INFORME DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGA

SOLUCIN DE CUESTIONARIO MEDIO DE CULTIVO (PARTE TERICA)

INTRODUCCIN

Los procesos de esterilizacin, limpieza y desinfeccin son diariamente

llevados a cabo, no solamente en el laboratorio, donde son fundamentales para
evitar la contaminacin de medios, cultivos, placas etc., sino tambin en otros
mbitos tales como los hospitales, donde fallas en estos procedimientos
aumentan la morbimortalidad de los pacientes.

En el mundo actual, donde el inters de los laboratorios que prestan servicios

es mantener controladas todas las variables que intervienen en el
procesamiento y anlisis de muestras. Es de ah la importancia de establecer
mtodos de limpieza y desinfeccin adecuados en las reas de trabajo. Por
esto se deben de utilizar desinfectantes que cumplan con ciertas caractersticas
especficas, siendo capaces de eliminar diferentes tipos de microorganismo
patgenos y no patgenos a concentraciones adecuadas en intervalos de
tiempo determinados1.

Para llevar a cabo estos procedimientos de limpieza es necesario tener en

cuenta las condiciones que influyen en la accin antimicrobiana como la clase,
el estado fisiolgico de microorganismos y su ambiente.

a continuacion se muestras los metodos de esterilizacion y desinfeccion

ademas de algunos de desinfectantes utilizados en el laboratorio de
microobiologia.

La esterilizacin por vapor es el mtodo ms utilizado para las agujas de

acupuntura y otros instrumentos de metal. No es txica y es econmica,
esporicida y rpida, si se utiliza de acuerdo con las instrucciones del fabricante
(por ejemplo, tiempo, temperatura, presin, envoltura, tamao de la carga y su
localizacin). La esterilizacin por vapor slo es plenamente eficaz si se realiza
sin aire, a ser posible con saturacin de vapor al 100%. La presin en s no
influye en la esterilizacin, pero sirve como medio para obtener las elevadas
temperaturas que se necesitan.

Tambin se puede utilizar calor seco para la esterilizacin de agujas, y en

particular para la esterilizacin de materiales que podra daar el calor hmedo,
pero las agujas pueden convertirse en quebradizas. Requiere temperaturas
ms altas y tiempos de esterilizacin ms largos.

En el cuadro que figura a continuacin se indican las temperaturas y los

tiempos de esterilizacin recomendados para el vapor a presin y el calor seco.
 Mtodos de esterilizacin recomendados

* Vapor a presin (por ejemplo, autoclave, esterilizador de presin)

Presin requerida: => 15 libras por pulgada cuadrada (101 kilopascales)

Temperatura Tiempo

115 C 30 minutos

121 C 15 minutos

126 C 10 minutos

134 C 3 minutos

* Calor seco (por ejemplo, horno elctrico)

Temperatura Tiempo

160 C 120 minutos

170 C 60 minutos

180 C 30 minutos

OBJETIVO

Determinar fundamentos tericos que contribuyan a prevenir infecciones en

un medio de cultivo.
Identificar los principios generales que garanticen la conservacin de la
esterilidad de materiales y equipos.
Determinar que las muestras que se desarrollan tengan ms probabilidades
de ser las causantes de la infeccin y cules son sus posibles
contaminantes o colonizadores.

METODOLOGIA

Con las informacion recivida y ademas de contar con la guia de laboratorio de

microbiologia general se procedio a resolver la nueve preguntas de carcter
teorico, las cuales nos dan informacion de los medios de cultivos como:
propiedades, nutrientes que requiren, ventajas y desventajas de sus medios,
tipo de conservacion entre otras.
RESULTADOS

1-Que nutrientes requieren los microorganismos para su crecimiento?

Los nutrientes para el crecimiento de microrganismos son:

-agua
-CO2
-fosfato
-sales mineras
-potasio
-azufre
-hierro
- magnesio
-calcio
2- qu propiedades deben de tener los medios de cultivo?

Propiedades de los medios de cultivos:

-humedad
-fertilidad
-Ph
-Transparencia

3-Cmo es la presentacin comercial de los medios de cultivo para

microorganimos?qu ventajas tiene un medio de cultivo granulado?

Tipos de medio de cultivo

-semisolido
-solido

Ventajas de medios de cultivo granulado

-Minimiza los riesgos para la salud y medio ambiente
-ms rpido
-simple y econmico

4- Cmo se clasifican los medios de cultivo para segn su estado fsico,

composicin y propsito?

Clasificacin de medios de cultivo

1) Medios comunes: Son aquellos que poseen los componentes mnimos para
que pueda producirse el crecimiento de bacterias que no necesiten
requerimientos especiales. El medio ms conocido de este grupo es el agar
nutritivo o agar comn, que resulta de la adicin de agar al caldo nutritivo.
Otros representantes de este grupo son el agar tripticase de soja, el agar
Columbia, etc.
2) Medios de enriquecimiento: Son aquellos que, adems de las sustancias
nutritivas normales, incorporan una serie de factores indispensables para el
crecimiento de microorganismos exigentes. Este enriquecimiento se hace por
adicin de sangre u otros productos biolgicos (sangre, suero, leche, huevo,
bilis, etc.) que aportan dichos factores. En ocasiones es posible aadir
suplementos artificiales a los medios para producir un enriquecimiento del
mismo (p. ej. Polivitex, Isovitalex, etc)El gonococo, por ejemplo, necesita cistina
y cistena para su crecimiento. Estas sustancias son aportadas por la sangre
calentada adicionada al medio de cultivo (agar chocolate).
3) Medios selectivos: Son medios utilizados para favorecer el crecimiento de
ciertas bacterias contenidas en una poblacin polimicrobiana. El fundamento de
estos medios consiste en facilitar nutricionalmente el crecimiento de una
poblacin microbiana especfica. Un ejemplo de medio selectivo es el caldo
selenito, que se utiliza para favorecer el crecimiento de salmonellas y frenar el
del resto de enterobacterias.
4) Medios inhibidores: Cuando las sustancias aadidas a un medio selectivo
impiden totalmente el crecimiento de una poblacin microbiana, se denomina
inhibidor. Los medios inhibidores podran considerarse como una variante ms
restrictiva de los medios selectivos. Los medios inhibidores se consiguen
habitualmente por adicin de sustancias antimicrobianas o de cualquier otra
que inhiba completamente el desarrollo de una poblacin determinada. Un
medio inhibidor es el MacConkey que permite el crecimiento de los grmenes
Gram negativos e impide el crecimiento de los Gram positivos.
5) Medios diferenciales: Se utilizan para poner en evidencia caractersticas
bioqumicas que ayuden a diferenciar gneros o especies. La adicin de un
azcar fermentable o un sustrato metabolizable se utilizan para este fin. El
medio MacConkey es un medio diferencial porque permite distinguir los
grmenes que fermentan la lactosa de aquellos que no lo hacen. Tambin lo
son el C.L.E.D. (lactosa +/lactosa -), el agar sangre (tipo de hemlisis), el SS
(que es doblemente diferencial), etc.
6) Medios de identificacin: Son los destinados a comprobar alguna cualidad
especfica que puede servirnos para reconocer la identidad de un
microorganismo. Estos medios han de poseer los elementos necesarios para
asegurar el crecimiento de los microorganismos, el sustrato especfico que
vaya a ser metabolizado y el indicador que nos muestre el resultado. El agar
Kligler, el medio de Simmons y en general, cualquier medio al que se le haya
aadido un elemento diferencial de un microorganismo, son medios utilizados
en identificacin. Actualmente estn apareciendo en el mercado una gran
cantidad de medios especficos de identificacin para ciertos microorganismos,
con lo cual se consigue simultneamente abaratar el costo y reducir el tiempo
de identificacin. Son ejemplos de esto ltimo los medios CPS ID3 o Uriline
ID(Biomerieux), utilizados para identificar los grmenes urinarios ms
importantes a partir de la placa de cultivo gracias a la utilizacin de sustratos
cromognicos especficos.
7) Medios de multiplicacin: Sirven para obtener una gran cantidad de
clulas a partir de un microorganismo ya aislado. Seemplean en la obtencin
de vacunas, en la investigacin y en la industria. Los medios ms adecuados
para la multiplicacin suelen ser lquidos. El caldo-infusin cerebro-corazn
(BHI), es un ejemplo tpico de estos medios.
8) Medios de conservacin: Se utilizan para conservar una cepa que, por
diversas razones nos interese mantener. Fundamentalmente se utilizan como
controles de calidad de las pruebas y reactivos utilizados en elLaboratorio de
Microbiologa. En el laboratorio se pueden conservar las cepas de tres formas:
a) haciendo pases peridicos de placa a placa,
b) mediante liofilizacin de una suspensin bacteriana, y
c) congelando las cepas en leche descremada estril al 0,1%.
9) Medios de transporte: Se usan para el transporte de muestras clnicas que
no pueden sembrarse inmediatamente. Suutilizacin debe hacerse
introduciendo la torunda con la que se obtuvo la muestra en el interior delmedio
(generalmente en un tubo). Son ejemplos tpicos de este grupo los medios de
Stuart-Amies,Cary-Blair, etc.

5- cmo se deben conservar los medios de cultivo?

Los medios de cultivo deshidratados se deben almacenar en envases sellados

bajo las condiciones que seale el fabricante. Generalmente se almacenan en
un lugar fresco (entre 15 y 25), con poca humedad y protegidos de la luz solar
directa. Nunca se deben almacenar cerca de autoclaves, hornos, ni otra fuente
de calor o vapor. Cuando los envases de estos medios de cultivo deshidratados
son abiertos para su uso inicial, se debe tener la precaucin de cerrarlos tan
pronto como sea posible y mantenerlos bien cerrados para prevenir la entrada
de humedad. Una vez que el medio de cultivo ha sido preparado y esterilizado,
puede almacenarse a temperatura ambiente por un periodo mximo de 2
semanas protegido de la luz, o por periodos mayores a 12 -15C. Sin embargo,
almacenados bajo refrigeracin entre 2 y 8C se prolonga la vida til de los
mismos, (nunca por debajo de 0C porque se destruye la estructura del gel).
Los medios de cultivo se deben mantener en recipientes bien cerrados para
evitar su deshidratacin y cuando se usa tapn de algodn, se debe colocar
por encima una envoltura de papel (Craft).

6- Qu requisitos se deben cumplir para una buena preparacin de un

medio de cultivo?

Para su preparacin se deben tener en cuenta los siguientes aspectos:

 Prepararlos slo a partir de productos que provengan de fabricantes o
proveedores que suministren productos de calidad.

Utilizar agua destilada o desmineralizada con una calidad microbiolgica y

fisicoqumica adecuada.

Utilizar materiales de vidrios bien lavados y enjuagados con agua destilada o

desmineralizada.

Controlar el tiempo y la temperatura recomendada durante su esterilizacin.

Nunca se deben exceder las condiciones sealadas por el fabricante.

7- Qu cuidados se deben de tener para el vertido del medio en las cajas

Petri y en los tubos con agar inclinado?

-no dejar burbujas mientras se est agregando el medio de cultivo a la caja

Petri

-no dejas espacios sin en la caja Petri sin el agar

-calentar la boca de los tubos siempre que se vaya a destapar y agregar este a
la caja Petri.

8-Qu posible defectos se pueden encontrar en la manipulacin y

preparacin de los medios de cultivo?

-contaminacin de los instrumentos

-Contaminacin de los medios de cultivo

DISCUSIN

Los resultados anteriores nos dieron informacin acerca de los medios de

cultivos y de cmo estos se clasifican de acuerdo a sus propiedades. Adems
sabemos los mecanismos de desinfeccin que se deben tener en cuenta a la
hora de llevar a cabo la elaboracin de cualquier tipo de cultivo, para que este
se obtenga con la menor cantidad o nula existencia de contaminantes de
cualquier tipo ya que estos afectaran en gran porcentaje la cultivacin de X
bacteria.

La importancia de la desinfeccin de instrumentos o del lugar de trabajo es que

al ejecutar el respectivo proceso estos inhiben en el crecimiento bacteriano con
ello se puede obtener los resultados ms ptimos.

Por otra parte, al saber cules son los medios o nutrientes esenciales en los
que la bacteria o sepa desarrollan un buen crecimiento bactriano, se podr
interactuar qumicamente para saber que bacteria estamos incubando y
hacernos preguntas como: de que nos sirve esta bacteria, que nutrientes son
los esenciales para esta clase
ANEXOS

1.

tabla 2: metodos de esterilizacion y desinfeccion en laborotario

CONCLUSIONES

Con la informacin terica se pueden prevenir factores de contaminacin

de los cultivos, mediante la adecuada implementacin de los
instrumentos de laboratorio los cuales al ser esterilizados inhiben en el
 crecimiento de cualquier tipo de contaminante. Adems se puede saber
que desinfectante es ms complejo.

REFERENCIAS

Celorrio-Pascual, J., Lapresta Moros, C. and Solano Bernad, V. (2016).

Fundamentos de antisepsia, desinfeccin y esterilizacin. Enfermedades
Infecciosas y Microbiologa Clnica, [online] pp.681-688. Available at:
http://www.elsevier.es/es-revista-enfermedades-infecciosas-
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(2008, 07). Esterilizacin y desinfeccin. fagro.edu. Obtenido 08, 2016,
de http://www.pv.fagro.edu.uy/fitopato/cursometodosfito/02-
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VIGNOLI, R. (2010, 03). ESTERILIZACION Y DESINFECCION. Higiene.
Obtenido 08, 2016, de
http://www.higiene.edu.uy/cefa/Libro2002/Cap%2027.pdf