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2.

Materiales y mtodos

2.1. Materiales

La calabaza de las cenizas (B. hispida) se obtuvo de un Mumbai, India. El producto fue llevado al
laboratorio en 12 h Despus de la cosecha y almacenado inmediatamente a temperaturas
refrigeradas Antes del procesamiento. Todos los productos qumicos estndar fueron Sigma -
Aldrich Chemical Company, EE.UU. (99% de pureza). Disolventes HPLC

Fueron de EMerck, India y se filtraron a travs de 0,45 m de filtro Papel y se desgasificaron antes
del anlisis de HPLC. Todos los dems disolventes (Grado de reactivo analtico) se redistilaron
antes de su uso.

2.2. Procesamiento y embalaje

Todo el vegetal se lav con agua corriente del grifo para quitar el polvo adherido. Despus del
lavado, fue pelado y cortado en pequeos trozos de dimensiones de 2,5 cm 2,5 cm 0,7 cm con
un cuchillo estril afilado. Los cubos fueron aleatorizados antes del envasado y las piezas cortadas
(100 g) se empaquetaron en poliestireno

Bandejas (dimensiones interiores: 9 cm 9 cm 2,5 cm). Las bandejas fueron sobre-envueltas


alrededor con la pelcula de la adherencia y sellado para evitar cualquier fuga.

La pelcula utilizada tena un grosor de 8-10m y permeabilidad al oxgeno y dixido de carbono de


1,7 y 10,3 cm3 respectivamente (datos proporcionados por el proveedor).

2.3. Irradiacin y almacenamiento

La calabaza de ceniza envasada se someti a varias dosis de radiacin (0,5, 1,0, 1,5, 2,0 y 2,5 kGy)
en un irradiador de cobalto-60 (GC-5000, BRIT, Mumbai, India) con una tasa de dosis de (1,64 Gy /
s). Irradiador Fue calibrado por el dosmetro de Fricke antes del inicio del experimento y Tena una
relacin de uniformidad de dosis de 1,2. Las muestras irradiadas se almacenaron en La oscuridad a
10 1 C. En estudios previos sobre calabaza de ceniza En nuestro laboratorio, se encontr la
temperatura de almacenamiento ptima Para ser 10 C (la informacin proporcionada en la Tabla
de materiales suplementarios 3). El almacenamiento a una temperatura ms baja (4 C) indujo una
lesin por enfriamiento Resultando en escasas puntuaciones de aroma mientras que a una
temperatura 15 C, el deterioro tanto fisiolgico como microbiano fue muy rpido Resultando en
una vida til ms corta. En el presente estudio, no irradiado Se utilizaron muestras como controles
durante todo el perodo de almacenamiento. Se prepararon tres repeticiones para cada dosis y da
de almacenamiento. Los Las muestras se examinaron en 0, 5, 8, 12 y 14 d despus del envasado.

2.4. Anlisis sensorial

Las muestras para anlisis sensorial se prepararon cortando coccin Pedazos de calabaza de ceniza
en agua hirviendo durante 5 min. Las piezas cocidas Se presentaron a los evaluadores en bandejas
blancas para la evaluacin sensorial.
Las repeticiones se evaluaron en tres sesiones diferentes para Evitar el cansancio y la saturacin.
Las pruebas hedonistas fueron realizadas por un panel sensorial experimentado (15 miembros)
usando una escala de 9 puntos con 1, disgusto extremadamente o no Caracterstica del producto y
9, como extremadamente o muy caracterstico Del producto (Lpez-Rubira et al., 2005).
Parmetros evaluados Fueron el color, el aroma, la textura, el sabor, el sabor y la aceptabilidad
general. La evaluacin sensorial se realiz en los das 0, 5, 8, 12 y 14 de almacenamiento. Las
muestras de control estuvieron mal deterioradas debido a la carga microbiana Dentro de 5 das de
almacenamiento y por lo tanto no podra ser evaluado por el sensor Para el gusto y el aroma. Para
determinar la aceptabilidad de Las muestras irradiadas que salen del almacenamiento, todos los
parmetros Se compararon con muestras de control frescas cada da de estudio. Se registraron las
puntuaciones mximas hednicas para las muestras A una dosis de radiacin de 2 kGy y
almacenada hasta 12 d. Ms all de 12 d Las puntuaciones sensoriales estaban por debajo de lo
aceptable (puntuacin 3,5 en la escala hednica) Debido a la drstica prdida de firmeza y aroma
inaceptable. Por lo tanto Todas las muestras fueron estudiadas adicionalmente para una duracin
total de 12 d solamente.

La evaluacin sensorial tambin se realiz mediante anlisis descriptivo cuantitativo Anlisis (QDA)
(Murray et al., 2001). QDA involucra tanto la calidad Y anlisis cuantitativo de componentes
sensoriales de un producto Por un jurado capacitado. Un panel formado por 9 miembros, 6
machos y 3 hembras evaluaron las muestras usando un mtodo no estructurado Escala de 150
mm. Los puntos de anclaje eran "muy dbiles" en el lado izquierdo Y 'muy fuerte' en el lado
derecho de la escala. Los 7 sentidos Los atributos evaluados fueron el color (blanco), el aroma (ash
cabaa, irradiado Y mohoso), textura y gusto (calabaza de la ceniza como e irradiado). Los
atributos sensoriales se generaron durante las sesiones de entrenamiento panel. Las evaluaciones
se repitieron dos veces y la sensorial Los datos se recogieron midiendo la distancia (mm) desde el
origen.

2.5. Anlisis microbiano

Se utilizaron mtodos estndar para enumerar microorganismos

Presente en la calabaza de ceniza de RTC en cada momento de muestreo y tratamiento para

12 d de almacenamiento. Las concentraciones de bacterias mesfilas, levaduras y mohos fueron

Llevada a cabo por triplicado para cada una de las bandejas usando el Agar del Recuento de Placas

(Himedia, Mumbai, India) y el mtodo de la placa de vertido (Saroj et al.,

2006). Se homogeneiz una muestra de 25 g en 225 ml de solucin fisiolgica estril

salina. Despus de diluciones en serie apropiadas, las muestras fueron

Vertido sobre agar de recuento de placas (PCA). Las colonias fueron contadas

Despus de 24 h de incubacin
% O2 =

Observado% O2

Observado% N2

78,084 (1)

% CO _ {2} = 100 -

? Observado% O2

Observado% N2

) 78.084 + 78.084?

(Composicin atmosfrica de N2 tomada como 78.084%)

(2

La composicin atmosfrica se control cada da por triplicado

Utilizando tres bandejas de muestras independientes.

2.7. Determinacin de color y textura

Crommetro Minolta (modelo CM-3600d Konica Minolta Sensing Inc., Japn) se calibr con un
azulejo blanco suministrado con El instrumento y luego se utiliza para determinar el color
utilizando el 3 Comision Internationale de l'Eclairage (CIE) coordina, L (ligereza), A (-verde, + rojo)
yb (-azul, + amarillo). Seis piezas de cenizas cortadas Calabaza fueron seleccionados
aleatoriamente de cada bandeja empaquetada para el color Medicin y los resultados representan
su promedio. Firmeza de las muestras de vegetales cortados irradiados y no irradiados
(Dimensiones de 2,5 cm x 2,5 cm x 0,7 cm) se midi con Un analizador de textura (TA.HDPLUS,
Stable Microsystems Ltd., Surrey, Inglaterra) con una clula de carga 980 N, equipada con una
sonda cnica (P / 45C S / s lote n 3889). La prueba se dise con una fuerza de disparo de 0,147
N Y una velocidad de prueba de 0,5 mm / s. La fuerza mxima requerida para penetrar Muestras
se refiri como una medida de la firmeza de la muestra. Datos Fueron recogidos para seis
repeticiones de cada bandeja y los resultados fueron Expresado como su promedio.

2.8. Preparacin de extracto metanlico

Se extrajeron cien gramos de calabaza de ceniza dos veces en 400 ml


Metanol. El extracto se centrifug entonces a 3000 x g durante 30 min

Y el sobrenadante se recogi y se hizo hasta un volumen final de

500 ml aadiendo metanol. Se usaron alcuotas para determinar

Antioxidante en trminos de fenolicos totales y contenido de vitamina C.

2.9. Actividad de barrido radical

Se utiliz un ensayo de barrido de radicales DPPH para

Actividad antioxidante de la calabaza de ceniza (Wen et al., 2010). Una alcuota de

Se aadi extracto metanlico (25 l) a 75 l de metanol y 1 ml

De solucin de DPPH (200 M en metanol). El volumen de reaccin final fue

Despus se hizo a 3 ml mediante la adicin de 1,9 ml de metanol. Despus de la incubacin

Bajo condiciones de oscuridad durante 30 minutos se midi la absorbancia a

516 nm. La actividad antioxidante total se expres como el cido glico

Masa equivalente por masa de calabaza de ceniza en mg kg-1.

2.10. Contenido fenlico total

El contenido fenlico total se evalu de acuerdo con el

Procedimiento de Folin-Ciocalteu (Singleton et al., 1965). Parte de

El extracto metanlico obtenido como se ha indicado anteriormente (seccin 2.2) se trat con

Polivinilpirrolidona (10 g / l, PVPP, Sigma - Aldrich, EE.UU.) a

Eliminar los compuestos fenlicos del extracto. La PVPP se purific como

Por el procedimiento detallado anteriormente (Doner et al., 1993). La mezcla

Se incub entonces durante la noche en un agitador orbital a 25 C

Y 2.5 oscilaciones por s. La PVPP se elimin luego por centrifugacin

A 21.000 xg durante 10 min a 4 C. Se recogi el sobrenadante

Y se descart el sedimento (complejo PVPP-polifenol). los

La absorcin del sobrenadante y del extracto original se midi a

725 nm usando espectrmetro UV-visible (Helios, Thermofisher Scientific,


USA) de acuerdo con el procedimiento Folin-Ciocalteu. los

Contenido de fenoles totales en la calabaza de ceniza se determin por la diferencia

Entre el contenido fenlico obtenido antes y despus de PVPP

Tratamiento y luego se expresa como la masa equivalente de cido glico

Por masa de calabaza de ceniza como mg kg-1.

2.11. Contenido de cido ascrbico

El contenido total de vitamina C de la calabaza de ceniza se estim de

Con el mtodo microfluoromtrico oficial de la AOAC

(AOAC, 1990). Se extrajo calabacn (20 g) con 20 ml de

Solucin de extraccin recin preparada que contiene metafosfrico

cido (0,3 mol L - 1) y cido actico (1,4 mol L - 1). El homogeneizado fue

tabla 1

Evaluacin sensorial (prueba hednica) para la apreciacin general de la calabaza de ceniza RTC en

Diferentes dosis de radiacin estudiadas (0-2,5 kGy) durante el almacenamiento (12 d).

Diferentes letras indican diferencia significativa en p 0,05.

Luego se centrifugaron a 16.000 xg durante 15 min a 4 C y el sobrenadante

Se trat con carbn activado (20 g / l) con

Agitando para convertir el cido ascrbico en cido deshidroascrbico. los

La mezcla se centrifug de nuevo a 21.000 xg durante 10 min a 4 C

Para quitar carbn. Alcuotas de este sobrenadante (500 l) fueron

Aadido a volmenes iguales de solucin de cido brico-acetato sdico (3%

cido brico en solucin de acetato sdico al 3,67 mol L-1). La solucin

Se dej en reposo durante 15 minutos y el volumen total fue entonces

Ajustado a 10 ml usando agua mili Q. Esto fue designado como


Solucin en blanco. Para preparar la solucin de muestra, otra alcuota de

500 L con un volumen igual de solucin de acetato de sodio

(3,67 mol L - 1) y el volumen total se ajust a 10 ml usando

Mili Q de agua. Una alcuota de 0,4 ml de ambas soluciones (muestra y blanco)

Se trat por separado con 1 ml de solucin de O-fenilendiamina

(0,02%) (Sigma Chemical Co. Ltd., St. Louis, EE.UU.), se sometieron a vrtice y

Se incubaron durante 35 min a temperatura ambiente (25 2 C). Ascrbico

cido reacciona con O-fenilendiamina para formar un conjugado fluorescente.

Se midi el conjugado total formado (EX \ leq 350 nm;

430 nm, Ancho de banda 5 nm) usando fluormetro CS-5000 (Shimadzu

Corporation, Japn). Se sigui el mismo procedimiento para

Soluciones de cido ascrbico de concentracin conocida (0,1-0,0015%) a

Dibujar una curva estndar. Luego se us la regresin lineal para determinar

La concentracin de cido ascrbico en cada muestra. El contenido

De vitamina C por masa de calabaza de ceniza se expres en g kg-1.

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