto resulta de vital importancia cuando se piensa en modificar el
ambiente que prive a los microorganismos de las molculas necesarias para
su desarrollo.

Resistente a las defensas del hospedero, agentes antimicrobianos y


detergentes: En biopelculas con una alta densidad celular, se induce la
expresin de genes de resistencia que proveen proteccin y supervivencia.
Las colonias organizadas e incluidas en el exopolmero forman una capa
impermeable en donde slo los microorganismos ms superficiales se ven
afectados.5,6
Quorum sensing: Los microorganismos se comunican unos con otros, esto
es lo que se ha denominado quorum sensing e involucra la regulacin y
expresin de genes especficos a travs de molculas de sealizacin que
median la comunicacin intercelular, es dependiente de la densidad celular.7

6. FASES DE FORMACIN DE LAS BIOPELCULAS

La capacidad de formacin de las biopelculas no parece estar restringida a


ningn grupo especfico de microorganismos y en efecto se considera que bajo
condiciones ambientales adecuadas todos los microorganismos son capaces de
formar biopelculas. Estas organizaciones microbianas se pueden formar en una
amplia variedad de superficies, incluyendo tejidos vivos, aparatos mdicos,
sistemas de tuberas de agua potable o sistemas acuticos naturales.

Una vez que la superficie ha ser colonizada queda expuesta a un medio acutico;
inevitable y casi inmediatamente se condiciona o cubre con polmeros del medio,
resultando en una modificacin qumica de dicha superficie. Esta pelcula
adquirida o condicionada se forma con slo minutos de exposicin, y contina
creciendo con el paso de las horas, variando su naturaleza dependiendo de la
superficie expuesta en el cuerpo humano.

La pelcula condicionada siempre se forma antes de la llegada de los


microorganismos, promoviendo la adhesin selectiva de algunos de ellos y
actuando como una fuente de nutrientes. Numerosos microorganismos en la fase
planctnica son transportados a la superficie, pero son las propiedades de la
pelcula condicionada las que determinan cuales microorganismos adjunta, y por
lo tanto influencia la composicin microbial de la biopelcula.

Una vez que los organismos entran en contacto con la superficie, cualquier
posible interaccin est gobernada por reglas fsico-qumicas y biolgicas, que
van a modular la regulacin de genes que ocurre en el interior de la clula
microbiana. Es decir, para que los microorganismos puedan colonizar y
asociarse con el sustrato, deben vencer ciertas caractersticas del medio como:
la velocidad del flujo adyacente a la superficie y la repulsin hidrosttica inicial
que se establece entre la clula y la superficie.

Para este fin, los microorganismos se valen de las estructuras celulares


superficiales como: fimbrias, los lipopolisacridos extracelulares (LPS), los
polmeros extracelulares (EPS), flagelos y otras protenas. Los polmeros de
superficie con sitios no polares como las fimbrias y componentes de ciertas
bacterias Gram negativas (Acido miclico) parecen dominar la adhesin a
sustratos hidrofbicos, mientras que los polmeros extracelulares (EPS) y los
lipopolisacridos son ms importantes en la adhesin a sustratos hidroflicos.
Los flagelos son importantes en la adhesin, ya que estn encargados de vencer
la fuerzas de repulsin inicial entre el microorganismo y el sustrato.
Sin embargo, aunque la motilidad y la presencia de flagelos ayudan al proceso,
esto no parece ser un requisito esencial, pues muchas bacterias Gram positivas
inmviles como estafilococos, estreptococos y micobacterias son capaces de
formar biopelculas. En el caso de las bacterias Gram positivas se ha descrito la
participacin de protenas de superficie (AtlE, Bap, Esp) en esta primera etapa
de adherencia primaria.

La formacin de la biopelcula ocurre en seis fases:


1- Adhesin inicial del microorganismo a la superficie
2- Colonizacin
3- Co-adhesin o co-agregacin
4- Crecimiento
5- Maduracin
6- Desprendimiento de algunos microorganismos
Durante el transcurso de cada una de estas fases, los microorganismos
presentan una expresin de genes bien regulada (11,13).

Grfico 1. Diagrama de las etapas de la formacin de la


biopelcula. Tomado de Svensater y Bergenholtz, 2004.

La etapa inicial del proceso de formacin de la biopelcula es la adherencia del


microorganismo sobre la superficie, pero para que esto ocurra debe haber un
prerrequisito: la presencia de microorganismos en estado libre flotante en un
medio acuoso, llamados microorganismos planctnicos.

Inicialmente los microorganismos se asocian de manera reversible a la superficie


y posteriormente se adhieren de forma irreversible.
Durante la fase de adhesin se va a regular la expresin gentica a travs de
varios sistemas de transduccin por seales, que van a conducir hacia una
cascada de diversas reacciones, permitiendo la induccin o inhibicin de la
trascripcin de genes. Las molculas que causan las seales, pueden ser
inherentes al ambiente o ser desconocidas

Entre estos sistemas de transduccin se encuentran los denominados sistemas


de dos componentes y los sistemas que responden a las seales en funcin de
la densidad celular, cuyo trmino en ingls es qurum sensing.

Los sistemas reguladores de dos componentes, frecuentemente estn


involucrados en el control de la expresin gentica en respuesta a un estmulo,
transmitiendo la seal ambiental al interior del microorganismo para adecuar la
expresin de genes a la nueva situacin ambiental.Dichos sistemas existen tanto
para organismos Gram positivos como Gram negativos participando en la
transduccin de seales, y por lo tanto son sensores esenciales para la
adaptacin de la vida en biopelculas.

El qurum sensing (trmino en ingls), representa una va que es activada como


respuesta a la densidad celular, y de igual manera son sistemas que se
encuentran en microorganismos Gram. positivos como en Gram. negativos. El
estmulo para la activacin del qurum sensing son molculas llamadas
autoinductoras, las cuales son producidas en un nivel basal constante, de esta
manera la concentracin de molculas va en funcin de la densidad microbiana,
y por lo tanto, la percepcin de la seal, va a ocurrir cuando la concentracin de
molculas autoinductoras alcancen el umbral.

Es por esta razn que el trmino qurum es usado para definir este tipo de
sistemas, ya que se necesita que cierto nmero de microorganismos deben estar
presentes para que la seal sea percibida por la poblacin y entonces poder
responder a esa seal

Las bacterias Gram positivas usualmente producen oligopptidos, los cuales son
reconocidos por los sistemas de transduccin de dos componentes, en tanto que
para los organismos Gram. negativos, las molculas que disparan la seal
pertenecen al grupo de lactones de homoserine. Estas molculas generalmente
difunden dentro de la clula obligando a regular la respuesta

Los microorganismos liberan dichas molculas inductoras cuando se aproximan


a la superficie que van a colonizar, aumentando la concentracin de las mismas
en el rea entre el microorganismo y la superficie debido a la difusin limitada;
de esta manera los patgenos van a percibir este incremento en la concentracin
y sentir la presencia de la superficie que estn colonizando

Las molculas inductoras para el sistema de qurum sensing son a menudo


altamente especficas, por lo tanto, este sistema sirve para comunicaciones
intraespecies. Ms recientemente se ha descrito un segundo sistema de
comunicacin, denominado sistema autoinductor 2 que permite la comunicacin
interespecies

Todos estos sistemas de transduccin por seales actan en la regulacin de la


virulencia, as como de la formacin de la biopelcula, sirviendo de conexin entre
ambos procesos

Una vez que la bacteria se ha adherido a la superficie, comienza a dividirse y las


clulas hijas se extienden alrededor del sitio de unin, formando una
microcolonia

En una fase posterior, el patgeno comienza a secretar un exopolisacrido que


constituye la matriz de la biopelcula y forma unas estructuras similares a setas
o championes entre las cuales se observa la presencia de canales. La
composicin del exopolisacrido es diferente en cada bacteria y vara desde
alginato en P. aeruginosa, celulosa en S. typhimurium, un exopolisacrido rico
en glucosa y galactosa en V. cholerae, poly-N-acetilglucosamina en S. aureus,
etc. Incluso una misma bacteria, dependiendo de las condiciones ambientales
en las que se encuentre, puede producir distintos exopolisacridos como
componentes de la matriz de la biopelcula

Seguidamente, ocurre la co-agregacin, que es el reconocimiento entre clulas,


donde los organismos en la biopelcula pueden reconocer y adherirse a bacterias
genticamente distintas a travs de adhesinas. Estas adhesinas reconocen
protenas, glicoprotenas o receptores de polisacridos en las superficies,
incluyendo otros tipos de clulas , dando como resultado una arquitectura nica
para cada biopelcula

Una etapa posterior implica la multiplicacin y el metabolismo de los


microorganismos que se unieron, lo cual va a resultar en una comunidad
microbiana mixta estructuralmente organizada. Durante esta fase las
caractersticas inherentes de los microorganismos y la naturaleza del micro
ambiente, influencia el crecimiento y sucesin de la poblacin dentro de la
biopelcula

Finalmente, algunos microorganismos de la matriz de la biopelcula se liberan de


la misma para poder colonizar nuevas superficies, cerrando as el proceso de
formacin de la biopelcula. La liberacin de las bacterias desde la matriz es la
fase de la que se tiene menos conocimiento.

Este proceso de separacin parece ser un proceso continuo durante todo el


desarrollo de la biopelcula. Es probable que la separacin localizada de
organismos comience despus de la adhesin inicial y se incremente con el
tiempo, lo que esta relacionado con el nmero de microorganismos presentes en
la biopelcula.

La dispersin de clulas puede ocurrir por diferentes razones: liberacin de


clulas hijas debido a un crecimiento celular activo, separacin como resultado
de los niveles de nutrientes, liberacin por seales del qurum sensing o por
desprendimiento de agregados de la biopelcula por los efectos del flujo del
medio ambiente en el que se desarrolla la biopelcula.

Una vez que la biopelcula se ha establecido, la expresin de un nmero de


adhesinas y factores de movilidad son suprimidos, sugiriendo que la funcin
principal de las adhesinas, pilis, y flagelos es participar en la adhesin inicial; y
una vez que el desarrollo de la biopelcula ha superado esta etapa, estas
protenas no son necesarias y su expresin es inhibida.

El tipo y disponibilidad de nutrientes va a influenciar la biopelcula a travs de su


desarrollo, desde la formacin inicial de la pelcula adquirida, pasando por la
adhesin de bacterias pioneras y la produccin de la matriz, hasta la competicin
bacteriana en las ltimas etapas de la acumulacin.

Como resultado final de todo este proceso, la composicin de la biopelcula va a


reflejar el resultado de la sucesin de microorganismos, resultante de la
competicin durante la adhesin.

Cada una de las fases de la formacin est expuesta a una variedad de factores
fsico-qumicos como: pH, temperatura, osmolaridad, radiacin, luz, tensin de
oxgeno y todos los posibles cambios regulares o irregulares que ocurran con
estos factores.

7. FACTORES QUE INFLUYEN EN LA FORMACIN DE BIOFILMS

La formacin de biofilms requiere que la superficie este en contacto con un fluido


que contenga minerales, molculas orgnicas y microorganismos.
Las 5 fases en el desarrollo de una biofilms y los procesos involucrados en ellas
se describen en detalle a continuacin:
ETAPA 1. Acondicionamiento de la superficie.
Existen factores externos que afectan la adhesin de las bacterias desde un
medio lquido sobre un slido.

Factores fsicos: Los factores fsicos ms importantes son la tensin de corte,


temperatura, rugosidad, topografa y carga superficial. Estos factores influencian
el transporte, los fenmenos interfasiales, el desprendimiento y las reacciones
en la interfase)

Factores qumicos: Los factores qumicos son numerosos, algunos de los ms


importantes son: la composicin de la superficie del sustrato, la composicin del
medio en el que se desarrolla el biofilm, el pH, el oxgeno disuelto.
La materia orgnica presente en el agua se adsorbe sobre las superficies y forma
lo que se conoce como pelcula acondicionante (conditioning film), cambiando
las propiedades qumicas y fsicas de la interfase sustrato/fluido y tornndola
ms amigable para la adhesin bacteriana.

ETAPA 2. Adhesin reversible.

La adhesin primaria (reversible) de bacterias a una superficie o a un sustrato


puede ser de dos maneras:

Activa: La motilidad, otorgada por flagelos, fimbrias y pilis tipo IV, ayudara a
la bacteria a alcanzar la superficie en las etapas iniciales de la adhesin, siendo
su funcin principal vencer las fuerzas de repulsin ms que actuar como
adherente. Sin embargo, la motilidad no parece ser un requisito esencial para el
acercamiento al sustrato, puesto que bacterias Gram-positivas inmviles, como
estafilococos, estreptococos y micobacterias, tambin poseen la capacidad de
formar biofilms. En el caso de las bacterias Gram-positivas se ha descrito, en
esta primera etapa, la participacin de protenas de superficie. Una vez que
llegan a la superficie pueden desplazarse sobre ella mediante movimientos
individuales o grupales.

Pasiva: Factores externos tales como la gravedad, difusin, precipitacin de


partculas y dinmica de fluidos pueden favorecer la adhesin de los
microorganismos a cualquier superficie.

ETAPA 3. Adhesin irreversible.


El cambio desde la adhesin reversible a irreversible se produce por la transicin
desde una interaccin dbil de la clula con el sustrato hasta un enlace
permanente, frecuentemente mediado por la presencia de polmeros y apndices
extracelulares. Investigaciones recientes han sugerido que la transicin hasta la
adhesin permanente a una superficie est acompaada por cambios
fisiolgicos profundos. En esta segunda fase de adhesin, predominan las
reacciones moleculares entre las estructuras superficiales bacterianas y la
superficie del sustrato. Estas reacciones implican una adhesin firme entre la
bacteria y la superficie mediadas por estructuras polimricas superficiales como,
por ejemplo, cpsulas, fibrillas, fimbrias, pilis y EPS. La adhesin irreversible
especfica puede ser definida como la unin especfica entre las adhesinas
bacterianas (un componente especfico molecular de la superficie bacteriana) y
un receptor del sustrato (un componente especfico de la superficie del material
o tejido superficial) estando menos afectada por factores ambientales (pH,
electrolitos y temperatura). Debe tenerse en cuenta que la pared celular de una
bacteria Gram-negativa como las Pseudomonas consta de tres regiones, una
membrana exterior, una monocapa de peptidoglicano y una membrana interior
plasmtica. Estas dos membranas pueden mostrar continuidad en varios puntos
de adhesin y pueden tambin estar unidas por los cuerpos basales del flagelo.

ETAPA 4. Maduracin del biofilm

La siguiente etapa del desarrollo del biofilm corresponde a la maduracin que


da como resultado una arquitectura compleja, con canales, poros y redistribucin
de bacterias en el sustrato. La densidad global y la complejidad del biofilm
aumentan a medida que los organismos adheridos se replican, mueren y los
componentes extracelulares de las bacterias interactan con las molculas
orgnicas e inorgnicas presentes en el medio ambiente circundante. El
potencial crecimiento de cualquier biofilm est limitado por la disponibilidad de
nutrientes en el ambiente inmediato, la penetracin de estos nutrientes dentro
del biofilm y la eliminacin de residuos. Otros factores que pueden controlar la
maduracin del biofilm son el pH interno, la penetracin de oxgeno y fuentes de
carbono y la osmolaridad.

ETAPA 5. Desprendimiento de bacterias

El trmino desprendimiento es un trmino que se utiliza para describir la


liberacin de clulas (ya sea individualmente o en grupos) de un biofilm o
sustrato. El desprendimiento activo es un evento fisiolgicamente regulado, pero
slo pocos estudios (68) han demostrado la base biolgica para este proceso.

Los tres principales mecanismos para generar el desprendimiento seran: (a)


erosin: remocin continua de pequeas partes del biofilm; (b) separacin:
remocin rpida y masiva; y (c) abrasin: liberacin por colisin de partculas
suspendidas en el lquido circundante con el biofilm. La separacin es menos
frecuente que la erosin, y se piensa que derivara de la disminucin de
nutrientes u oxgeno en el interior del biofilm.

Se observa preferentemente en biofilms voluminosos, que se han desarrollado


en medioambientes ricos en nutrientes. La separacin y erosin proporcionaran
los mecanismos para que las bacterias migren desde zonas densamente
colonizadas a reas desnudas que podran favorecer mejor su desarrollo,
logrando as formar nuevos biofilms en sitios distantes. Un ejemplo de este tipo
de desprendimiento es la sepsis recurrente en un paciente con un catter
infectado. La forma en que se produce la dispersin afectara, aparentemente,
las caractersticas fenotpicas de los microorganismos. Los conglomerados
desprendidos desde el biofilm conservaran, probablemente, ciertas
caractersticas de ste, tales como la resistencia antimicrobiana. En cambio, las
clulas bacterianas liberadas aisladamente parecen volver rpidamente a su
fenotipo planctnico, tornndose nuevamente susceptibles a las defensas del
husped y a los antimicrobianos.

8. APLICACIONES EN CAMPO INDUSTRIAL

Las biopeliculas en el campo industrial estn implicadas en diversos mbitos


constituyndose en un enemigo cuando estn involucradas en el biofouling o en
un aliado cuando se utilizan en bioremediacion. El hecho de que estas
organizaciones degraden compuestos orgnicos ha impulsado a los
microbilogos y ambientalistas a utilizarlas en todos los campos donde se
requiere bioremediar. Las biopeliculas tienen cualidades magnificas para
eliminar los elementos contaminantes del ambiente, como el no requerir de
energa extra para trabajar, no generar en sus procesos de biodegradacin
desechos txicos, ser relativamente econmicas y fciles de manejar, de manera
que muchos procesos se pueden dar de manera natural o sern impulsados por
el hombre, es por eso y muchas otras razones que las biolepiculas sern
involucradas en la creacin de ambientes bioregenerativos donde el agua, el aire
y los suelos se podrn reutilizar con el fin de no perder estos elementos tan
valiosos del ecosistema.

Aplicaciones en problemticas ambientales

Plantea que la formacin de estas comunidades proporciona a la vida


microscpica que la habita notables beneficios, resaltando que los
microorganismos en la naturaleza se hallan con mayor frecuencia en biopelculas
y por eso se hace interesante reconocer la aplicabilidad de estos
microorganismos asociados a estas comunidades en actividades
biotecnolgicas como la biorremediacin, una tcnica que ha permitido la
interaccin de sistemas biolgicos con sustancias contaminantes para el
ambiente, logrando transformar la carga contaminante en sustancias benficas
o menos txicas y contaminantes, para as recuperar escenarios deteriorados,
estas tcnicas han sido implementadas tanto en suelos como aguas y no sera
posible generarlas sin los microorganismos, que son capaces de soportar la
polucin del medio (Demnerova, et al., 2005). A s mismo Singh, et al., 2006).
Plantea las diferentes aplicaciones de las biopelculas en biorremediacin donde
menciona su uso en biorreactores para el tratamiento de grandes volmenes de
soluciones acuosas diluidas tales como aguas residuales industriales y
municipales. As mismo, menciona que la mejora de cepas, sus vas metablicas
y el aumento en el nmero de copias de genes que codifican para enzimas
implicadas en la degradacin o transformacin de sustancias, podran mejorar
an ms las estrategias, biorremediacin mediada por microorganismos
presentes en las biopelculas. A su vez, plantea sus implicaciones en la
inmovilizacin, eliminacin de cidos y la degradacin de contaminantes.
Actualmente varias de las sustancias que llegan a la naturaleza se encuentran
en mnimas cantidades pero causan un efecto txico y se hace necesario
eliminarlas, siendo las tcnicas biolgicas una solucin favorable para la
remocin de compuestos txicos, materia orgnica e inorgnica; donde
bacterias, hongos, plantas nativas del medio y las enzimas que estos producen
transforman esas microsustancias en unas menos txicas para el ambiente.
(Garzn, DJ., et al., 2009). Segn Barrionuevo M., D., et al., 2009, los estudios
con biopelculas en los que la utilizacin de microorganismos aislados a partir de
los ecosistemas afectados resultan en un beneficio adicional, debido a que en
sus ambientes naturales estos ya se encuentran ntimamente relacionados con
superficies de diferentes orgenes formando las biopelculas que mejoraran
favorablemente los procesos de biorremediacin. Por consiguiente, el uso de
estos para controlar la contaminacin ambiental, en el caso de los metales
pesados, en los que cabe aclarar que lo que genera su toxicidad es la carga no
el metal como tal, puesto que se ionizan a cationes y son altamente txicos.
Debido a que la alta resistencia de las biopelculas a concentraciones elevadas
de estos puede servir para la remocin de metales contaminantes en suelos y
fuentes de agua, adems del aprovechamiento de sistemas microbianos de
tolerancia a metales, entre los que se pueden nombrar, los componentes
celulares que capturan iones, los sistemas de expulsin de cationes o aniones
que neutralizan la toxicidad de los metales, transportadores de membrana y
enzimas que modifican el estado redox de los metales convirtindolos en formas
menos txicas que pueden ser utilizados en procesos biotecnolgicos para la
remocin de contaminantes ambientales (Cervantes, et al., 2006). As como se
plantea la aplicacin del QS en procesos de biorremediacin por medio del uso
de microorganismos asociados a biopelcula, los estudios e investigaciones que
contemplen la interrupcin de la formacin de estas comunidades tambin son
importantes si se enfocan, por ejemplo, en prevenir la afectacin de las plantas;
lo cual acarreara una importante aplicabilidad en el sector agrcola y ambiental,
en el diseo de biosensores para la medicin de posibles contaminantes en
suelos, aire y agua, tambin en la prevencin de biopelculas que afectan los
procesos industriales y las que se asocian con infecciones en humanos y
animales. La solucin abarcara la bsqueda de enzimas que disuelvan los
polmeros de la matriz de exopolisridos de la biopelcula y la interrupcin de la
expresin de genes que sintetizan para protenas de competencia, factores de
virulencia, el sistema flagelar como posibilidad para combatir la formacin de
estas comunidades por la alteracin de los sistemas de comunicacin celular del
QS (Federle y Bassler, 2003, y Miller y Bassler, 2001). Un sistema que se debe
estudiar a fondo es el Quorum Quenching (QQ) que en pocas palabras es un
sistema inhibidor del QS. En el QQ varios microorganismos segregan enzimas o
molculas qumicas que degradan o son anlogos a las seales de QS,
interrumpiendo el proceso de expresin gnica, siendo importante para el control
de cepas patgenas que utilizan este sistema para producir enfermedad sobre
plantas, animales y humanos. Por ejemplo, Agrobacterium tumefaciens induce
la proliferacin de la clula husped por la produccin de tumores en las plantas
por la expresin de opinas y fitohormonas (Choudhary y Schmidt-Dannert, 2010;
Miller y Bassler, 2001; y Raina S., et al., 2009). La interrupcin de las seales de
QS puede evitar procesos de patogenicidad, es decir, la identificacin y estudio
de enzimas microbianas que alteren los mecanismos de expresin gnica
regulados por QS es importante para el descubrimiento de nuevos
antimicrobianos. (Rueda, N., et al., 2012). Por otro lado, la formacin de
biopelculas por bacterias estimulantes del crecimiento vegetal les permite
adherirse fuertemente a la raz en un proceso de simbiosis planta-
microorganismo mediado por el sistema QS, por lo tanto estos microorganismos
no solo estaran involucrados en procesos de patognesis, sino que el QS est
presente en procesos benficos asociadas al ambiente, por ejemplo, en la
formacin de biopelculas por parte de microorganismos fijadores de nitrgeno
que aumentan la concentracin de este elemento, como en el caso de Rhizobium
leguminosarum que el QS le facilita la interaccin con la raz al ser dependiente
de la densidad celular para formar ndulos que ayudan a captar y fijar el
nitrgeno o para la bacteria Gram negativa Sinorhizobium meliloti y plantas
leguminosas alfalfa (Medicago sativa) que establecen una relacin simbitica,
siendo favorable para el crecimiento y asimilacin de nutrientes por parte de la
planta. (Harrison, et al., 2006; Marquina y Santos, 2010; y Raina S., et al., 2009).

Biopelculas y residuos de hojas de sisal

Las biopelculas tambin se han estudiado en la produccin de biogs a partir de


residuos de hoja de sisal, una planta que es implementada para obtener fibra y
material textil, no obstante, tras su uso se generan residuos lixiviados de la hoja
de sisal que generan contaminacin en el ambiente y pueden afectar la salud,
se ha evaluado la capacidad de formacin de biopelculas en biorreactores
donde se han colocado los residuos de la hoja de sisal y se ha visto que crecen
biopelculas de bacterias anaerobias que degradan estos lixiviados y a la vez
generan la produccin de biogs. (Mshandete, et al, 2008a). La digestin
anaerobia para la produccin de biogs y la biodegradacin de los lixiviados se
divide en dos etapas; en la primera intervienen bacterias anaerobias que generan
metano y di- xido de carbono, donde juntos forman el biogs, y la segunda
etapa se basa en la biodegradacin de los lixiviados de la hoja de sisal mediante
una biopelcula anaerobia de lecho fijo disminuyendo as la contaminacin del
medio por parte de los lixiviados. La aplicabilidad y beneficio que muestran las
biopelculas en diferentes campos por su resistencia y versatilidad aumentan la
necesidad de indagarlas, conocerlas en sus campos de accin para as
proporcionar soluciones favorables ante las problemticas ambientales actuales.
(Mshandete, et al., 2008b).

Biopelculas y agua de centros nucleares

Recuperar el agua empleada en gran cantidad en las centrales nucleares se


hace cada vez ms necesario, all usan material radioactivo como el uranio
enriquecido (235U), el cual es utilizado como combustible para generar energa
elctrica (Sarro, et al., 2005), estos materiales radioactivos necesitan estar
inmersos en unas piscinas que estn elaboradas con lminas de acero
inoxidable o titanio y poseen agua que es calificada como qumicamente pura
cuya funcin es mantener refrigerado y estable el material radioactivo, se creera
que por las caractersticas del medio y la alta carga radioactiva la vida microbiana
sera inusual; sin embargo, se ha hallado que en estas piscinas, alrededor de la
placa de acero o titanio se ha generado biopelculas, los microorganismos que
crecen sobre estas superficies resisten altas cargas de radionclidos y se han
visto como una alternativa para descontaminar las aguas radioactivas,
disminuyendo su peligrosidad y los efectos adversos que tendra para con la vida
misma. El tratamiento del agua radioactiva se hace por medio de un intercambio
inico pero el auge que ha tomado implementar la biorremediacin en este
campo es muy alto ya que es ms econmica, efectiva y elimina una cantidad
elevada de contaminantes. (Chicote, 2005, y Demnerova, 2005). La efectividad
de las biopelculas ha sido analizada mediante biorreactores que poseen ovillos,
estructuras de acero inoxidable que favorecen el crecimiento de la biopelcula, y
una vez pasa por estos el agua contaminada las comunidades interactan con
los radionclidos presentes en el agua, acumulndolos; as se hace ms fcil
recuperar material radioactivo y disminuye la tasa de toxicidad de la radiacin,
se ha hecho interesante identificar los microorganismos que hacen parte de
estas biopelculas y se ha encontrado que debido a las condiciones que los
microorganismos tienen hay una serie de cambios en sus caractersticas
morfofisiolgicas, siendo difcil su cultivo por lo que se ha extrado DNA de los
microorganismos para tcnicas moleculares y se amplifica la regin 16S DNA,
que es una regin del material gentico conservado en los microorganismos que
al ser secuenciado permite identificar el microorganismo presente tras comparar
con datos de las secuencias reportadas en el National Center for Biotechnology
Information (NCBI), identificando gneros como Proteobacteria,
Actinobacteridae y Firmicutes, encontrando bacterias Gram negativas y Gram
positivas especialmente Bacillus cereus, los cuales resisten la radioactividad y
tras analizar los radionclidos acumulados se encontr concentraciones de
cobalto, cesio, manganeso, zinc y cromo. Tambin por microscopia electrnica
de barrido se evala la capacidad de adherencia de estos microorganismos a las
superficies de acero inoxidable y titanio. (Sarro, et al., 2007).

Biopelculas y aguas residuales

Las aguas residuales se forman tras el uso de agua a nivel domstico, industrial
y comercial; estas contienen desechos slidos, materia orgnica
biotransformable, como son los carbohidratos, las protenas y los lpidos;
contienen adems, nitrgeno, fsforo, carbono, calcio, sodio, sulfato; gases
como el oxgeno, puede contener tambin dixido de carbono, sulfuro de
hidrgeno, gas amoniaco, materiales txicos como metales pesados, entre los
que destacan el cromo, nquel, cobre, zinc, cadmio, mercurio y plomo; adems
de radionclidos e hidrocarburos, tambin puede llevar grasas, aceites y otros
compuestos como detergentes y jabones, tambin contienen microorganismos
patgenos, siendo uno o varios de estos componentes, lo que hace que las
aguas residuales sean un problema de contaminacin ambiental. La aplicabilidad
de las aguas residuales se ha visto en las prcticas agrcolas, con mayor
frecuencia en lugares donde los abastecimientos de agua potable son escasos
y generan problemas de salud pblica y asociada a enfermedades transmitidas
por los alimentos. (Rivas, et al., 2003; y Silva, et al., 2008).
A partir de esta problemtica frente a las aguas residuales se ha diseado el
tratamiento de las mismas, que consta de un tratamiento primario en el que se
aplican procesos de filtracin, sedimentacin y precipitacin que buscan eliminar
los desechos slidos contenidos en el agua residual, un tratamiento secundario
en el cual se utilizan microorganismos para eliminar la materia orgnica disuelta
en el agua, y finalmente un tratamiento terciario que consiste en el uso de
qumicos que llevan a la desinfeccin (Gmez Saravia, 2003 y Gonzales, et al.,
2002). Haciendo nfasis en el tratamiento secundario de aguas residuales en
este se implementan biorreactores que evalan la capacidad de los
microorganismos para degradar los compuestos txicos en el agua. Sin
embargo, se han desarrollado diferentes clases de biorreactores que se basan
en la formacin de la biopelcula sobre un material, que puede ser plstico como
el polietileno de alta densidad, plsticos porosos, que permiten el crecimiento
dentro del material y en su superficie estando siempre en contacto los
microorganismos con los nutrientes. (Gonzales, et al., 2002). Las biopelculas se
muestran como una alternativa amigable, de gran aplicabilidad en el tratamiento
de aguas residuales antes de su disposicin final, que se basa en sus propios
sistemas biolgicos para degradar contaminantes, por medio de las
interacciones que existen entre los microorganismos que la conforman,
previniendo as la contaminacin de ros, mares y ocanos para que no haya
perjuicio alguno sobre vida y el ambiente. (Betancourth, 2000, y Singh, 2006).

Alternativa para la consolidacin de un tratamiento secundario de aguas


residuales.

Mediante el estudio de microorganismos asociados a biopelcula aislados del


medio a biorremediar se posibilitan nuevas alternativas en biotecnologa
ambiental en las que es realmente importante conocer el mecanismo qumico,
bioqumico y molecular de las interacciones realizadas por los microorganismos
presentes en la biopelcula; entender an ms su proceso de formacin, analizar
los sistemas que le permite establecer interacciones de sinergismo tales como
la relacin microorganismo-medio, microorganismo-contaminantes y
microorganismo, al interior de la biopelcula para mejorar la eficacia de estos
procesos y en este caso ser aprovechado para la formulacin de estrategias en
el tratamiento secundario de aguas residuales. (Barrionuevo M. D., et al., 2009).
Por lo anterior, el estudio de estas comunidades microbianas es muy interesante
y plantea la posibilidad de generar investigacin; en torno a esto se propone la
identificacin de microorganismos asociados a biopelculas en trampas de aguas
residuales urbanas. Esto contemplara identificar biopelculas en trampas de
aguas residuales urbanas, a las cuales se les realizara un anlisis
microbiolgico y la caracterizacin qumica de las especies asociadas a la
biopelcula, como dos factores que constituyen las variables del estudio,
plantendose como tema de investigacin el interrogante cules
microorganismos presentes en aguas residuales estn asociados a la formacin
de biopelculas? Atendiendo a esta temtica se hara necesario dividir el proyecto
en varias fases: la primera, centrada en aislar los microorganismos asociados a
biopel- culas en trampas de aguas residuales; la segunda, enfocada en
determinar los compuestos que actan al interior de la biopelcula; y la tercera,
se centra en entender la relacin que existe entre los microorganismos de la
biopelcula y los compuestos con el fin de proponer su posible aplicacin en el
tratamiento secundario de aguas residuales como una alternativa de
biorremediacin2 . (Cristiano, et al., 2011).
Por ltimo, hay que tener en cuenta que el inadecuado uso de la biorremediacin
puede ocasionar una serie de impactos negativos, por lo tanto se debe buscar
un vnculo entre la gestin ambiental y la biorremediacin por medio de
herramientas como la tica, la educacin ambiental y planes de manejo que
permiten alcanzar procesos amigables con el ambiente enfocados hacia el
desarrollo sustentable. De esta forma se busca establecer relaciones que
puedan llegar a posibilitar procesos para el tratamiento secundario de aguas
residuales, con el fin de contribuir y generar un impacto positivo sobre el
ambiente, aportando herramientas de estudio y fomentando el inters por la
gestin ambiental; de esta forma se evidencia el importante papel que juega el
profesional de bacteriologa dentro del enfoque ambiental y cmo la
investigacin formativa es fuente de solucin de problemticas ambientales
(Olarte, 2010).

9. VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LOS BIOFILMS

El desarrollo de estas biopelculas puede ser beneficioso o perjudicial


dependiendo del entorno en el que se forman y el uso que se hacen de ellas. La
formacin de biofilms es una estrategia adaptativa de los microorganismos, por
lo cual presenta las siguientes ventajas para el crecimiento del microrganismo: 1
Protege a los microorganismos de la accin de los agentes adversos.
Incrementa la disponibilidad de nutrientes para su crecimiento.
Facilita el aprovechamiento del agua, reduciendo la posibilidad de
deshidratacin.
Posibilita la transferencia de material gentico (ADN).

A nivel industrial, presenta una mayor resistencia frente a desinfectantes debido


a la difusin lenta o incompleta del biocida al interior del biofilms o por la
diferenciacin fisiolgica de las clulas en el biofilms. 2

La formacin de un biofilm es la causa de muchas infecciones crnicas debido a


que presenta resistencia inherente a los agentes antimicrobianos como
antibiticos, desinfectantes, germicidas o incluso a la respuesta inmunolgica del
hospedador; adems, tienen la capacidad de ayudar a otras bacterias a resistir
el ataque de antibiticos produciendo inhibidores como el caso de las Beta-
lactamasas, causan numerosos problemas tcnicos debido a la corrosin de
equipos produciendo prdidas econmicas para las industrias y son difciles de
erradicar.3
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