Sunteți pe pagina 1din 358

L

CALIQPSIA FLOREA

BACTERIOLOGIE
i
VIRUSOLOGIE

Editura Galai
2010
Copyright 2010
Toate drepturile asupra acestei ediii sunt rezervate
autorului.

Descrierea CIP a Bibliotecii Naionale a Romniei


FLOREA, CALIOPSIA -

Bacteriologic i virusologie / Caliopsia


Fiorea - Galai: Editura Zigotto, 2010 Bibliogr.

ISBN 978-606-8085-71-5

579(075.8)(076.5)
Editura SZtyotijo- este recunoscut de Consiliul Naional al
Cercetrii tiinifice din nvmntul Superior (cod 262)

Refereni tiinifici:
Prof.univ.dr. Aurel NECHITA
Prof.univ.dr. Carmina Liana MUAT

Tipografiai2t0UC*#itf- Galai
Tel.: 0236.477171
n memoria mamei meCe
L
^ .
CUPRINS

Capitolul I
Microbiologic: definiii, repere. Microbiologie medical: obiective i
conexiuni interdiscipiinar ................................................................ 7

Capitolul n
Bacteriile: structur, funcii .......................................................... 15

Capitolul III
Bacteriile: compoziie chimic, metabolism, cultivare ............... 36

Capitolul IV
Virusurile ...................................................................................... 59
Capitolul V
Genetica microbian .................................................................. 68
Capitolul VI
Relaiile microorganism - gazd uman ...................................... 82
Capitolul VII
Aprarea antiinfecioas nespecific, specific,
de specie i dobndit .................................................................... 94

Capitolul VIII
Staphylococcus ........................................................................... 105
Capitolul IX
Streptococcus .... ... ....................................................................... 115
Capitolul X
Listeria, Erysipelothrix, Corynebacterium
(bacili Gram pozitivi nesporulai) .. .......................................... 127
Capitolul XI
Familia Bacillaceae....................................................................... 138
Capitolul XII
Mycobacterium: bacilii tuberculozei, barilul leprei,
alte micobacterii. Bacterii nocardiforme ..................................... 153

Capitolul XIII
Neisseria: meningococul, gonococul. Moraxella .......................... 166
Capitolul XIV
Familia Enterobacteriaceae.......... . ............................................. 178
Capitolul XV
Vibrioni, spirili: Vibrio, Campylobacter, Helicobacter ........ .. . 199
Capitolul XVI
Pseudomonadele: Pseudomonas, Burkholderia ......................... 208

Capitolul XVII
Parvobacteriaceae ......................................................................... 212
Capitolul XVriII
Pasteurella, Legionella ........................ ................. ...................... 223

Capitolul XIX
Bacterii anaerobe nesporulate} .................................................... 230
Capitolul XX
Spirochete: Treponema, Borrelia, Leptospira

.237
Capitolul XXI
Bartonella, Rickettsia i Chlamydia ........................................ .. 248
Capitolul XXII
Genul Mycoplasma ................... .. ............................................ .. 257
Capitolul XXIII
Proprieti generale ale virusurilor. Profilaxie, tratament......... 261
Capitolul XXIV
Herpesvirusuri: v. Herpes simplex, V. Varicela-zoster, v. Epstein-
Barr, v. Citomegal .......................... .. .... .. .......... .. . ................ . 27.1
Capitolul XXV
Parvovirusuri, adenovirus uri, poxvirusuri,
parapoxvirusuri .............................. ... ......................................... 281
Capitolul XXVI
Virusuri hepatitice: A, B, C, D, E, F.............. ... ........... .. ......... 289
Capitolul XXVIII
Orthomyxovirusuri: virusurile gripale A, B. C.
Pararayxovirusuri: v. parainfluenzae, v.
respirator
Capitolul XXVII
Picornavirusuri: enterovirusuri, rinovirusuri,
reovirusuri, rotavirusuri, calicivirusuri ..................................... 296
sinciial, v. uriian, v. rujeolic. Coronavirusurile ....................... 317
Capitolul XXIX
Retrovirusuri, prioni .................................................................... 328
Bibliografie .................................................................................. 337
List de abrevieri........................................................................... 341
Caliopsa FLOREA Bacierioioie i virusologie

Capitolul I
Microbiologic: definiii, repere.
Microbiologic medical: obiective i
conexiuni interdisciplinare

Microbiologla
Definiie este tiina care se ocup cu studiul microorganismelor.
Termenul de microorganism (microb) cuprinde n exprimarea curent:
bacteriile, ciupercile
microscopice, inclusiv levurile, unele alge, protozoarele i virusurile.
n cele ce urmeaz se va face o scurt incursiune n istoria
microbiologici medicale ca ramur a medicinii umane.
Se poate ncepe cu HIPOCRATE (460-377 .e.n.) care s-a nscut n
insula Cos din Marea Egee, unde a organizat o renumit coal medical.
ntreaga sa experien a fost concretizat n lucrarea Corpus
hippocraticum (Culegere hipocratic), care reprezint o sintez a
cunotinelor de medicin: embriologie, anatomie i fiziologie. Prin
jurmntul su Jurmntul hipocratie a transmis tuturor generaiilor de
medici dragostea pentru fiina uman, care trebuie iubit i slujit cu
cinste i druire.
ARISTOTEL (384-322 .e.n.) marele gnditor al
antichitii, s-a nscut n Tracia, ntr-o familie de medici, tatl lui
Nikomachos, a fost medic la curtea regelui Macedoniei. Dintre
lucrrile sale importante de biologie se cunosc: De generaione

7
Caliopsa FLOREA Bacterioloie i virusologie
animalium (Dezvoltarea animalelor); De partibus animalium (Prile
animalelor); ,Jfistoria animalium (Istoria animal).
HIERQNIMUS FRACASTOR (1478-1553) medie erudit,
astronom i literat italian, n lucrarea ,J)e contagionae et contagiosis mor bis
et curatione (Verona 1546) afirm ca organismele vii foarte mici
,jseminaria prima, se multiplic, ajung la oamenii sntoi, nmulind
astfel cazurile de boli contagioase. n perioada n care infecia sifilitic
fcea ravagii n Europa, iar denumirea bolii varia dup cei ce o aduseser
sau dup numele rii vecine, Fracastor scrie poemul ,J)e morbus Gallicus
al crui erou .;s.e numete Syphilis, poemul a cunoscut o larg rspndire
ceea.ce a legat pentru totdeauna numele eroului de redutabila boal:- .<.
ROBERT HOOKE n 1665 public ,Mlcrographia, unde d prima
descriere a microscopului i a pieselor componente.
ANTONY VAN LEEUWENHOEK (1632-1723) naturalist
olandez, care -s-a-nscut n Deift, ndeletnicindu-se nc din tineree cu
meteugul de lefuire a lentilelor, i construiete unul din primele
microscoape, care avea o putere de mrire de 150-200 ori. El este primul
care a vzut un organism microscopic unicelular. Principala sa lucrare a
fost Tainele naturii descoperite cu ajutorul microscoapelor, aprut n
1724. Unde descrie granulele de amidon, globulele roii din snge,
musculatura la purice, pduche, nar, structura miocardului, aparatul
bucal la nar, capilarele sanguine, diferite microorganisme,
spermatozoizii
KARL LINNE naturalist suedez (1707-1778) va ine seam de
micile vieuitoare n clasificarea sa general a lumii vii Sistema naturae
(1767), cuprinde n Vermes, clasa Chaos cu 6 specii, ultima fiind
<Chaos infuzoricum, organisme microscopice observate pn atunci. El
scria, misterioase moleculele vii, n care vor trebui s se descurce
urmaii notri.
Adevrata descoperire a microbilor aparine secolului XIX- lea,
deoarece la o anumita acumulare de date tiinifice i inovri tehnice, nu
numai c acum se demonstreaz experimental adevratul lor rol n natura,
dar se elaboreaz i se aplic principiile, metodele i tehnicile care combat
sau previn activitile microbiene duntoare pentru sntate, industria
8
Caliopsia FLQREA Bacterioloie i virusologie
alimentar etc.
Un rol n acest sens l-au avut Louis Pasteur i Robert Koch.
LOUIS PASTEUR (1822-1895) chimist francez, intr n contact cu
microbii studiind cristalele tartrailor. mpreun cu un colectiv de
specialiti diferite, pun bazele patrimoniului pasteurian, ca bun naional
i universal:
- interpretarea biologic a efectelor chimice produse de microbi;
- doctrina microbian a bolilor infecioase;
- vaccinarea ca principiu i metod de prevenire a infeciilor
microbiene;
- atenuarea n medii adecvate a microbilor viruleni pentru
obinerea tulpinilor vaccinate atenuate, stabile;
- explicaii i soluii tehnologice eficace i simple n industriile
fermentative;
-institutul Pasteur din Paris care marcheaz cu aceast tnr tiin
nceputul procesului complex al instituionalizrii cercetrii
tiinifice.
ROBERT KOCH (1843-1910), medic de ar, german, devine
printele colii germane de microbiologic prin studii despre bacteria
crbunoas, descoperirea metodei de cultivare pe medii solide a
bacteriilor, descoperirea vibrionului holeric, a baeilului tuberculozei i a
alergiei la tuberculoz, pentru care primete premiul Nobel n 1905.
ALPHONSE LAVERAN (1845-1922), microbiolog francez,
studiaz paludismul i descoper n 1878 hematozoarul palustra (premiul
Nobel, 1907).
JULES BORDET medic francez (1870-1961), descoper agentul
tusei convulsive (premiul Nobel, 1919).
DIMITRJE L IVANOVSCK3 (1869-1920) a pus n eviden o nou
form de existen materie vii, virusurile filtrabile (1892), prin
descoperirea virusului mozaicului tutunului i ncepe dezvoltarea unei noi
tiine, virusologia.
LANDSTEINER POPPER n 1909 izoleaz virusul poliomielitic
prin inoculare la maimu.
JOSEPH LISTER (1827-1912), chirurg englez, contribuie esenial
9
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie
la elaborarea tehnicilor bacteriologice, metode de cultivare, fiind primul
baeterioog care a obinut cu certitudine culturi pure. A aplicat pentru
prima dat (1867) antisepsia (distrugerea microbilor cu substane
chimice).
CHARLES NICOLLE (1866-1936) cerceteaz tifosul exantematic
i descoper metoda de prevenire (premiul Nobel 1928). .
PAUL EHRLICH (1854-1915) descoper Savarsan, pentru
tratamentul sifilisului.
ALEXANDER FLEMING (1881-1955), microbiolog englez,
descoper penicilina (1928-1929), mpreun cu chimistul Chain i
microbiologul Flofey, premiul Nobel 1945,
n dezvoltarea microbiologici ca tiin, un aport important a fost
adus de muli savani romni.
VICTOR * BABE (1854-1926) este fondatorul microbiologiei
romneti, primul profesor de microbiologic la Facultatea de Medicin
din Bucureti. Primul microbiolog care a susinut posibilitatea imunizrii
cu ser provenit de la animale vaccinate, iniiatorul seroterapiei. A
descoperit peste 40 de microorganisme patogene, printre care grupul
taxonomic care i poart numele Babesiile. A studiat turbarea i vaccinarea
antirabic, lepra, numeroase parazitoze. A pus n eviden ineluziile
specifice turbrii n citoplasm neuronului bolnav (1896, ineluziile
Babe-Negri).

10
Caliopsia FLOREA Bacterioioie i virusologie
ION CANTACUZINO (1863-1934), colaborator a lui Mecinieov, a
organizat coala romneasc de microbiologie i a nfiinat Institutul de
Seruri i Vaccinuri Bucureti. n acest institut a preparat vaccinul
antitifoparatific, vaccinul antiholeric, anticrbunos, antituberculos
(B.C.G.) ara noastr a fost a doua din lume care a folosit acest vaccin.
C. LEVAUTI, St. S. NICOLAU, N. CONSTANTINESCU, au fost
printre primii care ah studiat virusurile: tropismul virusurilor,
incluziogeneza, morfopatoogia virozelor i cultivarea lor n laborator.
\
ALEXANDRU SLTINEANU (1873-1939), a fost primul
profesor de microbiologie la IaiX A studiat epidemiologia tifosului
exantematic, malaria, febra tifoid, scarlatina, lepra, tuberculoza. A
organizat prima coal de ihicrobiologie din Iai.
C. IONESCU-MIHETI (1883-1962} abordeaz teme
din: virusologie, bacteriologie, parazitologie^ imunologie,
hematologie, anatomie patologic i epidemiologie. ^eontinuat
dezvoltarea Institutului Ion Cantacuzino.
MIHAI CIUC (1883-1969) studiaz printre altele: scarlatina i
celelalte infecii streptoeociee, febra tifoid, difteria, tifosul exantematic.
A adus importante contribuii n studiul malariei.
D. COMBIESCU (1887-1961) a cercetat: febra tifoid, febra
recurent, dizenteria, tetanosul, crbunele, gangrena gazoas,
rickettsiozele, ulterior leptospirele.

Microbiologic medical se ocup cu studiul microorganismelor


implicate n patologia uman i interaciunile dintre organismul uman i
aceste microorganisme. Din punct de vedere biofizic orice celul vie este
un complex autoorganizat de molecule organice care schimb energie i
materie cu mediul nconjurtor funcionnd pe baza principiului de
maxim economie i care este capabil s reacioneze la aciunea mediului,
s creasc i s se reproduc. Dac o celul sau o grupare de celule
(corpul omului conine circa 5 x IO12 celule) constituie o entitate
funcional capabil de existena autonom n mediul natural adecvat,
atunci este un organism viu.
11
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie
Organizarea funcional perfect a organismelor vii este bazat
pe organizarea ierarhic a biomoleeulelor existente n celule,
organizare care merge pn la constituirea unor structuri fine al cror
ansamblu reprezint structura celular. In funcie de organizarea
structural toate celulele pot fi mprite n dou tipuri: procariote i
eucariote.
Tabel I Caractere difereniale ale celulelor
procariote i eucariote
Formaiune Celule procariote Celule eucariote

- Au un nucleu tipic, cu nucleol i


- Nu are nucleu tipic. membran nuclear.
Materialul nuclear (nucleotidul) - Cromozomii sunt mai muli,
nu este delimitat de o membran numrul lor este constant pentru o
nuclear i este constituit dintr-o specie dat.
singur ' molecul circular nchis - n timpul diviziunii se formeaz
de ADM, care reprezint un aparatul mitotic.
Nucleu
1
J
cromozom unic.
i
i - Nu are aparat mitotic.
- Prezente: mitocondrii, lizozomi,
- Absente reticul endoplasmatic, aparat
Organite - Unele celule posed sisteme Gogi,etc. [
celulare membranoase (mezozomii, <
lamele fotosintetizante) provenite
din membrana citoplasmatic.
Ribozomi 70 s (subuniti 50 s i 30 s) 80 s (subuniti 60 s i 40 s)
- n general este prezent (lipsete - Este prezent la levur i plante
Ia micoplasme i formele L) (structur distinct de a
Perete
avnd o component procariotelor) i absent la celulele
celular
caracteristic: peptidoglicanul, n animale.

12
*=1

Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie


componena cruia intr acidul N-
acetilmuramic i N-
acetilglucozamina (cu unele
excepii)
- Diviziune directa (amtoz)
- nmulirea sexual este foarte - Diviziune indirect (mitoz,
Diviziune rar, situaie n care zigotul cariochinez) cu faze
(merozigot) se formeaz prin caracteristice: profaza, metafaza,
celular
recombinare genetic. anafaza i telofaza.
- nmulirea sexuat este frecvent,
zigotul formndu-se prin meioz.
- Nu prezint fenomenul de - Pot prezenta endocitoz i pot
endocitoz i nu are vacuole avea vacuole digestive
digestive intracelulare. intracelulare.
- Nu au capacitate de difereniere - Au capacitate de difereniere
Alte celulara dect foarte rar i limitat. celular.
diferene - Nu au capacitate de a forma - Au dimensiuni mai mari.
organisme pluriceulare.
- Au dimensiuni mici (civa jxm)

Obiectivele microbiologici medicale i conexiuni interdiseiplinare


1. Studiul microorganismelor i al rolului lor n procesele
naturale, normale sau patologice i al reaciilor pe care le provoac.
2. Studiul etiologiei i patogeniei bolilor infecioase, parazitare i
imunitare i mijloace specifice de diagnosticare, prevenire i combatere
a acestora.
3. Studiul cauzelor i mecanismelor de producere a infeciilor
bacteriene, virale, parazitare, i noiuni de imunologie.
4. Studiul microorganismelor i al rolului lor n procesele
naturale, normale sau patologice i al reaciilor pe care le provoac.
5. Studierea bolilor transmisibile cu potenial de larg propagare:
tuberculoz, infecii acute respiratorii, hepatite virale, retrovirusuri,
arbovirusuri, enterovirusurilor,etc.
6. Cercetri n vederea elaborrii i evalurii de teste moleculare

13
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie
pentru diagnosticul modem microbiologic, imunologic i imunochimic,
inclusiv n scopuri epidemiologice.
7. Studiul eficacitii produselor biologice, precum i al metodelor
de profilaxie specific a bolilor infecioase.
8. Studiul unor aspecte fundamentale de imunologie celular i
umoral privind mecanismele imunomodulatoare; rolul receptorilor
celulari i al funciilor celulare prin mediatori; mecanisme moleculare i
celulare ale bolilor autoimune i alte imunodeficiene.
9. Identificarea unor substane de origine bacterian sau vegetal
cu proprieti terapeutice.

14
Caiiopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

Capitolul II
Bacteriile: structur, funcii

Structuri celulare i funciile lor morfologice

Definiie: bacteriile sunt organisme unicelulare (celula somatic


fiind i celula reproductoare), procariote (cu nucleu alctuit dintr-un
singur cromozom), haploide (cu unic set de gene), divizibile n celule
identice. Dimensiunile se situeaz sub limita vizibilului cu ochiul liber
(0,l-300pm) i de aceea observarea lor se poate realiza numai cu ajutorul
microscoapelor.

Caractere generale ale bacteriilor


Bacteriile au o capacitate mare de sintez i multiplicare. Se
nmulesc asexuat, prin diviziune direct, ritmul de diviziune n condiii
optime este de 10-12 min. n funcie de modul de procurare a substanelor
nutritive, microorganismele se mpart:
Autotrofe - i pot sintetiza din surse anorganice metaboliii
eseniali.
Heterotrofe - triesc pe seama gazdelor vii, de la care i procur
substanele necesare.
Morfologia bacteriilor
Se refer la form; dimensiuni; dispoziia germenilor (fie n stadiul
vegetativ-de celul procariot, fie n stadiul de rezisten - de spor);
afinitatea tinctorial.
Forma exist 3 forme majore ale bacteriilor:
Sferic (se refer la coci) cu anumite variaii:
o stafilococii i streptococii sunt sferici;

15
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie
pneumococii au form lanceolat (n vrf de lance);
meningococii i gonococii au aspect reniform (n boabe de
cafea, fa n fa).
Cilindric (se refer la bacili) forma lor este alungit, de bastona cu
forme diferite:
bacili scuri cu capete rotunjite, exemplu enterobacteriaceele;
bacili mari, groi, cu catete tiate drept {Bacillus anthracis, are
lungime de 10pm i grosime a de lpm);
bacili scuri, subiri i ncovoiai (bacilul Koch);
bacili fuziformi, cu capete ascuite, lungi (5pm-8pm);
bacili cu capete mciucat, ngroat {Corynebacterium)\
bacili scuri, cu mijlocul umflat (barilii pseudodifterici). Curb-
spiralat (se refer la vibrioni i spirochete) au corpul format din una sau
mai multe spire:
corpul format dintr-o jumtate de spir (vibrioni);
corpul format din mai multe spire, nedeformabile (spirochete:
genul Treponema i genul Leptospira);
corpul alctuit din mai multe spire, deformabile (genul Borrelia).
Form ptrate se ntlnesc la formele saprofite.
Forme intermediare - de cocobadli familia Parvobacteriaceae
Filamente - Actinomicete, bacterii care n stadiul de culturi tinere
formeaz filamente lungi i ramificate, asemntoare unor micelii;
ulterior se produce fragmentarea filamentelor rezultnd forme bacilare
cu lungimi diferite.
Dimensiuni sunt de ordinul micrometrelor, variind ntre 0,1-300 pm
lungime, de aceea ca s poat fi observate la microscop, acesta trebuie s
mreasc de cel puin 900-1000 ori.
- coci ntre 1-1,5 pm;
- bacili ntre 0,5-10 pm lungime i 0,3-0 5mp grosime;

16
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie
- spirochete ntre 5 - 300 pm.
Dispoziia germenilor ei pot fi dispui izolat sau n grupuri de doi
sau mai muli germeni.
Cocii pot fi dispui n:
- streptos (n lan) - streptococii;
- diplo (dou cte dou) - pneumococi, meningococi, gonococi;
- tetrade (patru germeni dispui n dou planuri perpendiculare);.
- n staphilos (n ciorchine) - stafilococii.
Bacilii pot fi:
- izolai, fr o dispoziie caracteristic (familia
Enterobacteriaceae);
- n lan - streptobacilii (Bacillus anthracis);
- n palisad, ca stinghiile de gard (bacilii pseudodifterici).

Fig. 1 Dispoziia bacteriilor


Jvi. s.Ti
Chit: PAU intri

iZ

m-vi

1
rlf
w c

17
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie
Afinitatea tinctorial este un criteriu important de clasificare. Se
folosesc n mod obinuit trei coloraii principale i anume: coloraia cu
albastru de metilen i coloraia Gram i coloraia Ziehl-Neelsen.
Coloraia albastru de metilen este o coloraie simpl se
folosete un singur colorant, albastrul de metilen, de obicei se face pentru
frotiurile din produsele patologice, pentru c prezint trei avantaje:
- poate evidenia germenii extracelulari, dar mai ales cei
intraeelulari;
- evideniaz germenii ncapsulai;
- pune n eviden relaiile dintre germeni i elementele figurate
din produsul patologic.
Coloraia Gram (pus la punct de Christian Gram, bacteriolog
danez, n 1884), este o coloraie difereniat, folosete doi colorani de
culori contrastante (violet de genian, pentru colorarea iniial i fucsin
bazic pentru recolorare), un mordant (soluia Lugol) i o soluie de
difereniere, decolorare (alcool-aceton). Coloraia Gram mparte toate
bacteriile n Gram- pozitive i Gram-negative n raport cu permeabilitatea
diferit a peretelui, dependent de strubtura lor diferit.
Coloraia Ziehl-Neelsen este o coloraie difereniat, mparte
bacteriile n alte dou grupe tinctoriale reflectnd structuri diferite de
perete: acid-alcoolo-rezistente (al cror perete foarte bogat n lipide
devine permeabil pentru colorant -fucsina- numai prin nclzire i rezist
apoi -la decolorarea cu acid i alcool) rmnnd colorate n rou) 'i acid-
alcoolo-nerezistente (pierd culoarea roie prin decolorare i se recoloreaz
cu al doilea colorant, albastrul de metilen).
Structura celular cuprinde:
- structuri eseniale oricrei celule: nucleu, citoplasm i
membran citoplasmatic, alctuind protoplastul (cea mai rudimentar
form de existen a bacteriilor) i peretele bacterian

18
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie
rigid, structur caracteristic bacteriilor tipice, care protejeaz
protoplastul, (lipsete Ia Mollicutes);
- structuri neeseniale pentru existena bacteriei, prezente numai la
faaafS5f^S'iKSiaSS50,>**3*aaSKiKSSffiSI

unele speciixapsul sau cel de-al treilea nveli, cili (flageli), fimbrii
(pili).
SiSiiJK&SWSi-i}W*Stta6Kar-

Sporul este forma de rezisten, n care se pot transforma unele


specii, cnd se gsesc n condiii neprielnice de nmulire.

STRUCTURA BACTERIEI \\
ntr-o reprezentare schematic, pornind de la interior spre exterior,
celula bacterian este alctuit din urmtoarele componente structurale:
material nuclear, citoplasm n care se gsesc: ribozomi, incluzii, vacuole,
structuri membranoase care deriv din membrana citoplasmatic
(mezozomi), structuri de nveli (membrana citoplasmatic, perete
celular), apendici bacterieni (cili, pili) i structuri extraceluare care
constituie glicocalixul (structuri regulate de suprafa, microcapsul,
capsul, strat mucos-uneori).

Materialul nuclear
La bacterii se numete corp nuclear sau nucleotid, are o organizare
primitiv, nu este mrginit de membrana nuclear i nu prezint nucleoli.
Pe seciuni fine materialul nuclear apare localizat n partea central a
celulei, constituind o zon cu dimensiuni i form variabil, cu densitate
electronoptic mai sczut dect citoplasm. Densitatea electronoptic
mai sczut a zonei nucleare este explicat prin faptul c dei ea reprezint
cea. 10% din volumul celulei, ADN-ul care alctuiete materialul nuclear,
reprezint numai 2-3% din greutatea uscat a celulei. Materialul nuclear
conine 60% ADN, 30% ARN, nou sintetizat i 10% proteine. ADN-ul
este organizat ntr-o singur molecul

19
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie
dublu helicoidal, circular nchis, cu un diametru de 20 i o lungime de
cca. llOOpm, numit cromozom bacterian.
ADN-ul celular este format din dou lanuri helicale
polinucleotidice nfurate n jurul unui ax comun. Cele dou lanuri
helicale merg n direcii opuse, ele fiind meninute mpreun prin
intermediul legturilor de hidrogen dintre bazele azotate complementare
corespunztoare de pe respectivele dou lanuri ale dublului helix. n
structura dublului helix ADN, bazele purinice (adenina, guanina) i
pirimidinice (timina, citozina), prin complementaritatea lor, reprezint
elementul purttor al informaiei genetice, n timp ce, gruprile fosfat
(P04) i de zahr, tip dezoxiriboz, au doar rol structural. Fiecare-lan din
structura dublului . helix ADN este un polimer de uniti
dezoxiribonucleotidice. Coloana vertebral a lanului ADN rezult din
alternana invariabil a unei grupri de zahar (dezoxiriboz) cu o grupare
fosfat. Partea variabil a lanului ADN este format din secvene de baze
complementare care realizeaz legtura dintre cele dou lanuri ale
dublului helix la nivelul zaharurilor. Se cunosc urmtoarele combinaii de
baze complementare: baza purinic (adenina) cu baza pirimidinic
(timina) i baza purinic (guanina) cu baza pirimidinic (citozina). Bazele
complementare se gsesc, situate n interiorul helixului de ADN, n timp
ce unitile fosfat i dezoxiriboz se afl situate la periferia helixului. O
baz azotat purinic sau pirimidinic legat de o molecula de
dezoxiriboz i de un radical fosforic reprezint o unitate funcional i
structural numit nucleotid. Nucleotidele la rndul lor sunt unite ntre \
ele prin componentele fosforice formnd un lan polinucleotidic (catena)
n care succesiunea bazelor, ce apar ca grupri laterale, costituie elementul
variabil (structura dublului helix, model propus de Watson i Crick n
1953)..
n cromozomul bacterian se gsete informaia genetic necesar
autoreplicrii precum i pentru organizarea structural i

20
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

funcional a celulei. nmagazinarea informaiei genetice n cromozomul


bacterian se ralizeaz sub forma unor segmente de lanuri de nucleotide
dispuse ntr-o anumit secven. Un astfel de segment nucleotidic
constituie o gen i conine inscripia unui anumit caracter genetic al
speciei. ntregul cromozom este alctuit din gene care codific
caracterele care definesc specia.
Autoreplicarea ADN-ului precede diviziunea celular i dup
cum arat modelul helicoidal al lui Watson i Crick, este de tip
semiconservativ, fiecare molecul de ADN nou format conine un lan
polinucleotidic din molecula de ADN parental i un lan polinucleotidic
nou sintetizat.
Informaia genetic care codific sinteza proteinelor structurale i
funcionale (enzime) este transmis de la molecula de ADN la ribozomi
(sediul sintezei) prin intermediul ARN-ului mesager (ARNm), a crui
structur reprezint transcrierea mesajului genetic coninut n anumite
gene ale cromozomului.

Citoplasm
Este situat ntre zona materialului nuclear i faa intern a
membranei citoplasmatice, cu care este intim asociat. Ea reprezint un
sistem coloidal alctuit din cca. 80% ap, n care se gsesc: o cantitate
mare de molecule organice mici (rezultate din metabolismul bacterian),
ioni anorganici, enzime i acizi ribonucleici (ARN) sub form de ARNr
(coninut n ribozomi), ARNt (ARN de transport) i ARNm (ARN
mesager).:
Fiecare dintre cele trei tipuri de acizi ribonucleici este format
dintr-un lan de nucleotide n compoziia crora intr baze purinice
(adenina i guanina), baze pirimidinice (citozina i uracil), un zahar
(riboza) i acid fosforic.
Se mai pot gsi: plasmide (determinani genetici
extracromozomiali, formai din molecule de AND) care conin
informaia genetic pentru rezistena la antibiotice, sinteza

21
Caliopsia FLO REA Bacterioloie i virusologie

bacteriocinelor, mediere n fertilitate i pentru sinteza unor factori


de virulen; vacuole gazoase i incluzii.

Ribozomii
Constituie elementele principale ale citoplasmei i reprezint pn
la 40% din greutatea uscat a celulei; ei dau aspectul fin granular al
citoplasmei. O mare parte a ribozomilor pot fi asociai, constituind
polizomi care la rndul lor pot fi liberi sau ataati de mezozomi sau/i
membranei citoplasmatice.
Ribozomii au un diametru de 20 nm, coeficientul de sedimentare
este 70 uniti Svedberg (70 S). n anumite condiii (stabilitatea lor este
dat de concentraia ionilor de MgT+ i K+), ribozomii se pot desface n
dou subuniti de form neregulat cu constante de sedimentare de 50S
i 3OS. Din punct de vedere chimic ei sunt formai din 65-70% ARNr i
35-30% proteine.
La nivelul ribozomilor se desfoar unul dintre cele mai
importante procese ale vieii bacteriei i anume biosinteza proteinelor de
structur i a proteinelor enzime.

Induziile citoplasmatice
Sunt formaiuni structurale inerte, cu dimensiuni i forme diferite,
care variaz cantitativ n funcie de condiiile de mediu. Uneori sunt
nconjurate de o membran proteic unistratificat, n grosime de 20-
40. Ele pot fi de mai multe feluri:
- incluzii poliglucozidice (glicogen), producerea lor este stimulat
de excesul de carbon din mediu, corelat cu limitarea azotului, fosforului,
sulfului,'au cnd pH-ul este sczut;
- incluzii de polibetahidroxibutirat (PHB), ele pot reprezenta mai
mult de 50% din greutatea uscat a celulei atunci cnS exist un exces
de carbon i surse de energie.
Incluziile sunt structuri legate de activitatea metabolic a bacteriei
i reprezint materiale de rezerv sau surse de energie.
Caltopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

Mezozomii
Sunt structuri membranoase care se formeaz prin invaginarea
membranei citoplasmatice, ele pot fi ntlnite ocazional. Uneori, ei sunt
mai rudimentari, lund natere prin invaginri simple ale membranei
citoplasmatice, alteori constituie structuri mai elaborate, sub forma de
bucle, inele, sau lame concentrice. Formeaz ntotdeauna caviti
deschise n spaiul periplasmatic, sunt ntotdeauna n contact direct cu
materialul nuclear, membranele din care sunt constituii au aproximativ
aceeai grosime cu membrana citoplasmatic. vi
Mezozomii conin cantiti foarte mici de enzime i componente
ale transportului de electroni (ATP-aze, dehidrogenaze, citocromi).
ELau rol n replicarea ADN-ului i la diviziunea celular (contact dintre
ADNc-mezozomi i mezozomi - sept de diviziune), participarea la
sinteza i secreia unor exoenzime (penicilinaze), participarea la sinteza
peretelui celular.

Membrana citoplasmatic
Este o structur care mrginete la exterior citoplasm bacteriilor,
separnd-o de peretele pe celular. Este o membran biologic groas de
6,5-7 nm, pe seciuni fine ea apare triplu sratificat cu stratul mijlociu
electronoptic mai transparent. La baza concepiilor actuale privind
organizarea sructural a membranelor biologice se afl modelul- de
mozaic fluid elaborat de Singer i Nicholson n 1972, model care a
fost i este revizuit i completat n permanen. Conform acestui model,
membrana citoplasmatic este format din dou straturi de molecule
fosfolipidice dispuse cu prile hidrofobe fa n fa, printre acestea, se
gsesc moleculele globulare proteice. Moleculele de proteine se pot situa
la nivelul unuia dintre cele dou straturi fofolipidice sau le pot traversa
pe amndou, fiind expuse pe ambele fee ale membranei, formnd
structura n mozaic. Este o structur fluid, dinamic, temporar i
reversibil n funcie de influenele factorilor din mediu i a celor
metabolici. Proteinele din membrana citoplasmatic (inclusiv ,cele din
mezozomi) reprezint cea. 20% din totalul proteinelor bacteriene.

23
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

Membrana citoplasmatic este semipermeabil, cu rol de barier


osmotic, care regleaz schimburile ce au loc ntre celula bacterian i
mediul extern att prin procese active specifice ct i procese de
difuziune pasiv. Ea este sediul enzimelor implicate n metabolismul
respirator, fosforilarea oxidativ, transportul activ, sinteza lipidelor,
replicarea ADN-ului, biosinteza tuturor componentelor majore ale
peretelui celular (peptidoglican, lipopolizaharide, fosfolipide) i sinteza
polizaharidelor capsulare. Ea particip direct la creterea i diviziunea
celular, formarea septului de diviziune.
Membrana citoplasmatic este implicat i n sinteza ARN- ului
i datorit asocierii cu ribozomii n sinteza proteinelor.

Peretele bacterian
Este o structur rigid, prezent la suprafaa bacteriei cu o
grosime de cca. 150 . Componenta principal a peretelui este mureina
sau peptidoglicanul, polimeri micti, din dou tipuri de hexoze: :N-
acetilglucozamina (G) i acidul N-acetilmuramic (M), aceste hexoze
alterneaz formnd lanuri longitudinale. De grupele '-N-acetilmuramic
se leag lanuri scurte (tetrapeptide) alctuite din 4 aminoacizi: L-
alanin, D-alanin, acid D-giutamic, L-lizin, n locul acestui aminoacid
poate s apar acidul mezodiaminopimelic.
Peretele bacterian al bacteriilor Gram-pozitive difer ca structur
i compoziie de cel al bacteriilor Gram-negative, dei ambii conin
peptidoglicani.
Bacteriile Gram-pozitive au un perete gros, alctuit dintr- un strat
rigid de peptidoglicani i din acid teichoic. Cantitatea mare de
peptidoglicani (70-80%) ofer acestor bacterii

24
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

sensibilitate la lizozim... i. penicilin. Lizozimul hidrolizeaz


specific peptidoglicanii ntre N-acetilglucozamin i acidul N- f
acetilmuramic. Penicilina inhib specific sinteza de
peptidoglicani.
Bacteriile Gram-negative au un perete mai subire de 100, cu
un coninut mult mai mic de peptidoglican (pn la 20%) i fr acid
teichoic. Un strat extern numit membran extern, acoper peretele
bacterian al bacteriilor Gram-negative. Aceast membran este mai
groas dect stratul de peptidoglicani i este compus din lipoproteine
i glicoproeine ataate de
peptidoglicani. Aceast membran conine antgenul somatic O,
caracteristic bacteriilor Gram-negative.
ndeprtarea peretelui bacterian, care protejeaz membrana
citoplasmatic, determin liza bacterian, pentru c membrana
citoplasmatic este incapabil s reziste presiunii osmotice din natur.
Protoplatii sunt forme bacteriene lipsite de perete bacterian,
create artificial, meninute n medii osmotice capabile s protejeze de
liz bacterian. n medii hipotone aceste celule se sparg, iar n medii
hipertone se ratatineaz. Protoplatii provin din bacterii Gram-
pozitive.
Sferoplati sunt forme bacteriene create artificial prin ,
ndeprtarea parial a peretelui. Peretele este lipsit de murein, ns
conine lipide, motiv pentru care au aspect sferic. Sferoplatii provin
bacterii Gram-negative.

Rolurile peretelui bacterian:


- asigur forma bacteriei;
- asigur rezistena bacteriei ia presiunea osmotic
intracelular, care este ntre 16-25 atmosfere;
- are rol n diviziunea bacteriei, participnd la formarea
septului de diviziune;

25
Caliopsia FLOREA Bacteriolote i vimsologie

- este sediul antigenelor, care pot induce un rspuns specific


umoral sau celular;
- este sediul unor receptori pentru ataarea altor celule (microfage,
macrofage) sau a unor proteine plasmatice (opsonine), sau
fixarea unor virusuri (bacteriofagi);
- are rol n patogenitate, fiind sediul unor factori de patogenitate.

Spaiul pcriplasmatic
Apare pe seciuni ca o zon cu densitate electronoptic redus n
interiorul creia se gsete un strat subire de peptidoglican cu densitate
electronoptic mai mare. Este situat ntre membrana citoplasmatic i
membrana extern. Lrgimea spaiului este variabil, depinznd de
starea fiziologic a celulei i de condiiile de cultivare. La nivelul lui,
legate de peptidoglican, se gsesc prile proteice ale unor molecule de
lipoproteine, n timp ce prile lipidice ale acestora sunt situate n
membrana extern.
Acest spaiu este sediul de depozitare al unui numr mare de
enzime i pigmeni

Membrana extern
Este stratul exterior al peretelui celular, are aspect eiectronopic
triplu stratificat. Este format din fosfoipide, proteine i cantiti
variabile de lipdpolizaharide.
Structura membranei externe este format din dou straturi de
molecule fosfolipidiee dispuse cu prile hidrofobe fa n faa i cu cele
hidrofile distal. Printre aceste molecule se gsesc intercalate diferite
tipuri de molecule proteice, realiznd o legtur strns ntre membrana
extern i stratul de peptidoglican.

26
CaKopsla FLOREA Bacterioloie i virusologie

Funcionalitatea peretelui bacterian i a membranei externe


Peretele celular este o structur rigid care asigur forma i
protecia osmotic a celulei bacteriene.
Membrana extern are rol important n reglarea traficului
molecular prin perete, permeabilitatea este mai mare dect a
membranei citoplasmatice pentru c exist nite pori (canale) de
transport pasiv, sau n cazul unor molecule mai complexe prin
intermediul unor proteine de transport (transport active). Prezena
acestei membrane ofer propieti deosebite n ceea; ce privete
sensibilitatea la antibiotice, distribuia exoenzimelor, toxicitatea.
Unele dintre proteinele existente n membrana extern sunt receptori
pentru fagi, eolicin'e, replicarea ADN-ului. Membrana extern
constituie suprafaa antigenic cu mare importan n inducerea
rspunsului imun.
La nivelul peretelui celular se gsesc un numr mare de enzime
situate la nivelul spaiului periplasmatic i al membranei externe:
fosfataze alcaline, penicilinaze, ribonucleaze etc. Ele simt eliberate
prin membrana extern n funcie de necesiti.
Peretele celular particip la diviziunea celular care se realizeaz
prin invaginarea peretelui celular care conduce la strangularea
citoplasmei i separarea n final a celulelor fiice.

Glicocalixul
Reprezint structuri de origine bacterian care conin
polizaharide i sunt situate la exteriorul membranei externe. Exist
dou feluri de glicocalix: glicocaixul regulat de suprafa (strat RS) i
glicocaixul capsular (capsula).

Stratul RS
Este prezent att la bacterii Gram (+) ct i la cele Gram (-) i
este format, n general, dintr-o singur specie de subuniti de
glicoproteine care se asambleaz n structuri hexagonale sau

27
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

tetragonale, dispuse sub forma unor reele regulate pe ntreaga suprafaa a


peretelui celular. Acest strat este foarte subire i se poate vedea numai la
microscopul electronic

Capsula
Este de natura polizaharidic complex, cu molecule neramificate
lipsite de miez lipopolizaharidic, puternic hidratat (99% ap). Ea poate fi:
microcapsul (structur fin ataat intim de peretele celular), capsul
obinuit (structur cu contur delimitat), sau strat mucos (materialul
capsular care este eliberat n mediu).

Funcionalitatea glicocalixului
Pentru bacteriile cultivate in vitro, pe medii uzuale, glicocalixu nu
este o structur esenial i pierderea lui nu antreneaz moartea celulei.
Pentru bacteriile crescute n condiii naturale in vivo unde pot s apar
factori nefavorabili i ageni antimicrobieni (variaii de pH, ioni de metale
grele, surfactani, bacteriocine, bacteriofagi, anticorpi, fagocite),
glicocalixu este o structur multifuncional cu importana n supravieuire.
Stratul RS protejeaz bacteria mpotriva factorilor nefavorabili din
mediu, el poate favoriza ataarea bacteriei la diverse substraturi, poate fi
implicat n unele activiti enzimatice.
Capsula are dou funcii:
a) promotor al aderenei i factor de colonizare pe suprafee inerte;
b) protector al bacteriei fa de factorii nefavorabili i agenilor
antibacterieni din mediu.
Capsula poate proteja bacteria mpotriva anticorpilor prin mascarea
surafeelor antigenice de la nivelul peretelui celular, ea are propieti
antigenice (antigene capsulare K) specifice care poate diferenia mai
multe tipuri antigenice n cadrul aceleiai specii. n afara acestor funcii
poate s mai aibe i altele: poate s conin receptori pentru bacteriofagi,
protejeaz mpotriva desicrii, induce producerea interferonului, este un
activator al complementului pe cale alternativ.

28
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

Cilii (flagelii)
Sunt structuri filamentoase, flexibile, subiri (0,01- 0,02 pm n
diametru), cu lungime variabil (6-15pm), dar totdeauna mai mare dect
corpul celular i sunt dispui la suprafaa bacteriei. n suspensie cilii au
form spiralat, dar cnd sunt examinate pe preparate uscate apar sub forma
unor filamente regulat ondulate ntr-un plan sinusoidal, cu lungimea undei
de 2-3 pm i amplitudinea de 0,25-0,60pm. Lungimea i grosimea cililor,
lungimea de und i amplitudinea spirelor, numrul i dispoziia cililor pe
suprafaa celulei bacteriene sunt caractere de specie, cu unele variaii n
funcie de vrsta culturii i de condiiile de cretere: celulele n vrst sau
crescute pe medii lichide au cilii mai lungi comparativ cu celulele tinere ale
aceleiai specii sau cu celulele crescute pe medii solide. n timpul diviziunii
bacteriilor ciliate peritriche, numrul cililor se dubleaz, distribuindu-se
ulterior n numr aproximativ egal celulelelor fiice. Formarea cililor este
reglat genetic fiind cuplat cu ciclul de diviziune celular. Cilii
individuali sunt prea subiri pentru a putea fi vzui la microscopul obinuit
cu lumin transmis, dac nu sunt folosite tehnici speciale de evideniere
cum ar fi: colorarea cu fucsin dup mordansarea cu tanin sau prin
impregnare argentic; ei pot fi observai n microscopia cu cmp ntunecat
datorit tendinei de a forma agregate la suprafaa celulelor peritriche.
Cercetarea structurii cililor la microscopul electronic a evideniat
alctuirea lor din trei componente morfologic distincte: o structur bazal
(corpuscul bazai, complex bazai), o structur n form de crlig i
filamentul flagela r principal.

29
Caliopsia FLOREA Bacierioioie i virusologie
Complexul bazai reprezint componenta cilului prin care acesta
se ataeaz la corpul bacteriei. Compexul bazai al E.coli este constituit
din patru discuri (diametru 22,5 nm) paralele, dispuse sub forma a dou
perechi pe o tij care trece prin centrul lor: o pereche interna (M i S)
i o pereche extern situat spre crlig (P i L) In care discurile sunt
ceva mai distanate. Cele patru discuri au fost denumite M, S, P i L n
acord cu presupusa lor ataare la nivelul membranei citoplasmatice,
spaiul periplasmatic, stratul de peptidoglican i respectiv stratul
lipopolizaharidic din membrana extern. Rolul celor patru discuri este
de fapt acela de a asigura etanietatea strbaterii membranei
citoplasmatice i a componentelor peretelui celular. Flagelii au micare
circular, corpusculul bazai (de fapt placa bzal a acestuia) avnd rolul
rotorului unui motora electric. Astfel corpusculul bazai reprezint o
component structural complex, montat n ntregime n peretele
celular i membrana citoplasmatic (model strucural propus de
Pamphilis i Adler, 1971). Tija central care unete discurile
complexului bazai, reprezint componenta rigid a acestuia i
realizeaz legtur cu crligul, crlig care la rndul su se leag prin
captul distal de filamentul flagelar. Tija central, crligul i filamentul
formeaz o structur tubular continu.

Crligul reprezint o structur scurt, care este situat n afara


corpulului celulei bacteriene i are o form mai mult sau mai
*pupn1inaniuW!igtt^^
flexibil, s transmit n unghi drept micarea rotativ de la nivelul
corpusculului bazai la flagelai propriu-zis.

Filamentul flagelar principal reprezint partea flexibil, n


generai spiralat a cilului, care se leag prin captul proximal la captul
distal al crligului. Flagelul este de fapt un snop de filamente extrem de
fine alctuite din molecule de flagelin puse

30
Caliopsia FLQREA Bacteriologic i virusologie

cap la cap. Aceste filamente formeaz un snop cu form spiralat atunci


cnd se nvrtesc n direcia bun.
Din punct de vedere biochimic, toate componentele cilului sunt
alctuite din proteine cu propieti antigenice proprii (antigene ciliare sau
antigene H), numite flageline. Att filamentul flagelar ct i crligul
sunt alctuite fiecare n parte din cte un singur fel de molecule proteice,
care sunt capabile de autoasamblare.
n funcie de numrul i dispoziia cililor bacteriile se mpart n
bacterii: j
- atriche (fr cili);

- monotriche (cu un cil);
- amfitriche (au cte un cil la ambii poli);
- lophotriche (au cte un smoc de cili la unul sau ambii poli);
- peritriche (cilii sunt dispui pe toat suprafaa corpului).

Funcionalitatea cilului
Cilii bacterieni au rol de organite locomotoare. Funcia
locomotoare este ndeplinit printr-o micare de rotaie a filamentului
flagelar n raport cu corpul celulei. Aceast micare- de rotaie a
filamentului flagelar este asemntoare unei nurubri- n mediu, avnd
drept urmare mpingerea nainte a corpului bacterian (bacteriile cu
filamente drepte sunt imobile). Motorul rotaiei cililor este complexul
bazai iar energia necesar este;.

Pilii (fimbriile)
Sunt apendici filamentoi neflagelari, imobili, prezeni n numr
mare pe suprafaa unor bacterii. Pierderea pililor se poate realiza prin
mecanisme reversibile sau ireversibile, iar prezena, numrul i lungimea
lor este influenat de felul mediului de cultur (mediile lichide
favorizeaz apariia pililor), de faza de cretere a culturii. Pilii sunt mult
prea subiri pentru a putea fi

31
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

observai la microscopul fotonic, dar pot fi vizualizai la microscopul


electronic. La E.coli, ca i la alte Enterobacteriaceae, prezena pililor poate
fi pus n eviden prin testul de hemaglutinare fimbrial, bazat pe propietatea
lor, de a adera la hematii. .
Pilii sunt de obicei mult mai subiri dect cilii, au o structur mai rigid
fiind drepi sau cu form uor sinuoas, neregulat (nu prezint o lungime de
und i o amplitudine constant), sunt mai scuri i mult mai numeroi, n
genaral sunt peritrichi. Originea pililor este la nivelul membranei
citoplasmatice, dar nu posed aparat corespunztor corpuscului bazai.
Pe baza caracteristicilor morfologice, biochimice i imunologice a fost
descris o mare varietate de tipuri de pili, n timp ce n raport cu
funcionalitatea au fost descrise numai dou tipuri:
- pili de conjugare (de sex),
- pili comuni (pili somatici).
Pilii de sex sunt mai groi dect cei somatici i se gsesc numai pe
suprafaa bacteriilor donatoare de plasmide mari conjugative. Pilii de
conjugare sunt codificai de plasmide transmisibile i sunt implicai n
conjugarea bacteriilor se numesc pili F, pili I Ja E.coli.
Pilii comuni sunt determinai de gene cromozomiale, dei este posibil
implicarea i unor plasmide. Din punct de vedere biochimic fiecare tip de pili
este alctuit dintr-un singur fel de monomeri proteici (piline) care.se
autoasambleaz sub forma unor structuri tubulare, n care piliiele sunt
dispuse helical. Natura proteic aparte a pililor le confer propieti
antigenice diferite de cele flagelare.

Funcionalitatea pililor
Pilii nu reprezint structuri comune tuturor bacteriilor (chiar n cadrul
aceleiai specii bacteriene pot exista tulpini piliate i

32
Caliopsia FLOREA Bacterioiogie i virusologie

ti nepiliate) dar atunci cnd sunt prezeni i sunt ndeprtai mecanic se


y refac cu uurin.
Att pilii de conjugare ct i cei comuni conin receptori specifici
pentru baeteriofagi, receptori situai n vrf (pantru bacteriofagi filamentoi)
sau pe suprafaa lateral (pentru bacteriofagii izomerici).
Pilii de conjugare, sunt necesari iniierii procesului de conjugare.
Pilii F prezeni la celulele F* (mascule) de E.coli, au sugerat c ei
acioneaz ca nite crlige retractile care aduc bacteriile ce se conjug
(donatoare i receptoare) n contact celular, fr a fi implicai n
transferul propriu-zis de material genetic.
Pilii polari, aparent, nu sunt implicai n conjugare, ei sunt pili
retractili, responsabili pentru o form primitiv de micare bacterian pe
suprafee solide, numit micare prin secuse.
Pilii sunt responsabili i pentru formarea unor pelicule bacterine la
ii suprafaa culturilor statice.
Pilii mediaz aderena unor specii bacteriene la anumite hematii,
inducnd fenomenul de hemaglutinare.
Pilii sunt organite adezive care mediaz ataarea unor bacterii la
celule epiteliale ale mamiferelor favoriznd colonizarea. n acest fel pot fi
i luai n consideraie ca factori de virulen.
2 Pilii joac probabil i un rol n rezistena bacteriilor la fagocitoz.
*:
v

&

33
Caliopsia FLOREA Bacteriologic i virusologie

Fig. 2 Structura bacteriei

Sporul bacterian
Este o form de rezisten, prezent doar la anumite specii
bacteriene, ex. familia BaciUaceae. Forma este sferic sau ovalar.
Evoluia sporului are trei stadii: preparator, prespor, spor matur.
Formarea spofblui: n jurul nucleului bacterian se depun structuri ce
conin H2O legat, dipicolinat de Ca; oferind rezisten deosebit la
variaii de temperatur i uscciune.
Sporul ,poate.jszista la ji^. condiii,
favorabile germineaz, trecnd n form vegetativ.
Strucrurile sporului de la exterior sunt: exosporium, peretele sporal,
cortexul sporal (alctuita din lamele concentrice), AND-ul cromozomial,
sporal.
Rolul sporului este de a asigura perpetuarea speciei bacterine n

34
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie,

condiii nefavorabile.

35
Caliopsia FLOREA Bacteriologic i virusologie
m%m38Smmr

Fig. 3 Structura sporului


!&33m,

Aceast form de reziten nu are rol n multiplicare sau patogenitate.

36
LOREA Vv Bacterioloie i virusologie
J

M, Capitolul III Bacteriile:


compoziie chimic, metabolism,
cultivare

COMPOZIIA CHIMICA A BACTERIILOR


* ___________________________ . _

Celula bacterian, ca i celulele plantelor i animalelor conine: ap,


sruri minerale, glucide, lipide, proteine, vitamine, pigmeni i ali
constitueni care ndeplinesc roluri diferite n fiziologia bacterian.
A. Apa reprezint peste 75-80% din masa bacterian i formeaz
mediul n care se petrec toate procesele vitale ale celulei bacteriene. Apa
/ celular provine din mediul extern i din unele procese metabolice. Forma
sub-care se gsete fLO este liber (este mediul de dispersie ^pentru unele
substane celulare), dar exist i -mici cantiti de ap legat (fizico-chimic
cu diferite componente celulare).
Rolul H?0 n celula bacterian este variat:
\ - constituie un mediu de dispersie pentru celelalte componente
bacteriene;
- particip la procesele metabolice;
- n prezena H20 liberfe, proteinele se degradeaz uor la
temperaturi ridicate.
Formele vegetative sunt omorte la 55-65C n 15-20min datorit
l cantitii de ap liber pe care o conin. Sporii bacterieni, conin mai
puin ap, se afl n marea majoritatea cazului legat,

37
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

ceea ee asigur rezistena deosebit a acestei entiti morfologice la


temperaturi ridicate.
(~ B. Proteinele reprezint ntre 40-80% din greutatea uscat a bacteriei,la
formarea lor particip aproximativ 20 de aminoacizi.
\ Compoziie
\ - proteine simple - formate doar din aminoacizi (acizii
i theicoiei, acidul diaminopimelic);
- proteine complexe (sau cenapse):
I - complexe glucido-lipido-polipeptidice; j - heteroproteine care sunt
formate din proteine i o grupare prostetic ex: mucoproteine (proteine i
acid mucoitinsulfuric i glucozamin esterificat cu H2SO4, exemplu
mucopolizaharidul, antigenul specific de grup al pneumococului; antigenul
M specific de tip al streptococului hemolitic; acidul hialuronic din capsula
streptococilor tineri);
- cromoproteinele formate din proteine i gruparea prostetic n
care intr un metal, au n special funcii enzimatice: catalaze,
peroxidaze, citocromi;
- nucleoproteinele formate din proteine i gruparea _ prostetic sunt
acizii nucleici ADN n nucleu i ARN
~~ n protoplasm.
Rolul proteinelor:
- plastic intr n constituia unor componente celulare sau/i
extracelulare;
- antigenic;
- energetic,
- n patogenitate,
- n transmiterea de caractere genetice.
C. Enzimele sunt prezente n bacterii, bacteriile sunt dotate
cu un echipament enzimatic foarte complex capabil s atace n mod practic
toate materiile organice din natur mai mult sau mai puin complexe.
" Capacitatea celulei bacteriene de a sintetiza enzime este determinat
genetic. Din aproximativ 3000de proteine, din celula bacterian, 2000
sunt enzime.
v 38
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie
Echipamentul enzimatic este foarte bogat la bacteriile autotrofe
(capabile de sinteze pornind de la molecule simple anorganice) i din
ce n ce mai srac la cele heterotrofe (folosesc substane organice), n
raport cu adaptarea lor la parazitism.

Clasificarea enzimelor ^
1. Dup localizare
Enzima extracelulare (exoenzime), acumularea n mediul de
cultur este probabil rezultatul autolizei celulelor, sau ieirea din celule
moarte care i-au pierdut permeabilitatea selectiv a membranei
exemplu: hidrolaze, proteinaze, carbohidraze, lipaze, etc.
ij Enzime ectoceluiare (au rol n permeabilitatea selectiv i ' \ n
respiraie), exemplu: permeaze, translocaze) sunt fixate i I situate n
membrana citoplasmatic i controleaz permeabilitatea Ij selectiv a
acesteia, ele transfer substanele prin membrana j citoplasmatic cu sau
fr schimbarea chimic a lor (hidroliz).
' Enzime intracelulare-sunt fie solubile, fie asociate diferitor
infrastructuri ale celulei bacteriene: nucleul i sistemele \ membranare ca
mezozomii, cromatoforii, membrana
citoplasmatic i intervin n procesele de sintez.
r .......... 2; i>ep~ ripul ue acfeme- asupra substratul ui--
1 biochimic):
- hidroazele: desfac legtura dintre carbon i atomii de O, N, S,
fixnd totodat o molecul de ap (proteazele, RN-aze, DN- aze,
lipaze, carbohidraze etc.);
- transferazele: realizeaz transferul anumitor radicali dup o
molecul pe alta;
- oxidoreductazele (desmolazele): desfac legturile dintre
atomii de carbon. Sunt enzime care catalizeaz procesele de

3
9
3
Caliopsia FLOREA BacterioJoie i virusologie
+
oxidoreducere, transferul de H pe oxigen molecular sau pe alt
acceptor, elibernd cantiti diferite de energie necesar
metabolismului celular. Exemplu: oxidaze, dehidrogenaze,
catalaze, peroxidaze, izomerazele (racemazele).
3. Dup modul de apariie In celula bacterian sunt de dou
feluri:
- enzime constitutive: exist totdeauna n celul, fiind
sintetizate indiferent de natura mediului, sunt constituenii permaneni
ai celulei;
- enzime inductibile sunt sintetizate de ctre celula
Vi
bacterian numai ca rspuns Ia anumii compui specifici aprui n
mediu. n lipsa substanei inductoare sinteza lor nceteaz, se face la
nivel minim.
D. Glucidele sunt prezente n microorganisme, ele pot
reprezenta ntre 14-20% din greutatea uscat. Cantitatea de glucide
variaz n raport cu: specia, vrsta, condiiile de mediu, n cadrul
aceleai specii apar variaii n raport cu tulpina bacterian. Bacteriile
conin glucide simple (mono i dizaharide) i glucide complexe
(polizaharide). Poiizaharidele pot fi formate prin condensarea unor
molecule de pentoze (pentozani) i hexoze (hexozani), sau prin
polimerizarea hexozelor, pentozelor i acizilor uronici, formnd
poiizaharidele mixte.
Cuplarea n complexe a polizaharideor cu proteinele, formeaz
la suprafaa bacteriilor, capsula, ce le confer pi^paetf 'aiiugcTicc
speciale ^depato^rstatr i i^zisena la condiiile de mediu.
Bacteriile pot elabora polizaharide care au proprietatea de a
precipita specific serurile antibaeteriene omologe, exemplu
mucopolizaharidul -MPZ- (substana SSS la pneumococ), sau
lipopolizaharidul -LPS- (glucido-lipido-proteine), antigenul O al
bacteriilor Gram negative.
Rolul glucidelor: energetic, plastic, antigenic, patogenic
E. Lipidele reprezint pn la 10% din greutatea uscat a

40
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

bacteriei;r iar ia micobacterii, pot reprezenta pn la 40% din greutate.


Bacteriile conin substane lipidice ca: acizii grai, lipide neutre, ceruri,
fosfoipide. n celulele mbtrnite lipidele sunt n cantitate mai mare.
Ele se pot gsi libere n vacuolele din celul sau se pot gsi sub form
combinat n complexe: lipido-proteice, lipido-glucidice sau glucido-
lipido-proteice.
Acizii grai, bacteriile conin acizi grai saturai (butiric, caprilic,
stearic) i nesaturai (palmitic, linoleic, crotonic), precum i acizi grai
speciali (la micobacterii sunt: acidul micolic, tuberculostearic, ftioic).
Lipide neutre (gliceride), provin din esterifcarea acizilor grai cu
glicerol.
Cerurile sunt substane complexe, n care esterifcarea acizilor
grai se face cu alcooli monovaleni superiori.
La bacteriile acid-alcoolo-rezistente coninutul n ceruri atinge 5-
10% din greutatea uscat a bacteriei este ceara D i conine acid
micolic, n timp ce la altele este foarte redus 0,3- 0, 8% .
^ J^pfblipidele sunt lipide complexe formate din: acizi grai, glicerol,
,acd fosforic i' o baz azotat (colina n lectine, etanolamina i serina
n cefaline).
Fosfolipidele se gsesc n cantitate mai mare in bacteriile Gram
negative i acid-alcoolo-rezistente.
Lipidele din bacterii nu conine colesterol. Coninutul mare n
lipide din peretele micobacteriilor confer impermeabilitate la
coloraiile obinuite, de aceea se folosete coloraia Ziehl-Neelsen.
n Treponema pallidum este un fosfolipid numit cardiolipin care
este un difosfatidil glicerol (conine 4 acizi grai polinesaturai diferi).
Cardiolipina se gsete i n structura esutului miocardic bovin, din
care se extrage, folosindu-se ca
j antigen pentru evidenierea anticorpilor omologi, pentru l diagnosticul
sifilisului.
Rolul lipedelor: energetic, plastic, patogenic (slab), antigenic (slab),
n permeabilitate.
^ Kjubstanele_mineraie variaz n funcie de specie, iar n /

41
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

cadM^aceleai speci ^variaz n raport cu vrsta culturii i \ compoziia


chimic a mediului de cultur. Celule tinere conin de I 6-7 ori mai multe
substane minerale dect cele btrne. Ele reprezint 2-30% din greutatea
uscat a bacteriei. Se gsesc toate oligoelementele: Fe, Ca, Mg, Na, Cl, Pb,
S, Zn, Cu etc. Aceste elemente intr n compoziia diferiilor compui
organici celulari: sulful n aminoacizi, fosforul n nucleoproteine, n
fosfolipide sau a compuilor macroergici (ATP). Fierul ntr n compoziia
citocromilor, enzime cu rol important n respiraia microbian.
Datorit cantitii mari de electrolii dizolvai n celula
microbian, presiunea osmotic intern a microorganismelor este
considerabil, astfel s-a calculat c la stafilococ poate atinge 15- 20
atmosfere, iar pentru colibacil 6 atmosfere.
~ ^ Rolul substanelor minerale:
l - favorizeaz schimburile ntre celul i mediu;
- contribuie la reglarea presiunii osmotice,
- are rol plastic, intr n compoziia constituenilor celulari i \ ai
unor enzime;
j - contribuie la reglarea pH-lui (7,2-7,4) i a potenialului de ^
oxidoreducere;
- activeaz sisteme enzimatice: catalizeaz unele procese (Fe-
citocromoxidaze), catalizeaz sinteza pigmenilor, Fe este
necesar sintezei toxinei difterice, rol n respiraie
(flavoproteinele), particip la permeabilitatea selectiv.
G. Vitaminele unele bacterii sunt capabile s sintetizeze
vitamine^rTcantiti att de mari nct servesc ca materie prim pentru
extragerea acestor vitamine. Astfel biotina este sintetizat de specii ca:
Proteus vulgaris, Mycobacterium tuberculosis,

42
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus anthracis,


Serratia marcescens. Tiamina (vitamina BJ este sintetizat de: E. coli,
caracteristic speciilor bacteriene cromogene. Ea este dependent de
condiiile de cultivare, mediile solide favorizeaz pigmentogeneza. De
asemenea este necesar prezena unor elemente ca: azotul, magneziul,
fierul, reacia mediului, sursa de carbon, temperatura, cantitatea de
oxigen, lumina.
B. subtilis, S. typhi, Shigella, C. diphteriae. Piridoxina (vitamina B6)
este sintetizat de unii lactobaeili. (f ($$1)
Pentru om,* flora microbian intestinal: constituie o "important surs de
vitamine (vitamine din grupul B, vitamina K).
: H. Pigmenii sunt prezeni n multe bacterii, mai ales bacteriile
anaerobe elaboreaz pigmeni. Pigmentogeneza este

/ Clasificare bacteriilor care conin pigmeni n funcie de specie:


- bacterii fotocromogene sintetizeaz pigmenii n prezena
luminii,
- bacterii scotocromogene sintetizeaz pigmenii n absena
luminii.
Clasificarea bacteriilor n funcie de localizarea pigmenilor:
a. cromofore (pigmentul este intracelular);
b. paracromofore (pigmentul este legat endocelular, de perete,
ca la stafilococi);
c. cromopare (pigmentul este eliberat n exterior).

Rolul pigmenilor
- fotosintez;
- rol protector (pigmenii carotenoizi protejeaz fa de U.V.),
- funcie vitaminic, antibiotic, enzimatic (vitamina K,
piocianina, flavoproteinele);
- semn de mbtrnire, substane de catabolism (melaninele);

43
,Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie
7 ' - . . - -- ' '

/
- identificarea bacteriilor: la bacilul piocianic sintetizeaz
piocianina (albastr), pioverdina (verde).
^ I. Substane care au aciui^^niba^tem|i^a_Multe specii
bactere^lbbreazrsubstane cu aciune inhibitoare asupra altor specii
sau asupra altor tulpini din aceeai specie. Unii bacili Gram negativi
sintetizeaz antibiotice cu aciune bactericid sau bacteriostatic de
exemplu polimixine, piocianina, ele acioneaz asupra altor specii.
Alte bacterii sintetizeaz substane cu aciune mpotriva propriei
specii, se numesc bacteriocine. \j

METABOLISMUL BACTERIAN

Cuprinde multitudinea de reacii biochimice, ce au


loc n celul, reacii prin care materialul nutritiv este luat din mediu,
transformat n energie i n constitueni celulari

^ Caracteristicile metabolismului bacterian:


- Este im metabolism uniceular, se desfoar intr-o singur
celul.
- Este un metabolism necompartimentat, caracteristic
procariotelor (lipsa organitelor citoplasmatice).
- Este un metabolism teleonomic, n timpul evoluiei nu au
fost selectate acele ci metabolice i acele mecanisme de reglare care
s-i asigure o eficien maxim.
- Se caracterizeaz printr-o mare flexibilitate metabolic, o
capacitate crescut de adaptare la condiii foarte variate de mediu.
- Este un metabolism de mare intensitate, ceea ce asigur o
multiplicare rapid, cu timp de generaie de 20 minute (celulele de
mamifere au timp de generaie de cel puin 24 ore). - - .
n complexitatea metabolic a lumii bacteriene acioneaz o restricie
genetic, determinat de cantitatea de informaie. La

44
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

E.coli, molecula cromozomial de ADN, are 2,9x109 daltoni, ea poate


codifica aprox. 3000 tipuri de molecule de proteine. Dintre acestea
cam 2000 sunt proteine, enzime, mai mult de 1/3 din ele fiind izolate,
purificate i caracterizate.

Nutriia bacterian

Este suma proceselor metabolice, ce concura la procurarea de


materiale convertibile n energie i componente celulare. In raport cu
tipul de energie i modul de obinere, microorganismele se mpart n:
- fototrofe (fotosintetizante), utilizeaz, energia radiant-
luminoasa;
- chimiotrofe (chimiosintetizante), utilizeaz energia rezultat
din reacii biochimice de oxido-reducere, ce pot avea loc la ntuneric.
n raport cu.felul sursei de azot i carbon, microorganismele se
mpart:
- autotrofe: utilizeaz pentru sinteze azotul i carbonul din
compui anorganici simpli: C02, NH3, N02, N03.
- heterotrofe: utilizeaz pentru sinteze azot i carbon din
substane ('organice diferite, care sunt descompui n produi simpli,
n raport cu gradul de complexitate.
Microorganismele fotosintetizante utilizeaz dou feluri de
reacii, ce se desfoar cuplat:
- reacii fotochimice, n care energia luminoas absorbit de
pigmeni speciali este convertit prin fotofosforilare n compui
macroergici: ATP (adenozin trifosfat);
- reacii de biosintez, n care ATP format anterior este folosit
n reacii endergonice pentru sinteza de materiale celulare, utiliznd
ca surs de carbon, fie C02 (fotoautotrofe), fie substane organice
(fotoheterotrofe): alcooli, acizi grai simpli, ca sur de azot este folosit
amoniacul sau N02.
Microorganismele chimosintetizante utilizeaz energia I obinut prin
reacii de oxido-reducerea unor substane anorganice sau organice.
- chimioautotrofele folosesc ca surs de carbon, CO2, iar ca surs
45
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

de azot, amoniacul, nitriii, nitraii ex. sulfobacteriile, ferobacteriile,


bacteriile nirificatoare;
- chimioheterotrofele sunt incapabile s-i sintetizeze toi
metaboliii eseniali, ei fiind luai din mediu de cultur.
Metabolismul bacterian este de doua tipuri:
- metabolism energetic (prin care se asigur respiraia bacterian),
reacii catabolice;
- metabolism de sintez (prin care se asigur sinteza
componentelor bacteriene), reacii anabolice i catabolice.
)I11
Metabolismul energetic bacterian
Respiraia reprezint totalitatea reaciilor biochimice, aerobe sau
anaerobe, productoare de energie. Aceste reacii au la baz mecanismul
oxido-reducerii biologice. Prin oxido-reducere biologic se nelege
pierderea atomilor de hidrogen (electronilor) de ctre o substan chimic,
donator i transferul lor pe molecula altei substane chimice, acceptor. n
timp ce prima substan (A) se oxideaz, a doua (R) se reduce concomitent.
Aceste dou reacii cuplate, de oxidare i de reducere, sunt reversibile. Ele
necesit prezena enzimelor, care transport hidrogenul (electroni) de la
donor ia acceptor, numite dehidrogenaze. n funcie de I natura acceptorului
final de hidrogen exist dou tipuri de | respiraii.
- Respiraie aerob (oxibiotic), acceptorul final este j oxigenul
molecular, iar produsul rezultat este apa. Acest proces 1 este deservit de mai
multe sisteme enzimatice dehidrogenazice:
nicotinice, flavinice, citocromii.

\
- Respiraie anaerob (anoxibiotic), acceptorul final este orice
substan anorganic diferit de oxigen, ex. CO2 sau o substan organic
(fermentaie).
n funcie de structura chimic a coenzimei sau a grupului prostetic,
aceste enzime pot fi grupate n mai multe categorii.
- Enzime nicotinice, au drept coenzime fie NAD (nicotin- adenin-
dinucleotid), fie NADP (nicotin-adenin-dinucleotid-fosfat) care reduse
46
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

devin NADH2 i respectiv NADPH2;


- Enzime flavinice, au drept grupare prostetic (nedisociabile de
apoenzime) FMN (flavin-mononucleotid), sau FAD (flavin-dinucleotid).
FAD redus devine FADH2;
- Enzime ferice, grupul prostetic conine fier sub form de derivai ai
protohemului. Fierul poate fi oxidat sau redus reversibil prin pierderea i
respectiv, ctigul unui electron. Enzimele ferice sunt citocromii b, c, a, a3,
dintre care ultimul, identificat cu citocrom-oxidaza, transfer electronul pe
oxigen, ca acceptor final. Alte enzime ferice sunt: catalaza i peroxidaza,
capabile s descompun apa oxigenat direct (catalaza), sau prin fixarea
oxigenului rezultat, pe un substrat redus, cu formarea ulterioar de ap
(peroxidaza).
Bacteriile aerobe posed toi citocromii, bacteriile facultativ
anaerobe posed unul sau doi citocromi finali, iar bacteriile anaerobe sunt
lipsite de citocromi, precum i de catalaz i peroxidaz, ele nu sunt
necesare pentru c procesele anaerobe nu conduc la formarea de ap
oxigenat.
- Enzimele cuprice, grupul prostetic conine cupru. Ele pot
dehidrogena substratul i fixa. hidrogenul direct pe oxigen, Iar intermediul
citocromilor.
Energia eliberat n cursul reaciilor de oxido-reducere nu este
consumat pe loc dect parial. Excesul este nmagazinat sub forma
legturilor macroergice fosforate pe care le conine ATP (adenozin-
trifosfat) i folosit dup necesitile de moment ale celulei.

47
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie
n respiraia aerob mecanismul de sintez a ATP este reprezentat n
special de fosforilarea oxidativ (Ia nivel de catalizator), cuplat cu partea
terminal a lanului respirator.
n respiraia anaerob (fermentaie), lipsit de lan respirator, sinteza
ATP este fcut prin fosforilarea la nivelul substratului, ^onatorii i
acceptorii de hidrogen fiind metabolii organici.
^ n funcie de potenialul oxido-reductor al mediului, "s-au descris mai
multe tipuri de respiratorii.
Bacterii strict aerobe, cresc numai n prezena unei cantiti mari de
oxigen, folosit ca unic acceptor final de hidrogen. Aceste bacterii posed:
catalaz, peroxidaza i citocromi. ^
Bacterii strict anaerobe, cresc numai n absena oxigenului, sunt
lipsite de enzimele de mai sus. Aceste bacterii sunt foarte sensibile Ia
aciunea oxigenului, care le este toxic.
Bacterii aerobe, facultativ anaerobe,^au posibilitatea ambelor tipuri
de respiraie, n funcie de existena oxigenului. Dei lipsite de catalaz i
citocrom-oxidaz, ele pot crete n aerobioz fiind mult mai puin sensibile
la apa oxigenat, datorit unor peroxidaze flavoproteice capabile s
descompun apa oxigenat.
Bacterii anaerobejnicroaerofile, tolereaz cantiti mici de oxigen,
probabil prin achiziia unor enzime de tip catalazic.
P/7Mf
_. ^ Energetica respiraiei aerobe ^
Energia se obine n dou moduri principale:
- prin fosforilarea substratului pe calea glicolizei anaerobe, n care o
molecul de glucoza este degradat n dou molecule de acid lactic, trecnd
prin stadiul de acid piruvic;
- prin fosforilarea oxidativ (la nivelul catalizatorului), n cazul
catabolismului glucozei n aerobioz. Acidul piruvic este carboxilat la acid
oxal - acetic, intr apoi n ciclul acizilor triearboxilici (ciclul KREBS), fiind
carboxilat pn la H2O i CO2.
Bilanul energetic total rezultat din catabolizarea complet, aerob, a
glucozei este de 38 moli ATP/1 mol glucoz. tiind c legtura macroergic

48
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i vintsologie

a 1 mol de ATP conine cca. 7000 calorii, nseamn c din 38 moli ATP
rezult 266 kcal/mol glucoz complet degradat.
Celelalte substane energetice, ca aminoacizii i acizii grai intr n
degradarea aerob ia nivelul ciclului KREBS: aminoacizii, dup ce sufer
transaminarea, intr la nivelul piruvatului, aspartatului, glutamatului, iar
acizii grai sub forma acetil-CoA, la nivelul acidului oxal-acetic.
*? ^
^"Energetica respiraiei anaerobe (fermentative)
Energia^ obinefprin fosforilarea substratului. Din punct de vedere
energetic, fermentaia este inferioar respiraiei aerobe, ea furniznd de 12-
19 ori mai puin energie (ATP).

Metabolismul glucidelor la bacterii


Glucidele reprezint surse de carbon i energie. Bacteriile utilizeaz
glucidele sub trei forme:
- monozaharidele ca atare,
- oligozaharidele sunt hidrolizate n monozaharide,
- poliiaharidele sunt de asemenea n monozaharide de ctre
hidrolaze specifice, care sunt exoenzime i ectoenzime.
Catabolismul glucidelor, toate monozaharidele sunt mai nti
transformate n glucoz-6-fosfat (G-6-P), care urmeaz cteva ci
principale de metebolizare:
- calea hexozo-difosfailor (EMBDEN-MEYERHOF- PARNAS),
produsul final este acidul piruvic, se produc i 2 moli ATP pentru lmol de
glucoz;
- calea pentozofosfailor, dei este neenergetic, este important,
deoarece este o surs de pentoze, necesare sintezei: acizilor nucleici,
glucidelor cu 4, 6, 7 atomi de carbon i de NADH2, necesare sintezei
glucidelor i lipidelor;
- calea ENTNER-DOUDOROFF, este caracteristic pentru
Pseudomonas i Aeromonas^ furnizeaz NADPFI2 i energie: Imol ATP
pentru lmol glucoz;
- calea ciclului acizilor tricarboxilici (KREBS), reprezint calea
comun de catabolizare a glucidelor, lipidelor i aminoacizilor
49
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

(dezaminai), pn la CO? i H20, cu eliberare de energie, prin reacii


succesive de decarboxilare, oxido-reducere, hidratare, sub aciunea unor
enzime specifice.

Sinteza polizaharidelor bacteriene


Oligozaharidele (dizaharidele) sunt sintetizate prin reacii de
transglucozidare, catalizate de transglucozil-transferaze.
Polizaharidele sunt sintetizate prin transglucozidarea unei uniti
monozaharidice pe un rest oligozaharidic.

Sintez acidului hialuronic


Mai nti are loc sinteza acidului glucuronic prin dehidrogenarea
UTP-G n prezena NAD i sinteza N-acetil- glucozaminei din glucoz-6-
P, Ac-CoA, cu participarea ATP, glutaminei, UTP (uridin-trifosfat). Este
apoi sintetizat unitate de baz, prin formarea legturii 1 -4 glucozidice,
ntre acidul glucuronic i N-acetil-glucozamina. Aceast unitate este apoi
polimerizat.
Acidul hialuronic intr n compoziia structurilor capsulare a diferitor
bacterii (streptococi tineri).

Metabolismul lipidelor la bacterii


Bacteriile au capacitatea de a degrada i a sintetiza lipide neutre i
fofolipide. Degradarea lipidelor are loc sub aciunea lipazelor i esterazelor,
care de obicei sunt extracelulare.
Gliceridele sunt hidrolizate n glicerol i acizi grai. Fosfolipidele
sunt hidrolizate n: glicerol, acizi grai, acid fosforic i baza azotat (colina
n cazul lecitinelor, sau etanol-amina, serina n cazul cefalinelor.
Glicerolul, rezultat din hidroliza lipidelor, este reutilizat ca atare n
liposinteze, sau dup fosforilare, este transformat n hidroxi-acetonfosfat i
intr n ciclul EMP (EMBDEN- MEYERH OF-PARNAS), al glicolizei
anaerobe.
Acizii grai, rezultai odat cu glicerolul, din hidroliza lipidelor, intra
n reacii de oxidare, n special pe calea ciclului LYNEN (bete-oxidare).
Aici are loc, printr-un proces oxidativ, ruperea succesiv a cte unui
50
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i vintsologie

fragment de doi carboni. Fiecare scurtare cu doi carboni cuprinde o


succesiune de patru reacii pariale precedate de activarea acidului gras, sub
forma de acetil- CoA. Resturile acetil-CoA, intr n fondul comun al
unitilor cu doi atomi de carbon, putnd fi utilizate n ciclul KREBS, n
sinteze acetil-derivailor, sau pentru sinteza de acizi grai. Baza azotat,
rezultat din hidroliza fosfolipidelor, este folosit, apoi, ca atare pentru
sinteza de fosfolipide, sau transformat n aminoacizi. Bazele azotate
reprezint o surs important de grupri metil, necesare altor sinteze.

Biosinteza lipidelor
Biosintez acizilor grai, urmeaz dou ci:
- alungirea unui acid gras cu nc doi carboni, prin reversia
parial a unora din etapele de degradare din ciclul LYNEN, de exemplu
sinteza acidului stearic (18 C), din acid palmitic (16 C) i Acetil-CoA;
'
- calea malonil-CoA, prin care o unitate acil CoA este condensat cu
un fragment de 2 C, cu formare intermediar a malonil-CoA, aceast cale
necesit: C02, biotin, ATP, NADH2.

51
Caliopsia FLORE A Bacterioloie i virusologie

Biosinteza trigliceridelor
Din monogliceride, se formeaz digliceride i apoi trigliceride,
prin adugarea succesiv a cte unui rest de aci-CoA. prin reacie de
transacetilare, dependent de ATP i CoA.
Din alfa-glicerofosfat i acil-CoA, prin formarea intermediar de
acizi fosfatidici (fosfogliceride fr baz azotat). Se face astfel legtura
cu fosfolipidele.

Biosinteza fosfolipideor !
Este un proces endergonic i presupune- presinteza glicerolului,
acizilor grai i bazei azotate, etanol-amina provine din decarboxilarea
serinei, iar colina din metilarea etanol-aminei. Sinteza fosfolipideor are
loc n patru etape;
- formarea alfa-glicerofosfatului,
- formarea acidului fosfatidic,
- formarea digliceridelor alfa-beta,
~ ncorporarea Bazei azotate.

Metabolismul proteinelor ia bacterii


Aminoacizii ncorporai sub form de proteine i peptide, au rol
plastic i rol energetic, excepie fac anaerobii proteolitici. Cele mai multe
specii bacteriene degradeaz activ aminoacizii, folosindu-i apoi pentru
diferite sinteze. Aminoacizii sunt preluai ca atare din mediu, sau n unna
hidrolizei substanelor proteice, de ctre proteazele (extracelulare) i
peptidazele (extra i intracelulare) bacteriene.
Absorbia aminoacizilor este asigurat de ctre sisteme permeazice
specifice, consumatoare de energie. Izomerii D ai aminoacizilor sunt mai
rspndii dect la alte organisme, care utilizeaz n special L-
aminoacizii. La bacterii, D-aminoacizii formeaz diferite peptide cu
activitate antibiotic (gramicidina, polimixina, bacitracina), capsula
bacilului crbunos, sau particip la formarea peretelui celular (D-alanina,
acidul D-glutamic).
Catabolizarea aminoacizilor
Bacteriile Gram negative atac toi aminoacizii, folosind ca surs de
52
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

carbon, glucoza i amoniac ca surs de azot.


Bacteriile Gram pozitive au capacitate limitat de degradare i sintez
a aminoacizilor i necesit un numr de aminoacizi n mediul nutritiv,
factori de cretere.
Degradarea aminoacizilor este iniiat prin ndeprtarea gruprii
aminice prin mai multe reacii.
- Transaminarea, transferul NH3 pe un oxiacid cu formarea
aminoacidului corespunztor.
- Dezaminarea, ndeprtarea grupei amino i care se datoreaz
urmtoarelor grupe de enzime:
a) cu spectru larg de aciune, L i D-aminoacidoxidaze (ex. la Proteus
se gsete L-aminoacidoxidaza, fiind utilizat ca un test important de
identificare, reacia fenilalanindezaminazei). n timp ce D-
aminoacidoxidaza se ntlnete la multe bacterii Gram negative;
b) dehidrogenaze, dintre care glutamat-dehidrogenazele NAD i
NADP dependente, au un rol major n utilizarea N (ionul de amoniu din
mediu);
c) enzime avnd ca substrat specific un singur aminoacid cu
mecanisme; variate de reacie: asparginaza, glutaminaza,
aspartaza, jstidaza, arginaza etc.
Dupndeprtarea grupei aminice, scheletul de carbon intr n reacii
'-degradative proprii mai ales n ciclul acizilor tricarboxilici.
- Decarboxilarea aminoacizilor are loc neoxidativ i ireversibil, sub
aciunea unei ^decarboxilaze specifice fiecrui aminoacid, avnd drept
coenzim piridoxal-P. n urma acestei reacii se formeaz amina
corespunztoare i bioxidul de carbon. Formarea de amine (bazice)
reprezint un mecanism de tamponare a pH-lui, care tinde spre aciditate,
prin acumularea de produi de fermentaie acizi. Cnd pH-ul scade sub 6,
este activat
decarboxilarea (pH optim 2-6), cu producerea de amine i creterea pH-
ului.

Sinteza aminoacizilor

53
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

Acest proces implic fixarea azotului pe lanuri carbonice


preformate (mai ales cetoacizi). Azotul este luat sub form de azot
molecular (autotrofe), N02, N03, amoniac, sau de grupare aminic (-NH2),
(heterotrofe).
Bacteriile autotrofe care folosesc azot molecular, l transform n
amoniac (nu se cunosc mecanismele), iar acesta este fixat pe acidul alfa-
cetoglutaric, sau acidul glutamic i prin transaminare se formeaz ali
aminoacizi.
Heterotrofele, cu un grad mai nalt de parazitism, folosesc pentru
obinerea aminoacizilor necesari, reacia de transaminare, catalizat de
transaminaze specifice, care necesit prezena NAD i piridoxal-fosfatului.
Transaminarea este o reacie de dezaminare, prin care gruparea amino (-
NH2)a unui aminoacid este transferat n poziia alfa a unui alfa-cetoacid,
care astfel devine un aminoacid nou, n timp ce primul aminoacid (care a
pierdut gruparea amino devine cetoacid). Unele bacterii heterotrofe nu-i
sintetizeaz nici prin transaminare dect un numr restrns de aminoacizi,
ceilali i ia ca atare din mediu (aminoacizi eseniali).
n concluzie, n ceea ce privete legtura cu metabolismul glucidic,
se pot distinge trei ci de biosintez a aminoacizilor, pe baza prelurii
scheletelor carbonice de la glucide:
- glicoliza anaerob (EMP), de ia acid 3P-gliceric se poate ajunge
la: serin, glicin, iar de la piruvat se ajunge la: valin, alanin, leucin;
- untul pentozelor, prin intermediul formrii acidului shikimic, se
ajunge la aminoacizi aromatici, iar prin intermediul ribozei-5P, la
histidin;

54
CaKopsia FLQREA Bacterioloie i virusologie
Colonia bacterian reprezint totalitatea germenilor rezultai din
multiplicarea unei singure celule bacteriene, ea este o cultur pur, sunt
germeni identici genetic (monoclonali).

Aspectul coloniilor
- Colonii de tip S^smooth = neted, coloniile au suprafaa
neted, lucioas cu margini drepte, de consisten untoas, cu un
diametru de 1-2 mm, se pot detaa uor, sunt alctuite din germeni
viruleni.
- Colonii de tip R, rough = aspru. Coloniile au suprafa aspr,
rugoas, cu margini neregulate, crenelate, nu se pot detaa o parte din
colonie cu ansa, ci doar colonia ntreag. Aceste colonii sunt formate
din germeni btrni, aviruleni. n aceast form nu se mai pot face
identificri.
- Colonii de tip M care au suprafaa neted, mucoas, sunt
variante ale coloniilor S ale germenilor cu capsul {Klebsiella). Ele
au tendina de a conflua ntre ele.
- Colonii de tip G glossy, simt colonii pitice lucioase, ele
rezult n urma aciunii antibioticelor asupra formelor S de
V germeni.

^ / C u r b a de cretere a bateriilor
Populaia care rezult prin diviziunea unei bacterii
crete n progresie geometric cu raia 2. Timpul necesar pentru dublarea
populaiei se numete timp de dedublare sau timp de generaie. Dinamica
real este caracterizat printr-o curb cu patru
faze:
1. Faza de lag 1

n primele 2 ore, numrul de indivizi este aproape constant (faza


de laten), ea este o faz de acomodare a germenilor la noile condiii de
mediu.

56
Caliopsia FLQREA Bacterioloie i virusologie
2. Faza de multiplicare exponenial sau logaritmic
Este o faz de cretere rapid a numrului bacteriilor. Dureaz 2-3
ore, curba evolueaz exponenial pn n momentul n care una dintre
substane nutritive din mediu este consumat sau/i n mediu se
acumuleaz metabolii toxici (factor limitant). n aceast faz bacteriile
au dimensiuni constante, citoplasm intens bazofil i omogen, lipsit
de incluziuni. Bacteriile sunt virulente, antigenele sunt cele mai bine
reprezentate^ n aceast faz se recolteaz germenii pentru prepararea
vaccinurilor.
3. Faza staionar \i
Prin consumarea substratului nutritiv ritmul de diviziune scade,
numrul germenilor care mor devine egal cu cel al germenilor care se
divid, deci'numrul total al bacteriilor rmne constant. Aceast faz
dureaz 2-3 zile. In aceast faz se fac identificrile bacteriilor, coloniile
sunt bine individualizate. Bacteriile din coleciile purulente (abcese) se
afl n aceast faz.
4. Faza de declin
Consumarea substratului nutritiv i acumularea de metabolii toxici
duce la moartea majoritii bacteriilor. Celulele rmase vii sunt btrne,
i pierd virulena i patogenitatea. Faza dureaz 2-3 luni. n aceast faz
apar sporii.
Aceast evoluie se obine i n macroorganisme. Cultura
bacterian, rmne permanent tnr, deoarece mediul de cultur nu i
pierde elementele nutritive.

57
Caliopsia FLQREA Bacterioloie i virusologie

- ciclul KREBS, de la acidul alfa-cetoglutaric, oxalacetic i fumrie


se ajunge la acid glutamic i acid aspartic.

Sinteza proteinelor
Este un proces complex care se desfoar n dou etape:
- Realizarea structurii primare a catenelor polipeptidice, prin
formarea legturilor peptidice (-CO-NH-), ntre aminoacizii dispui n
ordinea specificat de ctre ARNm. Schematic se realizeaz prin activarea
aminoacizilor, legarea lor de ARNt- sintetaze (sau enzime cu pH 5) n
prezena ATP, transportul aminoacizilor activai, laribozomi,
secvenializarea aminoacizilor, formarea succesiv a legturilor peptidice Io*
ntre aminoacizi, ce se dispun succesiv pe suprafaa ribozomului, n
ordinea specific, codificat de ARNm, eliberarea catenelor polipeptidice
de pe ribozom.
- Morfogeneza proteinelor, realizarea structurii secundare, teriare,
cuatemare, prin constituirea de legturi intra- sau intercatenare (puni de
hidrogen, fore Van der Waals, sau covalente de tip -S-S-).

Cultivarea bacteriilor
i

' Creterea bacteriilor


Este ^procesul biologic prin care bacteriile i mresc volumul,
datorit sintetizrii de noi produi i acumulrii apei. Creterea este
dependent de raportul suprafa/volum, este att timp ct este n favoare
suprafeei.

Multiplicarea bacteriilor
Atunci cnd valoarea raportului este n favoarea volumului (se
inverseaz rapotul) creterea nceteaz i apare nmulirea.

54
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

Aceasta se realizeaz prin diviziune direct i rar prin nmugurire.


Ritmul de diviziune este foarte rapid de 10-20 min, excepie face bacilul
Koch care are un timp de 18-20 ore.

Cultura bacterlan
Este rezultatul nmulirii germenilor ntr-un mediu favorabil.
Aspectul culturii depinde de: specie, de vrsta culturii i de mediul de
cultur.
Bacteriile pot fi cultivate de : medii artificiale (acelulare), culturi
celulare, ou embrionat de gin, animale receptive.
-------- ( bfi-ejjjP ~ 9> D ^
jj/ Culturile bacteriene pe medii artificiale
^J^lnmedii lichide
Determin apariia unei turbiditi (tulburri a mediului apos) dup
18-20 ore n condiii de cretere specifice bacteriei. n funcie de aspectul
turbiditii culturile pot fi:
- culturi S (smooth) - turbiditate omogen, germenii sunt tineri,
viruleni, care disperseaz rapid i uniform;
- culturi R (rough) - mediul este limpede, germenii se gsesc sub
form de grunji (depui pe fundul vasului sau pe perei), tulbur neomogen
mediul. Sunt determinate fie de germeni aviruleni, nepatogeni, sau de
germeni patogeni mbtrnii, care i-au pierdut virulena.
Uneori creterea n medii lichide mai poate fi sub form de:
- vl la suprafa, n cazul germenilor aerobi (bacilul tuberculos);
- depozit gros pe fundul vasului n cazul germenilor anaerobi.
-' Pe medii solide
Produsul patologic se nsmneaz prin diverse procedee de
dispersie. Cultura bacterian apare sub form de colonie dup 4 ore.

55
Caliopsia FLOREA Beterioloie i virusologie

ssacaM
Basasi
Figura 4 Curba de multiplicare a-bacteriilor n cultur I

i
log. nr. germeni/ml

i
i


v
f

I.

i
j
t
i

58
Caliopsia FLOREA Bacte
6

Capitolul IV
Virusurile
r DEFINIIE ;
Virusurile reprezint o familie deosebit de agejni infecioi /
care difer fundamentai din punct de vedere structural i fiziologic / de
celelalte microorganisme, au dimensiuni foarte mici, cuprinse f ntre 20-
300 nm. Dup A. LWOFF, virusurile sunt entiti ^ infectante
nucleoproteice, potenial patogene, posednd un singur tip de acid nucleic,
incapabile de cretere i fisiune binar, lipsite de informaie genetic pentru
sinteza unui sistem energetic i propriu i necesitnd pentru reproducere,
ribozomii celulei \_gazda. PCJAO a j JJr^{CjSX
r O particul viral (virion este format din albumin i acid nucleic, ADN
sau ARN). Acidul nucleic (nucleotid) este nconjurat de un nveli abuminic
protector, care i confer aspectul i structura specific. nveliul de
albumin se numete capsid. Aceasta stabilizeaz i protejeaz genomul
viral, iar n / cazul virusurilor neanvelopate, are rol n fixarea virusului pe /
receptorii specifici pe membrana celular.
"A Unele virusuri prezint la exteriorul nucleocapsidei un

Jnveli extern numit peplos (anvelop). Acesta este de natur


lipoproteic, n peplos pot fi implantate (de cele mai multe ori) \ structuri
glicoproteice (spculi), codificate de genomul viral, ce \ proemin la
suprafaa nveliului extern ^ Faa intern a anvelopei este tapetat cu o
matrice de natur proteic (proteina matrix sau proteina M). Anvelopa
stabilizeaz

59
jja FLOREA Bacterioloie i virusologie

nucleocapsida, iar spiculii confer antigenicitate i ajut la fixarea


virusurilor anvelopate pe receptorii celulari.
Virusurile sunt lipsite de echipament enzimatic productor de
energie i de metabolism propriu, sunt parazii intraceiulari obligatorii
i se replic cu ajutorul celulei infectate.
Pot fi cultivate numai pe medii celulare (culturi de celule, ou
embrionat de gin i animale de experien).
Nu sunt sensibile la aciunea antibioticelor, dar sunt sensibile la
interferoni (IFN).

Taxonomie
Conform ICTV (Comitetului Internaional pentru Taxonomia
Virusurilor), urmtoarele caractere fizico-chimice ale virionului sunt
folosite pentru gruparea virusurilor n familii:
- natura chimic a acidului nucleic viral,
- simetria capsidei,
- prezena sau absena nveliurilor pericapsulare,
- diametrul capsidei pentru virusurile cu simetrie helicoidal i
numrul de capsomere pentru virusurile cu simetrie cubic
(icosaedric).
Icosaedrul este un poliedru cu 20 de fee triunghiulare
echilaterale;, 30 de muchii i 12 vrfuri (vertexuri), orientate dup
axele de sirhetrie.
Conform ICTV exist, pn n anul 2003 aprox. 4000 de specii
de virusuri i peste 30.000 de tipuri i subtipuri, care sunt pstrate n
centre de referin. ;
Pe baza naturii chimice genomului viral, se mparte n:
dexoxiribovirusuri i riboviriisuri, cu genomul alctuit din ADN,
respectiv ARN. n funcie de simetria capsidei, helicoidal sau cubic,
virusurile se grupeaz n clase: dezoxihelica,
. _ dezoxicubica, ribohelica, ribocubica.
, Polaritatea ARN-ului genomic a fost stabilit n mod convenional n
raport cu posibilitatea de traducere (direct sau

60
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

indirect) a informaiei n protein. Astfel ARN-ul tradus direct I n


protein, fr o transcriere prealabil, este considerat cu I polaritate
pozitiv i este notat convenional ARN (+), n timp i ce ARN-ul transcris
nti ntr-un ARN complementar i abia apoi I n protein, este considerat
cu polaritate negativ i este notat I ARN (-).
Taxonomia viral cuprinde : ordin, familie, subfamilie, gen,
specie.
Nomenclatura este internaional i se aplic la toate
^virusurile (indiferent de regnul parazitat).
Ordinul reunete familii de virusuri care posed caractere / care
le difereniaz de alte familii i are sufixul virales.
! Familia ntrunete caractere comune (morfologie distinct a
virionului, organizare genomic specific), care nu se ntlnesc la alte
virusuri i este desemnat cu sufixul viridae.
Suhfamilia se gsesc n interiorul unei familii, se utilizeaz sufixul
virinae.
Genul este un grup de specii care posed caracterele familiei, dar
! au i alte particulariti, au sufixul virus.
j
Specia reprezint grupuri de tulpini virale ce se deosebesc prin
prezena unor gene, care codific aceste diferene. Se exprim fr
sufix, specificaiei de virus adugndu-i-se numele
ntreg: virus gripal, virus Ebola.
Exemplu: familia Herpesviridae, subfamilia
f Alphaherpesvirinae, genul Simplex virus, specia Virus herpes simplex
| serotip 2. ._ ^ ft
i \y JOV
I m yf \ DEZOXDRIBOVIRUSURl &' V
1 f \ 'o
Virusuri ADN nvelite
Familia POXVIRIDAE au dimensiuni de 220-450/140-260 nm,

61
jja FLOREA Bacterioloie i virusologie

structur complex, cu ADN dublu catenar, liniar.


Subfamilia Chordopoxvirinae (poxvirusurile vertebratelor).

62
Caliopsia FLOREA Bacteriooie i virusologie

Genul Orthopoxvirus cu speeie/grup: V. variolic, K vaccina,


acestea pot da variola respectiv vaccina. Tot din acest gen se vor enumera
virusuri care pot genera zbonoze cu erupii localizate sau generalizate la
animale: V. pox bovin (cowpox), V. pox al maimuei (monkey pox). V.
pox al ratonului, V. ectromeliei (la oarece).
Genul Parapoxvirus: V. orf (dermatit contagioas);
Pseudocowpox virusuri (nodulii lptarilor).
Genul Mottuscipoxvirus: V. molluscum contagiosum (dau negi).
_v
Familia HERPESVIRIDAE au dimensiuni de 160-200 nm, capsida
este icosaedrie, cu ADN dublu catenar, liniar.
Subfamilia Alphaherpesvirinae
Genul Simplexvirus: V. herpes simplex 1, 2 (dau herpesul la om);
V. herpes B (simiae) care poate da encefalita; V. mamitei bovinelor
(mamita).
Genul Varicetlavirii: V. varicella-zoster ( pot da varieela ij
Zona Zoster); V.-pseudorarabiei (afeciuni ale porcior)r-^=^
^ Subfamilia Betaherpesvirinae 1 Genul Cytomegaivirus: V.
citomegaic (infecii congenitale,
/ pneumonii).
/ Genul Muromegalvirus: V. citomegaic al oarecelui.
Genul Roseolovirus: V. herpetic uman 6 i 7 (roseola).
infecioas, limfom.Burkit, earcinom nazo-faringian). ^ ^

Genul Lymphociyptovirus: V. Epstein-Barr


,
(mononucleoza
<\}
Subfamilia Gammaherpesyirinae ^ \ S'
v> (^
Genul Rhainovirus: V herpetic uman 8 (sarcomul Kaposi), Herpesvirus
saimiri (afeciuni ale maimuei). y, Familia HEPADNA VIRIDAE Au
dimensiuni de 40-50 mn,
^ capsida "icosaedric, cu ADN circular bicatenar, parial \monocatenar.
Caliopsia FLQREA Bacterioloie i virusologie
Genul Orthohepadnavirm: V. hepatitei B, V. hapatitei marmotei,
V. hepatitei veveriei (dau hepatit, carcinom
hepatocelur).
Genul Avihepadnavirus: V. hepatitei raei de Peking, V.
cocostrcului gri. * j AM/
^ Virusuri ADN nenvelite/i\ijj oLi
Familia ADENOVIRIDE: dimensiuni 70-80 nm, capsid
icosaedrie, ADN dublu catenar, liniar.
Genul Mastadenovirus: Adenovirus (adenoyirusuri la mamifere),
dau afeciuni., respiratorii, oculare, entente, potenial \ oncogen. ^ fOl
'fyWJScrL}
\> _ Genui y4 viadenovirus: Adenovirusuri la psri.
Familia PAPILLOMA11RIDAEU: dimensiuni de 55 nm, capsid
icosaedrie, ADN dublu catenar, circular.
Genul Papillomavirus: V. papiloamelor umane (papiloame,
condiloame, asociere cu tumori maligne); V. papiloamelor \ mamiferelor;
V. Shope (afeciuni tumorale ale iepurilor).
Familia POLYOMAVIRIDAlf: dimensiuni de 45 nm,
; capsid icosaedrie, ADN dublu catenar circular.
Genul Polyomavirtts: VJC (leucoencefalita multifocal ; progresiv,
infecii renale, infecii respiratorii); VBK; S.V. 40 al maimuei rhesus; V.
polyoma a oarecelui; V. limfotrope al maimuei (dau afeciuni
tumorale).
\ [# au fost ncadrate anterior ca familia Papovaviridae].
V"" Familia PAR VOVIRIDAE: dimensiuni 18-26 nm, capsid |
icosaedrie, cu ADN monocatenar liniar de sens + sau -.
\ Subfamilia Parvovirinae
Genul Erythrovirm: V. B19 (autonom), poate da eritem I infecpos,
anemie aplastie.
I Genul Pavovirus: V. bolii Aleutine a nurcii; V. roztoarelor,
I vitelor, felinelor etc. (entente, hepatite, encefalopatii).
| Genul Dependovirus: AAV (V. asociat adenovirusurilor) tip
\ 1-5 la om, tip 4 la maimu; sunt virusuri defective.

V 63
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie
\ 11
Genul Rubivirus: V. rubeolos care produce rubeola.*'') Familia
FLAVIVIRIDAEz dimensiuni de 40-50 nm, capsid icosaedric, ARN
monocatenar liniar, sens (+).
Genul Flavivims: Arbovirusuri gr. B (febra galben); V. encefalitei
de Saint-Louis (Denga); V.. encefalitei West-Nile (encefalita West-Nile),
etc. cxv)f \
1
\ Genul Hepacivirus: V. hepatitei C (hepatita C).^ J'L ^ ""
Genul Pestivirus: Virusurile vitelor i porcilor.
Familia CORONAVIRIDAE: dimensiuni de 80-160 nm, capsid
helicoidal, ARN monocatenar liniar, sens (+).
Genul Coronavirus: Coronavirusuri umane (CVU 229E, CVU OC430
produc infecii respiratorii i enterice. Alte virusuri ale animalelor i
psrilor. ;
G en ul j\ 7Yvovirus: V. Berne, V. Breda care pot da afeciuni ale
vitelor i cailor.
Ordinul MONONEGA VIRALES
Familia PARAMYXOVIRIDAE: dimensiuni de 150-300 nm, capsid
helicoidal, ARN monocatenar liniar, sens (-). Subfamilia Paramyxo virinae
Genul Respirovirus: V. pragripal uman 1, 3 (dau infecii respiratorii).
Genul Rubulavirus: V. paragripal uman 2, 4A, 4B; V.
ForeionuUuVproduce oreionul); V. bolii Newcastle (afeciuni ale

64
A0
Calopsa FLOREA Bacterioloie i virusologie
\ psrilor) ii Uproduce &
iv ^RIBGVIRUSURI \\
" ,l
r
Virusuri ARN nvelite
Familia TOGAVIR1DAE: dimensiuni 50-70 nm, capsid icosaedric,
ARN monocatenar liniar, sens (+).
Genul Alphavirus: Arbovirusuri gr. A; Grupuri/complexe: EEE/VEE,
SF, SIN, WEE pot produce: encefalite ecvine, ? sindroame febrile, artrite,
rash. {

' " IA . n
J 1

65
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie
I Genul Morbilivirus: V. rujeolos (produce rujeola, PESS- I panencefalita
sclerozant subacut-); V. pestei bovine (pesta 1 bovin); V. jigodiei
canine (jigodia).
\ Subfamilia Pneumovirinae
Y Genul Pneumovirus: V.
respiratorii). vV V o 0^ '' ^ CP^ respirator sinciial uman (infecii

- ^Familia RHABDOVIRIDAE: dimensiuni de 130-380/70-85 nm, capsid


helicoidal, ARN monocatenar liniar, sens (-).
vitelor i porcilor (boala febril nsoit de stomatit vezicular, la \y
Genul Veziculovirus: V. stomatitei veziculoaftoase a cailor,

animale i la om).
1 Genul Lyssavirus: V. rabic (produce rabia)T yyjiW Familia
FILOVIRIDAE cu dimensiuni de 80/600-1000 nm,
' j capsid helicoidal, ARN monocatenar linear, sens (-).
! Genul Filovirus: (Marburg like-viruses; Ebola like-viruses)
\ cu V. Marburg; V. Ebola care produc febre hemoragice. ^"Familia
ORTHOMYXOVIRIDAE: dimensiuni de 80-120 f nm, capsid
helicoidal, ARN monocatenar liniar, sens (-), segmentat (6-8
segmente).
Genul Influenzavirus Ai V. gripal A
Genul Influenzavirus B: V. gripal B
Genul Influenzavirus C: V gripal C, toate genurile produc > gripa
la om.
Genul Thogotovirus: V. Thogoto; V. Dhori care dau afeciuni
respiratorii.
Familia BUNYAVIRIDAE cu dimensiuni de 80-120 nm, f capsid
helicoidal, ARN monocatenar liniar, sens (-), din 3 I segmente circulare.
i Genul Bunyavirus: V. Bunyamwera; V. California; V.
\ Bwamba care pot da encefalite, meningite.
\ Genul Hantavirus: V. Hantaan (produce febra hemoragic de Coreea);

66
A0
Caiiopsia FLQREA Bacterioloie i virusologie
[ Genul Nairovirm: V. febrelor hemoragice de Crimea i Congo.
~ Familia ARENAVIRIDAE cu dimensiuni de 90-100 nm, capsid
i
helicoidal, ARN monocatenar, sens + i segmentat (2 segmente).
Genul Arenavirus: V. eoriomeningitei limfoeitare
(meningita aseptic);. $. ' ___,
Familia RETROVIRIDAE cu dimensiunPde~80-100 nm7~' capsid
icosaedric, ARN diploid monocatenar, liniar, de sens (+). v
Subfamilia Oncovirinae
Genul Oncovirus A (leucemii, limfoame, sarcoame, tumori j mamare
la: oareci, hamsteri, cobai).
Genul Oncovirus B: V. tumorii mamare a oarecilor.
Genul Oncovirus C: V. sareomului Rous, neoplazii i j leucemii ale
mamiferelor i psrilor. j
-
Gr. V. leucozelor aviare, {
-
Gr. V. mamiferelor j
- Gr. V leucemiei umane i bovine HTLV/BLV: HTLV-1
(care pot produce leucemia adultului de tip T); HTLV- II ! (paraparez
spastic tropical); V. leucemiei bovine (BLV) care poate da leucemia
bovin. /
Subfamilia Lentivirinae
Genul Lentivirus: HIV 1 - HIV 2 care dau SIDA; SIV (SIDA la
maimue), etc. (pentru animale). _
y Virusuri ARN nenvelite ^ ^
Familia PICORNAVIRWAE dimensiuni de 27-30 nm, capsid
icosaedric, ARN monocatenar, liniar, sens (+).
Genul Enterovirus: V polio (poliomielit, meningit,
conjunctivit); V. coxsackie A, B (herpangin, respiratorii); V. echo

Y Genul Hepatovirus: V. hepatitei A (hepatit). sn j\ 0Jj/

Genul Rhinovirusx Rhinovirus uman (infecii respiratorii),


Genul Aphtovirus: V aftos (febra aftoas).

67
Caliopsia PLOREA Bacteriooie i virusologie
(enterit, miocardit, pericardite).

68
Caliopsia PLOREA Bacteriooie i virusologie
Genul Cardiovirusi V. encefalomiocarditei (V. Theiler) d
encefalomiocardita.
=S5S=
" Familia REOVLRIDAE cu dimensiuni de 60-80 nm, capsid dubl
icosaedric, ARN dublu catenar, liniar, segmentat (10-12 segmente), sens
(-).
Genul Reovirusi Reovirusuri ale omului, maimuei, vertebratelor,
psrilor (infecii respiratorii i enterice minore).
\ Genul Rotavirus: Rotavirus (gr. A-G) pot da gastroenterite
acute la om. Vu /.tchi ^y
Genul Orbivirus: V. Kemerovo, V. Lipovnic, Tribec, V.
Chanquinola pot da encefalite, boli febrile, la om. f ^^Familta
CALICfVIRWAEf cu dimensiuni de 27-40 nm,
! capsid icosaedric, ARN monocatenar, liniar, sens (+).
Genul V. Nrowalk (Noro): V. Norwalk, dau sindroame febrile i
vrsturi la copii i diaree la aduli.
Genul V. Sapporo (Sapporo like-viruses): V. Sapporo poate da
gastroenterite.
' Familia ASTROVIRIDAE cu dimensiuni de 28-30 nm. Capsid
icosaedric, ARN monocatenar, liniar, sens (+).
Genul Astrovirus: Astrovirus uman serotip 1-7 poate da
gastroenterite acute.
[# V. hepatitei E nu mai face parte din Caliciviridae, rmnnd
nencadrat ntr-un anume grup de virusuri].

'fi
U' 1

i
<
69
Caiiopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie
Capitolul V
Genetica microbian

Obiectul geneticii n general i deci i cel al


geneticii' 1 bacteriene este constituit din studiul ereditii organismelor vii. j
Prin ereditate se nelege capacitatea organismelor vii de a f transmite
descendenilor caracterelor lor distinctive de specie. *
Genomul (materialul genetic) bacterian este totalitatea i
determinanilor genetici ai bacteriei. Genomul este organizat n: \
- material genetic nuclear (cromozomul);
- material genetic extracromozomial.
Ambele tipuri de material genetic asigur ereditatea.
---- Genotipul este totalitatea informaiei genetice pe care o
posed un anumit organism.
Fenotipul este totalitatea caracterelor exprimate de un organism, 4!
poate prezenta variaii importante, care sunt n mare msur influenate de
condiiile de mediu.
i *
Modificrile n fenotip survenite n timpul vieii unui organism nu
se transmit descendenilor* n timp ce orice alterare a genotipului va
afecta i descendenii. 1
Materialul genetic nuclear (cromozomul bacterian) este format
dintr-un ADN dublu catenar, helieoidal, care deine ^informaia pentru
funciile vitale ale bacteriei.
^TCelula bacterian este haploid pentru c are un singur I cromozom
(un singur lan ADN). Cromozomul nu este nvelit de j membran
nuclear, venind n contact cu citoplasm. Desfurat
\

70
Caliopsia FLQREA Bacterioloie i virusologie
cromozomul are o lungime de 1 mm i are o form circular, dimensiuni
imense raportat la dimensiunea celulei. Prezint ns un aranjament
spaial special, realizat printr-o nfurare sau mpachetare, ce i
permite s ocupe n celul un spaiu foarte mic i care explic totodat
aspectul de structura fibrilar pe care l prezint materialul nuclear
hacterian.

Componentele unui cromozom sunt:


Gena este o mic poriune a genomului, o secven anumit de
nucleotide (dispuse liniar), care codific informaia pentru o protein.
Cistronul este cea mai mic subunitate a genomului, care codific
informaia pentru un lan polipeptidic i poate fi un sinonim al genei.
Codonui este unitatea morfologic format din 3 baze azotate
succesive, care codific inserarea unui aminoacid ntr-un lan
polipeptidic.
ADN-ul este format din:
- baze purinice: adenin (A) i guanin (G);
- baze pirimidinice: citozin (C) i timin (T).
ARN-ul este format din aceleai baze purinice i pirimidinice, dar
timina (T) este nlocuit cu uracilul (U).
Pe matria de ADN, ARN polimeraza, ADN-depentent,
sintetizeaz un ARNm (mesager) complementar cu poriunea de ADN
respectiv, care la nivelul ribozomilor este decodificat n proteine.
/:
_ X Materialul genetic extracromozomial
Este format din ADN dublu catenar, helicoidal. Deine informaii
neeseniale pentru bacterie care se pot pierde fr a afecta viaa bacteriei,
contribuind la variabilitatea bacterian. Acest material este reprezentat de
mai multe formaiuni.
I 1. Plasmide propriu-zise, care sunt formaiuni de ADN circular, nu se
integreaz n cromozom, se afl numai n stare autonom. Ele au
capacitatea de a se replica autonom. Se cunosc mai multe feluri de
plasmide.
a. Factorul R de rezisten. Conine una sau mai multe gene
71
Caliopsia FLQREA Bacterioloie i virusologie
care codific rezistena fa de unul sau mai multe antibiotice sau
chimioterapice* poate s dein i un factor de transfer al rezistenei
(gena RTF). Este o gen care codific sinteza unui canal propriu de
conjugare, chiar n lipsa factorului F. Se multiplic independent de
ritmul de multiplicare a cromozomului.
b. Factorul col, deine informaia pentru sinteza unor J
substane cu aciune antibacterian (colicine). |
c. Factorul F, este un factor independent n citoplasm. \
d. Bacteriofagul, ca factor independent n citoplasm, cnd j
este inserat n cromozom devine bacteriofag temperat. __ ______
77^ 2. Episomii sunt formai din ADN dublu catenar, helicoidal,
de form circular. Se pot gsi n stare autonom, sau integrai n /
cromozomul bacterian. Integrarea se face prin scindarea inelului I
cromozomial, integrare i apoi refacerea inelului. Sunt formai din:
i a. Factorul F (fertility factor) care codific sinteza unui
I canal de conjugare, pilul F. Factorul JF a fost descris la E. coli [ (tulpina
K12)j n funcie de prezena acestui factor se descriu 4 tipuri de bacterii:
(1) F', bacterii femele, nu au factor F i nici pili sexuali;
(2) F+, bacterii mascule, care prezint un factor F autonom
n citoplasm precum i pili sexuali;
(3) Hfr (high-frequency recombination). Sunt celule cu nalt
frecven de recombinare, au factor F integrat n cromozom;
(4) F, au un factor F autonom n citoplasm, dar care a fost
desprins n prealabil din cromozom. ntre celula F+, mascul sau
donoare i celula F' , femel sau acceptoare, are loc un

72
Caliopsia FLOREA jBacterioloie i virusologie
transfer de material genetic, plasmide sau chiar fragmente din genom.
Prezena factorului de fertilitate reprezint prima difereniere pe linie
flogenetic.
b. Bacteriofagul, paraziteaz celula bacterian, fiind un virus
adaptat Se poate prezenta sub 2 forme:
(a) forma virulent, se multiplic pe seama celulei bacteriene
i apoi o lizeaz;
(b) forma de profag (bacteriofag temperat), acesta se include
n genomul bacteriei, replicndu-se odatpu ADN-ul nuclear. Inseria
n ADN se face rupndu-se i ADN-uI nuclear i profagul ntr-un
anumit locus. Acest profag poate aduce caractere noi bacteriei care l
ctig, prin transducie (fenomen de variabilitate genetic).
3. Secven de inserie (SI), sunt secvene foarte scurte de ADN, care
nu dein informaia necesar codificrii unei proteine, dar prin
inserarea lor n cromozom sau n plasmide i episomi duc la modificri
ale expresiei fenotipice. Aceste secvene de inserie nu se pot replica
autonom.
4. Transpozoni (Tn), sunt secvene de ADN liniar, de dimensiuni
superioare secvenelor de inserie, care dein informaia pentru sinteza uneia
sau mai multor proteine, n general n legtur cu rezistena la antibiotice.
Acestea se pot muta dintr- un locus n altul n cromozom, sau n plasmide.
Nefiind n stare autonoma nu se poate autoreplica.

Variabilitatea genetic Ia bacterii


Dup cum se tie, potrivit modelului lui WATSON i.
CRICK (1953), molecula de ADN este reprezentat n
lumea vie, deci i la procariote, de un dublu helix constituit
din dou lanuri complementare polinucleotidice (cu caracter de
polimer), format printr-o repetare de uniti dezoxiribonucleotidice,
esterificate. In fiecare dintre aceste lanuri, elementele caracteristice ale
unitilor dezoxiribonucleotidice, adic bazele azotate, purinice i

73
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

pirimidinice, sunt orientate ntr-o succesiune specific de-a lungul unei


coloane alctuit printr-o alternan regulat de dezoxiriboz i
grupri fosfat. Cele dou lanuri sunt meninute fa n fa prin puni
de hidrogen (legtur de natur electrostatic), ce se realizeaz ntre
bazele azotate aparinnd celor dou catene. Legturile de hidrogen
(datorit condiiilor stereochimice) se pot realiza numai ntre bazele
structural complementare: adenin i timin, ntre guaitin i
citozin, aceast situaie reprezint principiul mperecherii bazelor,
ea determin complementaritatea celor dou lanuri din molecula de
ADN.
Structural molecula de ADN (dac nu se ine seam de spirala sa),
evoc aspectul unei scri, n care cele dou coloane, alctuite din
dezoxiriboz alternnd cu grupri fosfat, formeaz susinerile laterale,
iar bazele azotate sunt grefate pe cele. dou coloane ctre interior si
situate fa n fa, sugernd treptele scrii. Datorit succesiunii
caracteristice a bazelor azotate, informaia genetic poate fi nscris n
macromolecula de ADN sub forma unui mesaj codificat, specificitatea
caracterelor ereditare fiind determinat tocmai de o anumit secven a
bazelor, n structura acestuia.'
Variaiile de coninut cantitativ, n ceea ce privete bazele azotate
i . alte omologii referitoare la structura chimic n moleculele ide
ADN de origine diferit, sunt folosite n ultimul timp drept criteriu
taxonomic important pentru clasificarea bacteriilor. ^
Modelul lui Watson i Crick ngduie nelegerea nu numai a
modului n care este nscris informaia genetic, ci i mecanismul
replicrii ADN.
Replicarea este iniiat printr-o despicare longitudinal
progresiv a moleculei dublu helicoidale (analogia deschiderii unui
fermoar), prin ruperea succesiv a punilor de hidrogen dintre bazele
azotate complementare a celor dou lanuri. Aceast
desfacere a dublei catene este incomplet, molecula de ADN n curs de
replicare lund forma literei Y. Fiecare dintre braele acestui Y va
servi drept matrice (model) pentru dispunerea ordonat a bazelor
complementare, sub forma unor lanuri noi, ataate de propriile lor

74
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

matrice prin puni de hidrogen. Acest proces se realizeaz progresiv i


sincronizat.
Acest tip de replicare se numete replicare ..semiconservativ,
deoarece cele dou molecule progene de ADN conin fiecare cte una
din catenele parentale, de care este legat o a doua, complementar nou
sintetizat.
Ereditatea reprezint pstrarea caracterelor de specie, a ABN-uIui
cromozomial, prin replicare semiconservativ.
Yariabilitatea reprezint apariia unor modificri fenotipice la
celulele fiice, care pot fi de scurt durat sau definitive.
Variaiile fenotipice, sunt variaii adaptative, de scurta durat, care
nu se transmit descendenilor i apar sub influena unor condiii de
mediu, fiind limitate de caracterele genotipului existent.
n variaiile genotipice modificrile aprute sunt definitive, la
nivelul materialului genetic, se transmit la descendeni prin replicare.
Modificrile la nivelul materialului genetic au loc prin:
- mutaii genetice
-.transfer i recombinare genetic.

S X^A. Mutaiile
Apar n cursul diviziunii bacteriilor, n perioada de diviziune
exponenial datorit ritmului foarte rapid de cretere n timpul
autoreplicrii. Mutaiile presupun modificarea secvenei bazelor azotate
astfel c genotipul uneia dintre celulele fiice difer de \ genomul celulei
mame. Celula care a suferit mutaia se numete mutant.

75
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

1. Schimbrile care apar n cursul mutaiilor sunt:


a. nlocuirea (substituia) unei baze purinice sau pirimidinice;
b. inseria unei baze noi;
c. deieia, suprimarea unei baze sau a unui grup de baze;
d. inversarea ordinii anumitor baze.
2. Mutaiile pot fi:
a. spontane,
b. induse. ,
a. Mutaiile spontane sunt greeli de copiere n timpul
autoreplicrii datorit vitezei de autoreplicare. Din aceste mutaii fac
parte i cele prin care unele bacterii ctig rezisten la antibiotice.
Aceste mutaii sunt rare, apare o mutaie la IO7-IO9 baze copiate.
b. Mutaiile induse sunt datorate unor factori inductori care
determin modificarea secvenei bazelor azotate:
- substane chimice (6-bromuracil, 2-aminopurina, etc.);
- factori fizici (radiaii UV i X);
- factori biologici.
c. Mutaiile pot fi punctiforme, atunci cnd modificrile
afecteaz o singur pereche de baze azotate sau extinse atunci cnd
mutaiile modific secvena nucleotidic pe o ntindere mai mare. ___
_______ _
V
/ . B. Transfer i recombinare genetic
Pentru a realiza acest tip de variabilitate genetic, este nevoie de o
bacterie donatoare de la care se face transferul de material genetic la o
bacterie receptoare.
Transferul n general se face n cadrul aceleiai specii sau ntre
specii bacteriene strns nrudite. n cadrul transferului se transmit
fragmente de ADN sau ntreg genomul celulei donatoare.
Recombinarea genetic are loc n celula receptoare, n care
ntregul genom al receptorului se combin cu fraciunea de

76
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

1. transformarea.
2. transducia,
3. conjugarea.
material genetic transferat, (excizie i integrare
prin substituie), rezultnd o nou celul cu noi
caractere genetice.
Transferul i recombinarea genetic se pot realiza prin 3
modaliti:
1. t ransformarea
a. Celula bacterian receptoare, care sufer procesul de
transformare, preia molecula de ADN transformat din cromozomul
celulei donatoare cnd se afl ntr-o anumit stare fiziologic numit
stare de competent i care, de obicei, apare n faza exponenial.
b. n aceast stare a bacteriei receptoare, ADN-ul transformat
poate strbate peretele i membrana plasmatic.
c. Primirea i integrarea unor fragmente de ADN transformat se
face cu ajutorul unor receptori cromozomici i pe calea recombinrii
genetice (crossing-over).

2. Transductia
Reprezint ctigarea materialului genetic pin intermediul
bacteriofagului.
/ a.^Bacteriofagii pot aduce material genetic de la o alt bacterie
astfel: dup integrarea bacteriofagului n genom acesta devine profag, n
anumite condiii profagul (bacteriofagul temperat) poate redeveni
virulent. Se desprinde de genom i antreneaz cu el o parte din genele
proprii ale bacteriei.
b. Ulterior, intrnd n alt bacterie i devenind profag include
n genomul acesteia i genele desprinse. - ------ -
c. Fagul se numete transductor, iar bacteriile se numesc
transductanti.
, d. Tipuri de transducie:
1. specializat (restrictiv);
75

i-
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

2. generalizat (n care genomul viral codific informaia


pentru un factor morfopoetic i pentru anumite nucleaze);
/"^3.abortiv (cu liz bacterian).
! le. Coversia lizogenic este un caz de tranducie care const n
modificarea genomului bacterian numai prin inserarea bacteriofagului ca
atare. Frecvent o bacterie nepatogen devine patogen prin capacitatea
ctigat de a sintetiza exotoxine J (bacilul difleric, streptococul).
Bacteriile lizogene (cele care ' prezint fenomenul de conversie lizogenic)
manifest noul caracter ct timp gzduiesc profagul. j Bacteria lizogen
sintetizeaz noua substan n urmtoarele situaii: fie noul caracter este
codificat de gene fagice care rmn nereprimate, fie gena respectiv se afl
n genom fiind represat, iar prin inserarea bacteriofagului este depresat
prin modificarea distanei dintre gen i represor.
;
r /' 3. Conjugarea
Spre deosebire de transformare i tranducie, conjugarea I este
un proces sexual i este necesar contactul direct dintre celula donator i
celula receptor. Reprezint transferul de material genetic de laj\donator la
acceptor prin canalul de conjugare realizat 1 ntre bacteriile F+ i cele F.
Celula donatoare posed factorul F. | Prin canal tfece citoplasm n care
este antrenat material genetic \ cromozomial i extracromozomial.
Conjugarea este calea cea \ mal frecvent de ctigare a rezistenei Ia
antibiotice.

I "V
\ V BACTERIOFAGUL
Bactcriofagul este un virus adaptat parazitrii celulelor
bacteriene. Structura morfologic este complex, fiind format din: i cap i
coad.

76
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

Capul
Msoar cca. 100 nm lungime, avnd un diametru de eca. 60 nm.
Conine ADN-ul viral (genomul). ADN-ul viral are n loc de citozin,
5-hidroximetilcitozin. Forma capului este icosaedrica, ADN-ul este
nconjurat de un nveli proteic, capsida, format din subuniti proteice,
capsomere.

Coada
Este formata numai din proteine i prezint mai multe elemente.
a. Un tub cilindric cu lungimea de 100 nm i diametrul
externde 8 nm, numit cilindrul axial. _
b. Un manon proteic, numit teaca cozii, avnd diametrul de 16
nm i lungimea de 80 nm, teaca este format din aprox. 144 uniti
proteice dispuse n inele aranjate helicoidal, cte 6 pe seciune.
Proteinele din aceast teac au proprieti contractile, putndu-i reduce
lungimea la jumtate din cea iniial.
c. Gulerul cozii are form de disc hexagonal cu diametrul de 35-
40 nm, este situat n partea proximal a tecii cozii.
d. Placa bazal are form asemntoare cu a gulerului cozii, este
situat n partea distal a tecii. De colurile ei sunt ataate croete.
Croetele sunt subuniti proteice cu care virusul se fixeaz pe
suprafaa bacteriei. De aceste croete se prind filamente proteice, numite
fibrele cozii, cu diametru de 2 nm i lungime de 130 nm. n stare de
repaus aceste fibre sunt ataate de gulerul
cozii. -----
Funciile cozii sunt de protecie, de ataare a bacteriofagului,
de penetrare a genomului viral n bacterie.
ADN-ul reprezint 60 % din greutatea bacteriofagului, iar
proteinele 40 %, acestea deinnd i proprieti antigenice.
Bacteriofagul este sensibil la ageni chimici (formol,
\ cloroform) i ageni fizici (radiaii UV i X).

77
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

J f A . Ciclul litic (productiv)


Bacteriofagul se multiplic n celula gazd. Pe suprafaa bacteriei
exist receptori specifici pentru un anumit bacteriofag. Acest ciclu se
realizeaz n mai multe etape.
1. Adsorbia bacteriofagului pe suprafaa bacteriei. Mai nti se
fixeaz fibrele, apoi croetele. De la nivelul croetelor se elibereaz
muramidaza, care lizeaz mureina, aceasta e singura enzim a
bacteriofagului.
Bacteriofagul este strict specific pentru un anumit tip de
bacterie, n cadrul aceleiai specii bacteriene exist tulpini i
sensibile Ia tipuri diferite de bacteriofagi (lizotipuri).
Relaii ntre bacteriofag i bacterie:
- ciclul litic (productiv)
1 - ciclul lizogen (reductiv)
2. Ptrunderea bacteriofagului. Peretele lizat permite intrarea
cilindrului axial, n urma contractrii cozii este propulsat ADN-ul viral
prin tubul cilindrului. Contractarea cozii este dependent de ATP i de
Ca4"*'.
3. Multiplicarea bacteriofagului.
Imediat dup ptrunderea bacteriofagului apare o scurt etap de
eclips. ADN-ul bacteriei este blocat, iar ADN-ul fagic preia toate
funciile de multiplicare i transmite sinteza propriilor iui componente
(proteine structurale).
4. Maturarea fagilor. Toate componentele aprute se
asambleaz, (proteine structurale i ADN-ul viral) formnd
bacteriofagii maturi viruleni. *,
5. Eliberarea bacteriofagilor. Bacteria i nceteaz
metabolismul, nainte ins sintetizeaz endolizina care lizeaz peretele
bacterian i permite eliberarea fagilor maturi.

78
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie
\ B. Ciclul lizogen (reductiv)
1. Fagul ptrunde n bacterie, ns i pierde virulena prin
aciunea unei substane represive bacteriene care i inhib multiplicarea.
Nu preia funciile ADN-ului bacterian. Se integreaz ca o gen nou n
cromozomul bacterian ntr-un anumit locus unde exist omologie
genetic ntre cei doi ADN. Bacteria se reproduce normai, transmind
descendenilor gena reprezentat de fag. Acest fag avirulent se numete
profag, fag lent, fag endogen sau fag temperat. v
2. Prin integrarea n genom, fagul modificaj materialul genetic
(surs de variabilitate genetic). Acest 'profag are capacitatea de a
redeveni virulent spontan sau indus, producnd
liza celulei gazd. - __
------- 3~0 celid bacterian poate fi n raport cu bacteriofagul:
a. lizosensibil, prezint receptori pentru bacteriofag, permind
multiplicarea lor, cu liz consecutiv a bacteriei;
b. lizogen, poart bacteriofagul sub form de profag,
transmindu-1 descendenilor, bacteriile lizogene pot sintetiza
exotoxine;
c. lizorezistent, nu are receptori pentru bacteriofag, fiind
rezistent la atacul acestuia.
Bacteriile lizogene (purttoare de profag) devin, de asemenea,
lizorezistente, fiind refractare la atacul altor bacteriofagi omologi.
4. Proprietile bacteriei lizogene
a. Rezistena specific (imunitatea bacterian). Bacteria lizogen
devine rezistent la atacul altor bacteriofagi omologi.
b. Inductibilitatea. Poate produce fagi maturi, viruleni, dup
aciunea unor ageni inductori:
- fizici radiaii UV sau X, temperaturi peste 40C; i -
chimici mitomicina C sau n mod natural (spontan).
\ Aceti ageni blocheaz substana bacterian represoare asupra fagului,
acesta redevenind virulent.

79
Caliopsia FLQREA Bacterioloie i virusologie
c. Poate purta un fag defectiv care nu se mai poate reactiva
niciodat.
d. Poate genera fagi recombinai genetic.
e. Contribuie la variabilitatea bacterian prin fenomenele de
transducie i conversie.

^Aplicaiile bacteriofagiei

A. Terapeutic
S-a ncercat tratarea anumitor boli bacteriene cu ajutorul i f f -
bacteriofagilor (infecii urinare), rezultatele sunt slabe. E

B. Indicator al gradului de poluare al apelor. Se testeaz ,


daca apele sunt poluate cu materii fecale prin punerea n eviden, j, de
exemplu a fagilor antiE. colt \

C. Lizotipia. Determinarea sensibilitii bacteriilor la t ! bacteriofagi


i mprirea lor pe lizotipuri (tipuri fagice). jj
1. Din punct de vedere antigenic i biochimic tipurile fagice | l
:
sunt identice.
2. Identificarea lizotipului urmrete stabilirea sursei de i ,;

infecie (filijaia cazurilor), ntr-un focar de boal infecioas. Se practic nj


cazul bolilor cu evoluie grav, n infeciile
k
intraspitaliceti. !i
' '
D. Studii de oucogenitate viral.5
Studii asupra variabilitii genetice a bacteriilor.

80
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

Fig. 5 Bacteriofagul (ultrastructura).

sJ

81
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

Capitolul VI
Relaiile microorganism-gazd uman

Relaiile microbilor cu gazda uman pot fi de: comensalism,


simbioz sau parazitism.
n relaia de comensalism microbii gzduii consum nutrieni de
pe suprafaa gazdei tar s-i aduc un prejudiciu.
In relaia de simbioz se stabilete o cooperare reciproc
avantajoas ntre microbi i gazd.
Iar n relaia de parazitism, microbul se dezvolt pe seama gazdei,
i aduce un prejudiciu care se poate manifesta printr-o stare de boal, n
acest caz microbii parazii sunt microbi patogeni.
n funcie de aceste relaii microbii pot fi:
Microbii condiionat patogeni care sunt comensali (de la cuvintele
latineti:cum = cu i mensa = mas, deci a mnca la aceeai mas) sau
patogeni numai atunci cnd scade rezistena antiinfecioas a gazdei.
Aceti microbi i manifest patogenitatea numai n anumite condiii,
relaia cu organismul gazd a fost numit oportunism, mprejurare
favorabil pentru a- i ataca gazda.
Microbii accidentai patogeni sunt contaminani saprofii ai
mediului extern i comensali sau patogeni care i manifest caracterul
limitat de patogenitate numai cnd, accidental, capt acces n anumite
esuturi unde numai pot aciona factorii aprrii antimicrobiene.

82
Caliopsia FLOREA Bacteriotoie i virusologie

Microorganisme patogene sunt microbi care nu se pot dezvolta


dect n organismul omului sau al unor animale i n dauna acestora, iar
relaia este de parazitism.
Tegumentele i o parte din mucoase care cptuesc cavitile
naturale ale organismului sunt constant populate cu microorganisme,
ceea ce alctuiete flora normal rezident i flotant a organismului.
Numai un numr mic dintre microorganismele care alctuiesc flora
normal, sunt constant i iremediabil patogene. ?
Simpla prezen a acestor microorganisme patogene pe suprafeele
epiteliale ale organismului gazd, fr ia ele s se multiplice, realizeaz
situaia de contaminare i nu de infecie. Pentru a realiza starea de
infecie, este nevoie de ptrunderea i de multiplicarea
microorganismelor patogene n esuturile gazd. Infecia poate fi urmat,
ns nu obligatoriu, de starea de boal. n funcie de reactivitatea i de
starea de receptivitate sau de rezistena organismului gazd, n urma
infeciei pot aprea consecine variate. Cnd rspunsul organismului
gazd fa de multiplicarea germenilor rmne la nivel umoral i celular,
rezult starea de infecie inaparent, n acest caz apar purttorii de
germeni patogeni care nu prezint semne de boal. Numai cnd
rezistena organismului fa de infecie este depit i survin tulburri
funcionale i/sau leziuni anatomice apare starea de boal.
Embrionul i apoi ftul, n cavitatea uterin a mamei, se dezvolt
n condiii sterile. O dat antrenat ftul n canalul de natere,
suprafeele organismului sunt expuse continuu
contaminrii cu microorganisme din mediul ambiant.
Deci contaminarea reprezint prezena microorganismelor pe
suprafaa corpului fr multiplicare i fr o reacie din partea
organismului-gazd. Contaminarea nou-nscutului ncepe cu microbii
din vaginul mamei, a minilor personalului care asist la natere, de
pe mucoasa lor nazal i orofaringean, microorganisme din aer, de pe
suprafee ce vin n contact cu nou- nscutul, din alimente.
Iar colonizarea este multiplicarea unui microorganism pe
suprafeele gazdei fr o reacie detectabil din partea acesteia (rspuns

83
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

inflamator).
Flora (microbiota) indigen sau flora microbian normal este
constituit de aceti contaminani care vor coloniza anumite zone ale
organismului uman.
Flora indigen este alctuit din flora rezident i flora flotant.
Flora rezident normal (de-a lungul existenei, s-au selectat
bacterii perfect adaptate la dezvoltarea n condiii chimice i fizice
oferite de fiecare regiune a tegumentului i mucoaselor) este alctuit
din specii saprofite (care triesc n depozitele de materie organic din
colon, spaii interdentae, carii, subunghial, interdigital, capabile s
triasc i n mediul extern) i comensale, dependente de anumii factori
de cretere oferii de celulele epiteliilor (incapabile s se dezvolte n
mediul exterior) de pe mucoase.
Flora flotant (temporar sau .tranzitorie) este reprezentat de
specii colectate din mediul extern. Timpul lor de persisten este redus
(zile, sptmni, luni), mai puin adaptate la condiiile de pe tegumente
i mucoase, persist pe pr n numr mare. n condiii de sntate acestea
nu reuesc s se nmuleasc, prezena lor este nemtiifest.
Uneori ajung pe nveliuri i specii condiionat patogene,
oportuniste, care nu depesc nveliurile normale, dar favorizate de
anumite condiii, pot s ajungn esuturi i umori i n funcie de starea
organismului poate sau nu s provoace boala.
Microbiota tegumentului
Este dominat de Staphylococcus epidermidis i ali stafilococi
coagulazo-negativi, Propionibacterium acnes, Corynebacterium spp. i
specii lipofile Pityrosporum versicolor (Malassezia furfur) care
acioneaz asupra sebumu-lui i altor grsimi de la nivelul pielii, produc
acizi grai nesaturai, cu aciune inhibant asupra dermatofiilor. La
nivelul axilei printr-un mecanism asemntor, bacteriile lipolitice sunt
rspunztoare de apariia substanelor cu miros neplcut. Aceste se
gsesc mai ales n foliculii piloi, n glandele sebacee, canaliculele
glandelor sudoripare i deci sunt influenate mai puin de splare. Uneori
acestea particip la patogeneza acneei.

84
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

Specia temporar mai des ntlnit este Staphylococcus aureus,


nsmnat pe propria piele de purttorii nazali, alte specii temporar
prezente reflect flora nazal i fecal prezent n anturaj, de exemplu:
specii patogene (streptococul hemolitic) sau condiionat patogene,
enterobacteriile, acestea sunt ntlnite mai ales la persoanele cu standard
sczut de igien personal.

Microblota a tractusului respirator superior (TRS)


Etajul superior al tractusului respirator se gsete o flor
bacterian abundent reprezentat de aproximativ 200 de specii
repartizate n diferite nie: crevasele gingivale, placa dentar, mucoasa
lingual, jugal, oro-faringe, criptele amigdaliene, nazo- faringe i
cavitile nazale. n crevasele gingivale se gsesc pn la IO9 UFC/mg
coninut, saliva conine IO8'9 UFC/ml, iar placa dentar 1011 UFC/g.
Bacteriile anaerobe predomin fa de cele aerobe n proporie de 5-10/1.
Cele mai frecvente sunt:
Bacterii anaerobe: Veillonella spp., Bacteriodaceae,
Prevotella (P. melanogenica), peptostreptococi, lactobacili,
Bifidobacterium spp., Fusobacterium spp.

85
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

Bacterii aerobe sau facultativ anaerobe: streptococi


viridans, neisserii nepretenioase, stafilococi coagulazo negativi,
Haemophilus spp., bacili difteromorfi, pneumococi.
Fungi Candida alhicas.
Bacteriile Gram-negative i pseudomonadele. apar rar la
persoanele sntoase, dar rata portajului i cantitatea lor cresc la vrstnici
i la persoanele spitalizate cu afeciuni grave.
In mod normal sinusurile paranazale i urechea medie sunt
necolonizate datorit eliminrii eficiente prin transportul muco- ciliar.

Microbiota tradusului respirator inferior (TRI)


Tractusul respirator inferior cuprinde: etajul subglotic al laringelui
pn la alveolele pulmonare, prin trahee, bronhiile lobare, segmentare,
lobulare, bronhiole.
Dei supus contaminrii microbiene, prin pulberi i aerosoli
inhalai, etajul infraglotic al tradusului respirator rmne necolonizat, n
mod nonnal, datorit unor eficiente bariere antimicrobiene.
- Filtrarea aerodinamic i sedimentarea.
- Transportul muco-ciliar, accelerat prin viteza ventilaiei
pulmonare i reflexul de tuse. n decurs de o or sunt eliminate peste
90% din bacteriile depuse pe mucoasa bronic (la aproximativ 20% din
persoanele normale au fost depistate pe mucoasa traheo-bronic bacterii
nepatogene n numr redus).
- Transportul alveolo-bronic, particulele sub 5 pm depesc
mecanismul de filtrare aerodinamic i sedimentare, dar ajung n
alveolele pulmonare, sunt fagocitte de macrofage, care antrenate de
mucus ul broniolar va fi antrenat de transportul muco-ciliar.
- Drenajul limfatic i sanguin al microorganismelor care au scpat
aciunii macrofagelor alveolare.
- O barier chimic superficial este realizat de: mucus, lizozim,
lactoferin, surfactant, al - antitripsin, interferoni.

86
Caliopsta FLQREA Bacterioloie i virusologie

- Bariera imunologic format din IgA secretoare, IgE - mastocite,


limfocite i plasmocite din corionul mucoasei treheo- bronice; IgG i
IgM circulante care stimuleaz sistemul complement i faciliteaz
fagocitoza.
Cnd sunt depite aceste bariere sau mecanisme fizice, chimice
sau imunologice, TRI se poate contamina, coloniza, i infecta cu
germenii aerobi, anaerobi, condiionat patogeni sau patogeni care
populeaz: tegumentele, TRS, sau din mediul exterior i pot da afeciuni
de graviti diferite ri funcie de segmentul afectat i de rezistena
organismului. .j
j
Micro biota tubului digestiv
n mod normal mucoasa gastric nu este colonizat de bacterii.
Dei diferite specii de: streptococi, stafilococi, neisserii, coliformi,
anaerobi, pot s ptrund o dat cu alimentele sau prin nghiirea
secreiilor oro/nazo-faringene, pH-ul sucului gastric care este ntre 1-4
(datorit secreiei de acid clorhidric) nu permite colonizarea acestor
bacterii de pasaj, multe sunt omorte n acest mediu. La persoanele cu
hipo sau aclorhidrie, numrul bacteriilor din coninutul gastric cresc
considerabil (peste 109UFC/g).
n mediul acid crescut din stomac doar Helicobacter pylori este
capabil s colonizeze mucoasa gastric i mai ales cea antral. Trei
factori fac posibil aceast colonizare:
- producerea de ureaz n cantitate mare, care hidrolizeaz ureea
cu eliberare de amoniac care tamponeaz pH-ul;
- forma spiralat i prezena flagelilor unipolari care i permit
traversarea stratului de mucus pentru a ajunge mai n profunzime la
nivelul celulelor epiteliului gastric unde pH-ul este aproape neutru;
- prezena de adezine pe suprafaa celulei bacteriene, ce realizeaz
fixarea specific, exclusiv la nivelul receptorilor epiteliului gastric.
Helicobacter pylori, stabilit n stomac poate coloniza o lung
perioad de timp, chiar toat viaa, bacteria este capabil s reziste la
fagocitoz i fa de aprarea umoral local (IgA i IgG). Spre
87
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

deosebire de flora comensal al altor mucoase, prezena H pylori pe


suprafaa mucoasei gastrice, se nsoete ntotdeauna de un infiltrat
inflamator (limfocite, plasmocite, macrofage, polimorfonucleare), cu
apariia gastritei tip B, depistat prin examen histopatologic. Eradicarea
terapeutic a bacteriei se nsoete totdeauna de vindecarea procesului
inflamator, sau dispariia sa spontan fiind condiionat de instalarea
gastritei atroflce cu metaplazie intestinal ce determin dispariia
receptorilor celulari.
Duodenul i jejunul superior sunt sterile sau puin populate (sub
IO3 UFC/ml n jejunul dominat de enterococi i lactobacili).
Ileonul este o zon de tranziie ntre stomac i colon n care att
bacteriile aerobe ct i cele anaerobe ajung la IO7 UFC/g, cele mai
ntlnite sunt: Aerobacter aerogenes, enterococi, E.coli, dar pot coloniza
i Bacteroidaceae spp., Clostridium spp., coci anaerobi.
Colonul este colonizat de bacterii anaerobe nesporulate n
proporie de 99% - IO11 UFC/g, cele mai ntlnite sunt: clostridiile,
Bacteroidaceae, Peptococcaceae, iar dintre bacteriile facultativ
anaerobe: Escherichia coli (IO8 UFC/g), Klebsiella, Enterobacter,
Proteus, enterococi i stafilococi care apar n cantiti de IO5-IO7 UFC/g.
Pe lng aceste bacterii pot exista tranzitoriu i: . mucegaiuri, levuri,
protozoare, bacteriofagi, enterovirusuri.
In intestinul sugarilor hrnii cu lapte matern, majoritatea florei
este reprezentat de Bifidium bacterium care este un bacii Gram pozitiv
anaerob nesporulat.
Flora intestinal care colonizeaz mucoasa intestinului realizeaz
un echilibru ecologic normal care este influenat de: alimentaie, vrst,
medicaie.
Microbiota tractusului urinar
Exceptnd uretra distal, tractusul urinar este normal necolonizat,
dei contaminri ocazionale ale vezicii sunt posibile, mai ales la femei
din cauza uretrei care este scurt i are un traiect direct.
. Necolonizarea se datoreaz unor bariere antimicrobiene:
continuitatea uroepiteliului care este dublat de

88
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

mucopolizaharid (un glicosaminoglican) care antagonizeaz aderena


bacteriilor lipsite de liganzi specifici;
- splarea mucoasei prin fluxul normal al urinei (are un spaiu
mort cnd are loc evacuarea complet a vezicii n cursul miciunii
normale);
- marea osmolaritate, concentraie mare de uree ca i pH-ul sczut
al urinei, fac din urin un mediu defavorabil dezvoltrii bacteriilor;
- efectele antibacteriene datorate secreiei glandelor prostatice i
periuretrae.
Uretra distal este normal colonizat cu bacterii de pe: tegumentul
perineal, din colon, din vulv. De aceea n acest sector pot coloniza:
stafilococi coagulazo-negativi, bacili difteromorfi, enterobacteriacee,
enterococi, neisserii, Fusobacterium spp., micoplasme, ocazional:
Candida, Propionobacterium, coci
anaerobi Gram pozitivi i Gram-negativi, lactobacili, micobacterii
saprofite, stafilococi aurii.

Microbiota tractusului genital masculin


Prostata, canalele ejaculatoare, veziculele seminale, canalele
deferente, epididimul, testiculele, sunt normal sterile. Aceast situaie
este asigurat prin: aciunea mecanic a miciunii i a ejaculrii, prin
lipsa colonizrii microbiene a uretrei proximale normale, dar mai ales
prin aciunea antibacterian a unui polipeptid care conine zinc i care
este eliminat de secreia prostatic. Iar uretra distal este colonizat de
speciile microbiene descrise la tractusu urinar.

Microbiota tradusului genital feminin


Tractusu genital feminin este reprezentat de: trompele uterine,
uter, vagin i vulv.
Uterul l trompele sunt normal sterile, Condiie care este asigurat
de: mueusul cervical care conine lizozim, actoferin; dar i de
imunogiobuline i maerofagele prezente n cavitatea uterin.
Flora vaginal sufer modificri n raport cu prezena hormonilor

89
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

ovarieni i instalarea activitii sexuale. Dup 2-3 sptmni de la


natere, cnd dispar hormonii ovarieni materni i pn la instalarea
ciclului menstrual i apoi n perioada post- menopauz, cnd pH~ul este
neutru, de 7, sunt prezente n vagin numeroase specii, n special bacterii
aerobe i anaerobe (IO8-IO9 bacterii/ml secreie, fiind identificate pn
la 100 de specii diferite) aceste fiind ntr-un echilibru optim. Aceast
flor normal mpiedic creterea excesiv a unor populaii microbiene
sau colonizarea vaginului cu specii patogene.
Atunci cnd se instaleaz funcia hormonal ovarian, are loc o
modificare profund a microbiotei vaginale. Secreia de estrogeni
determin ngroarea mucoasei vaginale cu depozit de glicogen n
celulele epiteliale. Dintre speciile colonizate, lactobaeilii (bacilii
Doderlein, bacii Gram pozitivi acidofili, anaerobi sau microaerofili)
sunt singurii care pot utiliza acest compus ca nutrient i deci vor prolifera
cu producerea final de acid lactic. n aceste condiii pH-ul vaginal va
scade ntre 3,8- 4,5, ceea ce va realiza condiii nefavorabile multiplicrii
altor specii bacteriene patogene, numai Candida albicans se poate
dezvolta n acest mediu acid. Mai recent s-a demonstrat c acest efect de
dezvoltare a lactobacililor ar genera producerea de

90
Caliopsia FLOREA Bacterioioie i virusologie

bacterioeine i peroxizilor de hidrogen, inhibani ai dezvoltrii


multor bacterii patogene.
Regiunea vulvar ca i uretra distal sunt colonizate de specii ale
microbioeenozelor tegumentului i colonului.

Variaiile normale ale microbiotei indigene


Ea poate fi influenat, n limite n care nu afecteaz starea de
sntate, prin variaii ale factoriilor de mediu, ale unor condiii
anatomice sau hormonale. La sugarul hrnit la sn polonul este populat
aproape exclusiv de laetobacili. O dat cu diversificarea alimentaiei se
constituie microbiocenoza asemntoare cu a adultului.
Frecvena i cantitatea, protozoarelor din colon este n funcie de
condiiile igienice i de existena individului n colectiviti.
n colectivitile de colari, Staphylococcus pyogenes este mai
frecvent n microbiocenoza oro-faringian dect la adult, la copii
naintea erupiei dentare i la edentai, lipsind crevasele gingivale,
microbiocenoza cavitii bucale este dominat de bacterii aerobe.
nainte de menarh i dup menopauz, microbiocenoza vaginal
este diferit de cea a femeii mature sexual, nu mai predomin
lactobaeilii, iar celelalte specii se diversific.

Funciile microbiotei indigene


Funcii nutritive, microbiota colonului furnizeaz gazdei
importante cantiti de: vitamine din grupul B, vitaminele E i K.
Funcia de protecie
Microbiota indigen se opune invadrii teritoriului de ctre
microbi patogeni prin fenomene de:
- antagonism microbian nespecific (competiia pentru substratul
nutritiv i spaiu vital, producere de metabolii cu aciune
antimicrobian: H2O2, pH acid);
- antagonism microbian specific (producerea de bacteriocine).

Colonizri microbiene anormale

91
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

Aceste colonizri microbiene anormale se numesc disbioze.


Aceste disbioze fac trecerea de la relaiile de comensalism i simbioz
la cea de parazitism.
Apar n urmtoarele mprejurri.
- Lipsa sau insuficiena unor bariere antimicrobiene. Acestea se
ntlnesc: la pacienii cu hipo sau aclorhidrie gastric numrul bacteriilor
din duoden i jejun depesc I06UFC/ml, cu predominana bacililor
coliformi i a bacteriilor anaerobe; plgile pot fi tranzitoriu colonizate
cu bacterii condiionat sau accidental patogene.
- Modificarea cantitativ i calitativ a substratului nutritiv oferit
pentru dezvoltare (n insuficiene digestive care intereseaz una sau mai
multe enzime). De exemplu la persoanele cu ten seboreic, excesul de
sebum favorizeaz dezvoltarea de stafilococi al cror lipaze elibereaz
n sebum cantiti mari de acizi grai care irit esuturile i favorizeaz
apariia acneei.
- Modificarea condiiilor fizico-chimice ale tegumentului.
Transpiraia- abundent n condiiile climatului cald i umed,
favorizeaz ]\ colonizarea excesiv cu Malassezia furfur (Pityrosporipn
versicolor) care determin pitiriazis verzicolor (keratomicoz).
- Modificarea receptorilor pentru liganzii bacterieni. La pacienii
spitalizai timp ndelungat i n condiii stresante, orofaringele poate fi
colonizat cu bacili Gram negativi, sub aciunea unor proteaze asupra
glicocalixului celulelor orofaringiene, determin pierderea fibronectinei.
Administrarea unor antibiotice care labilizeaz
microbiocenozele prin eliminarea bacteriilor sensibile i colonizarea
anormal cu contaminani rezisteni. De exemplu dup administrarea
unor antibiotice (macrolidelor) apar colitele

92
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

pseudomembranoase, adevrate boli ecologice, care permit


nmulirea necontrolat a Clorstridium difficile, care elaboreaz o
citotoxin responsabil de acest sindrom diareic grav. Tratamente
ndelungate cu tetracicline, determin nmulirea excesiv la nivelul
cavitii bucale, colonului, vaginului i pliurilor ano- rectale cu Candida
albicans, levur rezistent la tratamentul antibacterian, care poate iniia
infecii uneori grave.
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

Capitolul VII Aprarea


antiinfecioas nespecific,
specific, de specie i dobndit

Are la baz structuri i funcii elaborate filogenetic i ontogenetic.


Sunt mecanisme de aprare nespecific, de specie i aprare specific sau
imunitatea.
. Aprarea antiinfecioas nespecific
Este cea mai veche aprare (filogenetic) care se manifest la primul
contact al organismului cu microbii, indiferent de specie. Este reprezentat
de :
, - bariere externe antiinfecioase,
- aprarea nespecific a mediului intern.
Bariere externe antiinfecioas sunt: tegumentele i \ mucoasele.
j
^- ibQJa lcP -Ptf'&UiA
. Tegumentul
{ Reprezint cea mai eficient barier mecanic n calea 1 invaziei
microbilor. Ct timp integritatea pielii este pstrat, ea nu I poate fi
traversat (cu unele excepii) de ctre agenii infecioi sau/i chimici. Pe
suprafaa tegumentelor pot exista stafilococi i provenii din mediul ambiant,
a timp ct pielea este intact | omul nu se mbolnvete deoarece,
integritatea ei, secreiile I sudoripare i sebacee nu permit accesul microbilor
ctre esuturi.
' Dac ar exista o soluie de continuitate (neptur sau o plag) ar putea s
apar abcese sau boli grave.

94
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virus*
Mucoasele
' Reprezint o barier mai puin eficient dect tegumentele, totui ea se
manifest prin:
- glicocalixul epiteliilor secretorii nu fixeaz polimerii microbieni
de nveli care nu sunt nrudii chimic cu glicoproteinele umane,
blocndu-le posibilitatea de ataare la celule, condiie primordial pentru
realizarea infeciei;
- lactoferina (un chelator de fier) cu efect bacteriostatic;
- lizozimul din componena salivei care poate s omoar
nespecific bacteriile Gram pozitive; \j
- curgerea lacrimilor este o alt modalitate de! eliminare a
bacteriilor de pe suprafaa corneei, care este secondat de existena
lizozimului n aceast serozitate, n absena lui, blefaritele ar fi prezente
n numr mare;
- descuamarea epiteliilor de tip malpighian (mucoasa oral,
faringian, esofagian i vagina) contribuie la eliminarea mecanic i
continu a contaminanilor;
___ - temperatura corporal, are un efect benefic atunci cnd ea
crete cu 3-4 C peste 37 C, deoarece bacteriile patogene, virusurile i
tumorile sunt adaptate la 37 C, creterea ei este total defavorabil pentru
aceti agresori, reacia febril este determinat de interleukina-1 (II-1),
pirogenul endogen, eliberat de macrofage sub aciunea unor activatori
(pirogeni exogeni), II-1 vehiculat prin snge ajunge la hipotalamus'unde
stimuleaz sinteza de prostaglandine E, care deregleaz centrul
termoreglrii cu apariia consecutiv a febrei;
i - echilibrul dintre flora Gram pozitiv (reprezentat prin
\ lactobacili) i flora Gram negativ (reprezentat prin colibacili) de lx la
nivelul tubului digestiv.
Cnd lactobacilii dispar, colibacilii se nmulesc excesiv, ceea ce
duce la ncrcarea organismului cu toxine bacteriene nocive. Aceast
situaie poate s apar i dup tratamente ndelungate i agresive cu
antibiotice, care are printre alte urmri,

95
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

instalarea candidozei bucale i vaginale. n acest caz se recomand o diet


cu iaurt pentru refacerea florei lactobacililor.
Micrile cililor, peristaltismul intestinal, tuea, strnutul,
favorizeaz eliminarea mecanic a germenilor.
----- Aprarea antiinfecioas nespecific a mediului intern
poate fi mprit n dou grupe de factori: factori umorali i factori
celulari. li.

A. Factori umorali acioneaz local sau sistemic (general).


- Dintre factorii umorali cu aciune local sunt:
a. lizozimul acioneaz ca factor antipenetrant care se gsete n
unele secreii (saliv, lacrimi) i spal mucoasele, n esuturi, este o
mucopeptidaz capabil s provoace liza bacteriilor, crora le scindeaz
mucopeptidele de Ia nivelul peretelui celular;
I b. Ig A secretor, n cazul mucoaselor, sunt capabile s ' JbJocheze unele
particule virale nrudite antigenic.
- Dintre factorii umorali cu aciune sistemic, cei mai j
importani sunt. - j
1. Properdina din snge, care n prezena fraciunii C3 a (
complementului i a Mg2-1", capt proprieti antiseptice.
2. Enzimele lizozomaie (fosfataze acide, |3-glicuronidaza,
arilsulfataza*etc.) eliberate din lizozim sub influena endotoxinelor
germenilor Gram-negativi, au efect antitoxic sau bacericid. ^ ^
3. Proteinele de faz acut cum ar fi ceruloplasmina,
proteina C reactiv, care sunt sintetizate i eliberate n urma \ infeciilor
sau a leziunilor. Acestea pot activa complementul i j poate duce Ia liza
bacteriei.
4. Sistemul interferon, este o familie de glicoproteine cu rol
/important n aprarea antiviral. Exist trei tipuri de interferoni:
/ - a sau leucocitar, produs de: celulele K, macrofage,
limfoblati;

96
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

-5.p interferon produs de fibroblati;


Sistemul complement, un complex de substane proteice,
- Y interferon
numite Clq, Cir, Cls, produs de limfocitele
C2-C9, T specific
la sinteza crora sensibilizate.
particip: macrofagele
(C2-C4), ficatul (C3, C6, C9), splina (C5, C8) i epiteliul intestinal
(CI).
antiproliferativ i imunomodulatoare.
Sistemul complement este dotat cu capaciti biologice poteniale
care devin efective numai dup activarea ntr-o cascad de reacii
enzimatice care vor duce la liza celulei. ^
Sinteza lor poate fi generat de infecii virale sau inductori nevirali
(acidul poliinozilic-policitidilic). INF au trei aciuni importante,
reversibile i limitante n timp: antiviral,

- Calea alternativ care este mai veche filogenetic i nespecific,


activeaz complementul printr-un sistem iniiator declanat imediat dup
contactul cu unele structuri de suprafa a microbilor, care va duce la
activarea funciilor fagocitare a macrofagelor i granulocitelor PMN, care
devin capabile s rein i chiar s nglobeze agenii strini de organism,
atunci cnd acetia au format complexe cu anticorpii i cu unele fraciuni
ale complementului.
- Calea clasic este activat printr-un sistem iniiator declanat
prin proteina C reactiv sau prin anticorpii care au reacionat cu
antigenul omolog, ducnd la bacterioliz sau citoliz.

B. Factorii celulari ai aprrii naturale nespecifice


Ca i cei umorali reprezint mecanisme primitive de aprare
formate n timpul evoluiei filogenetice i realizate de ctre celule
fagocitare sau nefagocitare. De exemplu:

97
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

- granulocitele PMN capabile de fagocitoz activ cu distrugerea


integral a materialului fagocitat, datorit bogatului coninut n enzime
lizozomale;

98
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

\ - macrofagele care degradeaz partial i selectiv, reinnd


, doar determinanii antigenici (epitopii);
- bazofele i mastociteie cu rol fagocitar minor sau chiar absent, dar
eliberatoare de mediatori implicai n iniierea inflamaiei i facilitarea
migrrii PMN ctre locul inflamaiei.

Rezistena antiinfecioas de specie


A aprut mai recent n evoluia fi lo genetic, este rezistena genetic
determinat a indivizilor unei specii fa de infecia cu anumite
microorganisme, care sunt patogene pentru alte specii animale, sau ntre
rase i grupe de indivizi ale aceleiai specii.
Mecanismele sunt diferite.
- Condiii improprii oferite de organismele unei specii pentru
dezvoltarea unui microb. De exemplu ginile care au temperatura corpului
de 42 C, sunt rezistente la infecia cu Bacillus anthracis, pe cnd
majoritatea mamiferelor sunt receptive.
- Lipsa receptorilor celulari pentru adezinele unui microb. De
exemplu, omul nu este receptiv pentru tulpini diareigene bovine sau porcine
de E. coli, pentru c pe enterocitul omului lipsesc receptorii pentru adezinele
tulpinilor diareigene pentru
porcine. ( j}\h' Kq<l ^ l ff) <P
/
bovine i
, Aprarea antiinfecioas dobndit (specific) sau ; imunitatea
| Este realizat de moleculele de imunoglobuline cu funcie de j anticorpi i
diferite tipuri de celule efectoare care intervin direct n i neutralizarea
agresorului. Anticprpii sunt efectorii imunitii \ mediate umoral, iar
diferite celule ale sistemului imun de exemplu: limfocitele T citotoxice,
celulele NK, K, macrofagele, sunt efectoarele imunitii mediate celular.
Imunoglobulinele (Ig) sunt un grup de proteine nrudite, cu funcii de
anticorp, care se gsesc sub form de molecule libere i sau de receptori de
membran pentru antigen de pe suprafaa

99
Caliopsa FLOREA Bacterioloie i virusologie

Iimfocitelor B, efectoare ale rspunsului imun mediat umoral.


Imunoglobulinele migreaz electroforetic, n mare parte n zona
gamaglobulinelor i mai puin n cea a betaglobulinelor/ Sinteza ""lor este
realzat de limfocitele B ajunse n faza de maturare final (plasmocit). Ele se
gsesc n lichidele extravasculare i n diferite secreii exocrine. O parte din
molecule se fixeaz citofil pe receptorii pentru Fc de pe membrana
maerofagelor, limfocitele B, PMN, mastocitelor, bazofilelor etojjpeci Ig pot
exista sub form:
- molecule libere, rspndiin plasm i n alte; lichide ale
corpului; J
- sub form de complexe antigen-anticorp; [
- molecule fixate citofil la diferite celule sau esuturi (fixate prin
fragmentul Fc de 4a extremitatea COOH a moleculei de Ig i
specific prin situsul combinativ -SC- de la extremitatea NH2
terminal);
- molecule fixate n membrana citoplasmatic a Iimfocitelor
B cu rol de receptori pentru antigene. ----
n 1959 R. Porter a obinut prin tratament enzimatic cu I papain trei
fragmente: dou legau antigenul (fragmente Fab,
I fragment care leag antigenul) i unul care cristaliza, fiind denumit
fragment Fc (fragment cristalizabil).
Fiecare molecul de Ig este format din cel puin o unitate monomeric
de baz care conine patru lanuri polipeptidice: dou L (light=uor) i dou
H (heavy=greu), unite ntre ele prin puni disulfidice (-S-S-). Aceste puni
se formeaz la nivelul reziduurilor de cisteina i pot fi n interiorul lanului
sau intracatenar, i ntre lanuri diferite sau intercatenarj Ele sunt
eseniale pentru asigurarea structurii tridimensionale a moleculei i pentru
realizarea condiiilor de funcionalitate a lor.
Lanurile L sunt comune pentru toate clasele de imunoglobuline, din
punct de vedere antigenic pot s aparin a dou tipuri distincte: de tip k
(kappa) i de tip X (lambda). n molecula de imunoglobulin ambele
lanuri aparin n mod
obligatoriu aceluiai tip, adic k sau X, Aproximativ 60% dintre oameni

100
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

au moleculele de Ig cu lanuri Lk, n timp ce ia oareci Lk reprezint 5%


din Ig, predominante sunt cele cu lanuri LX
Lanurile H se deosebesc prin proprietile lor antigenice, ele
conferind caracterul de clas imunoglobulinelor. Lanul greu al
moleculelor IgM se numete p. (miu), al celor IgG-y (gamma), IgA-a
(alfa), IgE-s (epsilon) i IgD-5 (delta).
Lanurile H i L sunt legate prin legturi disulfidice \ intercatenare,
iar n ceea ce privete pe cele intracatenare, lanurile L are dou legturi
disulfidice, una la nivelul regiunii variabile V i alta Ia nivelul celei
constante C.
Situsul combinativ (SC) situat la extremitatea NH2 terminal ' a
fragmentului Fab, respectiv a moleculei de Ig, este locul prin care
molecula recunoate i leag specific antigenul, i este format din ariile
variabile i hipervariabile de pe VH i VL, fiind diferite ca form, mrime
etc.
ragmentul Fc este alctuit la clasele IgG, IgA, IgD, din
domeniile constante CH2 i CH3 unite prin legturi disulfidice, iar la
clasele IgM i IgE, din domeniile CH2-CH4.
/ Principalele proprieti funcionale ale moleculei de Ig
j mediate de ctre fragmentul Fc sunt urmtoarele:
- interactioneaz cu proteinele complementului;
- intercioneaz cu proteina A stafilococic (SpA);
- transportul transplacentar al lg este posibil datorit legrii
moleculei prin Fc la membrana celulelor placentei, procesul fiind
^ dependent de pH.
Clasa IgG reprezint 75% din totalul Ig din serul uman ^normal.
Moleculele de IgG apar dup stimulul antigenic secundar I i reprezint
principalii anticorpi: neutraliznd, aglutinani,
/ opsonici, citotoxici, fixatori de complement.
Clasa IgA este alctuit din IgA seric care reprezint 15- 20%
din totalul imunoglobulinelor serice i IgA secretorie principala Ig din
saliv, lapte, secreii nazale, bronice i
gastrointestinale. IgA secretorie este format din doi monomeri la care se

101
Caliopsia FLOREA Bacterialoie i virusologie

adaug o protein suplimentar care se numete pies secretorie.


Clasa IgM este format din imunoglobulme sub form de
pentameri, aleuii din cinci uniti identice i reprezint 5-10% din totalul
Ig serice. IgM reprezint anticorpii de rspuns primar, ^anticorpii ce apar
dup primul contact cu antigenul.
. Clasa IgD este format din Ig cu o semnificaie imunologic mai
puin important, concentraia n serul uman este sub 1%.
Clasa IgE este format din anticorpi reaginici. In momentul cnd
ptrunde n organism un alergen, anticorpii IgE fixai citofil recunosc
specific antigenul i astfel se transmit semnale la celula care elibereaz
prompt, n cantiti mari amine vasoactive de tipul histamin, serotonin.
Aceste substane provoac contracia muchilor netezi i crete
permeabilizarea vaselor sanguine, genernd simptomatologia a
hipersensibilitii de tip imediat.

Antigenele
Sunt substane strine (non self) sau necunoscute ca proprii
organismului, care ptrunse n organism sunt capabile s declaneze un
rspuns imun (specific).
Proprietile antigenelor:
- antigenicitatea (sau puterea imunogen) este proprietatea de a
produce un rspuns din partea organismului;
- specificitatea este capacitatea de a produce un rspuns imun
specific, adic de a induce sinteza de anticorpi, care se combin
jioar eu antigenele care au indus rspunsul.
Condiii de antigenicitate:
- s fie non self (strin organismului sau nerecunoscut ca
proprie);
- s aib o greutate molecular (GM) mai mare de 10.000 de
daltoni, cele care au GM mai mic nu sunt antigenice, dar pot

102
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

I deveni antigenice prin legare de macromolecule, se numesc t haptene;


\ - s aib o configuraie spaial,
\ - structura chimic s fie ct mai complex (secundar,
\ teriar,, cuaternar). ,
Clase de antigene \
- Proteinele sunt cele mai puternice antigene. i
- Glucidele pot deveni antigene numai legate de proteine. j Hi
- Lipidele nu sunt antigene, ele devin antigene prin legare de
proteine (complexele fosfolipoproteice).
- Acizii nucleici sunt slab antigenici.

I Imunitatea mediat umoral -------- c ,


/ Ptrunderea unui antigen n organism este urmat de modificri celulare
1

j
care preced apariia anticorpilor. La locul de ptrundere a antigenelor apar
polimorfonuclearee, urmeaz mobilizarea macrofagelor care iniiaz
rspunsul imunologic prin prelucrarea antigenului. El este fagocitat i
catabolizat pn la j structurile care dein informaia genetic.
1 Urmeaz faza de predare a informaiei antigenice-macrofag,
celulelor imunocompetente limfocitelor T i B.
Dup preluarea informaiei urmeaz o etap activ de difereniere
a limfocitelor T i B. Acestea se transform mai nti n imunoblaste i
ulterior prin diviziuni succesive n plasmocite mature.
Limfocitele B se difereniaz n plasmocite i limfocite B cu
memorie, Plasmocitele nu se divid. Ele produc imunoglobuline pe
ntreaga perioad de viabilitate, de 4-5 zile.
Limfocitele B cu memorie persist o perioad mare de timp i ele
iniiaz rspunsul de tip secundar.
La stimulul primar plasmocitele rspund cu formare de anticorpi,
ce apar n snge dup 8-10 zile. n prima faz ele aparin IgM.
Anticorpii se combin cu antigenele care au provocat

103
Caliopsia FLQREA Bacteriologic i virusologie

formarea lor i n majoritatea cazurilor conflictul se ncheie n mod


favorabil pentru organism, pot s apar urmtoarele efecte:
- neutralizarea unui factor de patogenitate al germenului:
anticorpi antitoxici neutraliznd: antitetanici, antidifterici,
antistreptolizin, antistreptokinaz, antistafilolizine, etc.;
- opsonizarea, prezena unei molecule de IgG la suprafaa unei
capsule sau a unui perete bacterian rezistent la ingestie, permite adeziunea
la fagocit i nglobarea i distrugerea sa;
- bacterioliza, provocat de fixarea Ig-lor pa bacterie cu activarea
complementului i perforarea peretelui bacerian;
- citotoxicitatea celulelor, mediat de antidorpi. Fixarea
microorganismelor pe anticorpi legai de unele celule, antreneaz
degranularea acestor celule (PMN, bazofile, eozinofile i mastocite).
Degranularea produce eliberarea de histamin i ali mediatori chimici cu
consecine de ordin patologic. Acest tip de aprare se adreseaz bacteriilor
invazive cu multiplicare extracelular, mpotriva celor cu multiplicare
intracelular intervine rspunsul imun celular.

mediat celular
^ ^ Este realizat prin limfocitele T, macrofagele i alte celule ! int a
rspunsului imun (celule infectate, tumorale, de transplant).
! Acestea nu pot distruge direct virusurile sau bacteriile (cu | excepia
macrofagelor), dar distrug celulele n care ei sunt / cantonai microbii,
adic cuibul lor. Anticorpii celulari sunt reprezentai de limfocitele T
specific sensibilizate care au pe I suprafaa lor sedii de recunoatere i
cuplare specific cu l^antigenul.
\ Celulele T specific reactive sunt cuprinse n dou clase ^ majore:
| - celulele T-reglatoare, care cuprind dou subpopulaii
\ denumite T-helper (ajuttoare) i T-citotoxice (supresoare);
\

\
- celule T-efectoare, au dou subpopulaii: celulele T- secretoare de
factori biologici activi-limfokine i celule citotoxice-ucigae, care
determin moartea celulei int prin contact direct cu antigenele de pe
104
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie
membrana acesteia i inducerea unui efect biochimic citotoxic.
In afara limfocitelor T, mai intervin n citotoxicitatea mediat
celular, celula K (uciga), celula NK (nativ uciga) i macrofagul
activat.
Figura 6 Structura imunoglobulinei

105
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

Jjf' Capitolul Vni


!
j?' Staphylococcus

Stafilococii fac parte din familia Micrococcaceae, genul


Staphylococcus. Pn n anul 1997 au fost individualizate 33 de specii,
dintre care 16 specii au putut fi izolate de la om: Staphylococcus aureus
i 15 specii de stafilococi coagulazo negativi. Speciile de importan
medical cele mai identificate sunt: Staphylococcus aureus care d cele
mai multe infecii la om, Staphylococcus epidermidis face parte din flora
indigen, dar poate produce ocazional infecii i Staphylococcus
saprophyticus care poate da afeciuni n sfera uro-genital.

^ Caractere generale.
) Morfologie
| Sunt coci sferoizi de dimensiuni de 0,8-1,5 pm dispui n j diplo sau n
grmezi neregulate n general necapsulate (exist i j tulpini de S. aures
ncapsulate), imobili, nesporulai, aerobi, \ facultativ anaerobi, saprofii sau
patogeni, Gram pozitivi, posed \ catalaz i descompun glucoza prin
fermentaie ( Y Caractere de cultur
1 Crete pe medii simple, suport mediile hiperclorurate (pn
la 10-15 g % NaCl). Pe mediile de cultur solide formeaz colonii x\ de
tip S (smooth-neted). Elaboreaz pigmeni endogeni (ce \ coloreaz doar
cultura, nu i mediul). Staphylococcus aureus
. r
r>
r* \ ' l
<) \
.
^u-iAiy
o fa
(wouw ,f-y 7
( J Bacterioloie i virusologie
Caliopsia FLOREA V /IBacteriologie i virusologie Caliopsia FLOREA
\ elaboreaz un pigment auriu, Staphylococcus epidermidis elaboreaz un Staphylococcus epidermidis se gsete pe tegumente i mucoase
pigment alb, Staphylococcus saprophyticus pigment galben. un este identificat mai ales n infeciile intraspitaliceti (nosocomiale) sau
Al Caractere biochimice^ infecii grave la persoane tarate.
Elaboreaz pigmeni; auriu, alb i galben. Elaboreaz hemolizine alfa i Staphylococcus haemolyticus a fost ntlnit n: endocardit,
bata (cercetri recente au mai identificat septicemii, peritonit,. ITU, plgile chirurgicale ale osului i
articulaiilor. /4f pr> UWJJJ
Staphylococcus saprophyticus este un agent etiologic frecvent
ntlnit n ITU la femeile tinere, n perioada fertil, uretrite
,c ; /70c negonococice, prostatite, infecii ale plgilor, uneori
m a au fO
7f4Striictiir antngerae septicemii. 4; o ! ^'Rezisten J " Rezist la uscciune ,i
Stafilococul are antigene somatice i solubile, 47
ntuneric, sunt sensibili la dezinfectante i antiseptice n concentraii
!. Antigeaele somatice intr n structura C/lQ.O
uzuale. Ctig uor rezistena la antibiotice. Expui la temperatura de 55-
___ _ celulefi'^" j 60 C, timp
| (Nucleoproteina P se ntlnete la stafilococii/patogeni sau j I I de 15 mi n sunt distrui, pasteurizarea este eficient. /
\ nepatogeni); Staflocoqul^auriu contine^rotelna A, numai l !
(h>o.o:aOAcer- " W O i O - c i t e lOKO/yti
i/iXZJU yuivxu WAlOUi OUI Ulipui 1 *
Diagnosticul de laborator al infeciilor stafilococice
J) Antigene solubile sunt de 3 tipuri:
m ipciyyiu
li'
~ - hemolizine: alfa, beta, gamma i delta, qiyaty t0piagnosticul bacteriologic
!
- enzime solubile (coagulaza, leucocidina, hialuronidaza, __
1. Recoltarea produselor patologice: Puroiul din
catalaza, fibrinolizina, lipaze, RN- i DN-aze). leziuni^deschise sau
i - exoloxine (enterotoxine) care sunt elaborate cnd stafilococii sunt
nchise: secreii otice, conjunctivale, exudate nazale i faringiene, sput,
lizogeni, adic purttori de bacteriofagi, pot - I produce toxiinfecii
exudat peritoneal, lichidul cefalorahidian, urin, secreie vaginal, materii
alimentare (HA) sau oc toxic. Au fost i identificate 8 seotipuri
fecale, vomismente, snge, probe alimentare incriminate n TIA, material
antigenice, din care 7 (A, B, CI, C2, C3, D I i E) sunt implicate n HA,
necroptic.
iar unul, F, este asociat cu sindromul de oc toxic. fenirf'-Jct-* r
Prelevarea probelor se face n funcie de afeciunea stafilococic
V //Habitat diagnosticat clinic, n condiii de sterilitate.
Staphylococcus aureus colonizeaz nrile, colonul, de unde
contamineaz frecvent tegumentul.
\

107
106
Caliopsia FLORE A Bacterioloie i virusologie

2. Examinarea macroscopic i microscopic (prin examen


direct) al produsului patologic.' ~ T
- Puroiul din infeciile stafilocoeice este de consisten groas, cu o
nuan aurie, fetid.
Pentru examenul microscopic direct din produsul patologic se
execut frotiuri care se coloreaz cu albastru de metilen i Gram.
A

In frotiu se pun n eviden coci Gram pozitivi, grupai n ciorchine, sau


diplo, intra i extracelular, care predomin numeric, alturi de ali
germeni Gram pozitivi i Gram negativi, leucocite,
1 detritusuri tisulare etc.

3. jnsamnare i izolarea
nsmnarea se face pe medii de cultur n raport cu produsul
patologic recoltat:
a. Puroiul care provine dintr-o leziune nchis (abces, flegmon) se
nsmneaz pe bulion simplu i geloz nclinat, pentru obinerea de
colonii izolate.
b. Puroiul care provine dintr-o leziune deschis, conine i
alt flor microbian, de aceea" se nsmneaz pe medii hiperclorurate,
care favorizeaz creterea stafilococilor, este mediul elecjtiv, pentru c
restul de germeni sunt inhibai datorit coninutului crescut de sare. f De
aceea se folosete mai nti mediul hiperclorurat lichid (rianit 1%, NaCl
7,5%), Chapmann, dup o incubaie de 24 la 37 C se efectueaz trecere
cu dispersia culturii microbiene pe mediul hipercldrurat solid Chapmann
n plci Petri pentru a se obine colonii izolate cu incubaie la 37 C, timp
de 24-48h. '
c. Exudatele nazale i faringiene, materiile fecale, vomismente,
probele alimentare i materialul necroptic, deoarece conin i flor de
asociaie, se nsmneaz ca i puroiul din leziuni deschise.
4. Citirea i interpretarea rezultatelor
Dup o incubare de 24 h la 37 C n bulion, staflococii
tuburFffifoffi ^diul, formnd un depozit la fundul eprubetei./ jPe.gelpz
stafloeocii dau natere unor colonii mari de 1-2 mm 0,. bombate,

108
Caliopsia FLOREA Bacterioioie i virusologie

cremose, rotunde, cu margini regulate,biTsuprafa neted de consisten


moale care se detaeaz uor de mediu.
Aspectul coloniilor de stafilococi prezint variaie morfologic n
funcie de structura antigenic i virulena germenilor.
^Pot's"fie1 colonihde'tip:,. ,,S (smooth), R (Rough), (mucoase),
G (glossy) pitIce.^^^|r^^^F^ljXi h;!.' Xj 'r
Staflococii .patogeni elibereaz frecvent hemolizine, 'care se pun n
eviden pe medii gelozate cu snge 5-7%. Cel mai frecvent produc alfa
hemoiizin, care determin dup o incubare de 24 h la 37 C o zon ngust
de hemoliz, complet de tip beta n jurul coloniei.
Staflococii de origine animal produc mai frecvent o beta
hemoiizin, care determin o hemoliz de tip cald-rece, adic o hemoliz
discret apare dup ce cultura este inut 24 h la 37 C, care se clarific
cnd placa cu agar-snge se va ine la 4 C 24 h, va apare o zon de beta
hemoliz n jurul coloniei.
Citirea culturii pe mediul solid Chapmann se face la 24-48 h la 37
C. Staflococii pot fermenta manita din mediu, dezvoltnd colonii galbene
de cele mai multe, ori sunt patogene,jcele care nu fermenteaz manita
produc colonii ce nu modific -aspectul mediului.

}- 5. Caractere de patogenitate
Pentru aceasta se vor obine culturi pure (dintr-o singur colonie de
stafilococ) apoi se face subculturi pe geloz nclinat i n bulion.

109
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

Teste de patogenitate in vitro


a/Testiilde pigmentogenez
Stafilococii patogeni elaboreaz cel mai frecvent un pigment !
galben-auriu.
Ir b* Testul heinolizei
jMajoritatea stafilococilor patogeni sunt hemolitici. Cei de ' provenien
uman produc alfa hemoiizin, care produce j hemoliza total a
eritrocitelor (beta hemoliza). jc. Testul fermentrii manitei
I Stafilococii patogeni fermenteaz manita, n acest scop se j folosesc medii
care conin mani (mediul Chapmann solid sau 1 ap peptonat"^tuhiesoiat
cu manit 1%). Prin fermentarea ] manitei se produce acidifierea mediului/
i virajul culorii indicatorului, de ia culoarea roz-violet va virajn galben.
'" d. Testul coagulazei v4

Stafilococii patogeni au proprietatea de a coagula plasma \ uman,


de iepure i de cal, acesta este un caracter important de patogenitate.
A

In practic se folosesc dou 2 tehnici de evideniere a coagulazei


staftlococice:
! - Testul pe lam pentru coagulaza legat Clumping
factor
I Plasma se obine prin amestecarea 9 ml snge uman sau de iepure cu 1 ml
EDTA sodic, sau oxalat de potasiu i amoniu i (amestec Wintrobe), se
centrifugheaz i se preleveaz supernatantul, sunt i preparate liofilizate.
Se emulsioneaz 1-2 colonii ;ntr-o pictur de AD steril pe lam de
microscop, pentru a obin o suspensie lptoas se adaug j o pictur din
plasma nediluat, proaspt. n cca. 10 secunde apar aglutinine mari, n
cazul unei reacii pozitive. Absena , aglutinrii n 2-3 minute, testul este

n tub.

negativ i se recomand testul

110
Caiiopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

- Testul n tub pentru coagulaza liber


Se repartizeaz n tuburi de hemoliza 0,5 ml plasma j oxalatat, peste
care se adaug 0,1 ml din cultur pur de stafilococ de 16-20 h n bulion
sau coninutul unei anse din mediul solid, concomitent se folosesc doi
martori: pozitiv (S. aureus), negativ (S. epidermidis).
! Se incubeaz la 37 C, se citete reacia prin nclinarea 1 tubului la
intervale de 30 min., n primele 4 ore, se poate incuba | pn la 24 ore.
' \'
Test pozitiv: apariia unui vl de fibrin, indiferent de gradul ei,
dac nu apare dup 4 ore se incubeaz peste noapte [i se citete reacia.
Test negativ: absena coagulri i cu incubare peste noapte, i
j
Tulpinile patogene de stafilococ elaboreaz coagulaza n proporie de
97%, fiind un test de mare fiabilitate, j e. Testul fibrinolizinei
i Stafilococii patogeni secret fibrinoiizin, care lizeaz
! coagulul de plasm format de coagulaza. Prezena acestei enzime se
pune n eviden prin nsmnarea tulpinei de stafilococ ntr- un mediu
cu 7 pri geloz nutritiv i o parte plasm oxalatat.
1 Dup o incubare de 12-18 ore la 37 C, se observ n jurul I coloniilor

de stafilococ o zon clar, datorit topirii cheagului de


1 fibrin. ___ * ,: ..
- ---- f. Testul evidenierii catalazei
\ Stafilococii sunt eatalazo pozitivi, spre deosebire de j streptococi care
sunt eatalazo negativi. Se poate executa prin I tehnica rapid pe lam, n
care se depune pe lam o pictur dintr- i o soluie de peroxid de hidrogen
30%, apoi se preleveaz o ans \ bine ncrcat din cultura de testat pe
geloz simpl i se amestec I cu pictura de peroxid. Apariia imediat a
bulelor de gaz indic j prezena catalazei. Este contraindicat prelevarea
coloniilor de pe | geloz-snge deoarece hematiile posed catalaz i
falsific \ rezultatele.
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie
I \g. Testul fosfatazei
/ Este utilizat pentru diferenierea speciilor de stafilococ.
j Staphylococcus aureus posed n echipamentul enzimatic
I fosfataza cu ajutorul creia desface molecula de fosfat de fenolftalein
punnd n libertate fenolftalein, prezena ei se 1 evideniaz n mediul
bazic. Se folosete agar nutritiv la care se
\ adaug 0,01% fosfat de fenolftalein, incolor. Dup nsmnare
^ cultura se incubeaz 18-20 h la 37 C, apoi se aeaz n capacul s cutiei
Petri un disc de hrtie de filtru mbibat n amoniac. Dup \ 1-2 min coloniile
cu fosfataza pozitiv se coloreaz n rou, cele
care nu posed fosfataza nu se coloreaz.

JU Teste de patqgenitH ia yivjo>!!L "'


Administrarea toxinei stafilococice i.d la iepure, pune n eviden
aciunea dermonecrotic, prin apariia unei zone de necroz la locui de
inoculare.
A

In cazul TIA, tulpina izolat din materiile fecale, vrsturi sau


alimentele incriminate se nsmneaz n geloz semisolid 0,5% i se
incubeaz ntr-o atmosfer cu 20% CC^, 48 h. Mediul se filtreaz i se
fierbe 30 min la'100C. n acest fel n filtrat rmne activ numai
enterotoxina stafilococic, care rezist la fierbere i sj pune n eviden
prin testul Dolman./ Se inoculeaz la pisoi tnr (3 sptmni - 3 luni
cu greutatea de 350-750 g), 1-3 ml filtrat, ifttraperitoneal. Dup 15-120
min apare o stare de agitaie, nelinite, urmate de contracia muchilor
abdominali, diaree, vrsturi somnolen. Dup 24-48 h animalul i
revine la normal.

6. Cercetarea sensibilitii la aciunea bacteriofagilor


n anumite situaii epidemiologice, mai ales n mediul
intraspitalicesc, lizotipia bacteriofagilor are o aplicabilitate direct.
\
\

112
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie
i
Pe baza sensibilitii la bacteriofagi, stafilococii patogeni coagulazo-
pozitiv se pot diferenia n tipuri bacteriofagice (lizopipuri) incluse n 4
grupe fagice.

^7.ftarea sensibilitii Ia antibiotice


Se realizeaz din cultur'pur, dup identificare. Se face j conform
standardului pe mediul MdelLer-Hinton. Se folosesc ' antibiotice i
chimioterapice din grupele: (3-lactamine, p-lactamine / n asociere cu
inhibitori de p-lactamaz, aminoglicozide, macrolide, chimioterapice,
rifampicin, chinolone.
Infeciile cu S. aureus meticiinorezistent, cu rezisten 'l multipl la
antibiotice, incluznd toate antibioticele p-lactamice i I adesea macrolidele,
aminoglicozidee, cotrimoxazolul etc., sunt / dificil de stpnit, mai ales cnd
evolueaz n mediul de spital.
I
Tabel II Schema minimal de difereniere a principalelor specii de
stafilococi recomandat de subcomitetul pentru Taxonomia
Staflococilor i Micrococilor (1976)
Caractere S. SL S.
aureus epidermidis saprophyticus
Coagulaza liber + - -
Fosfataza + -

Novobicin/5|ig/disc-rezistent - - +
Acidifierea zaharozei(aerob) + + +
Acidifierea trehalozei(aerob) + - -l-
JxBoala
Acidifierea la om
manitolului(aerob) + - d
^Afeciunile pe care
Intre 6-15% din tulpinile stafilocociile
de S. epidermidis dau le potfosfatazei
testul provocanegativ
oamenilor
sunt diverse:
- afeciuni cutanate: furuncule, foliculite superficiale,
hidrosadenit (infecii ale glandelor sudoripare n axil), sicozis
(furuncule profunde al foliculului pilos la brbai)

113
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

- septicemii, septicopiemii cu localizri viscerale; :


- angine, otite, meningite, sinuzite;
- poate suprainfecta plgile tuturor leziunilor deschise;
- osteomielite;
- tulpinile care elaboreaz enterotoxina poate, proyoca toxiinfecia
alimentar (TIA);
- sindromul pielii oprite (sindrom Lyell) produs de o toxin cu
aciune exfoliativ asupra epidermului;
- sindromul de oc toxic stafllococic, produse de toxine: endo
i exotoxine;
- n urma administrrii n exces a antibioticelor poate s apar
enterita stafilococic.

114
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

Capitolul IX
Streptococcus

Streptococii fac parte din familia Streptococcabeae, genul


Streptococcus, unele specii sunt patogene, altele fac parte din flora
indigen a orofaringelui, tractului intestinal, al pielii.
Cele mai importante specii pentru patologia uman sunt:
Streptococcus pyogenes, Streptococcus agalactiae, Enterococcus,
streptococii viridans, i Streptococcus pneumoniae.
Morfologie: sunt coci dispui n lanuri, Gram pozitivi, sunt
saprofii, patogeni sau condiionat patogeni. Au dimensiuni de 0,5-1
pm, au n peretele bacterian o concentraie de murein mare (80%),
sunt imobili, nesporulai, uneori pot prezenta capsul, ce le confer o
mare virulen.
Habitat: sunt ubiquitari (ntlnii peste tot) i n special pe
tegumente i mucoase.

Caractere de cultur
Cultiv pe medii lichide cu snge Pike (bulion gucozat cu azid
de sodiu i cristal violet 1/4000 cu 5% snge), iar pe mediu solid,
geloza snge 5%, se recomand snge de berbec, care poate s conin
cristal violet 1/4000 i acid nalidixic (mediu selectiv pentru
streptococi).

Pe mediul lichid
Cresc sub form de flocoane care se depun pe perei sub form
de fulgi i las un sediment pe fundul eprubetei, formele

115
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

5R;cei care au capsul (foarte patogeni) dau o turbiditate omogen mediul,


formele S.

Pe mediile solide
- streptococii patogeni pe geloz-snge dau colonii de tip S,
cei care au capsul au aspect de colonii M;
- colonii mate (matt) rotunde, cu margini regulate, cu
suprafaa manielonat, de consisten apoas, cu tendin la confluen,
care da aspectul de hart geografic, aspectul este determinat de
streptococii viruleni, care conin substana M;
- colonii glossy, G rotunde, mici, cu suprafaa bombat,
lucioas, translucid, conin forme mai puin virulente;
- colonii 5,R (rough), uscate, cu- margini neregulate, cu
suprafa rugoase, forme degradate fr structur antigenic.

Caractere de hemoliz
Dimensiunile coloniilor de streptococ sunt mult. mai mici I
dect de stafilococ (care au un diametru de 0,5-1 mm), sunt 1
incolore i dau hemoliz. n funcie de elaborarea hemolizinei j
streptococii se mpart n 4 categorii:' [
1. Streptococi a hemolitici (elaboreaz hemolizina a ) ei j
metabolizea^ incomplet hemoglobina i dau o culoare verde n \
j
jurul coloniilor. Din aceast categorie fac parte streptococii viridans, ei sunt
saprofii, condiionat patogeni. j
2. Streptococii a hemolitici (elaboreaz hemolizina a ), ei
1 1
j
metabolizeaz complet hemoglobina, dr este o hemoliz n care j
mai sunt hematii nehemolizate ~ incompleta, marginile coloniei i
sunt neclare. n aceast categorie intr serogrupurile B i D j
streptococice, sunt saprofite sau condiionat patogene. \
3. Streptococii p hemolitici (elaboreaz hemolizina p), dau |
hemoliz beta, care este complet, foarte ntins, coloniile avnd j
marginile clare. Din aceast categorie fac parte serogrupurile: A |
(care este totdeauna patogen), C, G. !

116
Caltopsla FLOREA Bacterioloie i virusologie

4. Streptococii y, sunt nehemolitici, nu elaboreaz hemolizine,


n aceast categorie sunt multe tulpini din serogrupul D.

Caractere biochimice
Elaboreaz hemolizine (a, a1, p) sau nu produc. Sunt aerobi, dar
pot fi i microaerofili sau chiar facultativ anaerobi cum sunt cei din
grupul D, enterococii.

Rezistenta
9

Au rezisten sczut, sunt distrui de razele UV, dezinfectante


i antiseptice la concentraii uzuale. Sunt distrui la 55 C timp de 20
min. Streptococul din grupul A este sensibil la penicilina G, care se
administreaz parenteral, oral.
Streptococul din grupul D este rezistent la concentraii mari de
NaCl 6,5%, la variaii mari de temperatur, la aciunea bilei i a
srurilor biliare (ca i viridans) i la aciunea multor antibiotice.

Structura antigenic
Streptococii au antigene somatice i solubile.
a. Antigenele somatice:
1. Antigenul capsular, la cei cu capsul (format din acid
hialuronic) i care poate fi distrus de o enzim proprie, hialuronidaza.
2. Antigenul M, se gsete pe suprafaa peretelui, pe baza
acestui antigen se mparte n 65 de serotipuri, iar organismul produce
anticorpi anti-M.
3. Carbohidratul C (se gsete n profunzimea peretelui
bacterian). Pe baza acestui antigen, streptococii se mpart n 19
serogrupuri (notate de la A-W, cu excepia literelor I i J), este
clasificarea lui Lancefield, de aici lipsesc streptococii viridans care nu
au carbohidratul C.
b. Antigene solubile
Exotoxina se numete erltrotoxina, are afinitate pentru piele,
determin exantem (la nivelul pielii), sau enantem (la nivelul

117
Calopsia FLOREA Bacterioloiei virusologie

mucoaselor). Exotoxina apare doar cnd streptococii sunt izogeni,


deci purttori de bacteriofg. Exotoxina determin scarlatina,
exotoxina este aceeai pentru toii streptococii, de aceea anticorpii
anti-exotoxina, ofer protecie.
Alte antigene solubile: hialuronidaza, flbrinolizinele:
streptolizina O, care va determina organismul s rspund prin formare
de anticorpi (ASLO) i streptolizina S care este responsabil de p-
hemoliz, proteinaze, DN-aze i RN-aze, carbohidraze.

Multiplicare i invazivitate
Caracterul de patogenitate prin multiplicare este dat de proteina
M care determin afeciuni la poarta de intrare. Iar invazivitatea este
dat de enzimele litice, care determin apariia de focare secundare
propagate din aproape n aproape. Ele determin infecii acute, dintre
care unele se pot croniciza. Infeciile datorate multiplicrii i
invazivitii sunt: infecii cutanate (erizipel, abcese, colecii
purulente), angine, infecii respiratorii (rinite, sinuzite, pleurezii),
meningite, abcese n diferite organe, endocardit, etc. '

Toxigeneza
Doar streptococii de grup A au aceast proprietate, pentru c ei
au receptori pentru bacteriofagi, devenind izogeni, ei dau scarlatina.

Boli prin hipersensibilizare


Apar n urma mecanismului de hipersensibilizare de tip ii
(citotoxic), de tip 111 (complexe imune), pot s apar boli

118
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

autoimune post-streptococice: reumatism articular acut, eardita


reumatismal, eritem nodos, coree, glomerulonefrit.

Streptococii grup A {Streptococcus pyogenes)

Diagnosticul de laborator

1. Diagnosticul bacteriologic
Prelevarea produselor patologice care pot ffc exudate, puroi din
coleciile purulente sau plgi, snge pentru h&moculturi, etc. J
Insmnarea prelevatelor atunci cnd se suspicioneaz etiologia
streptococic se recomand s se fac o nsmnare n mediul lichid,
bulion Pike, 24 h la 37C, apoi se va msma de pe mediul lichid,
pe mediul solid, geloza snge 5-7% pentru strptococi, se recomand
ca sngele s fie proaspt i de berbec. Se incubeaz la termostatul de
37C, 24 h.
Citirile, se repic numai coloniile de cel mult 1 mm diametru,
treansparente i cu o zon ntins de p-hemoliz. Aceste colonii se vor
dispersa pe sectoare pe geloz snge pentru streptococi n vederea
obinerii culturii pure (o cultur obinut dintr-o singur colonie). Din
aceast cultur pur se vor face toate testele pentru identificarea
grupului serologic i testarea sensibilitii la substanele
antibacteriene.
Identificarea grupului serologic se face prin reacii Ag - Ac i
sensibilitatea la chimioterapice. .c
- Testul la bacitracin se evideniaz grupul A (singurul sensibil
Ia acest antibiotic). Reacia este pozitiv cnd apare o zon de
inhibiie a creterii de 10 mm n jurul discului de bacitracin de 0,04
UI sau 0,1 UI, dac colonia este de alt grup atunci colonia se dezvolt
normal (este rezistent).
- Reacia de coaglutinare evideniaz grupurile A, B, C, G, D.
Este o reacie de aglutinare pe lam prin care anticorpii
cunoscui, cuplai cu proteina A stafilococic, reacioneaz cu agentul
(antigenul) necunoscut. n acest fel complexele Ac-Ag sunt
119
Caltopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

transformate n corpusculi i pot fi vizualizai.


- Reacia de precipitare n inel se folosete pentru evidenierea
grupelor serologice.
- Testul SXT (discuri de sulfametoxazol-trimetoprim)
difereniaz grupurile A i B rezistente de grupurile C i G sensibile.
Diagnosticul bacteriologic se termin cu testarea sensibilitii ia
antibiotice i chimioterapice numai dac se face recomandarea de ctre
clinician ntrct Streptococcus pyogenes este sensibil ia p-lactamine.
Dac se recomand antibiograma, ea se ma face pe geloz snge de
berbec 5% sau mediul solid Mueller Hinton snge de berbec 5%.

2. Diagnosticul imimologic
La 2-3 sptmni de la debutul infeciei streptococice respiratorii
acute, incorect tratat sau netratat, se poate instala una din
complicaiile grave nesupurative: glomerulonefrita acut (GNA),
reumatismul articular acut (RAA), sau febra reumatismal (FR),
cardita reumatismal (CR), coreea, eritemul nodos. Apar n urma
mecanismului de hipersensibilizare de tip II(citotoxic), IlI(complexe
imune).
Diagnosticul imunologic se face uzual prin reacia ASLO. (care
reprezint titrul anticorpilor anti sjtreptolizin 0) ea poate stabilii:
diagnosticul, prognosticul, eficiena tratamentului.
Un titru mai mare de 200 u ASLO/ml arat o infecie
streptococic n antecedente, daca dup 3 sptmni de tratament nu
scade titrul anticorpilor la normal, tratamentul se repet, dac nu scade
nseamn c s-a instalat reacia de hipersensibilizare, n acest caz
pacientului (sub tratament pe antibiotice, de preferat penicilin) i se va
determina lunar titrul ASLO, un titru care se
normalizeaz arat vindecarea. Se va face monitorizarea lunar a titrului
ASLO.

Patogen itate
Streptococii grup A pot de infecii acute ale: tractului respirator

120
Calopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

(forma eruptiv- scarlatina, forma neeruptiv: angina, faringita, etc).


Mai poate da: otita medie, sinuzita, meningita, pneumonie,
bronkopneumonie, pleurezie, endocardita acuta.
Localizarea cutanat a infeciei treptococice este mai frecvent
n zonele calde: intertrigo, impetigo, zblu (infecia comisurii
bucale), celulite, abcese, flegmoane. .
Erizipelul este o infecie streptococic cu localizare cutanat, la
nivelul gambelor, feei, cu caracter recidivant.
Virulena streptococilor piogeni este dat n special de
proprietatea antifagocitar, care depinde de prezena componentelor
celulare de suprafa: acidul hialuronic capsular i proteina M.

Streptococii grup B (Streptococcus agalactiae)

Este identificat n grupul B pe baza polizaharidului specific prin


gruparea Lancefield. Fac parte din flora comensal a omului i
animalelor, se izoleaz din: vagin, uretr, faringele adultului sntos i
de pe suprafeele cutanate (ombilic), faringe, conductul auricular al
nou-nscuilor contaminai de la mame n timpul travaliului.

Infeciile umane cu streptococi grup B


La copil sunt dou forme:
- forma precoce, septicemic, se izoleaz n primele ore, 2- 3 zile
de la natere, care poate avea o evoluie fudroiant, fatal n 60-70%
din cazuri;

121
Caltopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie
- forma tardiv, meningitic, apare n a 10-90 a zi de la
natere, cu mortalitate mare de 20%, cu sau fr sechele neurologice,
infectarea se face prin transmitere nosocomial de la purttori
faringieni din mediul ambiant. Alte forme tardive la copil mai pot fi
sub form de: pneumonie, otit medie, abces pulmonar, artrit septic,
osteomielit, conjunctivit etc.
La adult infecia se poate manifesta sub form de: avort,
septicemie post-partum sau postabortum, ITU etc.
Caractere culturale, biochimice, biologice
- Aceti streptococi prezint hemoliza a', care poate fi
evideniat mai bine prin testul CAMP, testul CAMP este pozitiv
pentru streptococii grup B, se realizeaz cu ajutorul discurilor
impregnate cu (3 toxin (hemolizin) stafilococic, sau prin
nsmnarea n striuri perpendiculare a tulpinii de testat i a
stafilococului p hemolitic. n jurul coloniei apare o zon de p hemoliza
datorit nsumrii celor dou hemoizine,
- Pe geloz Columbia produce colonii pigmentate n rou.
- Rezist la concentraii mari de bil (ca i cei din grupa D).
- Nu hidrolizeaz esculina.
Streptococii din grupul B pot elibera bacteriocine cu activitate
specific pentru streptococii B i unele tulpini din grupul D, nu sunt
active fa de alte specii microbiene.
Sensibilitatea la antibiotice este mai sczut, de aceea se
recomand efectuarea antibiogramei i asocierea P-laetaminelor i a
aminoglicozidelor.

Streptococii viridans

Aceti streptococi dau hemoliza de tip a, n jurul coloniei i


colonia vor fi verzi (dup meninerea peste noapte ia 4 C, poat s
mai apar la exterior un inel de hemoliz complet). Sunt 5 grupuri de
specii care pot da infecii umane. Cele mai importante sunt:
- grupul mutcms, cu specia S. mutans, cariogen; ,

122
Catiopsia FLOREA - Bacterioloie i virusologie

- grupul saivarius, unele specii produc ureaz, un caracter distinct din


acest gen;
- grupul sanguis, care hidrolizeaz esculina; * ;

- grupul mitis;
- grupul anginosus. -
Se gsesc n cavitatea bucal, tract urogenital, piele, sunt
germeni saprofii sau condiionat patogeni, ei pot da endocardita lent
malign. Nu conin n structura peretelui carboliidratul C, deci nu sunt
inclui n clasificarea Lancefield. \j
Pentru diagnosticul diferenial cu Streptococcus pneumoniae,
care au acelai tip de hemoliza (alfa), se efectueaz testul sensibilitii
la optochin, al bilolizei i fermentrii inulinei, toate sunt pozitive
pentru pneumococ i negative pentru Streptococcus viridans.

Streptococii de grup D {Enterococcus)

Se mai numesc enterococi, cele mai cunoscute specii sunt E.


faecahs, E. faecium, E. bovis. Pot produce hemoliz de tip a sau (3 pe
mediu de geloz-snge cca. 1/3 din tulpini, restul sunt nehemolitici.
Pe agar cu bil-esculin i azid de sodiu, coloniile enterococilor sunt
albe-cenuii cu halou negru. .
Se caracterizeaz printr-o rezisten crescut la temperaturi
ridicate (pn la 40-60 C), capacitate de dezvoltare la variaii mari
de temperatur (ntre 10-45 C). la pH alcalin (9,6). Enterococii sunt
sferici, ovalari sau cocobacilari dispui n perechi sau scurte lanuri,
Gram pozitivi, n majoritate imobili cu excepia speciilor: E,
gallinarum i E. casseliflavus, care sunt mobile. '
Ei determin infecii urinare, genitale, endocardite subacute
(pn la 20% din totalul lor). Se recomand s se fac testarea
sensibilitii la antibiotice i chimioterapice atunci cnd se izoleaz
enterococi. Prezena n ap sau alimente a enterococilor
arat contaminarea fecal a acestora, decelarea lor servind ca test de
poluare.

123
Calopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

Streptococcus pneumoniae (pneumococul)

Morfologie
Sunt coci lanceolai dispui n diplo cu dimensiuni de 1/1,5 pm,
pneumococii viruleni au capsul care nconjur ambele celule, dispui
cu capetele rotunjite fa n fa. Sunt imobili, nesporuai, Gram
pozitivi, majoritatea sunt saprofi, dar sunt i tulpini patogene, nu se
gsesc n natur.

Caractere de cultur
Cresc numai pe medii ce conin snge, cei ncapsulai dau colonii
de tip S. Sunt hemolitici, coloniile sunt mici, transparente i
nconjurate de o zon de hemoliz a, ca la streptococii viridans.
Pneumococii se pot cultiva pe geloz ocolat, care este mai nutritiv,
unde se poate pune n eviden hemoliz a, n atmosfer de 5-10%
CO2, care stimuleaz creterea.

Caractere biochimice
Sunt sensibili la bil, la optochin, fermenteaz inulina.
i
Rezistent9

Sunt sensibili n mediul extern, se transmit prin picturile


Pfliigge, sunt distrui de razele solare, de dezinfectante la concentraii
uzuale. Majoritatea tulpinilor sunt sensibile la penicilin.

Structur antigenic
Are antigene somatice i solubile, cel mai important este Ag SSS
(Substana Solubil Specific), din constituia capsulei,

124
. Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

avnd o structur polizaharidic, Ag SSS mparte pneumococii n 83


de serotipurl (serotipul 3 d cea mai mare capsul).

Caractere de patogenitate
Pneumococii ncapsulai sunt patogeni prin multiplicare i
invazivitate, nu are capacitate de toxigenez. Determin pneumonia
franc lobar (localizat doar la nivelul unui singur lob).

Diagnosticul de laborator
Se practic diagnosticul bacteriologic, produsul patologic cel mai
folosit este sputa, doar primele 14 grupuri serologice sunt patogene.
Sputa n afeciunile pulmonare pneumococice este ruginie,
puroiul este de consisten cremoas, fibrinoas de culoare verzuie.
Frotiurile din produsele patologice se coloreaz Gram i albastru
de metilen. Se vor pune n eviden coci lanceolai, dispui n diplo sau
lanuri scurte, nconjurai de capsul, Gram pozitivi, leucocite, intra i
extracelulari precum i detritusuri celulare etc.

Identificarea pneumocociior
Se face cu ajutorul unor teste biochimice i serologice, pe cultur
pur.
- Biloliza (fenomenul Neufeld) lizarea culturilor de
pneumococi prin adugarea de bil, caracter care l difereniaz de
Streptococcus viridans.
- Testul sensibilitii la optochin (ethilhidrocuprein). Pe o plac
de geloz snge, pentru streptococi, se nsmneaz un sector dintr-o
cultur pur suspect, n centrul ariei se depune un disc de optochin de
5 pg, dup 24 h la 37 C se citete rezultatul, tulpina de pneumococ
fiind foarte sensibil n jurul discului va
apare o zon de inhibiie a creterii de 10 mm, test pozitiv pentru
pneumococ. . > .
- Fermentarea inulinei - se nsmneaz o cultur pur de
pneumococ n mediul Hiss, ce conine inulin, fermentarea inulinei
schimb culoarea mediului, prin schimbarea pH-uIui la acid prin
125
Caliopsia FLOREA Bacteroloie i virusologie

descompunerea zahrului.

Identificarea serologic prin:


- Reacia de aglutinare. Se realizeaz cu o suspensie de germeni
n cultur pur, n mediu lichid care se pun n contact cu serurile
specifice de tip, la o reacie pozitiv apar aglutinine. n arealul nostru
geografic, se realizeaz identificarea serogrupurilor 1,2 i 3.
- Tehnica de umflare a capsulei (reacia Neufeld), prin tratarea
cu ser antipolizaharidic specific de tip are loc o mrire a capsulei.
- Inocularea la oarece se practic pentru aprecierea virulenei
tulpinii izolate. Se inoculeaz oareci albi. Dup moartea sau
sacrificarea animalului se autopsiaz i se pune n eviden
pneumococul n produsele patologice recoltate.
Tratament cu: penicilin, cefalosporine, eritromicin.
Antibiograma nu este necesar pentru c sunt sensibili la
medicamentele de mai sus.

* . Capitolul X
Listeria, Erysipelothrix, Corynebacterium
(bacili Gram pozitivi nesporulai)

j * * :
' * X
- -

Listeria . .H
Genul Listeria cuprinde cocobacili sau bacili Gram pozitivi,
nesporulai, mobili prin flagelii peritrichi, sunt aerobi sau
microaerofili, cultiv la temperaturi cuprinse ntre 1-45, C,
fermenteaz carbohidraii fr producere de gaz, sunt catalazo-

126
Caliopsia FLOREA Bacteriolaie i virusologie

pozitivi i oxidazo-negativi. ........


Genul Listeria cuprinde ase specii: L. monocytogenes, L.
ivanovii, L. innocua, L. welshimeri, L. seeligeri i L. grayl

Habitat
Germenii sunt rspndii n natur (ap, noroi, scurgeri de canal,
vegetaii, fecale). Listerioza este o zoonoz, infecia la.om apare
accidental i foarte frecvent evolueaz inaparent. Poate afecta omul
mai ales prin consumul de alimente contaminate. Grupele de risc
major l reprezint: femeile nsrcinate, nou- nscuii, pacienii
imunocompromii i vrstnicii.
Cea mai important specie pentru patologia uman este Listeria
monocytogenes. ,,s;-
Infecia cu listerii are un caracter invaziv, pentru c se pot
multiplica n enterocite, supravieuiete intraceluar, i se multiplic
intramacrofagic. Trec n snge, iar bacteriemia primar este. uima
de localizri secundare (meninge, .endocard, cu tropism accentuat
pentru placent i fat).

127
Caliopsa FLQREA Bacterioloie i virusologie

Boala la ora poate avea urmtoarele localizri:


meningoencefalice, otice, conjunctivale, cutanate, plcentare.

Diagnostic bacteriologic

Caractere de cultivare
Listeriile sunt bacterii aerobe sau facultativ anaerobe, cresc pe
medii uzuale suplimentate cu snge, lichid de ascit sau glucoz ntre
0-45 C, optim la 20-37 C i n atm. de CO2 10%.
Pentru izolarea din produsele patologice se folosete mediu
selectiv: bulion triptoz i NaCl 10% sau bulion triptoz cu telurit de
K 0,05%. se poate ine bulionul nsmnat la 4C, 10-14 zile. timp n
care germenii de asociaie sunt distrui n timp ce Listeria se
multiplic.
Se fac treceri pe mediul solid cu geloz i glucoz 2%, se
incubeaz 24-48 ore la 35-37 C, coloniile de Listeria au diametrul de
1-1,5 mm, rotunde, netede, uor bombate, transparente, formele S,
asemntoare cu picturile de rou, examinate n lumin oblic, la 45,
apar cu irizaie bleu-verzuie. Uneori pot fi forme R.
Pe agar. cu 5% snge, coloniile de L. monocytogenes sunt
nconjurate <j\u o zon ngust de p-hemoliz. Pe medii solide degaj
un miros caracteristic de lapte acidulat.
Pe mediile semisolide, agar 0,3%, dup nsmnare prin nepare
i incubare la temperatura camerei crete sub forma unei umbrele la 3-
5 mm de suprafaa agaruluf.

Caractere microscopice '


Se fac frotiuri colorate Gram din sedimentul produselor dup
centrifugare (n cazul organelor dup mojarare, filtrare sau din
amprente). Se pun n eviden cocobacili Gram pozitiv cu capete
rotunjite cu dimensiuni de 0,5-2/0,4-0,8 im, intra i extracelular.
n culturile tinere, incubate la 35-37 C, apar formele scurte,
cocobacilare, n timp ce n culturile vechi apar formele filamentoase
de 6-20 pm.
128
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

Caractere biochimice
- testul catalazei pozitiv, oxidazei-negativ,
- p-hemoliz pozitiv,
- testul CAMP, se va nsmna Staphylococcus aureus sau de
Rodococcus equi sub form de striuri ntr-o singur direcie pe placa
de agar-snge, iar tulpinile de Listeria perpendicular. Hemoliza L.
monocytogenes este mai accentuat n apropierea striurilor de
stafllococ sau R. equi
- fermentarea carbohidrailor, producerea de acid din L-
ramnoz, a-metil-D-manozid.

Aciunea agenilor fizici, chimici i biologici


L. monocytogenes este foarte rezistent n mediul extern. n
produsele alimentare de origine animal (lapte, carne, ou), n
vegetale, n furaje sau nutreuri nsilozate, n straturile superficiale ale
solului, n apele de suprafa, poate supravieui sptmni, luni sau ani.
Rezist la temperaturi sczute, multiplicarea este favorizat de
umiditate (25-30%). Rezist 20 min la formol 2,5% i permanganat de
potasiu 2,5% - 5 min.
Germenul este sensibil la: ampicilin, eritromicin,
tetracicline, rezistent la: acid nalidixic, polimixin.

Caractere antigenice
Se fac aglutinri pe lam, apoi n tuburi cu serul polivalent
antilisteria, apoi monovalent de tip I i IV (mai frecvent).
Test de patogenitate
Testul Anton prin instilarea unei picturi din cultura din bulion
de L. monocytogenes de 24 ore, n sacul conjunctival, la oareci, dup
24-36 ore produce o kerato-conjunctivit purulent, uneori cu
ulceraii. Iepurele este i el sensibil n doze ceva mai mari, infectarea
parenteral cu 0,5-0,8 ml cultur, omoar animalul n 3-5 zile, la
autopsie se constat noduli necrotici n ficat i capsulele suprarenale.
Aproximativ 50% din listeriozele umane evolueaz ca infecie

129
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

perinatal.
Contaminarea gravidelor se poate face prin consumarea unor
produse de la animale bolnave (lapte, came, ou), dar i din praful
contaminat. Ftul se poate contamina de la mam prin 3 moduri:
transplacentar, de la lichidul amniotic i n timpul naterii de la colul
uterin. n aceste cazuri, germenul, se poate izola din lohii i lichidul
amniotic. Macroscopic existena acestei infecii se pune n eviden
prin apariia unor noduli albi-glbui de 3-4 mm, care se observ la
suprafaa placentei, iar la nou-nscutul decedat se observ n plmn,
ficat, suprarenale, faringe, esofag, tegumente. La nou-nscut,
listerioza se manifest precoce i tardiv (dup a 5 a zi postnatal).
Forma precoce apare mai ales la prematuri, iar cea tardiv la
maturi. Forma precoce are aspectul unei septicemii sau pneumonii, iar
cea tardiv sub forma unei meningite purulente, conjunctivite
purulente sau pneumonii. La mam are o evoluie de sindrom
inflamator nespecific.
Se izoleaz la nou-nscut din: coninut gastric, snge, LCR,
urin. 1

Diagnosticul se pune n eviden pe baza caracterelor de cultur,


biochimice, cultiv foarte bine pe ou embrionate de gin ct i pe
culturi celulare. Cel mai rapid diagnosticul se pune prin
contraimunoelectroforez care pune n evideni antigenele solubile
specifice din produsele patologice amintite.

130
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

Erysipelothrix '
Genul Eiysipelothrix cuprinde dou specii E. rhusiopathiae i
mai nou E. tonsilarnm, sub form saprofit sau patogen. E.
Rhusiopathiae este agentul cauzal al infeciei umane sub denumirea
de erizipeloidul lui RosenbacH5 o dermit acut, care evolueaz n
jurul porii de intrare, ca un placard rou-violaceu cu margini bine
delimitate i extensie centriped. Durerea local este discret sau
absent. Rar infecia evolueaz sistemic cu artrite, endoeardita, abces
cerebral. La animale afeciunea poart denumirea de rujet. Frecvent
izolat din canalele ajbatoareor, sol, furaje i ape de suprafa
contaminate. l
E. tonsillarum, recent izolat de pe amigdalele porcilor sntoi,
poate cauza endocardite la cini, dar iar semnificaie la om.
Sunt bacili subiri, imobili, necapsulai, nesporulai cu tendin
la cretere filamentoas, sunt Gram pozitivi, dar se decoloreaz uor
i pot aprea Gram negativi. Sunt aerobi, facultativ anaerobi, C02 5-
10% stimuleaz creterea, sunt catalazo i oxidazo-negativi, produc
FLS pe TSI, fermenteaz glucoza i lactoza.

Caractere morfologice i de cultur


Sunt bacili imobili, necapsulai, nesporulai, Gram pozitivi, cu
dimensiuni de 0,8-2,5/0,2-0,4, izolai, n perechi unghiulare, grmezi
sau lanuri scurte. Sunt aerobi, facultativ anaerobi, cresc la 37 C i la
pH de 7,4. , . . : , s.
Aceste bacterii pot crete pe medii obinuite, dar creterea este
mbuntit prin adugarea n mediu de glucoz, ser de cal, triptofan,
riboflavin, acid oleic. = :
n mediile lichide, creterea este relativ slab, formele S
produc o uoar tulburare a mediului, dup 48 ore dezvolt un
sediment redus. Formele Rdezvolt o cretere cu flocoane i
tendin la sedimentare rapid.
Pe mediile solide, dup 48 ore de incubare, coloniile S sunt
foarte mici (1-1,5 mm), convexe, transparente, netede cu margini

131
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

regulate. Coloniile R sunt mai mari turtite, opace cu suprafaa


neregulat. nsamnarea prin nepare n gelatin, tulpinile S
prezint o cretere n form de perie.
Pe geloz-snge de oaie, coloniile S prezint o uoar hemoliz
de tip alfa.

Aciunea agenilor fizici, chimici, biologici


Erysipelothrix rhusiopathie este un germen destul de rezistent
pentru un nesporulat, n form uscat poate persista civa ani. Este
distrus rapid prin fierbere. Rezist la operaiile de srare. afumare i
acidifiere. n cadavre rmne viu, datorit mediului alcalin peste patru
luni. Formolul 2%, NaOH 1%, fenolul 5% omoar germenul n cteva
minute.
Este rezistent la sulfamide, polimixina B i sensibil la penicilin,
cefalosporine, streptomicin.

Infecia experimental
oarecele i porumbelul sunt foarte sensibile la infecia cu E.
rhnsiopathiae.
\
Diagnosticul de laborator
Este ^bacteriologic, se pune pe baza caracterelor: morfologice,
de cultur, biochimice,
E. tonsillarum se deosebete de E. rhnsiopathiae prin
capacitatea lui de a fermenta zaharoza.
!
Corynehacteriam
Genul Corynebacterim include mai multe specii de bacili Gram
pozitivi (poate fixa colorantul neregulat i pot avea incluziuni de
polimetafosfat), uor incurbai, mciucai, aezai n V, L, mici
grmezi neregulate, sau n palisade, nesporulai,
necapsulai, imobili, aerobi i facultativ anaerobi, catalazo pozitivi.
n ultimii ani, studiile taxonomice au redefinit genul
Corynebacterium meninnd numai 23 de specii.

132
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

Speciile pot fi separate n trei grupe distincte dup habitat i


patogenitate:
- Corynebacterii patogene pentru om i animal,
- Corynebacterii patogene pentru plante,
- Coiynebacterii nepatogene.
Dintre Corynebacteriile patogene pentru om, grupul
Corynebacterium diphtheriae reunete trei specii: C diphtheriae cu 4
biotipuri (gravis, mitis, intermedius i belfanti ), C. ulcerans i C.
pseudotuberculosis.
Coiynebacterium diphtheriae are capacitatea de a elabora
exotoxin n urma conversiei genetice. Este agentul cauzal al difteriei.
Difteria este o boal infecioas grav, care n forma ei caracteristic
se manifest printr-o leziune la poarta de intrare, cel mai frecvent la
nivelul amigdalelor, unde produce un exudat fibrinos, aderent: falsa
membran de culoare gri-maronie (diphthera = membran), ea se
formeaz local sau se extinde acoperind faringele, obstrucionnd
arborele traheo-bronic producnd crup laringian, asfixie mecanic. La
adpostul falsei membrane, bacilii i continu multiplicarea i sinteza
de toxin. Tulpinile lizogene (infectate cu bacteriofag tox+)
sintetizeaz toxina eliberat extracelular i difuzat n organism pe
cale sanguin i limfatic produce leziuni importante la nivel cardiac
(miocardit), nervos (demielinizare), renal (necroz tubular),
suprarenalian, muscular i hepatic.
Diagnosticul de laborator este bacteriologic. Este un diagnostic
de mare urgen.

133
Caliopsia FLQREA Bacterioloie i virusologie

Habitat
B. difteric se izoleaz de Ia bolnavi, din falsa membran, de
pe mucoasa nazal, ocular, vulvar etc. Poate infecta unele leziuni
cutanate, poate fi identificat n ulceraiile profunde ale pielii,
reprezentnd difteria cutanat.
B. difteric poate fi izolat din gtul sau nasul purttorilor sntoi
unde poate persista timp ndelungat, mai poate fi izolat de la animale
(cai, cini, maimue) purttoare sau bolnave.

Caractere morfologice, tinctoriale


Cultivat pe medii elective, sunt bacili Gram pozitivi, la limit,
cu dimensiuni de 3-8/0,5 jxm, uor incurbai, mciucai, pleomorfi,
aezai n unghiuri ascuite (V, L) sau cu aspect de litere chinezeti.
Prezint o colorabilitate inegal din cauza granulelor de polifosfai
care apar evidente n special prin coloraia metacromatic (corpusculii
Babe-Emst) sau dup decolorare prelungit n coloraia Gram.

Caractere de cultur
B. difteric este un germen aerob facultativ anaerob care se
dezvolt la 37 C, la pH de 7,4-7,6, crete bine pe mediul electiv
Loeffler (ser coagulat de bou, glucozat 1%). Izolarea din produse
patologice se face pe geloz snge i pe medii selective Tinsdale,
Gundel-Tietz (care conine: geloz-snge-cistein-telurit de K).
Pe mediul Tinsdale (care conine geloz-ser-cistin-telurit-
thiosulfat), Corynebacterium diphtheriae produce dup 24-48 h de
incubare la 37C, colonii mici, negre cenuii, nconjurate de un halou
brun (datorit H2S care rezult din metabolism i reacioneaz cu
srurile de telur). Bacilii pseudodifterici cresc sub form de colonii
negre, fr halou brun, n timp ce C. ucerans produce un halou foarte
intens.
Pe mediul Gundel-Tietz n funcie de aspectul coloniilor pot fi
difereniate trei tipuri biochimice (biotipuri) de C. diphtheriae: gravis,
mitis i intermedins, avnt proprietatea de a reduce teluritul de potasiu

134
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie
n telur metalic, de culoare neagr.' Dup incubare 48 h la 37C i
apoi 2-3 zile la temperatura laboratorului:
- tipul gravis produce colonii negre, mari, cu suprafaa
granulat cu aspect de margaret (margini crenelate, centru ridicat i
striuri radiale); .
- tipul mitis produce colonii mai mici, negre, cu margini
regulate;
- tipul intermedius colonii negre cu aspecte intermediare
ntre primele dou: talie mai mare, suprafa granulajr, centrul uor
mamelonat, margini regulate, transparente.
Pe geloz-snge bacilii difterici produc colonii rotunde,'
friabile, cu suprafaa uor granular, de culoare alb-gri perle.
Pe mediul Loeffler bacilii difterici produc colonii albe, care
seamn cu picturile de spermanet (substan gras cu aspect de
cear).

Caractere biochimice i de metabolism


Pentru cretere, bacilul difteric are nevoie i de factori de
cretere (vitamine, aminoacizi) care se gsesc n serul i sngele
introdus n aceste medii. Tulpinile toxigene elaboreaz o exotoxin,
specific, de natur proteic, responsabil de simptomele de
toxiinfecie difteric. Bacilul difteric produce cistinaza care
descompune cistina cu formare' de hidrogen sulfurat, dar nu
hidrolizeaz ureea (ureazo-negativ). Bacilul difteric, indiferent de
biotip, fermenteaz constant glucoza, maltoza i evuloza i nu
fermenteaz zaharoza i manita. n funcie de fermentarea
polizaharidelor bacilii difterici au fost mprii n trei biotipuri:
1
"'
- tipul gravis fermenteaz: dextrina, amidon, glicogenul;
- tipul mitis nu fermenteaz nici un polizaharid; :
- tipul intermedius fermenteaz, uneori tardiv, numai dextrina.

135
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

Rezisten la ageni fizici, chimici i biologici


Bacii ii difterici sunt rezisteni la uscciune, sensibil la
antisepticele uzuale l distrug n cteva minute. Este sensibil la:
eritromicin, penicilin, bacteriofagi specifici.

Caractere antigenice
Au fost descrise antigene somatice (Ia nivelul peretelui
bacterian), dar nu s-a realizat o schem antigenic de identificare,
exotoxina este puternic antigenic i este comun tuturor tulpinilor de
C. diphtheriae. Filtratul de cultur reprezint toxina brut, care supus
aciunii combinate a formolului i cldurii se detoxific,
transformndu-se n anatoxin. produs dotat cu caliti antigenice dar
lipsit de orice urm de toxicitate.

Imunitatea
Este preponderent antitoxic, se obine dup trecerea prin boal
sau dup vaccinarea profilactic cu anatoxina difteric.

Diagnosticul de laborator este bacteriologic


Se recolteaz produse patologice att de la bolnavi ct i de la
purttori i se face prin izolarea, identificarea germenului precum i
stabilirea caracterului toxigen al tulpinii.
Recoltarea se face din exudate cu tampoane sterile, dimineaa
p^jnemncate, nainte de a face tratament cu antibiotice.
De la bolnavii sau suspecii de angjina difteric se recolteaz trei
tampoane din secreia faringoamigdalian i un tampon nazal.
De la cazurile suspecte de difterie cu alte localizri se recolteaz:
un tampon din secreia faringoamigdalian, un tampon din secreia
nazal i un tampon din leziunea cutanat sau mucoas suspectat.
De la coritacii din focare de difterie sau de la purttori sntoi
se recolteaz un tampon cu exudat nazal i un tampon cu secreie
faringoamigdalian.
Diagnosticul bacteriologic
La bolnavi, tamponul nr.l (din cele trei) va servi pentru efectuarea

136
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

frotiurilor colorate: Gram, albastru de metilen, Del Vecchio [(pentru


evidenierea granuaiilor metacromatice, n soluia apoas de albastru
de metilen 10% se adaug hidrat de K 0,l%o)]; tamponul nr. 2 de va
nsmna pe mediile solide: Tinsdale, Gundel-Tietz, geloz-snge,
Loeffler; iar tamponul nr. 3 este incubat 16-18 h la 37 C n mediul de
mbogire O.S.T. (ou- ser-telurit), dup timpul de incubare se fac
treceri pe mediile solide de mai sus.
Tampoanele din celelalte secreii (nazale, oculare, din plgi etc.)
se mbogesc n mediul O.S.T. i dup incubare n condiiile descrise
se vor trece pe mediile solide corespunztoare.
Dup incubarea pe medii solide, 24-48 h, se vor face repicri una
sau dou colonii reprezentative pe un tub cu mediu Loeffler, sau n
sectoare cu mediu geloz snge, i frotiuri din toate aceste medii i
colorate Gram i Del Vecchio, pentru stabilirea caracterelor
morfologice microscopice.
Apoi se fac nsmnri din mediul Loeffler pentru punerea n
eviden a caracterelor biochimice (fermentarea zaharurilor n mediul
Hiss cu indicator Andrade, proba cistinazei pentru evidenierea H2S,
proba ureazei n mediul Blake-Cristensen).
Toxigeneza vitro se face prin testul de precipitare n gel
E.O.F. (Elek, Ouchterlony, Frobisher), sau77in vivo" la cobai prin
inoculare s.c. a culturii, dup 24-48 h, cobaii mor cu evidenierea
semnelor de intoxicaie difteric.
Testarea producerii de toxin pe culturi celulare, sau prin alte
metode: Wesem-blot, ELISA, PCR pentru subuniti ale genei tox (+).

o*

137
Caliopsia FLQREA Bacterioloie i virusologie
Capitolul XI
Familia Bacillaceae

Bacil Gram pozitivi sporulai: Bacillus i Clostridium

In aceast grup de bacterii fac parte bacili Gram pozitivi


sporulai aerobi, facultativi anaerobi i bacili Gram pozitivi sporulai
anaerobi. n aceast familie se ntlnesc specii saprofite i patogene
pentru om i animale, germenii patogeni pentru om i aparin
genurilor Bacillus i Clostridium

Genul Bacillus
Germenii din acest gen sunt bacili cu dimensiuni mari 3- 10/1-
1,5 pm, dispui n lanuri sau izolai cu spori centrali sau subterminali,
mobili sau imobili, ncapsulai (n produsele patologice), se cultiv
uor pe medii simple, n condiii de aerobioz.
O singur specie, Bacillus anthracis este patogen pentru om i
numeroase animale, unele specii: B. cereusl B. subtilis contamineaz
frecvent orezul, fructele uscate pot provoca uneori infecii umane, alte
specii B. larvae etc. produc infecii la albine sau diferite insecte, specii
thmofile: B. coaguans, B. stearothermophilas sunt izolate din
nmoluri ca i din alimente supuse unei prelucrri termice (zahrul
din sfecl, conserve n cutii din tabl).
Specia Bacillus anthracis 1

Este una din cele mai importante specii patogene pentru om din
acest gen. Acest bacii se mai numete bacteridia erbunoas este
agentul patogen al antraxului (crbunelui), este o antropozoonoz.

Patogenitatea este dat de caracterele de invazivitate i de


toxigenez. ^
- Factorii de invazivitate sunt agresinele \ (proteaza,
lecitinaza) i capsula. * - .. ^
138
Caliopsia FLOREA . Bacterioloie i virusologie

- Toxigenez este dat de exotoxina erbunoas.'


Antraxul se transmite la om prin contactul cu animalele
bolnave sau cu produsele provenite de la animalele bolnave (produse
prelucrate: piele, ln; produse proaspete: carnea) i prin contactul cu
pmntul n care se gsesc spori de bacili crbunoi (aa numite
puni blestemate) i foarte rar prin contactul interuman. Cea mai
frecvent form de antrax este forma cutanat care poate mbrca trei
forme clinice:
- Pustula malign (buba neagr sau dlacul),1 localizat mai ales
pe fa, gt, membre. La locul de inoculare apare o vezicul cu lichid
sero-sanguinolent, urmat de o ulceraie mic ce se usuc i d natere
unei cruste negre (crbunele). Regiunea subiacent leziunii prezint
uii edem gelatinos, nedureros..
- Edemul malign, atunci cnd edemul este extins, febr
ridicat, stare toxic, de fapt este este o form grav a crbunelui
cutanat.' i * ^ '
- Antraxul visceral, cu un pronostic mai puin favorabil,
crbunele pulmonar (pneumonie sau bronhopneumonie hemoragic
nsoit de septicemie) crbunele gastro - intestinal (scaune
sanguinolente, stare toxic, colaps i mortalitate ridicat) i
meningoencefalita erbunoas este o form foarte grav aproape
totdeauna mortal. '
Diagnosticul de laborator este bacteriologic

1. Recoltarea produselor patologice


Se face n funcie de afeciunea clinic: serozitate din vezicul
sau pustu, lichidul de edem din crbunele cutanat, sputa din
crbunele pulmonar, materiile fecale din crbunele gastrointestinal,
LCR, sngele din toate formele clinice i materialul necroptic la
decedai, alimente.

2. Rezistena la factori fizici, chimici i biologici


Formele vegetative sunt distruse la 55 C n 40 min, iar la 60 C

139
Caliopsia FLORE A Bacterioloie i virusologie

n 30 min.
Sporii sunt foarte rezisteni la factorii din mediu: sunt distrui
prin fierberea apei n 15 min, prin autoclavare la 120C instantaneu, n
2 ore la 160 C, cldur uscat. n frotiurile fixate i colorate nu i
pierd vitalitatea. La temperaturi sczute sub 0 C, sporii rmn viabili
i dup 10 ani. n sol, sporii se conserv dup 30 de ani.
Substanele dezinfectante distrug n concentraii uzuale formele
vegetative, n schimb sporii au o rezisten mai mare.
B. anthracis este sensibil la penicilin, eritromicin,
cloramfenicolj^ sulfamide. Este sensibil la bacteriofagul gamma.

3. Caractere morfologice
Serozitatea i lichidul de edem din crbunele cutanat au un
coninut hemoragie, sputa din formele pulmonare este hemoptoie,
materiile fecale din, formele gastro-intestinale sunt sanguinolente.
'
Frotiurile realizate din produsele patologice se coloreaz cu
albastru de metilen i Gram. Bacilii crbunoi apar sub forma unor
bastonae cu capete tiate drept, ncapsulai, izolai sau dispui n
lanuri, Gram pozitivi, sporulai capsulai, intra sau extracelulari,
detritusuri celulare.

140
Caliopsia FLOREA Bacterioioie i virusologie

4. Caractere de cultur
nsmnarea produselor patologice se face pe medii simple:
bulion simplu, geloz simpl, geloz snge, la pH 7,2-7,4 i 35 C.
Culturile de B. anthracis (tulpinile virulente) sunt de tip rough R. n
bulion formeaz flocoane care se depoziteaz pe pereii eprubetei,
mediul rmnnd limpede, pe mediile solide dezvolt colonii de tip
R, mari cu diametrul de 4-5 mm, albe opace, cu suprafaa rugoas,
margini neregulate, aspectul caracteristic este al unei mpletituri de
filamente cap de meduz sau coam de leu;
La tulpinile recent izolate, dup 2-3 zile n centrul coloniei
primare se dezvolt o proeminen central n form de buton, colonie
fiic sau secundar.
n geloz dreapt, nsmnat prin nepare, se dezvolt sub forma
unui brad inversat.
M

Pe mediile cu snge nu produce hemoliz.


n culturile vechi apar n special formele sporulate, dispui n
lanuri lungi.

5. Caractere biochimice
B. anthracis elaboreaz catalaz, fermenteaz glucoza fr
producere de gaz, fermenteaz maltoza i inconstant zaharoza.
Are aciune proteolitic: pe mediile care conin gelatin,
lichefiaz mediul n cca. 10 zile, pe mediul Loffler (ser coagulat de
bou) cresc colonii albicioase care lichefiaz mediul,

6. Caractere de patogenitate * vivo


Se inoculeaz la oarecele alb, s.c. 0,5 ml cultur din bulion de
24 ore, pe faa intern a coapsei, dup 1-3 zile animalele mor prin
septicemie crbunoas sau edem gelatinos la locul inoculrii i
hepatosplenomegalie.
Se face autopsia, se observ edemul gelatinos, iar din organe
(splin) se fac frotiuri, n care se evideniaz germenii capsulai cu
aspect morfologic caracteristic,
Se poate recolta snge din cordul animalului decedat pentru
141
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

hemoculturi. ' >

Diagnosticul se face pe baza caracterelor descrise mai su.


Diagnosticul retrospectiv
Se face pe cadavrele umane i animale. n cazul cadavrelor vechi,
intrate n putrefacie, se face reacia termoprecipitrii ASCOLI. Este
o reacie de precipitare n inel cu ser anticrbunos, Substana
precipitabil (antigenul de identificat) este format din substana P
capsular de natur polipeptidic i fraciunea somatic -
polizaharidic, ambele termostabile, este reprezentat de un filtrat de
organ, preparat prin mojararea unor fragmente de organ (splin, ficat)
cu SF i fierbere timp de 5-10 min.
Serul anticrbunos se prepar pe cal. ntr-un tub de precipitare se
pun 0,5 ml ser precipitant, apoi cu o pipet Pasteur se adaug 0,5 ml
filtrat, n aa fel nct cele dou lichide s nu se amestece. Extractul
este mai uor i va rmne deasupra serului, dup 5-10 min apare un
inel de precipitare n zona de echivalen, realizat ntre cele dou
componente. Se vor folosi martori pentru antigen (antigen + ser
normal), martor ai serului precipitant (SF + ser precipitant) i dac este
posibil un martor pozitiv (extract de splin de la un animal bolnav +
ser precipitant).
Pentru testarea strii de sensibilizare a organismului fa de
antigenul crbunos se face prin intradermoreacia (IDR) Blteanu-
Toma.
La contaci sau n scop preventiv nu se recomand serul
anticrbunos ci antibiotice.
La bolnavi se va administrarea serului anticrbunos.
Bacillus cereus v^
Este un bacii aerob sporulat, cu margini uor rotunjite,
necapsulat, dezvolt colonii plate, opace, alb-eenuii cu margini
dantelate. Pe geloz-snge produce o (3-hemoliz puternic, tulbur
uniform bulionul cu o pelicul la suprafa.
Dac se nmulesc excesiv n alimente produce o toxiinfecie

142
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

alimentar. ;

Bacillus subtilis (B. mesentericus)


Este n general nepatogen, a fost izolat n conjunctivite,
iridociclite, panoftalmii, sinuzite cronice, poat produce toxiinfecii
alimentare. ::?
* \

Condiii de anaerobioz

Pentru a nelege mai bine condiiile de cretere pentru bacteriile


anaerobe, se vor prezint mai nti posibilitile de cretere a
bacteriilor n condiii de anaerobioz.

Noiuni de cretere n anaerobioz ^


nlturarea oxigenului din mediul de cultur se face prin mai
multe metode i anume procedee: fizice, chimice, biologice i
combinate. * . -

X. Anaerobioz prin metode fizice: '


- Regenerarea este meninerea n ap n fierbere sau n vapori
flueni a unui recipient cu mediu. Vaporii formai in mediu antreneaz
i aerul* dizolvat. Dup regenerare, recipientele se rcesc brusc n jet
de ap. mpiedicarea ptrunderii aerului se realizeaz: raportul
redus suprafa/volum; acoperirea mediului cu un strat de ulei de
vaselin, sau parafin; consistena semisolid a mediului (0,5-0,8%);
o substan chimic reductoare introdus n mediu (acid tioglicolic).

143
Caliopsa FLOREA Bacterioloie i virusologie

- Folosirea aparatului de vid, acesta nu se folosete uzual i


const, dup eliminarea aerului cu un aparat cu sau fr realizarea
prealabil a vidului, introducerea unui amestec de gaze (N2 85%,
C025%,H210%).
- Utilizarea gazelor inerte, mai grele dect aerul, pot fi folosite i
n recipiente pentru transportul materialului patologic, n camera
anaerob "glove box, nsmnarea se va realiza n condiii de
anaerobioz.

2. Anaerobioza prin procedee chimice


- Introducerea substanei reductoare n mediul de cultur: se
folosete mediul cu acid tioglicolic sau tioglicolat de sodiu (mediul I,
mediul VF-Cantacuzino), etc. Mediul se va regenera daca indicatorul
colorat se observ pe o nlime mai mare de 1/4 de la suprafa).
- Utilizarea substanei reductoare cu mare de absorbie a
oxigenului, pirogalOlul. Sunt pliculeele reductoare realizate din
hrtie de filtru care conin: carbonat de Ca 0,4 g, pirogalol 0,4 g, talc 4
g; pentru o plac Petri cu diametrul de 12 cm.

3. Anaerobioza prin procedee biologice


- Procedeul Tarrozzi, introducea n medii lichide fragmente de
organe proaspete (ficat, rinichi) de la animale de laborator, meninerea
ittuburi la termostat 24-48 h, apoi folosite.
- Procedeul Fortner, mprirea unei plci Petri cu geloz n
dou: extragerea unui sector de mediu dd-a lungul diametrului, pe una
din jumti se nsmneaz germenul anaerob, iar pe cealalt un
germen aerob foarte avid de oxigen (B. suhtiis, B. prodigiosus), se
realizeaz un fel de simbioz n care aerobul consum 02, permind
creterea anaerobului.

4. Procedee combinate.
Genul Clostridium

Cuprinde numeroase specii, majoritatea sunt saprofite, dar un


144
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

numr redus sunt patogene. Sunt bacili Gram pozitivi, mobili datorit
unor cili peritrichi (n afar de CI. perfringens) cu dimensiuni mari,
strict anaerobi, formeaz spori ovoizi sau sferici care au dimensiuni
mai mari dect grosimea bacilului, deformndu-1, sunt rspndii n
mediul exterior mai ales n sol (anaerobi telurici). Patogenitatea este
dat de invazivitate dar i de toxigenez. Anaerobii patogeni se mpart
n dou grupe:
- anaerobi productori de toxine histotrope: clostridiile
gangrenei gazoase: CI. perfringens, CI. histolyticum, CI. oedematiens,
Cl septicum, Cl. sporogenes etc.;
- anaerobi productori de toxine neurotrope: CI. botulinum i
CI. tetani.

Clostridiile gangrenei gazoase


Cele mai frecvente specii sunt: CI. perfringens, CI histolyticum,
CL oedematiens, CI. septicum, CI. sporogenes.
Pot provoca, la om, tabloul clinic al gangrenei gazoase (mai
frecvent la muchii membrelor), apoi infecia uterin postabortum,
infecia post-operatorie, post-colecistectomie, abces cerebral, infecie
sinuzal, poate afecta orice esut sau organ.

Habitat
Are o rspndire universal: n mediul exterior, sol, intestinul
omului i animalelor.

Diagnosticul de laborator este bacteriologic.

1. Recoltarea produselor patologice


Sunt: snge, secreii din plag, lichid peritoneal sau din alte
caviti nchise, secreie uterin, materii fecale, alimente.
Produsele trebuie nsmnate n cel mult o or de la recoltare, n
condiii de anaerobioz, nu se pstreaz, la rece (sunt sensibili la rece).

2. Caractere morfologice

145
Caliopsia FLQREA Bacterioloie i virusologie

Secreiile recoltate din plag au aspect serosanguinolent. Pe


frotiul colorat Gram se observ un numr foarte mare de clostridii,
alturi de ali germeni din flora de asociaie. n general predomin una
din speciile de mai sus.
CI. perfringens este un bacii lung 3-9/0,8-1,2 pm, drept cu capete
rotunjite, n produs frecvent nesporulat, ncapsulat. Sporii apar n
leziunile mai vechi de trei zile, sunt ovalari, subterminali, cu
dimensiuni mai mari dect grosimea germenului.
CI oedematiens este un bacii lung 4-8/0,8 pm, cu spor ovalar,
subterminal.
CI septicum este un bacii subire, scurt de 3-5/0,6 pm, cu spor
ovalar subterminal.
CI histolyticum este un bacii subire, scurt de 5-6/0,8 pm cu spor
ovalar, mare central, cu aspect de butoia.
CI. sporogenes, bacii lung i gros 3-8/1 pm cu spor ovalar,
subterminal, care devine foarte repede liber.

3. Caractere de cultur
Produsele patologice sunt frecvent contaminate, de aceea se
folosesc mai multe medii selective.
- inactivarea produsului patologic la 70 C timp de 30 min,
pentru distrugerea formelor Vegetative, apoi sporii care supravieuiesc
vor fi nsmnai pe medii speciale n condiii de
i;aerobioz;
- nsmnarea pe medii selective lichide sau solide (bulion V.F.
cu amestec de antibiotice, Shaedler).
nsmnarea n profunzime n geloz V.F. n tuburi Weinberg
(tuburi lungi i subiri).

146
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

Dup incubare n condiii de anaerobioz aspectul coloniilor n


aceste tuburi este caracteristic pentru diferitele specii.
CI. perfringens, este un germen imobil, d colonii biconvexe, cu
margini bine delimitate.
Celelalte clostridii fiind mobile au aspect de "grenad explodat
cu un centru opac avnd la unul din poli numeroase filamente.
Ci. septicum d colonii cu numeroase arborecene, cu tendin
la expansiune rapid n mediu. CI. histolyticurri d colonii mici,
opace, cu margini neregulate,' CI. sporogenes d colonii cu aspect de
ppdie.
nsmnarea se face pe suprafaa unor medii turnate n plci
Petri cu asigurarea condiiilor de anaerobioz. Se recomand geloza
cu glbenu de ou i geloza Willis (conine glbenu de ou i lactoz),
ambele medii pot s conin i antibiotice cu caracter selectiv.

4. Identificarea
Se face pe baza caracterelor morfologice, de cultur i
biochimice.
Caracterele morfologice evideniaz bacii i Gram pozitivi cu
sporulai, mari, care deformeaz forma bacilului.
Caracterele de cultur se evideniaz prin cultivarea anaerobilor
n profunzime n geloz V.F.
Caracterele biochimice se evideniaz prin nsmnarea
produsului patologic pe mediile Willis cu sau fr antibiotice. Mediul
Willis prin coninutul n glbenu de ou i lactoz, poate evidenia
elaborarea lecitinazei i fermentarea lctozei. Dac produce lecitinaz
n jurul coloniilor apare o zon de opacifiere a mediului, reacia este
intens pozitiv la CI. perfringens a crui exotoxin (a-toxin) este o
lecitinaz i pozitiv la CL oedematiens. Fermentarea lctozei
determin virarea culorii coloniilor n galben.

147
Caliopsia FLOREA Bacterioioie i virusologie

Laptele tumesolat d indicaii n legtur cu reducerea,


acidifierea. coagularea i digestia cheagului din lapte. Laptele se
nroete datorit fermentrii lactozei i coaguleaz, apare o cantitate
mare de gaz care rupe cheagul, se lipete de pereii eprubetei i n
spaiile libere apare un lichid limpede (cheag alveolar).

5. Teste de patogenitate "in vivo


Se fac rar, pe animale de laborator sensibile la toxinele
histotoxice ale clostridiilor, cum sunt oarecele alb i cobaiul.

6. Antbiograma nu este necesar deoarece clostridiile patogene


sunt sensibile la: penicilin, ampicilin, eritromicin, cefalosporine,
coramfenicol.

Clostridium botulinum
Botulus = cmat n limba latin, izolat n 1896 de van Ermengem
n cursul unei intoxicaii cu cmai. Aceast bacterie este lipsit de
virulen, incapabil de multiplicare n organism, produce n afara
organismului cea mai puternic toxin cunoscut,
a crei ingestie provoac boala.
(
1\
Habitat;
Este rspndit n sol i se gsete n intestinul omului i
animalelor. Sunt apte serotipuritipuri de CI botulinum (A, B, C, D, E,
F, G) la noi este mai rspndit tipul B, foarte rar .tipul A.

Caractere morfologice
Este un bacii lung i gros 4-6/0,8-1,2 pm, Gram pozitiv, , mobil datorit
cililor peritrichi, cu spor subterminal, deseori cultura poate pune n libertate
muli spori.
Caractere de cultur
Crete pe mediile uzuale lichide, tulburndu-le uniform, produce
un miros uor rnced al culturii.

148
Caliopsia FLOREA Bacterioioie i virusologie

Pe suprafaa mediilor solide d colonii cu margini neregulate,


translucide, cu suprafaa granular i eu o margine n extensie
continu. Pe geloz snge de cal 5%, coloniile sunt hemolitice.
Pe mediul Nagler sau Willis-Hobbs produce opalescen i strat
perlat (n afar de tipul G).

Patogenitate
Din toate tipurile de CI botulinum, doar patru provoac
botulismu la om: A, B, E i F; C i D afecteaz animalele i psrile
i tipul G nu d mbolnviri.
Toxina botulinic are un neurotropism exclusiv (ca i tetanic)
determin blocarea transmiterii nervoase prin inhibarea secreiei de
acetilcolin. Simptomatologia este cantonat n principal la paralizii
ale muchilor capului. Botulismu infantil rezult din producerea n
intestin a toxinei la sugari sub 6 luni.

Diagnosticul de laborator
Numai n laboratoarele n laboratoarele de specialitate, se pune
n eviden toxina prin toxinotipie. Toxina se caut n: lichidul de
spltur gastric, vrsturi, coninut intestinal, ser, lichidul din
conserv.
Dac aceste lichide nu sunt limpezi se filtreaz i apoi se face
toxinotipia.

149
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

Tabel III Toxinotipa


(preluat din Tratat de Bacteriologie voi. II, Blbie V., Pozsgi N 1985)
Lotul I II III IV *
cercetat
Proba de Supernatant 0,5 Supernatant Supernatant Idem ca la lotul
cercetat ml, inoculat la inactivat 15 amestecat cu 0,1 III dar cu ser
oarece (4 min la 100C, ml ser antibotuiinic anti
animale) sau 1 ml inoculat la fel antibotuiinic anti B inoculat n
la coba (1 animal) ca n 1 A i lsat nainte aceleai condiii.
i.p. de inoculare 30
min la 37C i
inoculat la fel

rezultate +cobai, - cobai, + cobai, - cobai,


l-H -i oareci oareci I H-+ oareci oareci

Rezultat: toxina este de tip B


Tratament
Se va administra de urgen ser antitoxic, innd seama c
antitoxina nu mai poate nltura toxina de pe substratul sistemului
nervos central, dup fixarea acestuia. Se va administra ser bivalent
A+B.

Clostridium tetani
Este un bacii Gram pozitiv anaerob, alungit, cu capete nerotunjite
de 3-4/0,4 im, sporul terminal nu prinde colorani obinuii, diametrul
transversal depete de 2-4 ori pe cel al corpului bacterian, are un
contur refringent, o form rotund, mai rar ovalara. Bacilul tetanic eke
foarte mobil, prezentnd fenomenul de crare pe suprafaa
gelozei, n condiii de anaerobioz, asemntor cu cel al Proteusului n
condiii aerobe.
Caractere de cultur
n bulion anaerob germenul se dezvolt bine la 37 C dup 24-
48 ore, tulbur uniform i degaj cteva bule de gaz cu miros
caracteristic de corn ars, sau de materii animale arse i acid butiric.
150
Caliopsia FLOREA Bacterioioie i virusologie

Pe suprafaa gelozei creterea este srac, cu margini


transparente i daca cantitatea de geloza este mai sczut, n cteva
zile se ntinde ca un vl uniform pe toat suprafaa.
Pe geloz snge apare hemoliza. Barilul tetanic nu fermenteaz
glucidele, n schimb are enzime proteolitice (peptidaze, dezaminaze,
gelatinaz). *

Patogenitate
Este determinat de o exotoxin pe care orice tulpin de CI tetani
dup 48-72 ore, n mediul lichid, o produce i este suficient pentru a
provoca o intoxicaie tetanic mortal la animalul de laborator.
Filtratul culturii conine dou componente:
- tetanolizina care produce liza hematiilor unor specii de
animale, dar nu are nici o capacitate tetanigen;
- tetanospasmina care provoac tetanosul experimental, dup o
incubaie de minimum 8 ore ( indiferent de doza inoculat).
Aciunea biologic a toxinei tetanice se exercit prin fixarea
exclusiv i ireversibil pe sistemul nervos mai ales central (SNC).
Injectat la oarece, cobai sau iepure, produce o paralizie spastic,
ce ncepe de partea i cu membrul n care s-a injectat: membrul este
fixat n extensie forat, corpul se curbeaz de aceeai parte, ulterior
survine generalizarea contracturilor, acesta este tetanosul ascendent.
Injectat la animale mari i la oameni, tetanosul ncepe cu
contractura muchilor masticatori (trismus), indiferent de locul de
ptrundere n organism al toxinei, este tetanosul descendent, care
afecteaz iniial nervul cel mai scurt i apoi continu cu formele
generalizate.

Diagnostic de laborator
Se inactiveaz produsul patologic nainte de nsmnare (30 min
la 80 C) pentru distrugerea formelor vegetative, meninnd sporii
viabili. Se nsmneaz pe geloz snge cu 3-3,5% agar pentru a
obine colonii izolate, apoi ce fac nsmnri n bulion n anaerobioz.

151
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

Din aceast cultur + CaCI2, se injecteaz la oarece n membrul


posterior, l omoar cu fenomene de tetanos n 4 zile.

Imunoprofiiaxia
- Activ cu ATPA (anatoxina tetanic purificat i adsorbit)
morbiditatea prin tetanos a sczut, rapeluri se fac la 5-10 ani i dup
orice plag tetanigen.
- Pasiv cu ser antitoxic de cal 3000-10.000 u, sau
imunoglobulin antitetanic uman 400-800 u.

Tratament
In momentul declanrii simptomelor, toxina este fixat pe SNC,
tratamentul este nespecific (sedaie, curarizare, respiraie asistat), ^

152
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

Capitolul XII
Mycobacteriile: bacilii tuberculozei,
bacilul leprei, alte micobacterii.
Bacterii nocardiforme

Genul MYCOBACTERIUM
Germenii din acest gen aparin familiei Mycobacteriaceae.
Aceast familie cuprinde mai multe specii, fiind aproape toate
saprofite cu excepia speciilor: Mycobacterium tuberculosis i
Mycobacterium leprae.
n anul 1882 Robert Koch descoper bacilul tuberculozei, tot n
acelai an Paul Ehrlich descoper acido-rezistena bacilului
tuberculozei.
n anul 1884 Robert Koch obine cultura bacilului tuberculozei
pe ser coagulat. n 1891 tot R. Koch semnaleaz fenomenul Koch i
tuberculina.
Albert Calmette i Claude Guerin n perioada 1908-1921 au
cultivat prin treceri la 21 zile, n bulion cartof glicerinat i biliat o
tulpin de Mycobacterium bovis virulent izolat din lapte. n urma
acestor treceri s-a obinut o tulpini fr patogenitate, dar capabil s
determine rezistena fa de infecia tuberculoas, caracterele
morfologice, tinctoriale, nutriionale, de cultur au rmas cele iniiale.
Aceast tulpin (tulpina BCG - bacilul Calmette i Guerin) a fost
utilizat ca vaccin mpotriva tuberculozei ncepnd din 1921, n 1927
se organizeaz laboratoare de producie a vaccinului BCG n 26 de ri,
inclusiv
n Romnia, care a fost a 2 a ar care a produs i folosit acest
vaccin.

Clasificare

153
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

1. Micobacterii care nu se dezvolt pe medii de cultur i


sunt strict patogene pentru om i animale, sunt dou specii:
- Mycobacterium leprae (agentul Armauer Hansen, descoperit
n 1873) este agentul etiologic al leprei umane;
- Mycobacterium lepraemurium, agentul etiologic al leprei
obolanilor.
2. Micobacterii care se dezvolt lent (sptmni) pe medii de
cultur i sunt patogene pentru om i animale homeoterme (care i
pstreaz temperatura constant a corpului):
- M. tuberculosis, agentul etiologic al tuberculozei umane dar
i cel al cinelui i pisicii;
- M. bovis produce tuberculoza la bovine, dar i la om;
- M africanum patogen pentru om;
- M. muris care determin leziuni cazeoase ganglionare i
subcutanate la unele roztoare.
3. Micobacterii care se dezvolt lent (sptmni) sau rapid
(zile) pe medii de cultur, unele din micobacterii sunt saprofite, iar
altele sunt patogene sau condiionat patogene.
n raport cu pigmentaia coloniilor i ritmul de creterii
micobacteriile se mpart n:
- Grupa I - Micobacterii fotocromogene, culturile se dezvolt
la 37 C n ntuneric nu sunt pigmentate, dac sunt expuse 30-60 min
la lumina zilei sau la o surs de 30 W aezat la o distan de 50 cm i
apoi rmn n ntuneric 12-24 ore, culturile se pigmenteaz n galben
sau portocaliu. Din aceast grup face parte M. tuberculosis.
- Grupa II - Micobacteriile scotocromogene, se dezvolt la
37 C att la ntuneric ct i la lumin, culturile sunt pigmentate n
galben-potocaliu (M. scrofulaceum).
- Grupa III - Micobacteriile necromogene: M. avium.
- Grupa IV - Micobateriiie cu cretere rapid (rapid
growers), coloniile care apar dup cteva zile sub form S sau R
la 37 C, cromogenitatea este variabil sunt condiionat patogene la
om sau animale.

154
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

Mycobacterium tuberculosis
Habitat \
Bacilui tuberculos manifest un parazitism str$ctj el este prezent
n leziunile omului sau animalelor bolnave de tuberculoz, poate fi
gsit n praful din ncperile n care a fost rspndit sputa bacilifer
sau pe obiectele contaminate de bolnav.

Caractere morfologice i tinctoriale


Sunt bacili subiri cu lungimea de 3-10 pm i lime de 0,1- 0,2
pm, uneori ramificai, drepi sau uor curbai sub forma literelor: X;
Y; Z, cu granulaii puse n eviden prin coloraii speciale, imobili,
nesporulai, necapsulai.

Structura peretelui este format din:


- Lipide, care sunt n cantitate mare [ntre 20-45% din greutatea
uscat a bacteriei (sub form de: fosfolipide - cardiolipina; acizi
micolici; glicolipide - cord-factorul; peptidoglicolipidele - ceara D,
aceasta n cantitate mai crescut la tulpinile virulente), la celelalte
bacterii lipidele sunt de 3-10%], se coloreaz foarte greu, ulterior
rezist la decolorarea cu acizi minerali diluai i cu alcooli, din acest
motiv se numesc bacili acid-alcoolo-rezisteni. Se folosete
coloraia Ziehl-Neelsen, pe frotiul colorat astfel bacilui tuberculos va
fi colorat n rou aprins, datorit fucsinei, n timp ce restul germenilor
sau celulelor vor fi colorate n albastru.
Pe lng lipide n structura micobacteriilor se mai gsesc.
- Proteine (tuberculoproteinele), tuberculina brut, cca. 1%,
care ofer antigenicitate.
- Polizaharidele care se leag de lipidele i proteinele din perete.

Rezistent*

Bacilii rezist luni sau ani n praf, sunt sensibili la aciunea


radiaiilor solare i UV, sunt sensibili la aciunea antibioticelor:

155
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

streptomicin, HIN, acidul para-amino salicilic, etambutol,


rifampicin (sinerdol), dar pot ctiga uor rezisten. r

Caractere de cultur
Spre deosebire de micobacteriile saprofite care se dezvolt uor
i rapid pe mediile de cultur simple, micobacteriile patogene se
dezvolt lent pe medii speciale. Adugarea glicerinei n mediile de
cultur favorizeaz dezvoltarea bacilului tuberculos uman, n timp ce
tipul bovin este parial inhibat.
Pe mediile lichide micobacteriile formeaz un vl subire, care
se ngroa, se cuteaz, se fragmenteaz i cade la fundul recipientului,
iar la suprafa se va forma un alt vl. Bacilii tuberculoi dj^ tip uman
fac un vl mai gros dect cel bovin i alcalinizeaz la nceput mediul,
apoi l acidific progresiv, iar cel bovin alcalinizeaz mediul la
nceput, dar ulterior nu-1 mai acidific.
Pe mediile solide, tip Lowenstein-Jensen (L-J), sau tip Ogawa,
sunt medii selective conir sruri minerale, asparagin sau acid
glutamic, amidon, glbenu de ou, glicerina i verde malachit.
Amestecul final se repartizeaz n tuburi de 18/180 i se coaguleaz n
poziie nclinat la 90 C.
Temperatura optim de dezvoltare a bacilului tuberculos este de
37 C timp de 30-60 zile, bacilul este aerob, de aceea ce

156
Caliopsia FLOREA Bacteriooie i virusologie

nsmneaz pe mediul solid nclinat, dar o cantitate de 10% C02,


favorizeaz creterea.
Coloniile micobacteriene apar trziu, dup prima sptmn abia
se vede o mic formaiune ce numai dup 30-40 zile ajunge o colonie
caracteristic de aspect verucos (conopidiform) de tip RM, aceasta
este cretere eugonic a coloniilor rugoase. Prezena coloniilor mici de
tip S este o cretere disgonic i este caracteristic pentru
Mycobacterium bovis.

Caractere biochimice
Sunt germeni aerobi, au enzime ureaz, catalaz, nitrat -
reductaz, se dezvolt la un pH uor acid, tipul hominis este singurul
care produce acid nicotinic.

Caractere de patogenitate
Virulenta micobacteriilor este dat de existena unei substane
cord-factor (giicolipid), care rezist la aciunea enzimelor
lizozomale, care lipsete la micobacteriile avirulente. De asemenea au
capacitatea de a se multiplica intracelular (intramaerofagic), n plus
produc n organismul afectat i fenomene de intoxicaie, care este un
factor agravant.

Evoluie i rspuns imun


1. Gemenii ptrund i se localizeaz la nivelul ganglionilor
pulmonari hilari, unde se multiplic intracelular, producnd afeciunea
primar (complex sau afect primar).
- Multiplicarea intracelular a b. tuberculoi duce la leziuni
locale manifest ca leziuni de tip proliferativ, se formeaz foliculii
tuberculoi (alctuii din celule Langhans parazitate, n jurul crora
sunt atrase fagocite prin chemotactism).
- Apar necroze prin aciunea toxic a lipidelor, proteinelor i
zaharurilor din structura b. tuberculoi.
2. Aceste leziuni din infecia primar sunt amplificate de
rspunsul imun celular, care apare dup 2-3 sptmni, care nu
157
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

realizeaz protecie.
3. Limfocitele T elibereaz mai multe tipuri dc imfokine: (de
transfer a sensibilizrii, rol chemotactic (+), cu rol blastic, de inhibiie
a migrrii neutrofilelor i macrofagelor) aceste imfokine determin o
aglomerare de celule, care duce la creterea foliculilor tuberculoi.
4. Apar i imfokine cu rol litic (limfotoxine), linfokine de
activare a neutrofilelor i macrofagelor.
5. Macrofagele activate determin o activare a limfocitelor T
obinuite, care nu au venit n contact cu Ag, se formeaz interleukina
1, care are aciune de stimulare a activitii limfocitelor T efectoare.
6. Astfel se formeaz necroza: esutul necrozat se elimin
respirator ( i bacilii viruleni) sau se pot elimina pe cale sanguin,
ceea ce duce la o localizare renal, genital, osoas, meningeal,
ganglionar, digestiv. Acestea sunt leziuni, de obicei, secundare.
7. Foarte multe din infeciile tuberculoase nu duc la o evoluie
generalizat, ci merg spre vindecare datorit mijloacelor de aprare
nespecifice ale organismului.
8. Premuniia (protecia de suprainfecie) apare pe fondul
existenei unei infecii tuberculoase care duce la pstrarea Ag n
organism. Stimulul imun celular este continuu cu sensibilizarea a noi
limfocite T circulante, aceste limfocite T pot asigura protecia fa de
germenii tuberculoi de suprainfecie. Acest fenomen a fost descris de
Robert Koch, fenomenul Koch care a inoculat b. tuberculoi
viruleni la cobai, consecutiv apare ancrul i n final moartea
cobaiului. Dac la acelai cobai i se face un nou inocul, n timp util,
apare ancrul secundar care evolueaz spre necroz, se elimin i apoi
se vindec.
9. Rspunsul imun celular este negativ fa de prima infecie i
este pozitiv fa de suprainfecie.

158
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

10. Apare i un rspuns umoral (apar Ac) care nu este un


rspuns de protecie, dar care permite dg. de laborator.

Diagnosticul de laborator este un diagnostic bacteriologic


Se bazeaz prin punerea n eviden a bacilului Koch n
produsele patologice, n acest scop se folosesc 3 metode: examenul
direct, cultivarea i inocularea la cobai.
Recoltarea produselor patologice se face n-, recipiente sterile
cu capac ce se pot nchide ermetic. }
- n tuberculoza pleuro-pulmonar se recotekz: sput, aspirat
bronic sau cavitar, lichid de sptur bronic, piese de exerez
chirurgical, lichid de sptur gastric, fecale, piese necroptice,
lichid pleural.
- n tuberculoza uro-genita: urina, snge menstrual, biopsie
de endometru, piese de exerez chirurgical.
- n tuberculoza ganglionar: material din biopsie sau puncie.
- n tuberculoza ostio-articular: lichid articular, puroi din
abcese reci, fragmente osoase.
- n meningita tuberculoas: lichid cefalorahidian.
Cel mai folosit produs este sputa, pentru c tuberculoza
pulmonar este forma cea mai frecvent.
Tehnica de prelevare a sputei: trebuie s se fac n recipiente
sterile de unic folosin, trebuie s se fac nainte de nceperea
tratamentului medicamentos. Se recolteaz dimineaa la sculare o
cantitate de 5-10 ml, se va repeta la 3-4 zile, se poate pstra la 4 C
cu adaos de carbonat de sodiu pulvis, 50 mg la 5 ml sput; sau fosfat
trisodic (2-4 ml din sol 15%). Se vor respecta regulile de asepsie a
personalului care asist sau transport probele.
Aspectul sputei: este purulent, nu se va lucra sputa mucoas,
care de cele mai multe ori este saliv.

159
Caliopsia FLQREA Bacterioloie i virusologie

Examenul microscopic direct se efectueaz pe frotiuri colorate


dup metoda Ziehl-Neelsen, se examineaz cu obiectivul cu imersie,
prezena este dat prin apariia de bacili roii pe un fond albastru.
Cnd numrul de germeni este redus, frotiul se face dup
omogenizarea i concentrarea produsului patologic.
Omogenizarea se face ntr-un balon de 250 ml, cu fund plat, peste
sput se adaug o cantitate egal sau de 2-3 ori mai mare de NaOH
0,5%, la 60 C, 30 min.
Concentrarea prin Hotare, se obine prin adugare de ap distilat
(AD) pn la jumtatea balonului i 2 ml de xilol sau neofalin. Se
agit energic 10 min, se adaug AD pn la jumtatea gtului
balonului, se las n repaus 30 min, timp n care se formeaz un inel
cremos n care au fost concentrai bacilii tuberculoi din produs.
Stratul cremos este aspirat ntr-o pipet Pasteur prevzut cu o par de
cauciuc, sau un pipetor automat. Pe 2-3 lame degresate, care sunt
aezate pe o platin nclzit sau pe un geam deasupra bii, se depun
0 bacili/ 300 cmpuri microscopice = absen b.a.a.r;
1-3 bacili/ HOO cmpuri II = prezena b.a.a.r se solicita repetare;
4-9 bacili/100 // II = prezena b.a.a.r (+),
10-100///100 // II - prezena b.a.a.r (++),
peste 100 bacili/100 cmpuri mic. = prezena b.a.a.r (+++).
succesiv, picturi din materialul cremos, pn cnd acesta se
epuizeaz, apoi frotiul va fi uscat, fixat la flacr i colorat Ziehl-
Neelsen.
Se va examina la microscop cu imersie i se va face o apreciere
cantitativ:

Concentraia micobacteriilor tuberculozei n sput este totdeauna


n raport direct cu dimensiunea i intensitate leziunii. Alte bacterii AR
posibil de ntlnit n frotiuri se deosebesc morfologic: nocardiile i
actinomicetele sunt filamentoase, cu ramificaii i extremiti
ngroate. Apoi produsul patologic se va

160
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

nsmna pe mediile de cultura amintite. Controlul creterii pe mediile de


cultur se face prin frotiuri colorate Ziehl-Neelsen.

Inocularea la cobai
Se practic n funcie de posibiliti, n formele de tuberculoz
extrapulmonar. Se folosesc cobai sntoi de 300- 400 g. Prelevatul
patologic se injecteaz 1-2 ml s.c. pe faa intern a coapsei, animalele
e urmresc zilnic timp de 90 zile. La fiecare 15 zile animalele se vor
cntrii i examina clinic, local, general. Infecia tuberculoas la cobai
se manifest prin: scdere n greutate, producerea unui nodul care apoi
se ulcereaz (ancru), la locul inoculrii i adenopatie 4 satelit. Pentru
stabilirea sacrificrii cobaiului se va face reacia la tuberculin, care se
face ntr-o zon nepigmentat, se injecteaz i.d., 0,1 ml din soluie 1/10
de tuberculin brut.
O escar n centrul unui halou inflamator persistent, observabil
la 24-48 h reprezint o reacie pozitiv.
Dup sacrificarea animalului, de regul dup 5-6 sptmni de la
inoculare se constat: ancru la locul de inoculare, hipertrofia (inclusiv
cazeificarea ganglionilor limfatici, inghinali, presacrai, mezenterici),
leziuni tuberculoase caracteristice (tuberculi-zone cazeoase ntinse) n
splin, ficat, i plmni. Se vor face frotiuri colorate adecvat i se vor
face nsmnri pe mediul Lowenstein-Jensen.

Identificarea culturii micobacteriene pure


- Controlul puritii: frotiuri colorate Ziehl-Neelsen.
- Primocultura (medii solide): morfologia coloniilor,
temperatura optim, pigmentarea (fotocromogenitatea).
- Culturi n medii lichide (teste fundamentale): acido-alcool
rezistena, viteza de cretere, producerea de acid nicotinic (testul
Niacin sau testul Kouno).

161
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

- Teste complementare: produce catalaza, peroxidaza, ureaz,


reducerea nitrailor n nitrii, Aiylsulfataza, rezistena la HIN
(hidrazida acidului izonicotinic) 1 pg/ml.
Dup obinerii culturii se va efectua antibiograma pe mediul
Lowenstein, pe care se nsmneaz, se depun discurile de antibiotice
sensibile, sau se pot livra plci care conin fiecare cte un antibiotic i
se va nsmna tulpina izolat

Identificarea rapida a micobacteriilor


1. Se face prin colorare cu fluorocromi (auramin-rhodamin) a
sputei i se examineaz cu microscopul cu fluorescen, micobacteriile
se coloreaz n galben portocaliu, pe fond negru, dac contracolorarea
s-a fcut cu permanganat de potasiu, celelalte resturi celulare sunt
galben deschis.
2. Reacia de amplificare genic (PCR) identific n 24 h
secvena de inserie (IS) tuberculosis, 6110 sau genele care codific
ARN 16 S specifice pentru complexul M.
3. Sonde ADN identific prin hibridare secvene nucleotidice
specifice unor micobacterii.

Profilaxie
a. Nespecific: depistarea, izolarea, tratarea sursei de infecie i
creterea rezistenei nespecifice.
b. Specific este vaccinarea cu vaccinul BCG de provenien
bovin, cu bacili vii atenuai.
Verificarea rspunsului imun se face prin IDR la tuberculin sau
PPD (Protein-purificat-deriyat). Se inoculeaz intradermic tuberculin
(2 u PPD), reacia se citete dup 72 ore:
- dac n organism exist o infecie tuberculoas, exist
limfocite T sensibilizate care elibereaz limfokine, apare o induraie i
o tumefiere a zonei, mai mare de 9 mm deci IDReste (+)>
- o reacie normal, organismul a venit n contact cu bacilul
Koch, dar este protejat, dup 72 ore va apare o papul de cel mult 9

162
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie
mm, tar induraie;
- dac nu apare nici o modificare, IDR (-) semnific absena
rspunsului imun celular, deci absena proteciei, ceea ce impune
vaccinarea cu BCG.
Vaccinarea se face: imediat dup natere, apoi se controleaz
(rapelri prin IDR la PPD) la: lan, 3 ani, 14 ani i la 18~ani.

Mycobacterium leprae

Sunt bacili acid-alcoolo-rezisteni, n coloraia Ziehl-Neelsen


apar roii. Sunt lungi de 4-5 im i groi de 0,4-0,5 pm, se gsesc
exclusiv numai la oameni, sunt dispui intraceluar n grmezi
compacte. Nu se cultiv pe medii artificiale i nici pe medii vii (culturi
celulare sau animale de laborator). Se poate cultiva pe oarecele alb
timectomizat i iradiat, bacilul leprei crete puin (inoculat n plant),
acest fapt se face pentru obinerea unui antigen lepromin, folosit n
diagnostic intradermic.
Aceti bacili au multiplicare strict intracelular, unde formeaz
grmezi care se numesc globi leproi (ca igrile ntr-un pachet)
Boala care este dat de M. leprae se numete lepr, se transmite
prin secreiile patologice eliminate de bolnavi, contactul infectant
trebuie s fie masiv, bolnavii de lepr sunt foarte puin contagioi,
incubaia dureaz mai mult de un an.
Este rezistent n mediul extern, sensibil la sulfone i rifampicin,
iar tratamentul dureaz 5 ani.
Exist 2 tipuri de lepr:
- lepra tuberculoid (uscat), care este forma benign, se
caracterizeaz prin foliculi granulomatoi care au tendin Ia ulceraii,
evoluia este lent;
- lepra leprotnatoas (umed), este forma malign, se
caracterizeaz prin leziuni de tip proliferativ cu o evoluie rapid.
n ambele tipuri de lepr este afectat sistemul nervos periferic,
ducnd la apariia amputaiilor spontane nedureroase, prin atrofia

i 163
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

nervilor periferici, la nivelul membrelor i extremitilor.


Identificarea micobacteriilor impune competen, norme de
securitate microbiologic, dotri i faciliti particulare. De aceea
laboratoarele implicate n Programul Naional de Control al
Tuberculozei sunt ierarhizate pe 3 niveluri:
Nivelul I, laboratoarele dispensarelor teritoriale de
pneumoftiziologie, efectueaz microscopia pentru depistarea b.a.a.r, i
trimit prelevatele patologice laboratoarelor de nivel II pentru
efectuarea culturilor, asimilate acestor laboratoare sunt unele din
laboratoarele clinice.
Nivelul II, laboratoarele dispensarelor/staionarelor judeelor de
pneumoftiziologie i ale marilor spitale cu paturi pentru pacieni cu
tuberculoz, trebuie s asigure izolarea micobacteriilor, identificarea
M. tuberculosis, identificarea primar a micobacteriilor non-
tubercuioase cu sau fr testare a sensibilitii la antibiotice.
Nivelul^ III, laboratoarele de referin, asigur identificri
definitive, monitorizarea laboratoarelor de nivel I i II, supravegheaz
dinamica chimiorezistenei primare i organizeaz colecia naional
de tulpini micobacteriene.

Genul Npcardia
\
Reunete specii rspndite n sol, care nu fac parte din microbiota
indigen a organismului. Nocardia asteroides i Nocardia hrasiliensis sunt
patogeni oportuniti care determin la om infecii mai frecvent
pulmonare. Formele filamentoase se disociaz uor n forme bacilare
polimorfe.

164
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

Speciile patogene pentru om sunt parial acido-rezistente: n


coloraia Ziehl-Neelsen rezist 5-10 secunde la decolorarea cu acid-
alcool.
Pe agar snge n aerobioz, la 37 C, cultiv lent n 1-2
sptmni, formnd colonii ceroase, ncastrate n mediu i pigmentate
variabil n galben, portocaliu.
Hife aeriene pot s apar i pe suprafaa coloniilor.

Forme clinice
- cervico-faciale din focarele dentoalveolare sau tonsilare,
- la nivelul SNC, abcese, meningite,
- la nivelul ochiului, n aparatul lacrimal-canaliculite, celulite orbitale,
- pleuropulmonare,
- miocardite, mediastinite, etc.

Tratamentul cost n asocierea metodelor chirurgicale (drenarea


abceselor, eventual excizia leziunii) cu administrarea prelungit a unor
ageni microbieni n doze mari (pentru a asigura difuziunea lor n
focare prin infiltratul dens, nevascular, cu fibroz periferic care
nconjoar nocardiile). Local, dup deschiderea larg a leziunii se
aplic antibiotice sau antiseptice.

Profilaxia cuprinde msuri de igien bucal, tratarea eficient a


focarelor dentoparadontale i tonsilare ca i protecia cu antibiotice
atunci cnd se deschid aceste zone.

Capitolul XIII

165
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

Neisseria: meningogoccul, gonococul.


Moraxella

Familia Neisseriaceae include patru genuri: Neisseria, Moraxella,


Acinetobacter, Kingella.
In genul Neisseria, speciile importante pentru patologia uman
sunt; Neisseria meningitidis (meningococul) i Neisseria gonorrhoeae
(gonococul), dar pot fi amintite i specii saprofite (care fac parte din
grupul neisseriilor nepretenioase) ca: N. lactamica, N. sicca, N. subflava,
N mucosa. N. elongata.
Germenii din acest gen sunt coci, de form reniform, cu prile
adiacente concave, n diplo, Gram negativi, uneori au o tendin de a
rezista decolorm. Toate speciile sunt aerobe, imobile, nu au flageli,
unele tulpini posed pili. Temperatura optim de dezvoltare este ntre
35-37 C (sunt stenotermi-rezist la variaii mici de temperatur).
Neisseriile patogene au cerine nutritive complexe, pe cnd cele
saprofite se dezvolt pe medii simple i la variaii mari de temperatur.
Echipamentul biochimic este reprezentat de un set relativ
restrns de enzime, testul citocrom-oxidazei este unul din cele mai
importante, el este pozitiv la genurile patogene pentru om i negativ
pentru cele nepatogene.
In acest curs se vor prezenta n special N meningitidis i N
gonorrhoeae.
Neisseria meningitidis
*

Sunt coci ovalari, reniformi de dimensiuni de 0,6 - 1,0 pm


dispui n diplo, Gram negativi. n produsul patologic (LCR) sunt
intra i extracelulari.

Habitat
Se gsesc numai la oameni (bolnavi sau sntoi). Sunt localizai

166
Caliopsia PLOREA Bacterioloie i virusologie
pe tegumente, dar mai ales n cavitatea nazal i bucal.
\l
Caractere morfologice .
Germenii n diplo sunt nconjurai de o microcapsul. n peretele
lor predomin antigenul 0, nu mureina, fiind Gram- negativi. Sunt
germeni imobili, nesporulai. Unele tulpini prezint pili n momentul
izolrii, acetia pot s dispar dup 1-2 subcultivri, nu par s aib
prea mare importan n virulena germenului.

Caractere de cultur
Cerinele nutritive sunt deosebite pentru Neisseriile patogene,
ele necesitnd factori de cretere speciali, de aceea se folosete mediul
MCieller-Hinton, care conine casamino-acizi n locul peptonelor din
came. Se mai poate folosi i mediul Thayer - Martin, se pot obine
culturi i pe geloz-snge, geloz-ser, geloz-ascit i pe geloz-
ocolat. Dup 24 ore apar colonii S mici cu diametrul de cca. 1 mm,
transparente, alb- cenuii, cu marginii regulate, cu suprafaa neted i
lucioas. La purttorii sntoi se pot izola colonii R, colonii mai
mari, opace, glbui, cu margini neregulate i suprafaa granular.
n mediile lichide (bulion M-H) crete srac, dup 2-3 zile,
tulbur uor mediul sau lsnd un mic depozit la fund. Ca suport
energetic utilizeaz glucoza din mediu, n cantiti mici de 2%o.

167
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

Aciunea agenilor fizici, chimici i biologici


Temperatura optim pentru dezvoltare este de 35-37 C,
meningococul se dezvolta mai abundent n atmosfer umed, cu o
concentraie de C02 de 5-10%, mai ales la izolarea din produsele
patologice. n pasajele ulterioare, prezena C02 nu mai are aceeai
importan. Meningococul este sensibil la variaii de pH (pH optim
este de 7,2-7,4), moare repede (autolizeaz) la uscciune, nerezistnd
n afara organismului, n picturile Pfiugge mai mult de 30 min. Fiind
foarte sensibil la variaii de temperatur, transportul LCR-ului de la
patul bolnavului n laborator pentru cultivare trebuie fcut
meninndu-1 la 37 C.
n cultur rezist 1-2 ore la 20-25 C, autolizndu-se mai rapid
dect la 37 C.
nsmnarea se face pe medii nclzite. Este sensibil la aciunea
fenolului 1%, a alcoolului de 70 (10-15 min), la aciunea razelor
solare, UV. . ,
Sunt sensibili la aciunea sulfonamidelor, antibioticelor,
penicilina fiind antibioticul de elecie n tratamentul infeciilor
meningococice.

Caractere biochimice i de metabolism


Este uri^ germene strict aerob, posed, ca toi germenii din acest
gen, o catalaz, o citocrom-oxidaz (se pune n eviden astfel: se pune
o colonie pe o hrtie de filtru care conine un indicator: tetrametil-p-
fenilendiamin, dac germenii sunt
oxidazo-pozitivi, atunci culoarea indicatorului va vira n purpuriu n
10 sec., un viraj mai tardiv nu este caracteristic). De asemeni mai are
i enzime zaharolitice, utiliznd pe cale oxidativ glucoza i maltoza
i nefermentnd lactoza, fruetoza i zaharoza.

Structura antigenic
Conine antigene somatice i solubile.
1. Antigene somatice
- Antigenu! capsular K, care mparte menngococii n 12

168
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

grupuri serologice (serogrupuri): A, B, C, 29E, H, I, K, L, W-135, X,


Y, Z. Toate grupurile sunt patogene, dar cel mai patogen este grupul
A.
- Antigenul 0 care se afl n peretele bacterian.

2. Antigene solubile
Se elibereaz dup moartea germenului, prin autoliz, este
endotoxina.

Caractere de patogenitate
Menngococii sunt germeni patogeni, dar cu virulen sczut,
60-70% din infeciile meningococice sunt inaparente. Cea mai
frecvent localizare este cea nazal, foarte rar infecia pate ajunge pe
cale sanguin la meninge, unde va produce meningita (1 caz la 1000).
Mai poate da rinite meningococice {cel mai frecvent), sinuzite,
faringite, mai rar meningita cerebro-spinal meningococic (MCSM).
Patogenitatea se datoreaz n special proprietilor sale antifagocitare,
date de ctre polizaharidul capsular i de lipopoizaharidul care se afl
n peretele bacterian.

Meningita fulminant, (sindromul Waterhouse- Friderichsen)


Este o form supraacut a infeciei sanguine cu meningococ.
Este ocul endotoxie dat de meningococ care se manifest printr-o
vasodilataie generalizat i creterea permeabilitii pereilor
vasculari, ajungnd chiar la o extravazare a hematiilor n esuturi. Este
considerat ca o manifestare a sindromului de coagulare intravascular
diseminat (CID), o coagulopatie de consum, reflectnd deficiene
importante ale factorilor de coagulare. n aceast form fulminant,
este caracteristic examenul LCR, este aproape clar, conine un numr
mic de PMN i un numr mare de

169
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

germeni. Decesul pacientului poate surveni n 24-36 ore, dac nu se


face tratamentul corespunztor.

Imunitatea
Imunitatea antimeningococic este de tip umoral i se datoreaz
anticorpilor serici indui de infeciile meningococice sau de simpla
stare de portaj (bacteriolizine, opsonine, aglutinine, precipitine,
anticorpi fixatori de complement). Rezistena la infeciile
meningococice pare a fi specific de tip, ea poate fi obinut cu
ajutorul unor vaccinuri antimeningococice care conin polizaharidul
specific.
Din 1971 se face vaccinarea antimeningococic pentru
serogrupurile: A, B, C, Y, W-35. Imunitatea post vaccinal se
instaleaz dup 10-15 zile i dureaz cca. 5 ani.

Diagnosticul de laborator
Este bacteriologic
Produsele patologice sunt: snge, LCR, lichid peteial (la
bolnav), exudate seroase, fragmente de organe (de la cadavru), sau
exudat faringian (la purttor). Recoltarea se face n condiii de
sterilitate.

Examenul direct al produselor patologice este foarte


important.
- LCR, aspectul macroscopic este tulbure, purulent. Proba se
nsmneaz pe mediile amintite, fr s conin ageni selectivi. Se
vor face frotiuri i apoi colorate: Gram, albastru de metilen, Ziehl-
Neelsen, May-Grunwald-Giemsa. n cazul unei meningite
meningococice pe frotiuri se vor vedea multe PMN, diplococi Gram
negativi, reniformi, intra i extracelulari.
- Amprente de organe de cadavru pot da unele indicaii.
Pentru alte produse exudate faringiene nu este concludent,
datorit florei polimorfe, unde sunt multe Neisserii saprofite.

170
Caliopsta FLQREA Bacterioloie i virusologie

nsmnarea pe medii de cultur


Se folosesc mediile Mtteller-Hinton, Thayer-Martin cu
supliment HYL (snge lacat de cal 10 pri, autolizat de drojdie de
bere 1 parte, autolizat de ficat de porc 2 pri). nsmnarea din
produsele patologice de la purttori sau din produsele suprainfectate,
la mediile de mai sus de adaug supliment selectiv LCN (lincomicin,
colimicin, nistatin). Se fac nsmnrile n condiiile descrise, dup
24-48 ore se fac citirile.

Identificarea (\
- Se selecteaz coloniile smooth S, mici cu diametrul de cca.
1 mm, transparente, uor gri.
- Se examineaz biochimic pentru producerea citocrora-
oxidazei (pe hrtie impregnat cu reactiv).
- Se fac frotiuri colorate Gram pentru prezena diplococilor
Gram-negativi, n boabe de cafea fa n fa. Dac ndeplinesc cele
trei criterii nseamn c aparin genului Neisseria.
- Identificare serologic de grup din culturile pure se fac
aglutinri cu seruri polivalente i apoi cu monovalente, identificndu-
se grupul de meningococ. n zona european cele mai frecvente simt:
A. B, C, Y, W-135 .

Confirmare
Coloniile care au aparinut genului Neisseria se vor repica pentru
obinerea culturilor pure i apoi se va face testare pentru fermentarea
zaharurilor:
- fie se nsmneaz pe medii: geloz cu zahar 1%, ser de cal
10%, indicator de albastru de bromtimol, se incubeaz n atm. de CO2
i se examineaz dup 24 ore.
- fie se nsmneaz pe galerii Api etc.

171
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

Fermentarea glucozei i maltozei i nefermentarea levulozei,


lactozei i zaharozei, confirm gennenul n specia Neisseria meningitidis.
i,

Metode de identificare rapid


- coaglutinarea i latexaglutinarea (anticorpii antimeningococici
sunt fixai pe proteina A stafilococic respectiv pe particule de latex)
se face direct din LCR;
- contraimunelecroforeza efectuat n gel de agar 1% cu tampon
vemal cu pH 7,8, godeurile dinspre anod sunt umplute cu LCR iar cele
dinspre catod sunt umplute cu serurile antimeningococice cele mai
frecvente n zona respectiv, dup migrare 60-90 min, la o intensitate
de 3 mA, poate fi urmrite apariia benzilor de precipitare ntre
godeurile cu lichid i seruri antispecifiee;
- metodele biologiei moleculare.

Testarea sensibilitii la antibiotice (antibiograma) se


face prin metoda disc-difuzimetric pe mediul Miieller-Hinton n atm.
de CO2 la 37C i se citesc conform standardului indicat de
productorul de microcomprimate.

Neisseria gonorrhoeae
x^

Neisseria gonorrhoeae sau gonococul produce infecia gonococic.


Aceast bacterie a fost descris de ctre Albert Neisser n 1879, n
uretrite acute la brbai i n conjunctivita nou- nscuilor. Punerea n
eviden a culturii de gonococ a fost n 1882 de ctre Leistikov i
Loeffler.

172
Caliopsa FLOREA Bacterioloie i virusologie

Habitat
N. gonorrhoeae este un parazit strict pentru specia uman. Se
grefeaz pe celulele mucoase ndemne, n special pe mucoasa genitala
i accidental pe alte mucoase: rectal, faringian, conjunctival.
Germenul , poate trece bariera epitelial rspndindu-se la glandele
aferente i ajunse n curentul sanguin, se poate localiza la membranele
sinoviale ale articulaiilor sau n anumite organe producnd abcese.
Conjunctivita care poate ajunge pn la oftalmia gonococic la
nou-nscut este o infecie exogen produs n timpul naterii atunci
cnd mama are vaginit gonococic.
La brbat principala form de boal este uretrita gonococic, la
femei vaginita i metrita.

Caractere morfo-tinctoriale
Sunt coci ovalari de 0,6-1,0 pm, n diplo, cu prile concave
adiacente, asemntori boabelor de cafea. Sunt Gram negativi, sunt
imobili, nesporulai. La suprafaa celulei au pili cu rol determinant n
ataarea bacteriei de celula gazdei, deci se gsesc la speciile virulente,
lipsind la cele nevirulente sau la cele din coleciile vechi.

Caractere de cultur
Gonococul nu se dezvolt pe medii simple, este germenul cel mai
greu de cultivat dintre toate Neisseriile. Se folosesc mediile descrise
la N. meningitidis, pentru produsele patologice se prefer mediile cu
supliment selectiv (colimicin i lincomicin cte 300 pg la 100 ml
mediu final) sau vancomicin, colistin, trimetoprim i nistatin. Este
necesar o atmosfer de 5-10% CC>25 la 35~37C.
Citirile se fac dup 24-48 ore. Gonococul produce colonii smooth
S de 0,5-1 mm, sau colonii de tip M (mucoase), nepigmentate,
transparente sau opace.
Aciunea agenilor fizici, chimici i biologici
N. gonorrhoeae este foarte sensibil n afara organismului. Este
sensibil la uscciune, moare n 1-2 ore, nefiind viabil dect n secreiile

173
Caliopsia FLOREA Bacterioioie i virusologie
purulente umede. Este distrus de fenol 1% n 1-2 min, alcool medicinal
70 n 5-7 min. Este sensibil la variaiile de temperatur i de pH
(optim pH de 7,2-7,8).

Sensibilitatea la antibiotice
In general este sensibil la penicilin n cca. 90%, dar pot fi i
tulpini productoare de p-lactamaz, de aceea se recomand
antibiograma.

Caractere antigenice
Are antigene somatice 0 (care se pune n circulaie dup
moartea bacteriei) i capsulare K.

Patogenitate
Bolile produse la om sunt: uretrite gonococice sau blenoragia la
ambele sexe, prostatite, epididimite la brbai, cervicite, anexite,
metrite la femei, conjunctivite, endocardite, artrite.
Toate cazurile de mbolnviri debuteaz cu o form acut cu
simptome evidente (apare o secreie abundent galben-verzuie la nivel
genital), dac tratamentul nu este corect, boala trece n form cronic,
greu de depistat i tratat i adenopatie satelit.

Imunitate ,
Imunitatea umoral este slaba, de aceea apar reinfecii cu N.
gonorrhoeae. Nu exist un vaccin antigonococic cu proprieti
profilactice.
Diagnosticul de laborator
Este bacteriologic. Produsele patologice sunt secreiile
exudative ale mucoaselor inflamate. Aceste au aspect purulent, opace,
cremoase cu o tenta glbuie i se desprind uor de pe mucoas.
- Recoltarea se face cu ansa sau cu tampoane sterile.
La brbai trebuie s se ptrund cu ansa sau cu tampoane cu
diametrul de 2-3 mm, pe o distan de 1-2 cm de la meat
La femei recoltarea, se face din colul uterin, sau* din sacul

174
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

vaginal posterior, se va face cu valve sau speculum, sterile. Din alte


exudate se face cu tampoane sterile. '
- Examenul direct din probele recoltate se vor face frotiuri care
se vor colora Gram i albastru de metilen, apoi se vor examina cu
imersie. Frotiurile din uretrite acute conin PMN i
A

coci n diplo n boabe de cafea intra i extracelulari. In formele


cronice prezena n cantitate mare a florei polimorfe i fibrin, pot
masca germenii care au provocat infecia.
- De aceea se va face nsmnarea pe medii de cultur.
Se vor nsmna pe mediile amintite cu sau fr ageni selectivi,
incubarea se va face n condiii de CO2 5-10%, la 37 C i n atmosfer
umed. Examinarea culturilor dup 24-48ore.

Identificarea
- Colonii mici cu diametrul de 1-2 mm, transparente, uor gri,
lucioase cu margini netede, reacia oxidazei pozitiv n 5-10 secunde;
- pe frotiuri, diplococi Gram negativ n boabe de cafea, intra
i extracelular.

Confirmare
- Se testeaz fermentarea zaharurilor. N. gonorrhoeae
fermenteaz numai glucoza

175
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

Metode rapide de identificare


- Prin imunofluorescen, cultura se va colora cu ser fluorescent
antigonococic, examinarea se va face cu microscopul pe fond ntunecat
n lumin ultraviolet.
- Testul de coaglutinare cu ser antigonococic cuplat cu proteina
A stafilococic, aglutinarea n 3 min d reacie pozitiv.
- Metodele biologiei moleculare: PCR, sonde nucleotidice.

Antibiograma
Se testeaz pe mediul Mueller-Hinton prin metoda disc-
difuzimetric. Sunt tulpini care secret p-lactamaz (care se testeaz
cu discuri de nitrocefln care au culoarea galben, dac colonia este de
gonococ care secret p-lactamaz, vireaz culoarea n rou) i de aceea
pot fi rezistente la penicilin, n acest caz se face antibiograma.
Conservarea tulpinilor
Se nsmneaz n tuburi cu mediul HYL sau geloz ocolat, se
incubeaz, se va aduga un strat de oleu de parafin steril de 5 mm,
rmn viabile 4-6 sptmni la 37C. Se pot conserva 2-7 ani, prin
liofilizare.

Transportul probelor
Atuncicnd probele se transport de la distane mari de
laborator, se5face n mediul Stuart, topit i repartizat n recipiente
sterile, la 20-25C.

Genul Moraxelt{i/Bran hameii a

Cuprinde apte specii, dintre care 6 sunt implicate n infecii


umane: M. lacunata, M. nonliquefaciens, M. osloensis, M. phenylpyruvica,
M. atlantae, M. itrethralis, iar M. bovis a fost izolat numai la animale. Sunt
bacili Gram negativi, scuri de 1 -2 pm, sau cocobacili, n diplo,
imobili. Sunt oxidazo pozitive i nezaharolitice. Nu necesit factori de
cretere, cu excepia M. lacunata, care necesit ser de iepure i pepton.
Nu sunt hemolitice, nu produc pigmeni, nu produc H2S.

176
Caliopsia FLORE A Bacterioloie i virusologie

Se gsesc frecvent pe mucoase la om i animale i sunt accidental


patogene pentru om.
Pot da infecii: oculare, respiratorii, uro-genitale.

177
Caltopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

Capitolul XIV
Familia Enterobacteriaceae

Generaliti
Familia Enterobacteriaceae este alctuit din numeroase specii, de
bacili Gram negativi, aerobi, facultativ anaerobi, nesporulai, mobili,
cu cili peritrichi, sau imobili, care se cultiv uor pe medii de cultur
simple, fermenteaz glucoza cu sau fr producere de gaz, sunt
oxidazo-negativi, produc catalaz, reduc nitraii n nitri{i. Sediul
obinuit al acestor germeni este intestinul uman sau animal.
Aceast familie este format din 44 de genuri, dintre care 25 de
genuri au fost implicate n patogenia uman.
Tabel IV Taxonomia familiei Enterobacteriaceae
dup Bergey's Manual of Systemic Bacteriology, 2004 (preluat din tratatul de
Microbiologie Clinic de Buiuc D., Negu M., 2008)
Genul Numr Specii de importan
specii medical
I. ESCHERICHIA 7 -coli
- fergusonii
t J
- hermanii
1\
1

- vulneris
II. ALTEROCOCCUS 1 - agarolyticus
IL ARSENOPHONUS 1 - nasoniae
IV. BRENNERIA 7 -
V. BRUCHNERA 1 -

VI. BUDVICIA 1 -

VII. BUTTIAUXELLA 7

178
Caliopsia FLORE A Bacterioloie i virusologie

VIIL CALYMMATOBACTERIUM 1 -
IX. CEDECEA 3 - davlsae
- lapagei
- neteri
X. CTTROBACTER 12 - freundii
- amalonaticus
- diversus
XL EDWARDSIELLA 4 - tarda
Xn. ENTEROBACTER 16
- cloacae
- aerogenes'i
- agglomerates
- gergoyiae \j -sakazakii
- taylorae
XIII. ERWINIA 28 - fitopatogen
XIV. EWINGELLA 1 - americana
XV. HAFNIA 1 - alvei
XVL KLEBSIELLA 10 - pneumoniae
- rhinoscleromatis
- oxytoca
- ozaenae
XVII. KLUYVERA
-ascorbata - cryocrescens
XVIII. LECLERCIA 1 - adecarboxylata
XIX. LEMINORELLA - grimontii
2
- richardii
XX. MOELLERELLA -

XXI. MORGANELLA 1 - morgani


XXII. OBESUMBACTERIUM 1 - proteus
XXm. PANTOEA 7 - agglomerans
XXIV. PECTOBACTERIUM 9 - fltopatogen
XXV. PHLOMOBACTER -

XXVI. PHOTORHABDUS 1 -

XXVII. PLESIOMONAS 1 - shigelloides


XXVIII. PRAGIA -

XXIX. PROTEUS 8
- vulgaris mirabilis
- myxofaciens
- penneri

179
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

XXX. PROVIDENCIA 6
- alcalifaciens,
- rettgeri
- rustigianii -sturtii
XXXI. RAHNELLA 1 -1'
XXXII. RAOULTELLA 3
XXXIII. SACCHAROBACTER 1 -
XXXIV. SALMONELLA 8 -enterica
- bongoii
- choleraesuis
- arizonae
- enteritidis
- paratyphi
- typhi
- typhlmurlum
XXXV. SAMSONIA 1 -
XXXVI. SERRATIA 12 - marcescens
- liquefaciens
- plymuthica
- quinovorans
- rubidaea
XXXVII. SHIGELLA 4 - dysenteriae
- boydii
- flexneri
- sonnei
XXXVIII. SO0ALIS 1 -
XXXXIX. TAf UMELLA 1 - ptyseos
XL. TRABULglELLA I -
XLI. WIGGLESWORTHIA 1 o

XLII. XENORHABDUS 6 -

XLIII. YERSINIA 12 - pestis


- enterocolitica
1 - pseudotuberculosis
XLIV. YOKENELLA 1

180

\
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

Genurile Shigella i Salmonella sunt ntotdeauna patogene. Celelalte


genuri sunt condiionat patogene sau ocazional patogene, cu excepia
speciei Yersinia pestis care este ntotdeauna patogen.

Genul ESCHERICHIA

Face parte din familia Enterobacteriaceae, sunt bacterii condiionat


patogene. Cea mai important specie pentru patogenia uman este
Escherichia coli, E, blattae a fost izolat numai la insecte (gndacii de
buctrie) iar celelate specii: E. hermanii, E. fergusonii i E. vulneris au fost
semnalate numai ocazional n diferite infecii umane. n caz de boal, E.
coli, poate fi pus n eviden n: snge, urin, puroi, fecale, etc.

Caractere morfologice i tinctoriale


Sunt bacili Gram negativi, lungi de 2-3 pm i groi de 0,5 pm, ciliai,
ceea ce face ca majoritatea s fie mobili, dar sunt i tulpini de E. coli imobile,
nu sunt sporulai.

Caractere de cultur
Nu sunt germeni pretenioi, cresc abundent pe mediile de cultur
obinuite: bulion simplu, ap peptonat, geloz nutritiv. Formele S
tulbur uniform bulionul i dau natere la colonii netede, bombate, cu
margini regulate, cu diametrul de 2-3 mm pe mediile gelozate. Formele R
cresc n bulion, se depun la fundul eprubetei i dau colonii rugoase cu
margini neregulate, pe mediile solide. Se pot folosi i mediile slab
difereniate, pe mediul AABTL (agar albastru de, bromtimol lactoz)
formeaz colonii galbene deoarece fermenteaz lactoza, pe mediul Levine
(geloz lactozat cu eozin i albastru de metilen) coloniile au o culoare
negricioas cu luciu metalic, spre deosebire de alte Enterobacteriaceae care
au o culoare roz-palid.

181
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

Caractere biochimice
Sunt bacterii aerobe, care se pot dezvolta i n condiii de anaerobioz.
Ele posed un bogat echipament enzimatic, fermenteaz glucoza, zaharoza,
lactoza (unele tulpini fermenteaz tardiv lactoza), produc indol, produc
lizindecarboxilaz, nu produc ureaz, fenilalanindezaminaz, nu produc
H2S, nu lichefiaz gelatina, pot avea o activitate hemolitic i
dermonecrotic.

Rezisten
Bacilii coli rezist timp ndelungat n mediul exterior, ei sunt omori
prin nclzire la 60C, timp de 40-60 min. Sunt sensibili la aciunea
substanelor dezinfectante: cloramin, fenol, formol, sublimat.
Sunt sensibili la aciunea streptomicinei, cloramfenicolului, la unele
sulfamide, aminoglicozide, chinolone, dar sunt rezisteni la penicilin. Unii
colibacili sintetizeaz substane care distrug alte specii bacteriene, colicine.

Structura antigen ic
Au o structur antigenic complex legat de existena celor trei
antigene: O (166 serogrupuri), K - 98 sertipuri (A, B, L, Vi), H (53
serotipuri); dup schema Kauffmann-White. Pe baza lor s-au mprit n:
grupuri serologice (O) i tipuri serologice sau serovaruri (H i K).
Antigenul solubil este endotoxina care se elibereaz dup moarte bacteriei.
l
Patogenie '
Cei mai muli colibacili nu sunt patogeni. Virulena i toxicitatea
bacteriilor patogene sunt legate de prezena Ag K i a unor toxine
(enterotoxina, neurotoxina etc.) precum i producerea hemolizinei i
factorului citotoxic necrotizant.
Boala la om: n anumite condiii E.coii poate s dea natere la diferite
afeciuni locale sau generale: afeciuni genitourinare [80% dintre infeciile
urinare provocate de patotipuri uropatogene datorit unor adezine,
hemolizine, aerobactinei, factorul citotoxic necrotizant I (CNF I) care au
receptori pe tractul urinar] i infecii intestinale. Sunt 6 patotipuri
diareigene ETEC (enterotoxigen), EHEC (enterohemoragic), EIEC

182
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

(enteroinvaziv), EAggEC (enteroagregativ), EPEC (enteropatogen), DAEC


(enteroaderent difuz); mai pot da faringite, otite, conjunctivite, endocardite,
meningite, septicemii. \j
Rspunsul imun este slab. '
Tratament: se face conform antibiogamei. Se mai poate administra
ser anticolibacilar 'sau se prepar un utovaccin din tulpina izolat de la
pacient. Tratamentul cu bacteriofagi poate da rezultate bune mai ales cnd
el este aplicat local.
Diagnosticul de laborator este bacteriologic Const n izolarea i
identificarea colibacililor din produsele patogene.
Recoltarea se face n funcie de produsele patogene.

Hemocultura n strile septicemice se recolteaz n condiii de


perfect sterilitate, sngele, se nsmneaz la patul bolnavului n bulion
pentru hemoeulturi 1/10, mediul astfel nsmnat este introdus la termostat
la 37 C. Dup 24 h, dac bulionul se tulbur, se vor face treceri pe medii
gelozate i apoi se va identifica bacteria prin teste biochimice i serologice.
Dac mediul este steril se va incuba cel puin apte zile, timp n care se va
examina bulionul i se vor face treceri oarbe, dac nu s-a nregistrat nicio
cretere, sau se vor face treceri pe medii adecvate dac au fost nregistrate
creteri de germeni. Dac dup apte zile de incubare nu se nregistreaz
nicio cretere de d rezultatul de hemocultur negativ.
Coprocultura
Materiile fecale sunt nsmnate, fr mbogire, prin dispersie pe
medii solide selecive slabe sau medii care s conin lactoz i un indicator
de pH (AABTL, Mc Conkey, Levine). Apoi se va trece la identificarea
biochimic i serologic a tulpinei.

Urocutura
Dup ce se recolteaz urina n condiii aseptice, se nsmneaz pe
mediile solide amintite, dac pe plac se dezvolt un numr de cel puin IO5
UFC/ml de colonii cu aceeai morfologie se va repica o singur colonie,
pentru obinerea unei culturi pure, apoi se va trece pe mediile politrope,

183
Caliopsia FLOREA Bacterioioie i virusologie

pentru identificare biochimic i serologic.


Dup fiecare identificare se va face antibiograma.

Genul SHIGELLA

Germenii din acest grup produc dizenteria bacilar. Bacilii


dizenteriei sunt gsii n materiile fecale ale bolnavilor de dizenterie i ale
purttorilor, de asemenea se pot gsi n unele alimente contaminate, ape
poluate.

Caractere morfo-tinctoriale
Sunt bacili Gram negativi, imobili i nu sunt capsulai.

Caractere de cultur i metabolism


Bacilii dizenteriei cresc uor pe mediile de cultur simple, pe medii
slab sau medii selective (ADCL, AABTL, Mc Conkey). Sunt aerobi,
facultativi anaerobi, fermenteaz glucoza dar nil fermenteaz
lactoza/zaharoza, nu lichefiaz gelatina, nu formeaz hidrogen sulfurat, nu
produc lizindecarboxilaz i fenilalanindezaminaz. Ei sunt mai puin
rezisteni la mediul
extern. n materiile fecale ei sunt distrui prin concuren de ali germeni,
de aceea nsmnarea trebuie, fcut,imediat dup recoltare. n alimente
i n ap, n. condiii de, temperatur, pH, etc., pot supravieui cteva zile
sau sptmni. . Sunt distrui imediat de substanele antiseptice obinuite.
Sunt sensibili la aciunea unor sulfamide, cloramfenicol, dar rezistente la
penicilin. . t.

Antigene
Diferenierea serologic se face numai dup antigenul somatic O
i antigene solubile, endotoxina. Sunt mai multe fraciuni comune de Ag
O, pe baza crora genul este mprit n grupuri mari, apoi sunt
mprite n tipuri i subtipuri.
Genul Shigella are 4 grupuri serologice: A, B, C, D.
Grupul A (Shigella dyzenteriae) cuprinde 13 serotipuri. Acest grup
184
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

este cel mai patogen. Shigella Shiga este cea mai patogen specie,
elaboreaz exotoxina neurotrop.
Grupul B {Shigella Jlexneri) cuprinde 6 .tipuri, din care primele 4 au
i subtipuri.
Grupul C {Shigella boydii) cuprinde 18 tipuri serologice.
Grupul D {Shigella sonnei) cuprinde dou faze:
- faza I (sau S)
- faza II (sau R)

, .Caractere de patogenitate
Au caracter de multiplicare i toxigenez, acioneaz la nivelul
sigmoidului cu ulceraii superficiale. n dizenteria dat de Shigella apar
trei simptome ce constituie sindromul dizenterie (scaune sanghinolente i
mucoase, colici abdominale, tenesme- senzaie de defecare fr scaun).
n general boala evolueaz cronic, uneori pe fondul unei rezistene
sczute dau recidive. La copii este cea mai grav dizenterie. Rspunsul
imun este foarte slab.

185
Caliopsia FLORE A Bacterioloie i virusologie

Diagnosticul de laborator este diagnostic bacteriologic


Recoltarea materiilor fecale, pentru coprocultur, se face astfel: la
bolnavii cu forme acute se recolteaz ct mai la nceputul bolii, din scaun
emis spontan. n mucus, striuri sanguinolente, puroi i fragmente de
mucoas se gsesc numeroi bacili dizenteriei. Se recomand ca recoltarea
s se fac nainte de nceperea tratamentului cu antibiotice. La bolnavii
cronici sau purttori de bacili dizenteriei, se recolteaz cu ajutorul unei
sonde Nelaton, care se va intoduce pn la sediul leziunii (sigmoid),
coninutul este descrcat n ser fiziologic sau n mediul de transport Cary-
Blair. Cultivarea se face fr mbogire pe mediile descrise la Escherichia,
fiind lactoz negativ, coloniile sunt mici, transparente, fr s modifice
culoarea mediului. Se izoleaz germenul i se identific genul biochimic,
grupul serologic, tipul i subtipul (dup caz).
Tratamentul se face conform antibiogramei.
n ara noastr se face un tratament specific cu un vaccin viu
nepatogen, Vadizen (vaccin viu antidizenteric) produs de Institutul Ion
Cantacuzino, cu rezultate promitoare.

Genul Salmonella

Este un grup al familiei Enterobacteriaceae, format din bacili Gram


negativi, mobili nesporulai, ce au o structur antigenic complex i
patogenitate cert pentru om.
Clasificare: pe baza structurii antigenice a fost alctuit o schem de
diagnostic n care genul Salmonella a fost mprit n grupuri (cu antigene
somatice comune), fiecare grup este format din specii care se difereniaz
prin antigenele flagelare specifice.
Habitat: germenii din acest gen se ntlnesc la omul bolnav sau
purttorii de germeni, la mamifere, reptile, n mediul extern: ape, soi,
alimente.
Caractere morfologice i tinctoriale
Sunt bacili ce au o lungime de 2-3 pm i groi de 0,6 pm. Sunt bacili
mobili, cu cili peritrichi bine dezvoltai, nu formeaz spori, nu au capsule,

186
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

sunt Gram negativi.

Caractere de cultur
Sunt germeni aerobi, facultativi anaerobi. Cresc pe medii de cultur
simple (bulion, ap peptonat, geloz nutritiv). Cresc sub forme S, care
tulbur uniform mediile lichide i formeaz colonii netede, rotunde,
lucioase pe medii solide; sa^j sub form R, care sedimenteaz n mediile
lichide i dau natefe la colonii zbrcite, cu margini neregulate, pe medii
solide.

Caractere biochimice
Sunt Enterobacteriaceae mobile cu excepia serovarului
Gallinarum/Pullorum care este imobil, fermenteaz glucoza cu producere de
gaz, nu fermenteaz lactoza, produc acid din manitol i sorbitol, produc
lizindecarboxilaz, arginindehidrolaz, omitindecarboxilaza, H2S (cu
unele excepii), folosesc citratul ca unic surs de carbon, nu produc indol,
ureaz, fenilalanindezaminaz i acetilmetilcarbinol (R. Voges-Proskauer
negativ), nu degradeaz adonitolul i esculina.
Ele se dezvolt bine la 37 C, pe medii cu un pH de 7,2-7,4.

Rezisten la ageni fizici, chimici i biologici


Ele pot tri cteva luni n mediul extern (pmnt, ap, ghea,
alimente), ele sunt distruse prin nclzire la 56-60 C intr- o or. Sunt
sensibili la aciunea dezinfectantelor (acid fenic 5%, sublimat 1%) care le
omoar n 30 min.
Salmonelele sunt sensibile la antibiotice (cloramfenicol,
streptomicin, aminoglicozide), la unele sulfamide. Sunt lizate de anumii
baeteriofagi n mod selectiv.
Structura antigenlc
Prezint toate tipurile de antigene.
1. Antigene somatice O , pe baza acestui antigen genul este
mprit n 65 de grupuri serologice.
2. Antigene flagelare H, pe baza acestui antigen, grupurile
serologice au fost mprite n tipuri serologice. Acest antigen prezint dou

187
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

faze:
- faz specific ce are 90 de fraciuni (a, b, c..z, zl, z2,
z3..),
- faza nespecifc, ce are doar 7 fraciuni, dar n acest caz nu poate
fi determinat specia.
Salmonella typhU cea mai patogen, i sintetizeaz totdeauna un
flagel din proteine specifice, de aceea poate fi identificat.
Kauffmann i White au stabilit c Salmonella cu Ag O == 9 sau
12, cu Ag H = d i Ag K Vi, este Salmonella typhi, iar cu AgH= g sau
m este Salmonella enteritidis. Acest fapt are mare importan practic
deoarece cu ajutorul serurilor imune specifice se poate pune diagnosticul.
Antigenul solubil este endotoxina, ea are un rol patogen mult mai
important la salmonelele cu caracter invaziv, deoarece sunt puse n
circulaie, ducnd la generalizare (febra tifoid).
i
Caractere de patogenitate
Toate salmonelele sunt patogene, prin multiplicare i
endotoxinogenez, iar cele ce prezint i o psudocapsul (Ag Vi) au i
caracter de invazivitate.
La om salmonelozele sunt sub dou forme principale.
1. Boli septicemice, cu evoluie grav i mortalitate ridicat, cum
sunt febra tifoid (produs de bacilul tific) i febrele paratifoide A, B i C
(produse de bacili paratifici A, B i C).
2. Boli localizate, mai ales la nivelul tubului digestiv (toxiinfeciile
alimentare i enteritele), cu o durat mai scurt i de o gravitate mai redus..
...
'b . ' r

Imunitatea
Fotii bolnavi de febr tifoid i paratifoid dobndesc o imunitate
solid, care poate dura toat viaa. Imunitatea n toxiinfeciile alimentare i
a enteritelor este slab. Imunitatea antitifoparatifoidic se poate dobndi i
n mod artificial, prin vaccinare. .

Diagnosticul de laborator in infeciile tifoparatifoidice este

188
Caliopsia FLOREA Bacterioloie i virusologie

bacteriologic i imunologic.
Diagnosticul bacteriologic
Produsele patologice care se examineaz sunt: sngele, mduva
oaselor, materiile fecale, urina, bila, lichidul din petele lenticulare. n cazuri
letale i sngele din inim, fragmente din organe (ficat, splin, ganglioni
mezenterici). Alegerea produselor patologice se face n funcie de cazul
studiat (bolnav, sau purttor sntos).
n prima sptmn de boal, germenii pot fi gsii in snge i n
mduva oaselor (hemoculturile i culturile din mduv sunt pozitive peste
90%), iar 60% n materiile fecale.
n sptmna a doua po fi depistai i n urin la 30%.
n sptmna a 3 a i a 4 a, hemoculturile sunt pozitive doar 40%, n
timp ce coproculturile vor fi pozitive n proporie de 80%.
La convalesceni sau la purttori, produsele de cercetat sunt materiile
fecale, bila i urina.

Coprocultura la bolnavi se recolteaz 4-5 g de materii fecale, care se


introduc ntr-un recoltor steril cu mediul Cary- Blair, dac este diareic se
recolteaz n aceast stare, dac este

189
Caliopsia FLOREA Bactertoloie i virusologie
consistent se omogenizeaz cu SF steril, dac bolnavul este constipat,
se recolteaz dup o clism cu apa fiart i rcit.
Fotilor bolnavi de febr tifoid i contacior li se administreaz o
doz unic de sulfat de sodiu i sulfat de magneziu (cte 15 g) dizolvate n
200-250 ml ap, apoi se recolteaz al 2-lea i al 3-lea scaun. Dup recoltare
vasele se dezinfecteaz cu o soluie de corur de var 10%, sau se
sterilizeaz. Dac probele trebuie transportate ele se fac n medii de
transport de un personal instruit. Fiecare prob se nsmneaz obligatoriu,
pe bulion, mediul lichid de mbogire cu selenit acid de sodiu, sau bulion
cu tetrationat Mtilier-Kauffmann, se incubeaza 37 C 18-24h, dac se
nregistreaz cretere, mediul lichid se va tulbura i poate vira la crmiziu
pentru mediul cu selenit sau pot decolora medilul Muller-Kauffrnann. Apoi
de pe aceste medii lichide se fac treceri pe medii solide selective (ADCL,
Istrati Meitert, Mc Conkey) sau nalt selective Wilson Blair (numai de pe
bulionul Muller-Kauffrnann).
Pa mediul A.D.C.L coloniile de Salmonella apar transparente, de
culoare roz, ca i la alte bacterii lactozo negative, dar cu centrul negru. Pe
mediul Mc Conkey coloniile sunt transparente, iar pe mediul Istrati Meitert
(agar cu bil uscat) coloniile sunt albastre cu centrul negru. Pe mediul
Wilson-Blair, nalt selectiv, care nu are lactoz n sistemul indicator, dar
conine sulfit de bismut i verde briliant, coloniile de Salmonella sunt negre,
rugoase, cu margini neregulate, forme R i halou metalic.
Apoi se vor nsmna pe medii multitest, pentru caracterele
biochimice.
Pentru identificarea grupului i a tipului serologic se fac aglutinri pe
lam cu seruri polivalent anti O, anti H, anti Vi i SF; apoi cu seruri
monovalente corespunztoare pentru antigenele O , H, n funcie de
aglutinrile care apar se poate integra ntr-un anumit grup, tulpina izolat.
Urocultura se practic la bolnavii convalesceni (a 7a, a 12a, i a 17a
zi) i la puttor. Urina se recolteaz din 24 h intr-un vas steril. Se
nsmneaz 2 ml n 8 ml mediu de mbogire, apoi pe mediile solide
amintite^ sau direct pe mediile solide. Identificarea speciei se face ca la
coprocultur.
190
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

Bilicultura, examenul bacteriologic al bilei, atunci cnd coprocultur,


urocultura sunt negative n mod repetat, i atunci cnd apar anticorpi anti
Vi n ser. Recoltarea se face pe nemncate prin tubaj duodenal, dup
centrifugarea \ibilei, din sediment se fac nsmnri pe mediul de
mbogire,' pe medii solide selective, apoi se va face identificarea ca Ia
coproculturi.

Hemocultura se face prin puncie venoas n condiii sterile, se


nsmneaz n bulion simplu sau bulion cu bil steril de bou n pri
egale, cantitatea de snge trebuie s fie 1/10 din bulion. Hemocultura se va
pune la termostat la 37 C i se va urmrii zilnic, dac apare o cretere se
va nsmna pe medii solide i se va face identificarea obinuit, dac nu
crete timp de 7 zile se va da hemocultura negativ.
n TIA se mai analizeaz i lichidele de vrsturi, alimentele
incriminate, etc., etapele sunt aceleai ca la coproculturi.

Diagnosticul imunologic
n febrele tifo-paratifoide se recomand efectuarea Ase (analiza
seric calitativ n aceast reacie antigenele 0 i H sunt inactivate)
fost seroreacia Widal (n care antigenele erau culturi vii atenuate de S.
typh), care permite decelarea, n mod separat a aglutininelor anti O i anti
H. nactivarea antigenelor 0 se face 18-20 ore la 52C i 10 min la
temperatura camerei, iar pentru antigenele H se face 2 ore la 52C i 10
min la temperatura camerei. Titrul aglutininelor crete uor ajungnd la
maximum ntre a 16 a i a 29 a zi de boal, el rmnnd crescut

191
Caliopsia FLORBA Bacteriologie i virusologie

i n convalescen. Reacia de aglutinare Vi pune n eviden


apariia anticorpilor anti Vi n serul bolnavilor i a purttorilor. Deoarece
aceti anticorpi apar tardiv n timpul bolii, ea este util mai ales n
diagnosticul purttorilor de germeni de lung durat.
Dup boala sistemic apar anticorpi care protejeaz cel puin 5-10
ani.

Genul KLEBSIELLA

Sunt germeni condiionat patogeni ai tubului digestiv i ai cilor


respiratorii superioare. n anumite condiii favorizante, ei pot provoca boli
ai aparatului respirator, infecii urinare, meningite, otite etc. J

Diagnosticul de laborator este bacteriologic

Caractere morfologice i tinctoriale


Klebsieleie sunt bacili Gram negativi, dispui n lanuri scurte, 2-3
bacili cu capete rotunjite n lan, sunt nconjurai de o capsul comun, mai
evident n "produsele patologice. Sunt imobili i nesporulai.
n
Caractere de cultur
Cresc abundent la 37 C timp de 18-24 h pe medii obinuite, n
mediile lichide formeaz la suprafa un inel sau un vl care ulterior cade
la fundul tubului. Formele capsulate dau pe geloz colonii mari (2-4 mm),
vscoase. Fermenteaz lactoza, pe AABTL produc colonii cu aspect de
pictur de miere (galbene, lucioase care se scurg uor).

Caractere biochimice i de metabolism


Sunt germeni aerobi i facultativi anaerobi, fermenteaz glucoza,
lactoza i alte zaharuri cu producere de mari cantiti de gaz, nu produce
indol i H2S, nu lichefiaz gelatina, reacia rou metil i testul la
fenillanindezaminaz sunt negative, formeaz. acetii-metil-carbinol
(reacia Voges-Proskauer pozitiv), descompun ureea i cresc n prezena
malonatului de sodiu i a citratului.
192
Caliopsia FLORBA Bacteriologie i virusologie

Rezistena la ageni fizici, chimici i biologici


Klebsielele sunt omorte prin nclzire la 55-60 C, timp de 30 min,
dar pot rezista mai multe sptmni n natur dac au condiii favorabile.
Sunt sensibile la antibiotice cu spectru larg, rezistente la penicilin.

Caractere antigenice
Se cunosc antigene somatice: O i K. Antigenul O se ntlnete
la formele S, antigenul K la formele capsulate. Pe baza acestor antigene
s-a stabilit o schem de diagnostic Kauffinann i 0rscov, pe baza
antigenului K sunt 77- de serotipuri (servaruri). Antigenul solubil este
endotoxina.

Caractere de patogenitate
Pe lng tipurile de Klebsiella condionat patogene, se pot ntlni i
specii patogene pentru om care produc: pneumonii, bronite, pleurezii,
infecii urinare, otite, meningite, colecistite. Uneori pot da infecii
intraspitaliceti. Speciile cele mai ntlnite sunt: Klebsiella pneumoniae,
Klebsiella oxytoca, sunt speciile cele mai frecvent ntlnite n infeciile
nosocomiale, pneumonii, infecii urinare. Klebsiella rhinoscleromatis i
Klebsiella ozenae, pot s dea afeciuni n sfera ORL.
Genul PROTEUS

Sunt bacterii foarte rspndite n natur i reprezint unul din


microorganismele principale ale putrefaciei datorit bogatului
echipament enzimatic.

Clasificare
Pe baza caracterelor biochimice a fost mprit n 4 specii, dintre
care 3 specii pot s afecteze omul: Proteus vulgaris, Proteus mirabiis,
Proteus penneri.

_ Diagnosticul de laborator este bacteriologic


Habitat

193
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

_ Sunt germeni saprofii care se ntlnesc n materiile organice n


descompunere, n alimente alterate, n flora intestinal a oamenilor i
animalelor.

Caractere morfologice i inctoriale


Sunt bacili Gram negativi de mrimi variabile de la 2 pm la forme
filamentoase (zeci de pm), au cili peritrichi foarte viguroi.

Caractere de cultur
~ Cresc uor pe medii simple, sunt germeni aerobi, facultativi anaerobi,
cresc optim la 34-37 C, 18-24 h. Tulbur uniform bulionul, formnd vl
la suprafa i invadeaz rapid toate mediile solide simple gelozate 2%,
din loCuI inoculrii, valuri succesive I de cultur migreaz concentric
pn la marginea mediului sau U pn la ntlnirea cu valul migrator al
altei tulpini, n acest caz migrrile se opresc l 1-2 mm distan, ntre ele
trasndu-se o linie de demarcaie (fenomenul Dienes), este folosit ca
marker epidemiologie. Pe geloza nclinat nsmnarea germenilor n
lichidul de condensare determin un fenomen de "crare.

194
Caliopsia FLORE A Bacteriologic i virusologie

Pe mediile selective coloniile sunt S lactozo negative cu centrul


negru i nu manifest fenomenul de migrare.

Caractere biochimice i de metabolism


Germenii posed un echipament enzimatic bogat, prezena unei
ureaze foarte active, prezena. fenilalnindezaminazei, lichefiaz
gelatina, formeaz H2S, fermenteaz glucoza cu producere slab de
gaz, nu fermenteaz lactoza i mamita, unele tulpini pot produce o
hemoliz slab.
i
*
Rezistena la agenii fizici, chimici i biologici
n mediul exterior, bacilii pot tri n condiii favorabile luni de
zile. Sunt omori la 60C ntr-o or. Fenolul 1% i distruge ntr-o
jumtate de or. Sunt sensibili la antibiotice cu spectru larg:
aminoglicozide, cloramfenicol, chinolone.

Structura antigenic
Kauffmann i Perch au propus o schem antigenic, dup
modelul Kauffinann-White, s-au bazat pe antigenele O i H cu
ajutorul crora au clasificat n 55 grupuri antigenice, dup antigenul
0 i 31 tipuri serologice, dup antigenul H\ Unele specii de Proteus
sunt imobile (0X19, 0X2 i Oxk) au antigene comune cu rickettsiile,
motiv pentru care sunt utilizate pentru diagnosticul serologic al al unor
rickettsioze de primoinfecie, reacia Weil-Felix.

Caractere de patogenitate
Ei se ntlnesc la om ca germeni condiionat patogeni, dar pot s
provoace: toxiinfecii alimentare, infecii urinare, otite, meningite,
septicemii cu evoluie grav. Inoculai la animale de laborator (iepure,
oarece, cobai) produc n cteva zile o septicemie mortal.

195
Caliopsia FLOREA Bacteriologic i virusologie

Imunitatea este slab.


Tratamentul se face dup antibiogram, dar pentru c apar tulpini
rezistente se completeaz cu autovaccin i bacteriofagi specifici.

Genul YERSINIA

Sunt enterobacteriacee cu morfologie cocobacilar, imobile Ia 37 C


i mobile la 22-30C (numai Y.pestis este imobil), cresc pe medii uzuale,
fermenteaz glucoza cu producere de gaz, produc p-galactozidaza
(ONPG), dar nu acidific lactoza (cu excepia Y.pestis), au o intens
activitate ureazic, nu produc H2S, lizindecarboxiaz i
fenialanindezaminaz, nu cresc pe medii cu citrat (Simmons).
Genul Yersinia cuprinde 3 specii: Yersinia pestis, Yersinia enterocoitica
i Yersinia pseudotuberculosis. Y.pestis este totdeauna patogen pentru om,
celelalte sunt condiionat patogene.

Generaliti
Sunt gemeni patogeni pentru obolan, se dezvolt n focare naturale,
se transmit de la un animal la altul prin purici (vectori), sau prim muctur
de obolan (direct). La om se transmite prin muctura obolanului sau
neptura puricelui. Boala pe care o face omul n urma infectrii cu
Yersinia pestis este PESTA sau CIUMA, ea face parte din bolile
pestileniale cu mortalitate de 95% i contagiozitate foarte
mare.1,Diagnosticul este bacteriologic de mare urgen.

Caracter morfologice i tinctoriale


Sunt cocobacili Gram negativi, cu tendin la coloraie bipolar, cu
lungimea de 1-2 pm i limea de 0,3-0,5 pm, sunt
dispui n lanuri scurte, prezint o capsul, sunt nesporulai, sunt imobili.
Caractere de cultur
Y.pestis crete uor pe mediile de cultur simple, slab sau mediu
selective, dar temperatura optim este 28-33 C, pe geoz simpl timp de
48 h, colonii de 1-2 mm (la 24h de 0,1-0,2 mm), rotunde, cu margini uor

196
Caliopsia FLOREA Bacterioiogie i virusologie

franjurate, la nceput gri cu centrul glbui i bombat (plrie chinezeasc),


iar pe AABTL sunt lactozo negative, colonii abastru-verzui. Celelalte
specii de Yersinia, dezvolt la 37 C n 24 h colonii de 1-1,5 mm, la 48h ating
2-3 mm.

Caractere de rezisten
Este puin rezistent n mediul exterior, rezist 2-3 sptmni n
produsele patologice, dar 1 an pe cadavre. Este distrus de dezinfectante. Este
sensibil la: tetraciclin, cloramfenicol, streptomicin.

Caractere antigenice
Prezint antigene somatice: de perete O, capsular K i antigene
solubile, endotoxina, care se elibereaz dup moartea bacteriei.

Caractere de patogenitate
Se manifest prin multiplicare i invazivitate date de antigenul
capsular.
Y.pestis d Pesta sau Ciuma, care se manifest mai nti prin apariia
unei vezicule, la locul nepturii, apoi ajunge n ganglionii limfatici, apare
o adenopatie (bubon pestos), dac aprarea este slab, germenii se vor
multiplica n snge, pot da o septicemie (pesta) cu evoluie foarte rapid,
mortalitatea n pesta bubonic este de peste 75%. Infecia poate ajunge n
pulmon,

197
Caliopsta FLOREA ' Bacteriologic i virusologie
apare pesta pulmonar, n acest caz bolnavul este contagios prin
picturile Pfltigge.
Y.pseudotuberculosis ajunge la om prin alimente i poate s
produc entente subacute nsoite de adenopatie mezenteric.
K enterocolitica ajunge la om prin alimente i poate da la copii:
entente, sindromul dureros al fosei iliace drepte, iar la adult artritele
reactive i eritemul nodos.

198
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

Capitolul XV
Vibnom, spirik: Vibrio,
Campylobacter, Helicobacter

Genul Vibrio (\

Face parte din familia Vibrionaceae i cuprinde mai multe specii,


dintre care 2 sunt potenial patogene pentru om: Vibrio cholerae i V.
parahaemolyticus. Vibrionul holeric a fost descoperit de R. Koch la
sfritul secolului XIX, ntr-o epidemie de holer din Egipt.
Definiie: s.unt bacili, Gram negativi, foarte mobili, care au o
form uor curbat, necapsulai, nesporulai. Specia principal pentru
patologia uman este reprezentat de Vibrio cholerae (vibrionul holeric).

Caractere morfologice
Sunt bacili Gram negativi, cu o lungime de 2 pm i grosime de 0,5
pm, sunt uor incurbai i au un singur cil (sunt monotrichi). Sunt
nesporulai, necapsulai.

Habitat
Se pot izola din intestinul oamenilor bolnavi sau purttori, din
apele poluate, din organismul animalelor de ap, de pe pmnt sau
obiectele contaminate.
Caractere de cultur
Cresc bine pe un pH alcalin (9-9,2), ap peptonat i n mediu cu
mult oxigen, sunt oxidazo-pozitivi, n mediile, lichide formeaz vl la
suprafa. Pe mediile solide BSA (agar sruri biliare) formeaz colonii

199
Caliopsia FLQREA Bacteriologic i virusologie

mici, transparente. Sunt rezisteni n mediile cu bil, de aceea se


folosesc mediile selective. Tolereaz concentraii de 6-6,5% MaCl.

Rezisten
Sunt rezisteni n mediul exterior, mor la uscciune (de aceea
transmiterea se face prin lichide). Sunt distrui de dezinfectantele i
antisepticele uzuale. Sunt distrui n 60 min la 50 C, instantaneu la
fierbere.
Sunt sensibili la streptomicin, tetraciclin, cloramfenicol i
sulfamide. Sunt rezisteni la antifiingice.

Caractere biochimice
Sunt oxidazo-pozitivi. Vibrio cholerae clasic este nehemolitic,
dar sunt sensibili la clor. Tipul Vibrio El tor este hemolitic i rezistent
la clor. Termenteaz glucoza fr producere de gaz, fermenteaz
tardiv lactoza (dup 48 h), lichefiaz geljatina, fermenteaz manita,
produc lizindecarboxilaz i ornitindecarboxilaz, nu produc
arginindehidrolaz, fenilalanindeZaminaz, reduc nitraii la nitrii,
produc indol, nu produc H2S.

Caractere antigenice l
Prezint antigene somatice i flagelare: 0 i H. ,
Are antigene solubile: endotoxin, dar i o exotoxin cu afinitate
pentru mucoasa intestinului subire. Antigenul 0 are mai multe
fraciuni, pe baza crora s-au identificat 6 grupuri serologice. Ol...06.
Grupul Ol este strict specific omului i
produce HOLERA. Celelalte grupuri se ntlnesc mai ales la
animalele de ap i dau diareele clasice acute.
Grupul Ol are 4 serotipuri (A, B, C).
- tipul I Ogawa (A+B),
- tipul II Inaba (A+C),
- tipul III Hikojima (A+B+C),
- tipul IV (tar nume) (A).

200
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

Caractere de patogenitate.
Sunt date de capacitatea de multiplicare i toxigenez. Nu are
capacitate de invazivitate. Germenii nu ajung n torentul circulator ci
rmn cantonai la nivelul tractului intestinal. Acioneaz la poarta de
intrare. Colonizeaz marginea n perie a celulelor epiteliale
intestinale, se multiplic i elibereaz toxina holeric. - Dup o
perioad de incubaie de 1-4 zile apar brusc grea, vrsturi, diaree
abundent (20-30 itri/zi) i crampe abdominale. Scaunele sunt
apoase, riziforme (ap de orez) conin mucus, celule epiteliale i un
numr mare de vibrioni. Evoluia bolii este rapid, de 2-7 zile. n acest
fel apare o pierdere mare de fluide i electrolii care duce la:
deshidratare, colaps circulator i anurie. Mortalitatea n lipsa
tratamentului este de 25- 50%.
Diagnosticul de laborator este bacteriologic.
Este un diagnostic de mare urgen i trebuie s respecte
urmtoarele etape:
- Recoltarea i transportul produsului patologic trebuie s
respecte regulile cunoscute pentru recoltarea materiilor fecale; s se
fac ct mai rapid, dup debutul bolii, nainte de administrarea
antibioticelor. Produsul patologic este cel mai frecvent reprezentat de
materiile fecale, dar uneori i lichidul de vrstur. Macroscopic
materiile fecale sunt apoase, riziforme, de culoare verzuie, cu miros
fetid, conin flocoane de mucus. Transportul

201
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

rapid n 1-3 ore, n mediul Cary-Blair, sau apa peptonat alcalin (pH de
9-9,2).
- Examinarea microscopic a produsului patologic include
realizarea unui preparat proaspt ntre lam i lamel. Se examineaz
cu obiectiv uscat 40x. Nu se evideniaz prezena leucocitelor,
vibrionii sunt n numr mare, cu micri foarte active, de rostogolire,
sau micri haotice.
- Cultivarea pe medii de cultur. Se face mai nti o mbogire
de 6-8 ore n apa peptonat alcalin cu incubare la 37C. Apoi se va
face nsmnare pe BSA (agar sruri biliare) sau TCBS (tiosulfat,
citrat, bil, sucroz) un mediu nalt selectiv.
- Identificarea se face pe baza caracterelor: morfologice,
tinctoriale, de cultur i antigenice.
Pe mediul BSA produce colonii smooth S, rotunde,
strlucitoare, transparente ca picturile de rou de 1-2 mm. Pe
TCBS coloniile sunt S de 2-4 mm i galbene.
Pentru caracterele antigenice se folosete serul anti-holeric Ol, se
practic reacia de aglutinare pe lam, iar serotipul se va face la nivelul
laboratorului de referin.
- Antibiograma se face prin metoda disc-difiizimetric.
- Lizotipul se fa face n caz de epidemii.
Rspunsul imun
Este slab, infecia fiind localizat la poarta de intrare, la
supravieuitori asigur protecia prin anticorpi timp de 6-18 luni.
Acum suntem n a 7 a pandemie de holer i agentul cauzal este
biotipui El Tor al vibrionului boierie.
V, paraheamolyticus este.^o specie marin gzduit de molute
(stridii i alte scoici comestibile). Poate da o toxiinfecie alimentar
cnd aceste fructe de mare se consum crude sau dup o pregtire
termic superficial.
Izolarea bacteriilor microaerofile

n grupul acestor bacterii cea mai ntlnit este genul

202
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

Campylobacter, respectiv: C. jejuni, C. coli. Amestecul gazos pentru


microaerofilie este format din: N2 85%, 02 5-7%, C02 8-
10%.
Aceast atmosfer se obine prin mai multe mijloace:
- Fizice: borcane etane n care se introduce amestecul de
mai sus, exicatoare sau borcane cu lumnarea, i
- Chimice: containere n care se introduc kit-uri Comerciale
reductoare a 02 i productoare de C02, procedeul Campypak.
- Izolarea cu mbogire se face prin membrane filtrante cu pori
de 0,65 im, sterile aplicate pe suprafaa unui mediu geozat (MH cu
hematii de oaie). Peste membran se aplic 2-3 picturi dintr-o
suspensie de materii fecale ntr-un bulion nutritiv. Dup o or la 37C
membrana se nltur i placa se incubeaz, n atmosfer de
microaerofilie, la 37C sau 42C timp de 2-5 zile.
Se va face identificarea pa baza caracterelor: morfologice, de
cultur, biochimice, antigenice.
Apoi testarea la substanele antibacteriene.

Genul Campylobacter

Acest gen cuprinde bacili incurbai n form de virgul sau S,


Gram negativi, monotrichi, foarte mobili, microaerofiii, oxidazo-
negativi, relativ dificil de izolat i identificat.

Habitat
Unele specii ale genului sunt comensale, nepatogene ale cavitii
bucale, intestinului i mucoasei genitale ale animalelor i ale
oamenilor. Alte specii adaptate la viaa parazitar, determin infecii
ale animalelor domestice, transmise accidental la om.
Caractere morfologice
Sunt bacili spiralai sau incurbai cu o lungime de 0,5-1,5 pm,
grosimea de 0,5-0,2 pm, n culturile vechi sunt sferici sau ovoizi. Sunt
germeni nesporulai, prezint un singur flagel.

203
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

. Caractere biochimice
Sunt oxidazo (-), catalazo (-), reduc nitraii la nitrii, nu
fermenteaz i nu oxideaz carbohidraii, produce H2S, nu are ureaz,
hidroiza hipuratului de sodiu este singurul test care difereniaz
specia C. jejuni care este (+), apare o culoare violet, de C. coli care nu
hidrolizeaz. Speciile C. jejuni i C. coli sunt specii termofile, care n
primoculturi se dezvolt numai la 42-43 C, dup o incubare de 48
ore. Au capaciti invazive i pot determina la om enterocolite ulcero-
exudative cu. potenial de bacteriemie.

Caractere de cultur
Plcile cu mediu solid, geloz Columbia, Mueller-Hinton,
pentru Brucella, simple sau cu adaos de antibiotice, geloz snge de
berbec 5-10%, n condiii de micrbaerofllie (N2 85%, CO2 8- 10% i
02 5-7%), la 42-43 C, 48 ore.
Identificarea pe baza caracterelor descrise i aspectul coloniilor.
J
Pe mediile solide cu snge sunt nehemolitice i au dou aspecte:
- colonii mici de 1-2 mm, S, uor opace, de culoare gri-
castanie la plcile mai vechi; *
- colonii umede mai mari de 5-7 mm, plate, mai puin opace, cu
margini neregulate cu tendin de a se ntinde pe striul de nsmnare
la plcile mai proaspete.
La imunodeficieni, alcoolici, diabetici, bolnavi cu insuficien
hepato-renal, C. fetus poate da endocardite, meningite.
Cele mai importante specii pentru patologia uman sunt:
1. Campylobacter jejuni care poate da diaree cu scaune apoase
sau mucoase, uneori cu snge. Este nsoit de dureri abdominale,
periombilicale, febr, grea, uneori vom. Netratat infecia dureaz
o sptmn cu vindecare spontan, dei sensibilitatea la bolnav mai
poate persista. Germenul se izoleaz din coprocultur i hemocultur.
Rezervorul natural este animalul domestic i psrile din curte
(mai ales curcanii i puii de gin).

204
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

Transmiterea este de la animal la om:


- pa cale direct, contact ntre animal i om,
- indirect prin consumul de alimente contaminate sau de ia
mam la nou-nscut.
Factori favorizani: vrsta 0-2 ani, sezonul cald, profesiunea
(cresctorii). .- ,
2. Campylobacter coli d o simptomatologie asemntoare cu C.
jejuni. Rezervorul i cile de transmitere sunt identice cu C. jejuni.
Tratament cu eritromicin n doze uzuale 5-7 zile.

Genul Helicobacter

Genul Helicobacter este format din bacili Gram-negativi,


incurbai pn la helicai, cu o lungime de-1,5-7,5 pm i o lime de
0,3-1,0 pm, mobili prin unul sau mai muli flageli dispui lopfotrichi,
amfitrichi sau lateral. La contactul cu aerul apar forme cocoide.
Sunt microaerofili, creterea este stimulat de hidrogen. Sunt
azaharolitici, oxidazo i catalazo-pozitivi. Speciile gastrice de
Helicobacter produc ureaz n cantiti mari.,

Habitat
Se gsesc ri stomacul oamenilor sau animalelor.

205
Caliopsia FLOREA Bacteriologic i virusologie
Patologie
De interes uman este specia H. pylori (responsabil de majoritatea
mbolnvirilor) i H. heilmanni (izolata n gastrita la oameni n cca. 1-
5% din pacienii cu gastrita). Se investigheaz persoanele care acuz
o simptomatologie digestiv . superioar. Sursa infeciei cu H. pylori
este omul, iar calea este oral-oral i fecal-oral.
Metoda de referin este evidenierea bacteriei * n biopsiile
gastrice prelevate n cursul examenului endoscopic. O
condiie important este ca bolnavul s nu fi urmat cel puin o lun
tratament cu antibiotice, sruri de bismut. Se recolteaz fragmente de
mucoasa antral (aprox. 2 cm de pilor) i fundic (n regiunea marii
curburii), se recolteaz 4 fragmente i se vor folosi astfel:
- un fragment va fi introdus n mediu cu uree i indicator de pH
pentru evidenierea ureazei;
- dou fragmente pentru evidenierea H. pylori pentru frotiuri i
cultur, care vor fi puse ntr-un flacon cu SF pentru a se evita desicarea
probelor i contactul cu 02, sau folosirea unei soluii de glucoz 20%,
care mpiedic detaarea stratului de mucus;
- un fragment pentru studiul histopatologic.
Conservarea probelor pentru nsmnare, dac nu se pot
lucra imediat, se face la 4 C, maxim 4 h, dac se depete acest timp
se vor conserva ntr-un mediu de transport (Stuart sau Portagerm
pylori) n care probele pot fi inute 24 h la 4 C.

Testul ureazei
Se introduce fragmentul ntr-un mediu cu 2% uree (lichid sau
agarizat) i un indicator de pH, rou fenol. Testul se citete dup 30
min, o or, 3 ore i 24 ore cu incubare la 37 C. Ionii de amoniu care
apar alcalinizeaza mediul i se constat modificarea culorii mediului
de la galben la roz-rou. Sunt i teste comercializate:

206
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie
CLO-test, CP-test, Helico-test. Specificitatea testului este de 100%, dac
virarea indicatorului este dup 4 ore.
Microscopia H. pylori poate fi recunoscut la microscopul cu
imersie dup morfologia caracteristic: bacili n forma literei S sau
virgul, spiralai cu dimensiuni de 1,5-7,5 pm/ 0,3-1 pm, care sunt
prezeni n stratul de mucus, n cripte sau pe suprafaa epiteiiului
gastric. Se face frotiu colorat Gram sau coloraie simpl cu fucsin
timp de 5 min.
Cultura
Un fragment bioptic va fi dispersat ntr-o cantitafe mic de SF
(0,5 ml), prin mojarare sau titrurare, cte dou picturi din omogenizat
sunt depuse pe suprafaa unui mediu selectiv i neselectiv, n condiii
de microaerofilie i o atmosfer umed. Examinarea coloniilor se face
zilnic ncepnd din ziua a 3 a pn n a 7 a, urmrindu-se apariia
coloniilor (mici i transparente), care vor fi identificate microscopic i
biochimic.
Examenul histopatologic
Pune n eviden bacili Gram negativi, n forma literei S sau
virgul, spiralai nsoii de o reacie inflamatorie, prin coloraie
Giemsa sau Gram.
Test serologic prin evidenierea n serul bolnavilor a anticorpilor
specifici mai ales de tip IgG.
Tratament
H. pylori este sensibil la metronidazol i macrolide sau chinolone,
la care se adaug inhibitori de pomp de protoni (omeprazol).

207
Caiopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

Capitolul XVI
Pseudomonadele: Pseudomonas,
Burkholderia

Aceti gemeni fac parte din familia Pseudomonadaceae. Cuprinde


specii care triesc liber n mediu, specii patogene pentru plante,
animale, specii patogene pentru om. Sunt bacili Gram negativi,
nesporulai, drepi uor incurbai, cu excepia speciei Burkholderia
mallei, sunt mobili prin unul sau mai muli flageli polari. Sunt germeni
nepretenioi sunt strict aerobi. Au metabolism oxidativ, niciodat
fermentativ. Sunt catalazo i mai ales oxidazo-pozitivi. Cele mai
multe specii reduc nitraii la nitrii.

Gemi! Pseudomonas
i
Cea mki important specie este Pseudomonas aeruginosa, numit
i barilul piocianic. Infeciile cu baeilul piocianic sunt n primul rnd
infecii intraspitaliceti.

Habitat >
Sunt bacili Gram negativi,' se gsesc, n mod normal n
intestinul omului i animalelor.

Caractere morfologice
Au lungimea de 2 pm i o lime de 0,4 pm, sunt monotrichi, au
un cil polar, Sunt nesporulai, unii pot fi ncapsulai.

208
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

Caractere de cultur
Cresc uor n* condiii'de aerobioza, cresc pe medii simple sub
form de colonii S sau M cnd sunt ncapsulai. n bulion sau ap
peptonat 1%, se produce o tulburare cu formarea unei pelicule la
suprafaa mediului, care dup cteva zile se fragmenteaz i cade la
fund, iar mediul devine filant i vscos.
Pe geloz simpl cresc sub form de colonii rotunde, convexe,
fluorescente, deseori cu reflex metalic, de culoare galben-verzui n
culturi tinere (dup cteva zile pigmentul devine brun) sau pigmentate
n rou, galben sau negru brun. Cultura de Ps. aeruginosa degaj un
miros aromatic datorat O- aminoacetofenonei, asemntor florii de tei.
Pe medii cu snge 5- 10% se dezvolt colonii gri, lucioase care produc
hemoliz de tip beta, care se intensific la temperatura camerei.

Pigmentogeneza
Bacilul piocianic elaboreaz doi pigmeni:
- piocianina (albastr), care predomin n produsele patologice,
- pioverdina (verde), coloreaz mediile de cultur.
Piocianicul este germenul care capt rezisten la
antibiotice.

Caractere biochimice
Este oxidazo-pozitiv, elaboreaz pigmeni, produce substane cu
aciune bactericid:
- piocinaza, care este bactericid pentru alte specii,
- piocina, care este bactericid i pentru aceeai specie, dar nu
i pentru aceeai tulpin. Nu fermenteaz laetoza, oxideaz glucoza,
reduce nitraii la nitrii, nu au ureaz, lizinalanindecarboxilaz,
fenilalanindezaminaz.
Rezistena
Este bun n mediul extern, rezist la uscciune, este distrus de
dezinfectante i antiseptice uzuale, dar ctig rapid rezistena la
antibiotice, este rezistent la alcool. Este rezistent la majoritatea
antibioticelor, dar poate fi sensibil la: carbenicilin, mezlocilin,

209
Caliopsia FLOREA Bacteriologic i virusologie
ticarcilin, ticarcilin-acid clavulanic, piperacilin, tobramicin,
amikacin, imipenem, aztreonam, fluorochinolone sau cefalosporine
gen. 3 (ceftazidim, cefsulodin). Se recomand antibiograma.

Caractere de patogenitate
Sunt patogeni prin multiplicare la poarte de intrare i mai puin
prin toxigenez.
Poate provoca: infecii cutanate (prin suprainfectarea unor plgi,
neavnd caracter de invazivitate), infecii digestive, urinare,
pulmonare, genitale, meningit la nou-nscut.

Rspunsul imun este de tip umoral, slab.


Diagnosticul este bacteriologic
Pe baza caracterelor morfologice, de cultur i a caracterelor
biochimice. Dup identificarea tulpinei se recomand antibiograma,
acest gen capt foarte uor rezistene la antibiotice i chimiolerapice,
astfel nct uneori este foarte dificil de tratat o infecie cu bacilul
piocianic i ar putea s fie nevoie de vaccin antipiocianic sau chiar de
autovaccin realizat din tulpina izolat.

Genul Burkfiolderia

Sunt bacili nefermentativi, oxidazo-negativi, Gram negativi.


Speciile care sunt implicate n patologia uman sunt: B. mallei, B.
pseudomallei, B. cepacia.

210
Caliopsia FLQREA Bacteriologic i virusologie

Burkholderia mallei cresc pe medii uzuale sub form de colonii


mici, 0,5-1 mm, la 37C, netede, cenuiu-translucide, nepigmentate.
Burkholderia pseudomallei crete pe geloz simpl sau Mc
Conkey, colonii de tip S, de 1-2 mm, la 37C, sau forme R, foarte
rar forma mucoid.
Pe agar snge coloniile iniial sunt a-hemolitice, devin cu timpul
p-hemolitice.
Burkholderia cepacia crete mai lent la 25-35C, cultura devine
vizibil dup 48ore. Crete pe medii simpli dezvolt colonii de tip S,
alb-cenuiu, altele colorate iniial-n galben apoi purpuriu. Pe medii
slab difereniale sunt roz-roii pe Mc Conkey. Pe agar snge coloniile
sunt de tip S, cu o arom ptrunztoare de pmnt. Aceti gemeni
au fost izolai de la pacieni din Thailanda, dar i de bolnavi cu o
imunitate sczut. n aceste cazuri pot s produc infecii cutanate,
bronhopulmonare,. infecii cu cateter intravenos, septicemii sau
meningite la nou- nscui.
Poate fi folosit ca arm biologic, dar mai puin eficient dect
Bacillus anthracis.
Este rezistent la majoritatea antibioticelor, dar pot fi folosite
dup antibiogram i n general cele la care este sensibil bcilul
piocianic. Este rezistent la dezinfectantele i antisepticele uzuale.

!
i
i

211
Caljopsia FLQREA Bacteriologie i virusologie

Capitolul XVII
Parvobacteriaceae

Familia PARVOBACTERIACEAE este alctuit din bacterii care


au un echipament enzimatic srac, necesitnd condiii speciale de
cretere. Sunt cocobacili. Aceast familie cuprinde trei genuri cu
importan pentru patologia uman: genul Brucella, genul Haemophilus
i genul Bordelella.

Genul Brucella

Cuprinde ase specii dar trei sunt de interes uman: Brucella


melitensis (capre, oi), Brucella abortus (vaci), Brucella suis (porci).
Aceste bacterii produc antropozoonoze.

Habitat,
Se gsejsc n organismul infectat, animalele domestice care
elimin bacteriile prin produsele de avort, secreii, lapte etc., urmate
de contaminarea masiv a mediului extern (sol, ap, vegetaie) i de
infectare a altor animale omul fiind o gazd accidental, aprnd ca
verig final n lanul de transmisie a infeciei. '

Caractere morfologice
Sunt cocobacili (bacili foarte mici) cu lungimea de 1 pm i
grosimea de 0,3 pm, sunt ncapsulai, imobili, nesporuai, aerobi,
Gram negativi.
Caractere de cultur
Sunt bacterii care cresc foarte greu, dezvoltnd culturi dup 3-4
sptmni, la 37 C, n condiii de aerobioz i 5-10% CO2. Se cultiv
pe medii lichide, bulion simplu n care se adaug gucoz 1% i ser
animal 5%. Dup 2-5 zile, mediul se tulbur uniform, iar dup cteva
zile apare un depozit fin, pulverulent, care se ridic prin agitare i nu
212
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

formeaz pelicul.
Pe mediile solide selective (care conin substane inhibitoare
pentru flora de asociere: cielohexamid, baeitracin, polimixin B,
nistatin), apar colonii dup cel puin 72 ore, sau 5-7 zile, colonii mici,
nehemolitice, nepigmerttate, iniial u diametrul de 0,25 mm apoi
cresc pn la 3-4 mm, sunt de tip S, o dat cu nvechirea culturilor
apar colonii R sau M. Examinate n lumin la 45, coloniile apar
transparente, gaiben-deschis, asemntor picturilor de rou, n
timp ce n lumin reflectat au culoare cenuiu-albastruie. Mai pot s
cultive pe embrionul de gin, prin inocularea n sacul vitelin sau pe
membrana corioalantoid.

Rezisten la factorii fizici, chimici, biologici.


Brucelele sunt rezistente n mediul exterior, la adpost de
lumin, uscciune i aciditate excesiv. Sunt distruse de antisepticele
i dezinfectantele uzuale. Sunt sensibile la streptomicin, tetraciclin,
cloramfenicol.

Caractere antigenice
Prezint un antigene somatice i capsulare. Antigenul somatic
O, are dou fraciuni A i M.
- la Brucella melitensis predomin fraciunea M,
- la Brucella abortus predomin fraciunea A,
- la Brucella suis se gsesc ambele fraciuni n proporii egale.
Caractere biochimice
Sunt cocobacili catalazo pozitivi, variabil: oxidazo pozitivi,
ureazo pozitivi, unele tulpini produc H2S.

Patogenitate
Este dat prin capacitatea de multiplicare i invazivitate. Brucella
se multiplic intracelular, de aceea este rezistent la antibiotice.
Infecia cu Brucella stimuleaz rspunsul imun, dar este slab datorit
dezvoltrii intracelulare. Boala are o evoluie cronic, apar leziuni de
tip proliferativ numite granuloame. Buceloza se mai numete febr

213
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

ondulant. Calea de intrare este digestiv, prin alimentele


contaminate, sau prin contaminarea tegumentelor (ns nu pe cele
intacte). Animalul gestant bolnav prezint avort spontan. Dup
intrarea n organism, cocobacilul se multiplic intracelular n
ganglionii limfatici i apoi ptrunde n circulaia sanguin.
Granuloamele se observ la nivel cutanat, n ficat, splin, sistem
nervos, boala fiind o septicemie cu evoluie lent.

Rspuns imun
Este un rspuns imun umoral i celular.
1. Rspunsul imun umoral este puternic, se bazeaz pe
activitatea limfocitelor B stimulate de prezena germenilor, dar nu este
protector.
2. Rspunsul celular este protector, ns doar pentru
suprainfecie, fenomen numit premuniie. Rspunsul imun celular este
datorat prezenei timp ndelungat a germenilor n organism i asigur
protecie de premuniie (protecie de suprainfecie cu condiia
existenei primei infecii n organism). Acest rspuns apare la scurt
timp dup vindecarea infeciei primare deoarece limfocitele T
sensibilizate rezist numai 7-10 zile dup dispariia antigenului din
organism. Rspunsul imun celular i infecia primar se evideniaz
prin IDR la brucelin..
Brucelina este antigen extras din brucele, reacia se citete dup 72-
96 ore de la inoculare. Dac la locul inoculrii apare eritem, edem,
necroz nseamn c reacia este pozitiv, deci exist rspuns imun
celular, consecutiv infeciei.

Diagnostic de laborator
Se face diagnosticul bacteriologic i imunologic.
Pentru examenul bacteriologic produsele patologice sunt:
sngele, puroiul din abcese, coprocultur, urociiltur sau bilicultur,
se nsmneaz pe mediile descrise sei urmresc caracterele
morfologice i de cultur descrise. ;

214
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

Pentru diagnosticul imunologic se face mai nti reacia de


aglutinare pe lam (reacia Huddleson), care pune n eviden
anticorpii din ser. Apoi se face reacia de aglutinare n tuburi (Wright),
cantitativ, un titra mai mare de 1/100 certific prezena bolii.

Profilaxia
Se poate face o profilaxie nespecific, depistarea sursei de
infecie, dezinfectarea aerului, a obiectelor contaminate, creterea
rezistenei nespecifice.
Profilaxie specific care se adreseaz populaiei cu risc crescut
i const n vaccinarea cu germenii vii atenuai, care determinarea
apariiei de anticorpi protectori timp ndelungat.

Tratament
Se face antibiograma, dar se poate ncepe cu: streptomicin, sau
cloramfenicol sau tetraciclin.

215
Caliopsia FLOREA Bactenologie i virusologie

Genul Haemophilus

Sunt cocobacili polimorfi, imobili, nesporulai, Gram negativi,


aerobi, facultativ anaerobi. Sunt gemeni pretenioi, pentru
dezvoltarea lor au nevoie de prezena factorilor de cretere prezeni n
snge. Cele mai cunoscute specii sunt: Haemophilus influenzae i
Haemophilus ducrey.

Haemophilus influenzae
Habitat *
Parazit obligatoriu al omului. Se localizeaz n arborele
respirator. Este agentul patogen cu rol primar n: meningit,
sindromul obstructiv laringian, artrita purulent, endocardita, cu rol
secundar n grip, bronit, pneumonie.

Morfologie
Este un cocobacil, de 0,3-0,5/0,3-05 pm, Gram negativ, bipolar,
nesporuat, imobil.

Caractere de cultur
Crete greu, coloniile apar dup 48-72 ore, sunt mici,
pulverulente.^ Se folosesc medii cu snge, deoarece au nevoie de
factori de crejtere din snge X i V. Factorul X (protoporfirina sau
protohem) termostabil, iar factorul V (nicotinamid adenin dinucleotid
-NAD) termolabil, pe care l putem lua din drojdia de bere. Factorul
X este obinut prin liza hematiilor, iar factorul V poate fi sintetizat de
stafilococ. D,e aceea, cel mai accesibil mediu de cultur pentru H.
influenzae se poate obine din geloz ocolat, se nsmneaz tulpina
i peste sectorul nsmnat se face un striu de nsmnare cu o
cultur de stafilococ patogen, coloniile de Haemophilus se vor dezvolta
n jurul striului de nsmnare, fenomenul de satelitism. Saii pot fi
folosite medii transparente, de exemplu geloza Levinthal, cu factori
X i V.
Pe geloza ocolat se dezvolt colonii S, de 1-3 mm, ca
216
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

picturile de rou, cenuii-albstrui strlucitoare, altele opace, netede.


Pe mediile transparente coloniile au irizaie caracteristic,
strlucitoare, confluente pentru tulpinile capsulate, sau individualizate
la cele necapsulate.

Rezisten
Este foarte rezistent n mediul, transmiterea se realizeaz prin
picturile Pflugge. Este sensibil la tetraciclin, cloramfenicol,
sulfamide.

Caractere biochimice
Pentru cretere au nevoie de factorii X i V, sunt indol pozitivi
n 70%, au ureaz un numr mare de tulpini, reacia bilolizei este
pozitiv 100%.

Structura antigenic
Pe baza antigenului capsular specia este mprit n ase
serotipuri: a, b, c, d, e, f. Anticorpii antieapsulari K, sunt protectori,
stimuleaz fagocitoza i induc activitatea bactericid a
complementului. H. influenzae tip b este cea mai frecvent cauz a
infeciei Ia copii. Proteina M este antigenul somatic 0 comun tuturor
tulpinilor de H. influenzae. Endotoxina este eliberat dup moartea
germenilor.

Diagnosticul de laborator
Este un diagnostic bacteriologic, produsul patologic (exudat,
sput) se nsmneaz pe mediile amintite. Se poate identifica
serotipul prin reacie se aglutinare din produsul patologic.
Haemophilus ducrey
Habitat
- Germenul este situat extra i intracelular, strict patogen pentru om,
fiind agentul etiologic al ancrului moale {Ulcus mole) localizat pe
organul genital sau n regiunea inghinal, produce tumefierea
ganglionilor regionali, nu se rspndete mai departe de limfaticele

217
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

nvecinate. Nu s-a descris starea de purttor.

Caractere morfologice
Este un cocobacil, Gram negativ, ncapsulat, imobil, nesporulat,
de 0,5/1-2 pm, n perechi sau n lanuri.

Caractere de cultur
Crete pe mediile cu geloz snge ocolat pentru c are nevoie
numai de factorul X, necesit 2-9 zile, 35 C i atmosfer de C02 10%.
Se mai poate cultiva pe membrana corioalantoid a embrionului de
gin.

Rezistent9

Este sensibil la aciunea cldurii, uscciunii i dezinfectanilor


obinuii. Este sensibil la ampicilin, cloramfenicol, rifampicin i
sulfamide.

Examenul de laborator este bacteriologic


Examinarea microscopic a secreiei ancrului, a puroiului din
abces, colorat Gram. Se nsmneaz pe mediile descrise, dar crete
foarte greu. ?

Genul Bordetella

Sunt cocobacili Gram negativi, cu dimensiuni reduse: 0,2-


0,3/0,5-1,0 pm, dispui izolai sau perechi, imobili sau mobili datorit
cililor peritrichi. De importan uman sunt trei specii:

218
Caliopsia FLOREA Bacteriologic i virusologie

Bordetella pertusis (agentul etiologic al tusei convulsive), Bordetella


parapertusis i Bordetella bronchiseptica care produc forme uoare de
tuse convulsiv.

Bordetella pertusis
Morfologie
Este un cocobacil, cu dimensiuni de 0,2-0,5/0,5-2 pm, Gram
negativ, ncapsulat, nesporulat, imobil. -
\
Habitat \l
Triete n cile respiratorii superioare ale omului bolnav.

Rezisten
Germenul este foarte puin rezistent n mediul exterior, rezist
maximum 2 ore la temperatura camerei, se distruge n 60 min la
aciunea luminii solare i n 50 min la 55 C. Rezist la peniciline i
sulfamide i este sensibil la eritromicin, tetraciclin i cloramfenicol.

Caractere de cultur
Mediile de cultur trebuie s conin: amidon, crbune activat,
snge. Se folosete mediul Bordet-Gengou (macerat de cartof
glicerinat i gelozat cu snge de cal 10%), este mediul de elecie
pentru izolare. Dup incubare la 37 C timp de 2-5 zile, apar colonii
mici convexe, uor transparente cu strlucire metalic, n lumina oblic
transmis apar ca picturile de mercur sau ca jumti de perle,
coloniile sunt foarte aderente de mediu cu o zon de hemoliz difuz.
Coloniile pot fi S sau R. Coloniile S faza I, are virulena
cea mai mare, n fazele II i III i pierde treptat virulena, ajungnd
n faza IV, avirulent, forma R,S.
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

Caractere biochimice
Bordetela pertusis este hemolitic, oxidazo pozitiv, ureazo
negativ.

Structura antigenic
Are antigen capsular, antigen somatic cu rol protector i
histaminosensibilizant cu aciune asemntoare histaminei,
producnd bronhoconstricie.
Antigene solubile reprezentate de endotoxin i exotoxin (care
are aciune neurotrop).

Patogenitate
Bordetela pertusis este patogen numai pentru om. Este agentul
etiologic al tusei convulsive, numit tuse mgreasc. Patogenitatea
este dat de capacitatea de multiplicare i toxigenez. Capacitatea de
multiplicare este dat de prezena capsulei i a antigenului somatic,
produc necroza i exfolierea mucoasei respiratorii cu apariia
exudatului. Toxigenez este dat de endotoxin care are aciune
local i de exotoxin care acioneaz pe SNC.
Transmiterea se realizeaz aerogen (picturile Pfigge) n
timpul accesului de tuse. Contagiozitatea este maxim n primul
stadiu de boal i la nceputul celui de-al doilea (tuse paroxistic).
Sindromul clasic de tuse convulsiv ncepe dup o incubaie de
7-10 zile, cu o perioad prodromal "stadiul cataral care evolueaz
1-2 sptmni cu simptomatologia unei infecii respiratorii obinuite,
urmeaz "stadiul paroxistic, caracterizat prin accese de tuse spastic,
cu o respiraie forat, adnc, terminal i vom. Dup 2-4
sptmni, paroxismele de tuse devin mai rare, apoi se instaleaz
convalescena, n care, timp de 2-3 sptmni poate persista o tuse
uoar.

220
Caliopsta FLOREA Bacterioiogie i virusologie

Diagnosticul de laborator este bacteriologic


Diagnosticul etiologic este util n primul stadiu al bolii, cnd
pacientul este foarte contagios. *
- Recoltarea i transportul produsului patologic, trebuie s se
fac ct mai recent i nainte s se fac tratament cu antibiotice.
- Se recolteaz secreii nazale i faringiene, se va realiza cu
tampoanele din alginat de calciu, care se las 30-60 secunde pentru a
favoriza absorbia B. pertusis (bumbacul inhib dezvoltarea
germenilor).
- Metoda plcilor tuite se expune o plac Petri cu mediul
Bordet-Gengou la aproximativ 20 cm n faa gurii pacientului, n
timpul accesului de tuse.
- Examinarea microscopic a produsului patologic include
realizarea a cel puin dou frotiuri din produsul patologic, care se vor
colora albastru de metilen i Gram. Se vor examina i se vor nota
prezena celulelor inflamatorii, a cocobacililor Gram-negativi dispui
separat sau n perechi, rareori n lanuri scurte.
- Cultivarea pe mediul electiv cu sau fr adaos de antibiotice
(penicilin/meticilin sau cefalexina pentru inhibarea florei de
asociere)

Profilaxia
- Nespecific se face prin izolarea bolnavului i creterea
rezistenei nespecifice (regim igieno-dieteti, vitaminoterapie, etc.).
- Specific prin vaccinarea cu DTP (diftero-tetano-pertusis),
care se ncepe la trei luni i se continu dup o schem pn la trei ani.

Genul Francisella

Paraziteaz mamifere, psri i unele insecte hematofage. Sunt


cocobacili Gram-negativi, cu dimensiuni de 0,5/0,2 pm, izolai cu
capete rotunjite sau pot avea forme cocoide, n rachet
221
Caliopsia FLOREA ___ Bacteriologie i virusologie
sau bacilare iar n culturile vechi sunt forme filamentoase. Este imobil,
care nu sporuleaz nu prezint capsul.
Cultiv aerob numai pe medii mbogite cu glbenu de oii sau
cistin. Cultura apare dup 2-7 zile la 37 C, apar colonii mici,
transparente, mucoide.
Specia patogen pentru om se numete Francisetta ~ tularensis. Omul
contracteaz tularemia prin mai multe ci:
- contact direct cu animalele contaminate (iepuri slbatici),
- prin neptura de cpue, purici, tuni, nari.
Comun este forma ulcero-ganglionar, la poarta de intrare apare o
papul care se transform n pustul i n scurt timp _ ulcereaz, apare adenit
regional, bubonul tularemie. Pot s apar leziuni necrotice n splin, ficat,
pulmoni, mduva oaselor. Tratamentul se face cu cloramfenicol,
streptomicina, care este medicamentul de elecie.

Capitolul XVm

222
Caliopsia FLORE A Bacteriologie i virusologie
Pasteurella, Legionella

Genul Pasteurella \{

Speciile admise n cadrul acestui gen sunt: Pasteurella multocida,


P. haemolytica, P. pneumotropica, P. cani, P. aerogenes, P. bettyae, P.
stomatis,
Pasteurelele sunt cocobacili, Gram negativi, polimorfi, imobili,
aerobi, facultativi anaerobi, fermenteaz slab carbohidraii fr
producere de gaz, fermenteaz zaharoza, dar rar lactoza. Sunt catalazo
i oxidazo pozitivi, reduc nitraii la nitrii.

Habitat
Se gsesc pe mucoasele tractusului respirator superior i digestiv
la mamifere i psri la care pot determina infecii primare sau
secundare grave. Omul devine ocazional gazda accidental pentru
cteva specii de Pasteurella ca urmare a contactului cu animalele.

Caractere morfologice
Sunt mici bacili Gram negativi de 1-2/0,3-1 pm, polimorfi,
frecvent cu forme cocobacilare. Are tendin s fixeze bipolar
colorantul.

223
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

Caractere de cultur
Sunt pretenioase nutritiv, ele trebuie izolate pe agar-snge sau
agar-ocolat. Majoritatea pasteurelelor formeaz dup 24 ore la 37
C, colonii mici de 0,5-1 mm, rotunde, convexe, netede, strlucitoare,
transparente, nehemolitice. Pasteurela mutocida dezvolt colonii
cenuii-glbui i brunific uor mediul.
Dup 5 zile Ia 37 C, ajung la 6 mm, apar cu inele concentrice
sau fine striaii, centrul se brunific, se opacifiaz, devine fin granular,
n timp ce periferia rmne cenuiu-glbuie, strlucitoare, omogen.

Caractere antigenice
. Are. antigene capsulare i somatice. Pe baza lor pasteureele au
fost mprite n 11 grupuri antigenice i 5 serotipuri antigenice.

Patogenitate
Germenii au capacitate de multiplicare n esuturi att
extracelular ct i intracelular. La speciile cele mai sensibile (psri,
taurine, iepuri) poate mbrca forma septicemic. La psri, infecia
este foarte grav i este cunoscut ca holer aviar. esutul pentru
care manifest o afinitate deosebit este plmnul. Iii'fecia la om are
un caracter sporadic. Este o antropozoonoz.
Calea de contaminare a constituit-o un traumatism prin
neptur sau muctur. Infecia la om nu are o form anatomo-
clinic caracteristic. Apar n ujma mucturilor de pisic, cu
inflamarea zonei la locul mucturii i adenopatie regional. Pot s
apar pericardite, osteomielite, apendicite, peritonite, otite medii.
Tratament
Se face cu tetracicline, peniciline, sulfamide. n cazul infeciilor
transcutane se impune toaleta i asepsia plgii.

Genul Legionella

224
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

Sunt mici bacili, ocazional au forme filamentoase, Gram


negativi, nesporulai, mobili prin unul sau mai muli flageli, potenial
patogene pentru om. Sunt catalazo i oxidazo pozitivi, nu acioneaz
asupra carbohidrailor, nu reduc nitraii.
Primul membru cunoscut al grupului, a fost agentul etiologic al
unei epidemii severe de infecii pulmonare, cu mortalitate ridicat,
aprut printre participanii la Convenia anual a Legiunii Americane
a fotilor combatani, inut la Philadelphia n 1976. Ea a fost numit
Boala legionarilor. n anul 1977 a fost izolat agentul etiologic.
Specia tip a genului este Legionella pneumophila, au fost izolate 39
specii i 60 serogrupuri.

Habitat
Este reprezentat de sursele i rezervoarele naturale sau artificiale
de ap unde stabilesc relaii complexe cu microbiocenozele ntlnite:
cianobacterii, flavobacteriile i algele care le furnizeaz nutrienii.
Protozoarele, amoebe i ciliatele le inger i la temperatura de 35-40
C, devin gazde de amplificare. Prin formele lor chistice le menin
viabile i virulente n aerosoli. Au fost izolate i din noroi, nmol sau
apa de ploaie, dar niciodat din sol sau pulberi.
Legionelele produc mari cantiti de glicocalix care favorizeaz
persistena i acumularea lor n tuburi i conducte de cauciuc, chiar i
siliconate. n apa distilat supravieuiesc i un an. Mai puin favorabile
sunt suprafeele din oel inoxidabil i cupru.

225
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

Rezisten
Supravieuiesc n apa de robinet un an la temperatura de 4 C, n
apa distilat cel puin 140 zile, rezist la pH acid 4,2 timp de 30
minute. Sunt distruse n 30 minute la 58 C, n aerosoli mor mai repede
cu ct scade umiditatea. 1
Sunt sensibile la antiseptice i dezinfectante (mai ales cei care
elibereaz clor), la fenoli, formolul, alcoolul de 70, compui
cuaternari de amoniu.
. Sunt sensibile la rifampicin, eritromicin, azitromicin,
clindamicin, ciprofloxacin, biseptol, imipenem.

Caractere morfologice
Sunt bacili mici cu dimensiuni de 1-4/0,3-0,7 pm, dar formele
filamentoase ajung pn la 50 pm. Sunt mobile, prezint flageli i pili.
Nu sunt sporulai, nu sunt capsulai. Au perete de bacterii Gram
negative, dar din produsele patologice se coloreaz cu coloranii
pentru grsimi (Sudan negru B), deoarece n compoziia peretelui
celular acizii grai reprezint 60-80% i au vacuole cu grsime n
citoplasm, dar nu sunt acido-rezisteni. Metoda de elecie pentru
detectare este imunofluorescena direct, aplicabil produselor
patologice, dar i pentru culturi.

Caractere de cultur
Mediul de elecie pentru izolarea legionelelor este agarul BCYE
a (Buffered Charcoal Yeast Extract a-ketoglutarat) extract de levur,
crbune activat; prin crbunele activat previne oxidarea foiochimic a
principalei surse nutritive, extractul de levur, iar prin coninutul de L
cistein i a-ketoglutarat, stimuleaz creterea.
Mai poate fi folosit agarul Feeley-Gorman (F-G), care conine
L-cistein, HCL i pirofosfat feric.
Legionelele sunt strict aerobe, cresc la un pH de 6,9, cu pn la
5% CO2. Cultura apare dup 24 ore, iniial coloniile sunt
punctiforme, dup 3-4 zile devin vizibile cu ochiul liber i ating cca.

226
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

1 mm, iar dup o sptmn 3-4 mm. Coloniile sunt rotunde, convexe,
strlucitoare, gri-verzui, au aspect de sticl tiat. n zonele de cretere
confluent apare o pigmentaie brun (numai pe agarul Feeley-
Gorman).

Structura antigenic
Au antigene somatice care le mparte n serorupuri i reprezint
i endotoxina cu rol important n patoldgie. Sunt cunoscute 39 de
specii, 13 au fost izolate la om i din mediul ambiant i 60 de
serogrupuri. '. '*

Patogenitate
Sunt potenial patogene pentru oameni, receptivitatea la infecia
aerogen cu legionele este mai mare dup vrsta de 50 ani i la
imunosupresai.
Se manifest sub dou forme:
- pneumonie atipic cu focare sistemice multiple (boala
legionarilor);
- forma nepneumonic, pseudogripal.
Mecanismele virulenei au fost legate de structuri care
favorizeaz invazivitatea: fimbriile, proteinele somatice i toxinele.

Imunitatea
Este de tip umoral specific de serogrup care este activ i
persistent, dar rolul hotrtor n aprare l are imunitatea celular.

Diagnosticul de laborator
Cuprinde:
- Diagnosticul bolii n formele clinice, precum i postmortem.

227
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

- Diagnosticul prin investigaii sero-epidemiologice ale


populaiei eventual la animalele domestice.
- Diagnosticul probelor recoltate din mediul extern n cadrai
cercetrilor ecologice i epidemiologice.

Examenul de laborator clinic


- hematologice: eucocitoz moderat cu neutrofilie (12.000-
25.000/jil), sau leucopenie, trombocitopenie, VSH mrit;
- biochimice: hiponatremie, hipofosfatemie, creatinina,
uree a, bilirubina, fosfataza alcalin i transaminazele sunt
crescute;
- citologic: sputa i exudatele aparatului respirator, care sunt n
cantiti mici, conin PMN, dar flora este absent.
Diagnosticul de certitudine al unei legionoze . este bacteriologic
i serologic.

Diagnosticul bacteriologic
Coloraia imunofluorescent direct din produsul patologic este
metoda de elecie. Cultivarea produselor patologice pe mediile de
cultur amintite. - Identificarea grupurilor i subgrupurile antigenice,
ca markeri epidemiologici prin reacii cu anticorpi nionoclonali.

Diagnosticul serologic
Este un diagnostic curent, dei tardiv pentru clinicieni, dar
indispensabil pentru diagnosticul retrospectiv i pentru investigaia
epidemiologic. ,>
La bolnavi se execut pe1 seruri paralele, recoltate n faza acut a
bolii, dar i n convalescen. O cretere de 4 ori a titrului de anticorpi
pn la minimum 1/128 constituie o confirmare serologic de
mbolnvire.
Detectarea anticorpilor se face prin:
- imunofluorescen indirect,

228
Caliopsia FLOREA Bacteriologic i virusologie
- hemaglutinarea indirect,
- ELISA, microaglutinare pe lam.

Profilaxie
Nu se cunosc tratamente profilactice eficiente.. *
Se vor supraveghea instalaiile de ventilaie i de purificare a
aerului, ca i a celor de distribuire a apei.

Tratament
Eritromicin, azitromicin per os sau i.v, iar la bolnavii
imunosupresai se va asocia rifampicina; ciprofloxacin, clindamicin,
imipenem. Se vor izola n spital bolnavii.
Caliopsia FLOREA Bacteriologic i virusologie

Capitolul XIX
Bacterii anaerobe nesporulate

Coci anaerobi Gram pozitivi

Cele mai importante genuri din aceast familie sunt:


Peptostreptococcus i Pepi o coccus.

Familia Peptococcaceae
Habitat
Flora din gura, tract intestinal, respirator, genital feminin.

Genul Peptostreptococcus
Cea mai important specie este: P. anaerobius (magnus).

Peptostreptococcus anaerobius (Diplococcus magnus)


Sunt coci Gram pozitivi aezai n perechi, tetrade, mase
neregulate sau lanuri, strict anaerobi, n generai catalazo negativi,
atac zaharurile fermentativ, unele sunt azaharolitice, metabolizeaz
peptonele i aminoacizii cu formarea, n funcie de specie, a unor
metabolii volatili:
- majori: cel mai frecvent! acid acetic i butiric, mai rar caproic,
izocaproic i lactic;
- minori: izobutiric, izovaleric, succinic.
Caractere de cultur
Cresc relativ lent, dup 48 ore n condiii de anaerobioz la
temperatura de 37C, apar colonii rotunde, alb-cenuii, opace,
nehemolitice, cu dimensiuni ntre 0,5-2 mm (dup cinci zile de

230
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

incubare). n bulion creterea este lent, sub form de agregate, mai


rar tulbur mediul.

P. anaerobius crete cel mai repede, dup 24 ore coloniile au 1


mm, dup 5 zile au 2-4 mm, nehemolitice, rotunde piate, gri cu centru
uor acuminat, alburiu, rspndesc un mirqjs dulceag ptrunztor.
'
Habitat sunt prezeni n intestinul gros

Caractere microscopice
Sunt coci Gram pozitivi, n funcie de vrst i mediul de cultur
pot deveni Gram negativi. Ei au form sferic, dar pot fi elongai i
cocobacilari. Au dimensiuni de 1,5-1,8 pm, aezai n diplo. Dau
infecii n asociere cu Bacteroides jragilis.
Cresc pe geloz snge, dau colonii mici ca picturile de rou,
transparente, dup 2-3 zile cresc i se opacifiaz.
Sunt sensibili la aer, peniciline, cloramfenicol, metronidazol.

Genul Peptococcus
Peptococcus asaccharolyticus (Staphylococcus asaccharolyticus)
Sunt coci Gram pozitivi, aezai n grmezi, cu dimensiuni de 1-
1,2 pm. Nu fermenteaz nici un glucid, reduce fr coagulare laptele
tumesolat, produce ndoi. Sunt bacterii anaerobe, Gram pozitive,
nesporulate, aezate n grmezi, catalazo pozitivi, anaerobi,
azaharolitici. Metaboliii finali volatili majori sunt: acidul butiric i
caproic, iar cei minori sunt: acidul acetic i izovaleric.
Peptococcus niger
Habitat
Zona ombilical, genital, foarte rar are semnificaie clinic.
Formeaz colonii mici, rotunde, convexe, netede, lucioase, negre,
mslinii, devin gri dup expunere la aer. Testul catalazei difereniaz
Peptostreptococcus, care este catalazo negativ, de Peptococcus care
este catalazo pozitiv.

231
Caliopsia FLOREA Bacteriologic i virusologie

Coci anaerobi Gram negativi


Cele mai importante genuri sunt: Veillonella,
Acidaminococcus, Megasphaera

Veillonella
Habitat, se gsesc mai ales n cavitatea bucala i n tractul
respirator.
Sunt coci Gram negativi, cu dimensiuni de 0,3-0,5 pm, anaerobi,
imobili, nesporulai, oxidazo i catalazo negativi, nu fermenteaz
carbohidraii, formeaz acid acetic, acid propionic, C02 i H2 prin
fermentarea piruvatului i lactatului. Reduc nitraii la nitrii. Dup 48
ore cu incubare la 37 C, colonii de 1-1,5 mm, transparentp pn la
opac-albe, nehemolitice. Pe medii lichide se dezvolt srac, dar produc
o mare cantitate de gaz. Examinate la lumin UVjcu lungimea de und
de 360 nm, apar ros pn la rou.

Acidaminococcus
Sunt coci Gram negativi, cu dimensiuni de 0,6-1,0 pm,
fermenteaz numai aminoacizii 'din care se obin acidul acetic i
butiric. Dup 48 ore de incubare Ia 370 C n condiii de anaerobioz se
obin colonii minuscule de 0,1-0,2 mm, rotunde, uor bombate, alb
cenuii, sau aproape transparente, nehemolitice. Nu sunt fluorescente.

232
Caliopsia FLOREA Bacteriologic i virusologie

Megasphaera
Sunt coci Gram negativi, cu dimensiuni de 2 pm i mai mari,
anaerobi, fermenteaz carbohidraii i produc: acid acetic i acid
butiric. Dup 4 zile de incubare la 37 C n condiii de anaerobioz,
dezvolt colonii de 0,5-2 mm, rotunde, uor bombate, cu margini
neregulate, lucioase, untoase pn la aderen, nehemolitice. Sunt
nefluorescente.
Toi aceti coci Gram negativi anaerobi sunt sensibili la aer,
ampicilin, cefazolin, cloramfenicol, metronidazol.

Bacili anaerobi Gram pozitivi nesporulai

Cele mai importante genuri sunt: Actinomyces,


Bifidobacterium, Eubacterium, Mobiuncus, Propionibacterium.

Actinomyces
Sunt bacili Gram pozitivi, ramificai, cu dimensiuni de 10-50
pm, grosime de 1 pm, cu aspect micelial i extremiti mciucate,
imobili, nesporulai, catalazo negativi, majoritatea speciilor,
microaerofili sau strict anaerobi, atac zaharurile fermentativ. Cresc
dup 48-72 ore microcolonii filamentoase cu aspect de pianjen.

Bifidobacterium
Sunt bacili Gram pozitivi, scuri, cu capete frecvent bifurcate,
cu extremiti mciucate sau spatuate, se dispun n lanuri, n
agregate stelate, n V sau palisade, imobili, nesporulai, catalaz
negativi, strict anaerobi.
Atac zaharurile fermentativ. Acestui gen acum i este asociat
i specia Gardnerella vaginalis.
Eubacterium
Sunt bacili Gram pozitivi, pleomorfi: de Ia formele coeobacilare
pn la bacili cu lungimi intermediare, frecvent bifurcai i umflai,
izolai, n perechi sau aglomerai, neramificai, imobili, nesporulai,

233
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

catalazo negativi, strict anaerobi.


O parte dintre specii fermenteaz zaharurile. Nu sunt hemolitici,
nu produc indol, nu reduc nitraii la nitrii.

Mobiluncus
Sunt bacili Gram pozitivi, uneori Gram negativi (n funcie de
mediul de cultivare), dar cu perete de Gram pozitiv, mobili printr-un
smoc de flageli subpolari, uor incurbai, catalazo negativi, strict
anaerobi, atac zaharurile fermentativ. Apare frecvent asociat cu
Gardnerella vaginalis la pacientele cu vaginoz.

Propionibacterium
Sunt bacili difteromorfi, bifizi sau ramificai, de 10-20 \im
ocazionai cocoizi, imobili, nesporulai, catalazo pozitivi sau negativi,
anaerobi pn la aerotolerani, atac fermentativ zaharurile cu formare
de acid propionic. Pe medii lichide crete abundent, iar pe medii solide,
dezvolt colonii alb-sidefii, hemolitice pe geloz snge, produc H2S,
lichefiaz gelatina, produc indol. Este rezistent la metronidazol, dar
sensibil la: ampicilin, c^fazolin, cloramfenicol, tetraciclin.
Poate da septicemii, endocardite, pleurezii.
J

Bacili anaerobi Gram negativi nesporulai

Din acest grup principalele specii cu interes medical aparin


genurilor: Bacteroides, Prevotella, Porphyromonas i
Fusobacterium.
Bacteroides
. Se gsesc n cavitile naturale, dar mai ales n tubul intestinal.
Sunt bacili mici, Gram negativi, pot fi cocobacili, imobili,
nesporulai, strict anaerobi, fermenteaz zaharurile cu producere de
gaz i acizi, metaboliii finali sunt acidul acetic i succinic.
Cresc pe medii cu snge, dup 48 ore la 37 C, n condiii de
anaerobioz, dezvolt colonii rotunde, uor convexe, qu margini

234
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

regulate de 1-3 mm, lucioase, umede, translucide sau sfemiopace.


Unele specii sunt hemolitice. Cresc pe medii cu bil, produce puin
H2S, coaguleaz i acidific laptele tumesolat.
Rezistent la peniciline i cefalosporine, dar sensibil la
eritromicin, cloramfenicol, metronidazol.

Prevoiella
Sunt bacili Gram negativi, polimorfi, dup 48 ore la 37 C n
anaerobioz, dezvolt colonii mici de 2 mm, sunt circulare, convexe,
cu margini regulate, suprafaa umed, lucioas. Pot fi hemolitice i
pigmentate n funcie de specie. Fermenteaz zaharurilor cu formare
de metabolii majori acizi acetic i succinic i minori acizi izobutiric,
izovaleric i lactic.

Porphyromonas
Sunt bacili sau cocobacili, Gram negativi, strict anaerobi,
imobili, nesporulai, fermenteaz aminoacizii cu formare de
metabolii volatili, pigmentogeni cu producere de protohem.
Dup cultivare n condiii de anaerobioz, la 37 C pe geloz
snge, dezvolt colonii care variaz de la minuscule, la 3 mm, colonii
rotunde, convexe, umede. Progresiv se pigmenteaz de la periferie
spre centru, ntreaga colonie putnd ajunge neagr dup
6- 10 zile.

235
Caliopsa FLOREA Bacterioiogie i virusologie

Fmobacterium
Sunt barili Gram negativi polimorfi de la forme cocobacilare,
bacili fuziformi la forme filamentoase, imobili, nesporulai.
Fermenteaz zaharurile, aminoacizii sau peptidele cu formare de
acid butiric, ca metabolit final major.
Cultiv n condiii stricte de anaerobioz, dup 48 ore la 37 C,
colonii de dou tipuri:
- F. necrophornm subspecia necrophorum, au diametrul de 2 mm,
rotunde, turtite, cu margini erodate, opace, ale sau cenuii, intens p-
hemolitice;
- F. necrophorum subspecia funduliformis care sunt mici cu
diametrul pn la 1 mm, rotunde, netede, cenuii-translucide, slab i
tardiv p-hemolitice.
Nu crete pe medii cu bil, laptele tumesolat nu este coagulat, slab
acidifiat, majoritatea speciilor produc indol. Culturile de F. necrophorum
degaj un miros putrid.
Poate produce moartea la animalele de laborator, poate genera
abcese n ficat, splin, rinichi, datorit unei exotoxine.
Este sensibil la penicilin.

\\

236
Caliopsia FLORE A Bacteriologie i virusologie

Capitolul XX
Spirochete: Treponema, Borretia,
Leptospira

Ordinul Spirochaetales cuprinde dou familii importante pentru


patologia uman:
- familia Spirochaetaceae n care se. descriu genurile Treponema i
Borrelia,
- familia Leptospiraceae care are un singur gen, Leptospira.
Sunt germeni helicoidali, mobili, au corpul format din mai
multe spire, micrile sunt datorate unor fibrile dispuse pe toat
lungimea corpului ntre peretele celular i membrana extern, peretele
este elastic format din glucide, lipide, polipeptide. Nu sunt rezistente
n mediul extern.

Genul Treponema
n acest gen sunt specii patogene pentru om: . ,
- Treponema pertenue care produce boala PIAN, cu leziuni pe
tegumente i mucoase. La copil se numete PIAN, iar la adult se
numete BEJEL.
- Treponema carateum care produce boala PINT cu leziuni
maculo-papuloase ulcerative, cu complicaii tardive, cardiovasculare
i nervoase.
- Treponema pallidum care este agentul etiologic al sifilisului, cu
transmisie n primul rnd sexual.

237
Caliopsia FLOREA Bacteriologic i virusologie

Specii saprofite: Tr. microdentium, Tr. mucosum, Tr. genitales, etc.

Treponema pallidum
Habitat
Este un parazit exclusiv al omului i nu se ntlnete n mediul
exterior, avnd o rezisten foarte sczut.

Morfologie
Se examineaz la microscopul cu fond. ntunecat. Are o lungime
de 10-15 pm, o grosime de 0,2-0,3 pm, form heicoidal, spirele sunt
n numr de 10-15 strnse i regulate cu capetele drepte: ntre perete i
membran are fibrile, care i confer mobilitate, prezint micri de
rotaie i flexie. Se coloreaz Giemsa slab, dar se coloreaz prin
impregnare argentic (coloraia Fontana-Tribondeau).

Caractere de cultur
Nu se cultiv pe medii artificiale, cultiv pe animale de laborator,
maimue i iepuri.
Tulpina Nichols de Treponema pallidum este reprezentativ ca
tulpin patogen i este folosit n toat lumea.
Tulpina Reiter de Treponema pallidum este o tulpin saprofit care
crete pe medii de cultur mbogite i este folosit pentru diagnostic.

Caractere antigenice ,
Are mai multe antigene. '
- Antigene de familie care sunt lipoidice (reprezint 15-20% din
greutatea uscat) ntre care se remarc haptena Wasseimann , care au
structur asemntoare cardiolipinei (din structura cordului bovin) i
folosit n diagnosticul de rutin al - sifilisului.

238
Caliopsia FLOREA Bacteriologic i virusologie

- Antigene de gen de natur proteinic comun genului


Treponema se extrage din Treponema Reiter.
- Antigene de specie (tip) de natur proteic, situat n
profunzime, apar doar la Treponema pallidum.
- Antigene polizaharidice specifice de specie i tip, una din ele
este implicat n testul T.l.T - T.P.I.(testul de imobilizare a
treponemelor).
Primii anticorpi care apar sunt anticorpii de imunofluorescen,
apoi n ordine: Ac antiproteinic de grup (Reiter) i antilipoidici,
ultimii sunt imobilizinele. ^

Rspunsul imun
Este umoral i celular
- rspunsul imun celular apare deoarece Treponema se
multiplic strict intracelular;
- rspunsul imun umoral se materializeaz prin elaborarea
anticorpilor fa de antigenele descrise mai sus.

Rezistena
Este foarte sensibil n mediul exterior, este rapid distrus prin
uscare n aer, temperaturi mai mari de 41 C, spun, antiseptice,
detergeni. Este rapid distrus prin aciunea ultrasunetelor.
Este sensibil la peniciline i cefalosporine.

Patogenitate
Treponema pallidum este patogen pentru om prin multiplicare
intracelular i invazivitate. Boala se numete SIFILIS sau LUES.
Boala se transmite prin contact sexual i mult mai rar nesexual (5%
din cazuri): doic sntoas alptnd copil cu sifilis congenital sau
doic bolnav alptnd copil sntos, transfuzie, medic consultnd
sau tratnd (fr msuri de protecie bolnavi de sifilis). Sifilisul este o
boal cronic, care n
lipsa tratamentului (sau un tratament inadecvat) evolueaz n 3 perioade
239
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

distincte.
1. Sifilisul primar apare dup inocularea n timpul actului
sexual.
- Bacteriile ptrund n organism prin leziuni fine ale pielii i
mucoaselor, datorita mobilitii lor, treponemele ajung pe calea
vaselor limfatice n ganglionii limfatici regionali i apare bacteriemia.
- La locul de inoculare apare dup 3 sptmni (ntre 10-60 zile)
ancrul dur, care apare dup multiplicarea treponemelor la locui de
inoculare, atunci cnd ating o concentraie local de IO7 germeni/ml.
De obicei ancrul este unic este totdeauna nsoit de adenopatie
regional, care este dur, nedureroas, nesupurat. Poate fi localizat n
zona contactului sexual: penis, regiunea anal, vagin, col uterin,
faringe, palat dur, etc. Fenomenele locale caracteristice leziunii
primare se vindec spontan dup patru-ase sptmni, fr a lsa i
alte semne clinice de boal.
Anticorpii devin evideniabili n a doua jumtate a perioadei
primare.
2. Sifilisul secundar la 2-3 luni "de la contactul infectant (45- 50
zile de la producerea ancrului) apar leziuni maculo-papuloase,
neulcerative ia nivelul tegumentelor i mucoaselor. Apar papule
umede i palide mai ales n regiunea ano-genital, axilar, gur. Se
produc i kite manifestri ca: meningita sifilitic, corioretinit, nefrit,
periostit. In aceast faz se gsesc treponeme n tot organismul,
bolnavul este foarte contagios. Dup cteva luni (mai rar 1-3 ani)
leziunile secundare, se vindec spontan, urmnd o ndelungat faz de
sifilis latent bare poate dura ani sau zeci de ani.
- 25% din bolnavi (n funcie de reactivitatea organismului) nu
se mai nregistreaz manifestrile fazei teriare;
- 25% dintre bolnavi rmn lateni toat viaa;
- 50% dintre bolnavi progreseaz ctre sifilisul teriar.

240
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

3. Sifilisul teriar este rspunsul imun celular la prezena Tr.


pallidum n organism i a produior lor metabolici. Apare dup 5- 40
ani de la contactul infectant, intervalul pn la debutul fazei teriare
se numete perioada de laten aparent, fr simptome, dar cu un titru
mare de anticorpi. Se caracterizeaz prin leziunile granulomatoase
(gome), tegumentare i osoase; modificri degenerative n sistemul
nervos central (tabes, paralizie general progresiv); leziuni
cardiovasculare (aortit, insuficien valvular aortic), leziuni
hepatice.

Diagnosticul de laborator
Este bacteriologic i imunologic.

A. Diagnosticul bacteriologic
Se efectueaz frotiu din secreia din ancrul dur, colorat
Fontana-Tribondeau sau preparat proaspt i se examineaz la
microscopul cu fond ntunecat, unde se observ treponemele cu forma
caracteristic i mobilitatea specific prin micrile de flexiune, sau
colorate maroniu pe fond galben, n coloraia Fontana-Tribondeau.

B. Diagnosticul imunologic
Se evideniaz anticorpii in vitro prin reaciile Ag-Ac.
- Iniial se fac teste de triaj: RFC (reacia de fixarea
complementului) Bordet Wassermann (RBW), VDRL este o reacie
de floculare (reacia pozitiv, este depunerea neregulat a cristalelor
de colesterol de care este fixat Ag pe anticorpii antilipoidici din ser).
Dac aceste reacii sunt pozitive se trece la teste de confirmare.
- Reacia FTA-ABS (Fluorescent Treponemal Antibody
Absorbtion) test de imunofolorescen indirect.
- Reacia de hemaglutinare pasiv (TPHA).
- Diagnosticul imunoogic celular se face prin IDR n care Ag
este luetina extras din Treponema. Reacia pozitiv se evideniaz prin
prezena rspunsului imun celular, care semnific prezena infeciei.

241
CaHopsi FLOREA Bacteriologie i virusologie

Tratament
Se administreaz penicilin, cefalosporine. Dac bolnavul este
alergic la peniciline se poate face tratament cu tetracicline, macrolide,
dar pentru femeia nsrcinat se recomand tratament cu peniciline.
Eficacitatea tratamentului se verific prin diagnosticul serologic. Dac
tratamentul este eficace, dispar Ac din serul de cercetat.

Genul Leptospira

Din acest gen fac parte:


- specii saprofite (Leptospira biflexa),
- specii patogene: Leptospira interrogans cu mai multe serotipuri
i mai multe specii: Leptospira icterohaemorrhagiae (are ca rezervor
oarecele), Leptospira grippotyphosa (rezervor este tot oarecele),
Leptospira pomona (rezervor este porcul), Leptospira canicola (rezervor
este cinele).

Habitat
Ele se gsesc la roztoare i animale domestice. La om apar
accidental. Paraziteaz eorticala renal, de unde sunt eliminate prin
urin n mediul nconjurtor^

Caractere morfologice
Sunt spirochete cu lungimea de 12 pm i diametrul de cc. 0,06
um. Fiind att de subiri, pot trece chiar i prin tegumentele intacte (la
contactul tegumentelor cu apa contaminat). Corpul are 10-12 spire,
nedeformabile, mici, regulate, cu capee rsucite, n form de crlig.
Aparatul locomotor este format dintr-o singura fibril dispus ntre
peretele celular i membran. Micrile spontane sunt foarte rapide i
variate: de rotire n jurul axului longitudinal, de flexiune i translaie.
Se poate colora Giemsa (foarte greu), mai bine Fontana-
Tribondeau (cu nitrat de Ag) apar colorate maro pe fond bej.

Rezisten

242
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

Rezist n sol umed i ap, nu suport uscciunea nici mediile


acide sau alcaline, de aceea rezervor este do^jr apa. Ele sunt foarte
sensibile la pH acid, mor instantaneu n urina acid, bil, soluii de
sruri biliare, sucul gastric normal l distruge n 10- 15 min. Sunt
distruse de dezinfectante i antiseptice. Sunt sensibile la radiaiile UV,
le distrug dup 15 min..
Sunt sensibile la tetraciclin, eritromicin, kanamicin,
penicilin, streptomicin.

Caractere de cultur
Cultiv pe medii mbogite cu ser de iepure, dar numai n medii
lichide, nu cresc pe mediile solide. Nu tulbur mediul lichid datorit
transparenei lor, pentru identificarea lor, dup 72 ore in incubare, se
recolteaz o pictur i se examineaz la microscopul cu fond
ntunecat. Sunt germeni aerobi. n ara noastr se folosete mediul
Korthof cu un pH de 7,2-7,4 cu adaos de ser de iepure 5-10%.

Antigene
Prezint antigene somatice care mpart genul n grupuri i tipuri
antigenice (tipul este identic cu specia n cazul leptospirelor).

243
Caliopsia FLOREA Bacteriologic i virusologie
Patogenitate
Leptospirele sunt patogene prin multiplicare i invazivitate.
Produc boala numit LEPTOSPIROZ, care este o antropozoonoz.
Calea de transmitere este cel mai adesea cutanat, mai ales la
nivelul membrelor inferioare. Dup ce au ptruns n organism, intr n
circulaia general, pot strbate seroasele, de aceea uneori poate s
apar meningita leptospirotic. Pot s apar hemoragii hepatice.
Specia patogen pentru oameni este Leptospira icterohaemorrhagiae.

Rspunsul imun
Este umoral i nu ofer protecie.

Diagnosticul de laborator
Este bacteriologic i serologic.

Diagnosticul bacteriologic
Const n recoltarea, nsmnarea i examinarea microscopic
la microscopul cu fond ntunecat. Produsele patologice sunt: sngele,
urina (n prima parte a bolii) care trebuie alcalinizat. |\
1
Diagnosticul serologic
Pune n eviden anticorpii din ser. Se pot face RFC cantitativ
i reacia de aglutinare (microaglutinare). Se formeaz aglutinine care
nu se pot vedpa cu ochiul liber, ci doar la microscopul cu fond
ntunecat, dnd imaginea de cer nstelat.
Genul Borrelia
Cuprinde specii saprofite dar i patogene pentru om. Complexul
Borrelia burgdorferia (cuprinde cca. 12 specii) pot genera boala Lyme,
care este rspndit n America de nord i Eurasia, principalul
rezervor sunt roztoarele i vectorii activi (cpuele, pduchii).
Borrelia recurrentis este o specie strict specific omului, care se
transmite prin pduche. Produce febra recurent.

Caractere morfologice

.244
Caliopsia FLQREA Bacteriologie i virusologie
Sunt spirochete cu 10-20 spire largi i neregulate cu extremitile
drepte sau n unghi obtuz, au lungimea de 20-30 jum i o grosime de
1 pm. Aparatul locomotor este alctuit dintr-un mnunchi de 30 de
fibrile dispus ntre membran i perete. Se coloreaz Gram, sunt Gram
negativi, dar i prin impregnare argentic (Fontan-Tribondeau).

Caractere de cultur
Cultiv pe medii care conin albumin bovin, gelatin, ser de
iepure, aminoacizi, extract de drojdie n condiii de microarofilie. Cea
mai bun metod de cultivare a boreliilor este inocularea pduchilor
(Weigl). Boreliile nu omoar pduchele, se nmulesc, dau culturi
pure, cu virulen nemodificat. Mai pot fi cultivate i pe ou
embrionate de gin n vrst de 12-16 zile.

Caractere biochimice i metabolice


Boreliile tolereaz mici cantiti de oxigen, sunt microaerofle,
fermenteaz glucoza producnd bioxid de carbon i acid lactic.
Rezistena
Sunt puin rezistente n mediul extern. Sunt sensibile la
penicilin, tetraciclin, cloramfenicol.

Caractere antigenice
Boreliile prezint fenomenul de variaie antigenic. Structura
antigenic a acestor bacterii se modific n cursul infeciei. Din aceast
cauz dozarea anticorpilor este inutil.

Paogenitate
Sunt patogene prin multiplicare i invazivitate. Produc
borrelioze, care sunt boli generalizate. Omul face boala dup 2-15 zile
de incubaie, debutul este brusc cu febr care poate ine 3-7 zile,
urmeaz criza cu frison, cefalee, mialgii, artralgii, fotofobie, letargie
apoi apirexi i 5-10 recderi ce se succed la intervale de
7- 9 zile. Se numete febra recurent. Se poate complica cu
leziuni necrotice i proliferative n splin, rinichi ficat. Mortalitatea

245
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

este de 30%.
Febra recurent nsoete, de obicei, tifosul exantematic, avnd
acelai vector (pduchele).

Rspunsul imun
Este umoral, de scurt durat, reinfecia este posibil dup 3- 6
luni.

Diagnosticul de laborator
Este bacteriologic i imunologic. Se poate nregistra o
leucocitoz de 25.000/jul, VSH deh 10mm/h.

Diagnosticul bacteriologic
Evidenierea i izolarea spirochetelor din sngele periferic
prelevat din sngele periferic prelevat n puseele febrile.

246
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie
Diagnosticul imunologic
Decelarea anticorpilor specifici fixatori de complement i
aglutinani n serul convalescenilor. O cretere de 4 ori a titrului n
cursul determinrilor succesive se traduce printr-o boal n evoluie.

Tratament
Tetraciclin sau doxiciclina (administrat n doz unic).
Tratamentul se face cu atenie pentru a preveni reacia Herxheimer
(declanat de endotoxina eliberata n cantiti mari n urma
dezintegrrii unui numr important de spirochete) care se manifesta
cu febr, imediat dup administrarea antibioticului, hipotensiune,
colaps.
Caliopsia FLORJEA Bacteriologie i virusologie

Capitolul XXI
Bartonella, Rickettsia i
Chlamydia

Genul Bartonella

Sunt bacii Gram negativi, pretenioi nutritiv, cultiv lent numai


pe medii mbogite. Sunt oxidazo negativi i fr activitate
biochimic. Sunt strict aerobe, necesit pentru cultivare atmosfer
umed, cu C02 pn Ia 10%. Specia reprezentativ a acestui gen este
Bartonella bacilliformis, acest gen mai include speciile Rochalimaea i
Grahamella.

Bartonella bacilliformis
Habitat
Se ntlnete n zona andin din Peru, Ecuador i Columbia.
Specia este nemotrop i endoteliotrop este gzduit de om i
transmis delflebotomul Lutzomya vert'ucarum.

Caractere morfologice
Bacili Gram negativi polimprfi cu 1,5-0,3 pm i grosime de 0,2-
0,5 pm. n culturile tinere pfedomin formele bacilare scurte dispuse
izolat, n perechi, n lanuri sau grmezi. n culturile btrne
predomin formele cocoide. Este singura specie mobil printr-un
smoc de flageli polari.
Caractere de cultur
Cultiv pe agar Columbia, agarul triptieaz soia sau agar infuzie
cord-ereier suplimentate cu snge, de berbec sau iepure, 5- 10%.

248
Caliopsia FLQREA Bacteriologie i virusologie

Temperatura optim de cultivare este de 25 C. Dup 4-5 zile de


incubare pot s apar dou tipuri de colonii: colonii minuscule,
transparente sau mucoide ca un film mucoid cu tendin invaziv. Pe
preparatele din produsele patologice, sngele periferic, se observ
bacili mici intraeritrocitari sau n citoplasm celulelor endoteliale din
splin, ficat, ganglioni limfatici sau leziuni cutanate.

Patogenie
Infecia pe care o determin evolueaz n dou stadii. ri primul
stadiu, acut, cunoscut ca febra de Oroya este un sindrom hemolitic
febril cu mortalitate de 40%, care poate evolua lent, al doilea stadiu,
subacut sau cronic, este cunoscut ca verruga peruan este o erupie
cutanat, asemntoare negilor.

Diagnosticul de laborator
Este bacteriologic pe baza caracterelor descrise mai sus.

Bartonella quintana (provine din genul Rochalimaea)


Sunt Bacili Gram negativi de 1-2 \im lungime i 0,5-0,6 pm
grosime, frecvent uor incurbai. Sunt eatalazo negative i slab
oxidazo pozitive. Determin febra de tranee, boal transmis de
pduchi. Cultiv la 35 C dup 14 zile, coloniile sunt conopidiforme,
pe aceleai medii i n aceleai condiii ca Bartonella bacillformis.
Determin febra de tranee, boal transmis prin pduchi, se ntlnete
n Europa, Africa pn n Mexic.

Tratamentul pentru bartonele se face cu tetraciciine i


cloramfenicol.
Ordinul Rickettsiales

Cuprinde dou familii: familia Rickettsia i familia Chlamydia.

Familia Rickettsia

Sunt microorganisme care se situeaz la grania dintre bacterii i


249
Caliopsia FLORJEA Bacteriohgie i virusologie
virusuri.
Se asemn cu bacteriile prin: dimensiuni, morfologie,
organizare celular intern, compoziie chimic, multiplicare prin
diviziune direct. Se aseamn cu virusurile deoarece nu cresc pe
medii acelulare, ele se multiplic numai n esuturi vi, ca virusurile.
Aceast familie cuprinde trei genuri: Rickettsia, Coxiella i
Ehrlichia.
Aceste microorganisme sunt transmise de artropode (pduche,
purice, cpu) multiplicndu-se n corpul acestora.
Specia tip al acestei familii este Rickettsia prowazeckiU care este
specific omului, celelalte specii au ca surs animalele.

Clasificarea
1. Rickettsii productoare de tifos exantematic:
Rickettsia prowazeckii, produce tifosul exantematic
epidemic, care se transmite prin pduchi.
- Rickettsia mooseri, produce tifosul exantematic endemic
(este o form mai uoar), are ca^ surs obolanul i se transmite prin
pduche.
2. Rickettsii productoare de febre butonoase:
- Rickettsia conori, determin febra mediteranean clasic
(febra butonoas), se transmite de la cine la,om prin cpue. La locul
nepturii apare un buton.

250
Caliopsia FLOREA Bacteriologic i virusologie
- Rickettsia rickettsii determin febra ptat a Munilor
Stncoi, se transmite de la roztoare prin cpue.
3. Rickettsii care dau febra tropical
- Rickettsia orientalis produce febra fluvial de Japonia, ca
rezervor sunt roztoarele, se transmite prin cpue.
4. Rickettsii care dau tifos pulmonar
- Rickettsia burnetii (Coxiella burnetii) boala se mai
numete febra Q, rezervorul este reprezentat de roztoare i comute,
se transmite prin cpue, dar i direct pe cale respiratorie i digestiv.
\[

Caractere morfologice ale rickettsiilor


Morfologia este polimorfa," de la coci pn la cocobacili, cu
dimensiuni 1-0,4 pm, Gram negativi, imobili, nesporulai.

Caractere de cultur
Cultiv strict intracelular, se multiplic doar n citoplasm unde
formeaz incluziuni, pot cultiva pe: fragmente de esuturi, culturi de
celule, ou de gin embrionat (locul de elecie este sacul vitelin) i
animale de laborator (cobai sau oarece).

Rezistent 9

Rezista la radiaiile solare, uscarea favorizeaz meninerea lor


timp ndelungat, ani, n stare viabil i virulent. Sunt distruse de
dezinfectante, antiseptice, prin expunere la 56 C timp de 15 minute.
Bila, albastrul de metilen, glicerina i fenolul distrug rickettsiile.
Sunt sensibile la tetraciclin i cloramfenicol.

Structur antigenic
Rickettsiile au antigene somatice i solubile.
Antigenul somatic este endotoxina care se elibereaz dup
moartea bateriei.
Speciile de Proteus OXK, 0X19, 0X2 au antigen aproape identic
cu al rickettsiile, de aceea se folosesc pentru diagnosticarea lor prin
251
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

reacia de aglutinare n tub Weil-Felix.

Patogenitate
Sunt patogene prin multiplicare intracelular, care duce la
leziuni de tip proliferativ i prin toxigenez datorit endotoxinei,
provoac RICKETTSIOZE

Rspunsul imun
Este umoral i celular.
Rspunsul umoral determin sinteza de anticorpi, care protejeaz
fa de efectul toxic al rickettsiilor.
Rspunsul celular ofer protecie la infecie, imunitatea este
ntreinut prin persistena infeciei latente, determinnd o imunitate
de premuniie, care prezint urmtoarele caracteristici:
- organismul cu infecie cronic nu prezint nici un semn de
boal, agentul infecios fiind perfect tolerat de organism;
- suprainfecia cu rickettsii din aceeai specie nu mai poate avea
loc;
- starea de rezisten astfel dobndit dispare o dat cu
dispariia stMi de infecie latent;
- n anumite condiii Rickettsia existent n stare latent poate
redeveni patogen dnd recderi ale bolii, tifosul de rerabolnvire
(boala Brill-Zinsser).

Rickettsia prowazeckii \
Este agentul etiologic al tifosului exantematic epidemic.
Boala apare n urma nepturii de pduche, pduchele face
infecia i elimin bacteriile prin dejecte pe pielea noii gazde, elimin
i o substan pruriginoas care determin scrpinarea. Prin leziunile
care apar, rickettsiile ptrund n organism i se multiplic n endoteliul
vaselor mici. Este caracteristic lezarea endoteliului vascular cu
formarea de infiltrate perivasculare (nodulii Fraenkel) cu limfocite,
monocite, histioeite i plasmocite, mai ales cutanat, sistemul nervos i
mai rar n miocard i corticala renal. Dup 7-14 zile de la neptur

252
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

apare febr de 40-41 C care dureaz o sptmn. Dup a 5 a zi de


febr apare erupia, pete roii.
Mortalitatea este mare. Aceast boal este o boal
infectocontagioas foarte grav cu declarare obligatorie i face parte
din grupul bolilor pestileniale.

Diagnosticul de laborator
Diagnostic bacteriologic i imunologic.
Diagnosticul bacteriologic se face numai n centre de referin,
const n examenul microscopic al seciunilor histologice sau al
amprentelor de organe recoltate de la biopsie sau necropsie. Se
coloreaz Machiavello (cu fucsin, acid citric i albastru de metilen)
se pun n eviden prezena intraeelular a eorpusculilor
rickettsiformi, ele apar sub form de bacili scuri sau coci colorai
n rou viu pe fondul albastru al frotiului, sau n coloraia Gimenez
sunt colorai n rou pe fond verde. Colorai n albastru purpuriu n
coloraia Giemsa.

Diagnosticul imunologic poate fi fcut i n centre judeene.


Se poate face RFC cantitativ, reacia de aglutinare Weil- Felix
(este o reacie de aglutinare n tuburi cu antigen de la Proteus 0X19) i
reacie de aglutinare pe lam Kudicke-Stauer,

Tratament
Cu tetracicline, doxiciclin i cloramfenicol.

Profilaxie
Nespecific se acioneaz asupra cii de transmitere prin
distrugerea artropodelor, depistarea i tratarea sursei.
Specific prin administrarea unui vaccin cu rickettsii omorte,
sau vii atenuate.

Familia Chlamydiaceae

253
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

Genul reprezentativ este Chlamydia

Caractere generale
Au dimensiuni mici, sub 1 pm (0,25-0,4 pm), trec prin filtre prin
care nu trec bacteriile, sunt Gram negative, se multiplic numai n
celulele vii: esuturi, culturi celulare, ou embrionat de gin n sacul
vitelin, animale de laborator (oarece, obolan, cobai).
Au metabolism propriu, care ns nu produce ATP, energia este
furnizat de celula parazitat.
Se multiplic n citoplasm celulelor gazd printr-un ciclu de
dezvoltare caracteristic.

Rezisten
Sunt moderat rezistente la iradiere cu UV, la uscare i liofilizare.
Se inactiveaz n 15-30 min la 56 C, sunt sensibile la antiseptice i
dezinfectante uzuale.
Sunt sensibile la tetracicline, cloramfenicol, eritromicin. Sunt
rezistente la streptomicin, vancomicin, kanamicin, gentamicin.

Clasificare \
- Chlamydia trachomatis este agentul etiologic al
TRACHOMULUI, cherato-conjunetivit, ce se caracterizeaz printr-
o secreie purulent abundent, poate s duc la orbire i este
rspndit n Africa i n Orient. Mai poate da: conjunctivita cu
incluzii (conjunctivita folicular), conjunctivita cu incluzii a noului-
nscut, uretrita negonococic (UNG), uretrita postgonococic
(UPG), epididimita acut, maladia Reiter (conjunctivita, uretrita,
poliartrit i uneori enterit), cervicite, salpingite.
- Chlamydia psittaci produce PSTACOZA care este o boal
natural a papagalilor.
- Chlamydia ornithosis produce ORNITOZA, o boala a psrilor
de curte.

Ciclul de dezvoltare

254
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

Are dou forme: extracelular i Intracelular* \


Forma extracelular este cea infecioas, dup c ptrunde n
interiorul celulei gazd, particula infecioas (cbrpusculul elementar -
CE, are form cocoid cu dimensiuni de 0,25-0,3 pm). Dup ataare
de celula gazd, 'se transform dup 8 ore, ntr-o particul mai mare
(corpuscul reticulat-CR, cu dimensiuni de 0,5- 1 pm), sunt formele
intracelulare. Corpusculii reticulai se reunesc i se multiplic prin
diviziune binar, formnd colonii (incluzii) intraeitoplasmatice. Dup
o perioad variabil (cca. 20 ore) n funcie de specia de chlamydii i
de celula parazitat, de la nivelul incluziilor, printr-un proces de
condensare, apar noi corpusculi elementari. Vacuola dup 48 ore este
plin cu corpuseuli elementari nou formai. Prin ruperea celulei,
corpusculii elementari sunt expulzai, urmnd s paraziteze alte
celule. Ciclul dureaz cca. 48 ore.

Diagnostic de laborator
Este bacteriologic i imunologic. Infeciozitatea (prin aerosoli)
este important pentru c trebuie luate toate msurile necesare pentru
prevenirea apariiei unor infecii la personalul din laborator.

Diagnosticul bacteriologic
- Recoltarea produselor patologie n funcie de afectare, trebuie
s se fac respectnd msurile de prevenire.
- Examinarea microscopic a produsului patologic, realizarea
unor frotiuri.
- Cea mai sensibil metoda de punere n eviden a ineluziilor
intraciioplasmatice sau corpusculii elementari este
imunofluorescena. Frotiul este uscat, fixat chimic (cu aceton a -20
C) i colorat imunofluoreseent. Se urmrete prezena, la
microscopul cu UV, a PMN i a celulelor caracteristice esutului
afectat. Incluziile apar ca o mas bine definit, cu fluorescen
(galben-verzui) n interiorul celulelor epiteliaie. Frotiul trebuie
examinat cel puin 3 minute i apoi, dac nu se observ nimic se da
rezultat negativ.

255
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

Se mai pot colora Gimenez (CE apar de culoare roie pe fondul


frotiului verde), Maehiavello (CE apar aglomerai de culoare roie pe
fond albastru).
- Se pot face culturi pe tipurile de celule vii amintite.

Diagnosticul serologic
RFC, microimunofluorescen i ELISA. Trebuie s fie un titru
de 1/64 care este sugestiv sau o cretere de 4 ori a titrului n dinamic
a anticorpilor specifici, pune diagnosticul pozitiv.

Trataihent
Cu tetraciclin, eritromiein, cloramfenicol.

256
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

Capitolul XXn
Genul Mycoplasma

Mycoplasma face parte din clasa Mollicutes (imollis - moale, cutis


= nveli), ordinul Mycoplasmatales, familia Mycoplasmataceae
cuprinde genul Mycoplasma care include cca. 100 de specii i genul
Ureqplasma cu 6 specii.
Mycoplasmele sunt cele mai mici cu dimensiuni de 0,2 jum, care
nu au perete celular, au posibilitatea de a fi cultivate pe medii
acelulare, dei ele pot fi cultivate i pe culturi celulare, unde pot
produce efect ciopatic ca i virusurile.
Speciile patogene pentru om:
- Mycoplasma hominis care au habitat n cavitatea bucal, nazal i
urogenital.
- Mycoplasma pneumoniae care au habitat n tractul respirator.
- Ureaplasma urealyticum a fost izolata din uretrite negonococice i
n alte infecii uro-genitale.

Caractere morfologice
Prezint o mare plasticitate, mai ales n medii lichide, poate avea
form sferic cu dimensiuni de 0,3-0,8 pm pn ia filamentose (2-40
pm). La exterior celula este delimitat de membrana citoplasmatic
tristratifieat.
Mycoplasma pneumoniae prezint la captul filamentului o
structur specializata sub form de mciuc ce se termin cu un vrf
ascuit, cu rol de aderare la epiteliul respirator.
CaiiopsiaFLOREA Bacteriologic i virusologie

Rezistena
Sunt foarte sensibile n exterior, sunt distruse n 7-10 minute la 50
C, uscciune, aciunea UV, ultrasunete precum i toate antisepticele i
detergenii uzuali.
Simt sensibile la tetraciclin.

Caractere de cultur
Cultiv pe medii aeelulare, dar cu necesiti deosebite, trebuie s se
adauge cel puin trei ingrediente de baz: infuzie de inim de bou, ser de
cal (aport de colesterol, acizi grai saturai), extract de drojdie (aport de
vitamine), la care se mai adaug: glucoza (M pneumoniae), arginin (M
fermentam), uree (Ureapiasma).
temperatura optim de dezvoltare este de 37 C, necesit la izolarea
primar, mai ales pentru Ureapiasma C02 5%, N2 95%, n timp ce M.
pneumoniae crete mai bine n condiii aerobe.
n medii lichide nu tulbur mediul, nu formeaz depozit - (prezena
lui este un semn de contaminare). Crete n 14 zile pn la cteva sptmni
(la primoizolare). Creterea se evideniaz prin virarea pH-ului mediului: la
acid n cazul fermentrii glucozei, sau alcalin la mycoplasmele care elibereaz
NH3, prin hidroliza argininei sau a ureei.
Pe mediile solide creterea are loc n cteva zile, chiar 24 ore
pentru Ureapiasma, dar 6-12 zile pentru primoizolarea la M. pneumoniae.
Coloniile sunt de dimensiuni reduse de 1 mm, _ vizibile numai cu lupa, sunt
aderente de mediu.
- Mycoplasma pneumoniae; formeaz colonii cu aspect granular, tar
halou periferic, suprafaa lor are aspect de mur, cu p-hemoliz.
- Celelalte mycoplasme au aspect tipic de ou ochi, rotunde cu
centrul dens, nconjurat de un halou mai puin dens, pot avea
^ alfa-hemoliz.
Caractere biochimice
Fermenteaz glucoza, nu metabolizeaz arginina, nu hidrolizeaz
ureea (cu excepia Ureapiasma ureafyticum). Myeoplasmele elaboreaz
hemolizine.

258
Caliopsia FLORE A Bacteriologie i virusologie

Antigene
Myeoplasmele au antigene somatice care clasific genul n grupuri
i tipuri serologice, pe baza lor se poate face identificarea lor. }
i
Patogenitate
Sunt patogene prin multiplicare la poarte de intrare i foarte puin
prin invazivitate. Nu sunt toxigene. Mycoplasma pneumoniae produce
peroxizi, ei au efect citolitic la suprafaa celulei gazda fr ca
peroxidazele i catalazele extraceluiare s poat interveni. Genomul mic
i lipsa peretelui celular permit contactul strns cu celula gazd i
apariia de autoanticorpi fa de: limfocite, muchi neted, plmni,
creier. Prezena acestor autoanticorpi i producerea complexelor imune
ar putea fi rspunztoare de manifestrile extrapumonare asociate
infeciei cuM pneumoniae.
n general sunt germeni cu virulen sczut, 80-90% din infecii
sunt asimptomatiee.
M. pneumoniae determin pneumonia atipic primar, sunt afectai
copiii i vrstnicii.

Rspunsul imun
Este n special umoral, dar este slab, nu poate asigura protecie
eficient.
Ele se pot multiplica i intracelular, de aceea poate s apar i un
rspuns celular.

259
Calopsia FLQREA Bacteriologie i virusologie

Diagnosticul de laborator
Este bacteriologic i imunologic.
Diagnosticul bacteriologic se pune prin evidenierea
mycoplasmelor din produsele patologice.
Diagnosticul imunologic se face prin:
- RFC cantitativ n dinamic, creterea titrului anticorpilor de 4
ori, pune diagnosticul pozitiv.
- Punerea n eviden a limfocitelor T specific sensibilizate la
Mycoplasme.
- Reacia de auto-hemagiutinare la rece (4 C). Ea se bazeaz pe
faptul c prin degradarea hematiilor de ctre hemolizinele
mycoplasmelor apar auto-anticorpi, care la rece se cupleaz cu hematiile
(cuplarea este reversibil).
Titrul reaciei este ultima diluie de ser la care apare aglutinare net,
este semnificativ titrul de 1/64.

Tratamentul
Se face cu tetracicline.

Epidemiologie
Sursa este omul.
Transmiterea se face prin picturile Pfliigge (n cazul infeciilor
aerogene) sau prin contact sexual (n cazul celor genitale). -
Profilaxia este nespecific.

260
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

Capitolul XXIII
Proprieti generale ale virusurilor.
Profilaxie, tratament

Proprieti generale ale virusurilor


Virusologia sau inframicrobiologia este tiina care se ocup cu
studiul virusurilor. Virusurile sunt entiti biologice infectante
subcelulare, vizibile numai cu microscopul electronic, ce paraziteaz
obligatoriu celulele vii.
Virusurile aparin unui regn aparte, Vira, ce cuprinde mai mult de
4000 virusuri identificate pn acum. Aceti ageni biologici pot
parazita celulele procariote sau eucariote aparinnd lungilor, plantelor
sau animalelor.
Primii ageni patogeni virali au fost izolai la plante (virusul
mozaicului tutunului de Ivanovski n 1892), apoi la animale (virusul
aftos de Loffler i Froschn 1897) i la om (virusul amarii de Reed i
Caroll n 1901). Descoperirea virusului sarcomului aviar (virusul Rous)
de ctre Peyton Rous n 1911 a sugerat potenialul oncogen al
virusurilor.
Virusurile prezint urmtoarele proprieti:
- Sunt structuri acelulare de dimensiuni foarte mici de 18- 300
nm, filtrabile i ultrafiltrabile.
- Conin un singur acid nucleic, ADN sau ARN.
- Sunt parazii intracelulari obligatoriu.
- Sunt lipsite de echipament enzimatic productor de energie i
metabolism propriu.
- Poi f cultivate numai pe medii celulare (culturi de celule, ou
embrionate de gin, sisteme biologice sensibile).
- Nu sunt sensibile la aciunea antibioticelor, dar sunt sensibile la
interferoni (IFN).
- Sunt specifice, fiecare virus provoac o anumit boal.

261
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

- Produc incuzii n celulele parazitate. Prezena acestor incluzii


nucleare, citoplasmatice, sau concomitent n nucleu i citoplasm, n
anumite esuturi uureaz diagnosticul de laborator.
- Fiecare virus prezint o structur antigenic specific, fa de
care organismul infectat fabric anticorpi specifici, iar imunitatea
dobndit poate fi solid i de lung durat.
Dup A. LWOFF, virusurile sunt entiti infectante nucleoproteice,
potenial patogene, posednd un singur tip de acid nucleic, incapabile
de cretere i fisiune binar, lipsite de informaie genetic pentru sinteza
unui sistem energetic propriu i necesitnd pentru reproducere,
ribozomii celulei gazd.
O particul viral (virion este format din albumina i acid nucleic,
ADN sau ARN). Acidul nucleic (nucleotid) este nconjurat de un nveli
albuminic protector, care i confer aspectul i structura specific.
nveliul de albumin se numete capsid. Stabilizeaz i protejeaz
genomul viral, iar n cazul virusurilor neanvelopate, are rol n fixarea
virusului pe receptorii specifici pe membrana celular.
Unele virusuri prezint la exteriorul nucleocapsidei un nveli
extern numit peplos (anvelop). Acesta este de natur iipoproteic, n
peplos pot fi implantate (de cele mai multe ori) structuri glicoproteice
(spiculi), ^codificate de genomul viral, ce proemin la suprafaa
nveliului extern
Faa intern a anvelopei este tapetat cu o matrice de natur
proteic {proteina matrix sau proteina M).
Anvelopa stabilizeaz nucleocapsida, iar spiculii confer
antigenicitate i ajut la fixarea virusurilor anvelopate pe receptorii
celulari.
Virusurile sunt lipsite de echipament enzimatic productor de
energie i de metabolism propriu, sunt parazii intracelulari obligatorii
i se replic cu ajutorul celulei infectate.

Taxonomie
Conform ICTV (Comitetului Internaional pentru Taxonomia
Virusurilor), urmtoarele caractere fizico-chimice ale virionului sunt
262
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

folosite pentru gruparea virusurilor n familii:


- natura chimic a acidului nucleic viral, \
- simetria capsidei, (\
- prezena sau absena nveliurilor pericapsulare, >
- diametrul capsidei pentru virusurile cu simetrie helicoidal i
numrul de capsomere pentru virusurile cu simetrie cubic
(icosaedric).
Icosaedrul este un poliedru cu 20 de fee triunghiulare echilaterale,
30 de muchii i 12 vrfuri (vertexuri), orientate dup axele de simetrie.
Conform ICTV exist, pn n anul 2003 aprox. 4000 de specii de
virusuri i peste 30.000 de tipuri i subtipuri, care sunt pstrate n centre
de referin. Pe baza naturii chimice a genomului viral, se mparte n:
dexoxiribovirusuri i ribovirusuri, cu genomul alctuit din ADN,
respectiv ARN.
In funcie de simetria capsidei, helicoidal sau cubic, virusurile
se grupeaz n clase: dezoxihelica, dezoxicubica, ribohelica, ribocubica.
Polaritatea ARN-ului genomic a fost stabilit n mod convenional
n raport cu posibilitatea de traducere (direct sau indirect) a informaiei
n protein. Astfel ARN-ul tradus direct n protein, fr o transcriere
prealabil, este considerat cu polaritate pozitiv i este notat
convenional ARN (+), n timp ce ARN-ul transcris nti ntr-un ARN
complementar i abia apoi n protein, este considerat cu polaritate
negativ i este notat ARN (-).

263
Caliopsia FLORBA Bacterioogie i virusologie
Taxonomia viral cuprinde : ordin, familie, subfamiie, gen, specie.
Nomenclatura este internaional i se aplic la toate virusurile
(indiferent de regnul parazitat).
Ordinul reunete familii de virusuri care posed caractere care le
difereniaz de alte familii i are sufixul virales.
Familia ntrunete caractere comune (morfologie distinct a.
virionului, organizare genomic specific), care nu se ntlnesc la alte
virusuri i este desemnat cu sufixul viridae.
Subfamilia se gsesc n interiorul unei familii, se utilizeaz sufixul
virinae.
Genul este un grup de specii, care posed caracterele familiei, dar
au i.alte particulariti, au sufixul virus.
Specia reprezint grupuri de tulpini virale, ce se deosebesc prin
prezena unor gene, care codific aceste diferene. Se exprim fr sufix,
specificaiei de virus adugndu-i-se numele ntreg: virus gripal, virus
Ebola.
Exemplu: familia Herpesviridae, subfamilia
Alphaherpesvirinae, genul Simplex virus, Virus herpes simplex serotip 2.
Virusurile dau infecii cu localizare primar n anumite organe,
pentru care virusul respectiv are afinitate:
- infeqtii ale sistemului nervos central: poliomielita, turbarea;
- infedii ale aparatului respirator: gripa, guturaiul;
- infecii localizate pe pile i mucoase: herpesul, negii, zona
zoster;
- infecii ale ficatului: hepatite epidemice;
- infecii ale glandelor salivare: parotidita epidemic;
- infecii ale ganglionilor limfatici: limfogranumolatoza
venerian.
Profilaxie

Profilaxia specific antiviral se poate face prin dou metode i


anume profilaxie activ, care se face prin vaccinare i profilaxie pasiv,
care se face prin administrarea serurilor imune specifice.
Primul vaccin viral a fost vaccinul antivariolic n 1789, a fost
264
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

administrat de ctre Edward Jenner, n mod empiric prin variolizare


(transmiterea coninutului pustelor variolice la indivizi sntoi), el a
observat c mulgtorii de vite cu leziuni pustuloase transmise de la
animale erau rezisteni la variol.
Profilaxia imun bazat pe date tiinifice i aparine lui Louis
Pasteur n 1885 cnd a preparat vaccinul antirabic i l-a administrat lui
Joseph Meister. n 1937 au fost obinute preparate profilactice
antimalarie, antigripale i antiurliene, dezvoltarea preparrii
vaccinurilor a fost posibil dup 1949.

Profolaxia activ

Vaccinurile sunt preparate imunoprofilactice care conin antigene


virale modificate, care administrate la indivizi susceptibili, induc
imunitatea activ ce determin rezisten specific Ia mbolnviri.
Protecia specific post vaccinal se bazeaz pe imunitatea
umoral (formarea de anticorpi) i pe imunitatea celular (apariia de
limfocite specifice sensibilizate), declanat n mod activ n urma
administrrii antigenelor vaccinale.
Pentru obinerea rspunsului imunitar optim, n practica
vaccinrilor profilactice ale copilului este necesar s se in cont de o
serie de factori:
- imaturitatea unor mecanisme imunitare, n primele 2-3 luni dup
natere, care diminu efectul sau face ineficace imunizarea;
- prezena anticorpilor materni, care n primele 3-6 luni dup
natere pot diminua eficiena imunologic a unor vaccinuri vii;
- rolul hipo sau anergizant al infeciilor acute, care n perioadele
de convalescen influeneaz n sens negativ calitatea rspunsului
imun.
Se vor meniona principalele tipuri de preparate utilizate.

1. Vaccinuri corpusculare preparate din virusuri vii atenuate:


antipoliomielitic, antirujeolos, antiurlian.
Avantaje:

265
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

- induc imunitatea similar bolii naturale;


- rspunsul imun este dirijat fa de toate antigenele virale;
- imunitatea indus este durabil (ani de zile);
- previn boala natural.
Dezavantaje:
- reversia spre patogenitate, n cazul vaccinului antipoliomielitic
viu atenuat frecvena reversiilor a fost de 1 caz la 107 vaccinai;
- eliminare de virus (consecutiv vaccinrii antipolio);
- infecia persistent: la copiii vaccinai antirujeolos, virusul poate
s persiste perioade ndelungate n limfocite;
- stabilitate sczut la temperaturi ambientale (vaccinul
antirujeolos, antirubeolos),
- sunt contraindicate la indivizi cu imunodeficiene.

2. Vaccinuri inactivate ', (vaccin antipoliomielitic, antirabic,


antigripal).
Conin particule virale ntregi cu infectivitate anihilat, dar
imunogenitatea intact. Inactivarea se realizeaz cu ageni fizici
(cldur, radiaii, RUV, RX) sau chimici (fenol, formol, (3-
propiolacton).
Avantaje
- rspuns foarte bun de tip umoral;
- stabilitate antigenic (absena reversiei i eliminrii de virus);
- stabilitate la temperaturi uzuale;
- pot fi administrai la imunosupresai (virusul inactivat nu se
multiplic);
- indivizii vaccinai nu transmit virusul la contaci~
Dezavantaje ;
- induc imunitate de durat mai scurt (necesit. rapelri
numeroase); *
- imunitatea de tip celular este redus;
- imunitatea local este limitat.

3. Vaccinuri subunitare

266
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

Sunt preparate vaccinale constituite din subuniti virale


responsabile de inducerea rspunsului imun protector. Vaccinul
antigripal semipurificat conine H (hemaglutinin) i N
(neuraminidaz), rezultate prin disruperea virionului, iar vaccinul
antihepatita B, conine antigenul HBs.
Avantaje
- imunitatea rezultat este direcionat numai fa de antigenele
coninute n vaccin;
- stabilitate antigenic (absena reversiei);
- absena reaciilor adverse.
Dezavantaje
- tehnologie avansat, cost ridicat;
- imunogenitate redus (inducerea sczut a imunitii de tip
celular);
- necesit asociere de adjuvani i rapeluri multiple.

267
Catiopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie
4. Vaccinuri obinute cu ADN recombinat
Genele care codific proteinele (antigenele) componente ale
vaccinului sunt selecionate, izolate i introduse n genomul unei celule
vector bacterie (E. coli), levur (Saccharomices cerevisiae) sau celule de
mamifere CHO (cultur de ovar de hamster), capabile apoi s le sintetizeze
n cantiti industriale. Vaccinul antihepatitic, antipoliomielitic, antirabic.
Avantaje
- Induce un rspuns imun eficace;
- posibilitatea de a induce rspunsuri fa de mai multe antigene
(inseria mai multor gene n vectori);
- posibilitatea de a se obine vaccinuri fa de virusuri ce cultiv
greu n culturi celulare (papilomavirusuri);
- stabilitate termic;
- se exclude contaminarea cu alte virusuri.
Dezavantaje
- tehnologie complex, costisitoare;
- necesit asociere de adjuvani i administrri repetate.

5. Vaccinuri sintetice
Se obin prin sinteza in vitro, prin gene virale, n prealabil
selecionate,]\a fraciunilor peptidice, componente ale unor epitopi
specifici, reproducndu-se nu numai secvena, dar i configuraia spaial
a pitopului natural. Fiind haptene, pentru a induce sinteza de anticorpi,
este necesar cuplarea cu o protein purttoare.
Avantaje
- preparate chimic definite;
- stabilitate ndelungat,
- absena reaciilor adverse;
- pot fi preparate pe scar mare;
- ageni contaminani abseni.
Dezavantaje
- imunogenitate slab;
- rspuns imun monospecific;
- degradare rapid produs de peptidazele sanguine.
268
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

6. Vaccinuri antiidiotip
Aceste vaccinuri n loc de antigen, conin anticorpi antiidiotip din
generaia a 2-a, care ar reflecta imaginea intern a antigenului i ar
declana rspunsuri imune specifice.

7. Vaccinuri din acizi nucleic: vaccinuri ADN sau ARN.


Avantaje
- tehnologie de preparare i purificare simple, comparativ cu
vaccinurile ADN-recombinate;
- stabilitate nalt;
- rspuns imun complex, umoral i celular;
- stabilitate termic.
Dezavantaje
- integrarea posibil n ADN-ul gazd, mai ale a genelor
nereplicative.

Profilaxie pasiv

Este administrarea de anticorpi specifici persoanelor


susceptibile, n scopul de a le conferi o protecie rapid, imediat.
Rezistena astfel obinut este de tip umoral.
Se utilizeaz preparate de imunoglobuline umane purificate, de
exemplu:
- imunoglobuline standard de tip Ig G;
- imunoglobuline specifice Ig G, ambele se administreaz
i. m.
Imunoglobulinele sunt eficace administrate nainte sau imediat dup
contactul infectant. Boala poate fi prevenit complet sau modificat, cu
simptomatologie clinic atenuat.
Se administreaz pentru urmtoarele boli virale: rujeol, rubeol,
hepatita A, hepatita B, varicela-zoster, rabia, n imunodeficiene.

Chimioterapna n viroze

269
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

Chimioterapia n viroze este combaterea unor ageni infecioi ce au


multiplicare intracelular obligatorie, cu ajutorul chimioterapicelor, de
aceea eficacitate agenilor antivirali va trebui s satisfac doua exigene
majore:
- aciune selectiv asupra virusului situat intracelular;
- absena toxicitii pentru gazd.
Principalele substane utilizate n terapia virozelor umane:
- inhibitori ai iniierii infeciei virale: amantadina i rimantadina;
- inhibitori ai sintezei acizilor nucleici: vidarabina, aciclovir,
ganciclovir, famciclovir, ribavirin, idoxiuridina;
- inhibitori ai ARNm: metisazona;
- inhibitori ai polimerazei virale: foscamet;
- inhibitori nucleozidici ai
reverstranscriptazei:
zidovudin, stavudin, didanozina;
- inhibitori nonucleozidici ai
reverstrancriptazei:
nevirapine;
- inhibitori benzodiazepinid: TIBO;
- inhibitori ai proteazei virale: saquinavir, ritonavir;
- inhibitori ai neuraminidazei: zanamivir, oseltamivir.
Capitolul XXIV
Herpesvirusuri: v. herpes simplex, v,
Varicela-zoster, v. Epstein-Barr, v.
Citomegal \

Clasificare
Herpesvirusurile fac parte din familia HERPESVIRIDAE, sunt
deoxiribovirusuri, cuprind cel puin 110 virusuri cunoscute. Aceasta
familie este format din trei subfamilii:

270
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

Subfamilia Alphaherpesvirinae
- Genul Simplex virus, din acest gen se va studia: virusul herpes
simplex (tip 1 i 2) - VHS1, VHS2;
- Genul Varicellavims: v. varicella-zoster (VVZ) (v. herpetic uman 3).
Subfamilia Betaherpesvirinae
- Genul Cytomegalovirus: v. citomegalic (CMV) (v. herpetic uman 5).
Subfamilia Gammaherpesvirinae
- Genul Lymphocriptovirus: v. Epstein-Barr (VEB) (v. herpetic uman
4).

Structur
Au dimensiuni de 160-200 nm, sunt virusuri ADN dublu catenar,
capsida are simetrie icosaedric. Are un centru dens, ce conine genomul
viral, nconjurat de capsida viral, iar la exterior o zon de material dens,
tegumentul, format din

271
Caliopsia FLQREA Baeteriologie i virusologie
glicoproteine i proteine a cror compoziie este specific fiecrei
subfamilii. La exterior virusul este nvelit cu un peplos (dublu strat
lipidic), pe suprafaa acestuia sunt spiculi scuri, giicoproteici, antigenici
cu rol n fixarea pe receptorii celulari.
Herpesvirusurile se replic intranuclear l formeaz incluzii
intranucleare.
Infecia primar (aparent sau inaparent) poate deveni infecie
latent, care se poate reactiva sub aciunea unor factorii: boli febrile,
terapia imunosupresoare, senescena, expunere Ia U.V., traume locale,
stres, ducnd la recurene.

Subfamilia Alphaherpesvirinae

Virusurile din aceast subfamilie se localizeaz n ganglionii


nervoi senzitivi, cranieni i spinali. VHS1 i VHS2 aparin genului
Simplex virus i prezint neuro i epiteliotropism, cele dou specii prezint
omologie structural n proporie de 50%.

VHS 1 (v. herpes simplex 1)

Este agentul etiologic al herpesului cu localizare cutanat, oftalmic


i $rofaringiana.
Poarta de intrare este o soluie de continuitate n tegumente sau
mucoase (bucale, conjunctivale sau genitale). Virusul se multiplic la
poarta de intrare n celulele epiteliale, apoi virusul intr prin terminaiile
nervilor senzoriali n ganglionii regionali. Cele mai frecvente forme
clinice *^unt urmtoarele.

Gingivostomatita herpetic acut


Este cea mai comun form a infeciei la copii. Are o incubaie de
3-5 zile.
Debutul se caracterizeaz prin: febr, anorexie, senzaie de arsur i
de uscciune a mucoasei bucale.
Leziunile caracteristice sunt veziculele, apare apoi edemul i eritemul
272
Caf iopsia FLOREA Bacteriologic i virusologie
mucoasei orale. Aceste leziuni se gsesc pe gingii, limb, mucoasa jugal,
palat, buze, sunt nsoite de adenopatie submandibular. In scurt timp se
transform n eroziuni superficiale, albicioase, foarte dureroase, uneori
devin ulceraii, ducnd Ia sngerrii gingivale. Sunt nsoite de inapeten,
disfagie. Se vindec n 1 -2 sptmni.

Herpesul bucal
Este cea mai comun form de infecie a adultului, poate s apar
leziuni la nivelul amigdalelor i faringelui.
Formele bipolare (herpesul oro-genita i oro-periungial).

Keratoconjunctivita
Se caracterizeaz prin secreii oculare nepurulente, ulceraii corneene,
erupie vezicular a pleoapelor i hipertrofia ganglionului periauricular.

VHS 2 (v. herpes simpiex-2)

Poate produce urmtoarele afeciuni

Herpesul genital
Apare la 20-24 ani la ambele sexe. Leziunile sunt veziculo- ulcerative
i localizate pe vulv, vagin, cervix la femei, penis la brbai i regiunea
perineal sau anal. Se nsoete de disurie i hipertrofia ganglionilor
inghinali. Durata mbolnvirii este de cca. 3 sptmni.

273
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

Herpesul neonatal
Contaminarea se poate realiza:
- in utero (5%) este corelat cu frecvena avorturilor spontane, mai
rar malformaii congenitale ale ochilor, creierului, plexului lombosacrat,
cervical sau subdezvoltarea extremitilor;
- la natere (75%) se produce prin contaminarea ftului cnd trece
prin canalul genital, la aceste mame se recomand cezariana;
- postnatal, de la mam (10%), dar i prin contactul cu persoanele
care elimin virusul.
Incubaia este de 2-26 zile (mai mare cnd este interesat creierul).
Tratamentul trebuie administrat ct mai curnd.
Poate avea potenial oncogen i poate da cancerul uterin, vulvar (la
33% din cazuri s-a constatat asocierea cu infecia
f A *

primar). In aceste cazuri s-a constatat asocierea cu infecia cu


papillomavirusurile.
Diagnostic de laborator
Produse patologice necesare: lichide din vezicule sau ulceraii, snge
(nu se folosete heparina, pentru recoltarea sngelui, inhib dezvoltarea
virusului), fragmente de organe la necropsie.
Izolare pe culturi celulare i identificare prin imunofluorescen i
seroneutralizare.
Diagnostic cert prin metodele biologiei moleculare.
Diagnostic serologic
Anticorpii specifici apar dup 4-7 zile cu maxim la 2-4 sptmni,
fiind de tip IgM i Ig(, determinrile se vor face pe perechi de seruri ce
demonstreaz seroconversia.
Tratamentul se face cu Acyclovir (Zovirax), 200 mg x 4/zi timp de 5
zile, nu poate preveni recidivele.
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

WZ (v. varicella-zoster) .

Este agentul etiologic a dou afeciuni infecioase:


- varicela (vrsat de vnt);
- herpes zoster (zona).

Varicela
Este o boal infectocontagioas, este o boal .eruptiv a copilriei, la
adult se ntlnete ocazional. Este o boal febril, sistemic. \j
Sursa de infecie este bolnavul de varicel. '
Transmiterea se face pe care respiratorie, prin picturile Pfltigge (urmat
de replicarea virusului n epiteliului tractului respirator i viremie cu localizri
secundare n: tegument, mucoase, plmni, sistem nervos).
Incubaia este ntre 14-21 zile.
Debutul este cu febr i stare general alterat.
Exantemul apare n perioada de stare, este constituit din leziuni
polimorfe: maculopapule (cteva ore) care se transform n vezicule, cruste,
evolueaz n mod obinuit benign, complicaiile fiind rare. Aceste leziuni se
extind de la scalp la trunchi i la extremiti. Erupia poate s apar n valuri
succesive, mai ales la aduli. * ,
Contagiozitatea este cu 1-2 zile nainte i 4-5 zile dup erupie. Mai apare
enantem oro-faringian (stomatita vezicular, vezicule izolate pe partea dorsal
a limbii, bolta i vlul palatin), uneori este asociat cu enantem genital.
Complicaii: pneumonia primar, encefalita viral,
mielopatiile asociate, tromboze vasculare sau varicela hemoragic (foarte rar).
Suprainfeciile bacteriene ale leziunilor cutanate sunt complicaii ce apar la
copiii mici.

275
Caliopsia FLQREA Bacteriologie i virusologie
Zona zoster
Este expresia clinic a reactivrii infeciei cu VVZ din ganglionii
senzoriali, apare la aduli i btrni. Se manifest prodromal cu parestezii i
durere intens, limitat la aria unor dermatoame. Leziunile sunt similare celor
din varicel, evolueaz lent (2-3 sptmni) i sunt unilaterale. Se nsoesc cu
adenopatie regional. Evolueaz spre vindecare, crustele vor persista
ndelungat
Tratament
n formele comune pentru varicel este simptomatic. n formele
generalizate cu complicaii i imunodepresai se administreaz acyclovir.

SubfamiUa Betaherpesvirinae
Aceste virusuri rmn cantonate la nivelul glandelor i rinichilor, au o
replicare lent, prezint reacii ncruciate datorit omologiilor ntinse ntre
regiunile genomice, infecia este de obicei subclinic, este grav la gazdele
imunocompromise,

Genul Citomegalovirus (CMV)


j\
Denumirea se datoreaz dimensiunilor foarte mari Omegalo) 'ale
volumului celulelor infectate i prezenei incluziilor intranucleare, foarte mari,
cu aspect de ochi de bufni.
Patogenez l
Sursa este individul care elimin virusul, contactul direct este modul de
transmitere. n cca. 90% din cazuri infecia este asimptomatic sau cu semne
clinice minore.
Sindromul de mononucieoz infectioas 9

Se observ la primoinfecia copiilor i a adulilor cu imunitate normal.


Incubaia de 4-8 sptmni, dup care poat s apar febr, oboseal,
adenopatie tranzitorie fr angin, afectare moderat hepatic i test pentru Ac
heterofili negativ, este nsoit de viremie, leucocitele sunt elementul principal
de diseminare a infeciei, CMV se detecteaz n toate organele.
Evoluia clinic este moderat i vindecarea este asociat cu persistena
276
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

ndelungat a CMV n glandele salivare, urin i secreii genitale.


Complicaiile sunt foarte rare i anume: anemie hemolitic,
trombocitopenie, pneumonie interstiial, hepatit.
Primoinfecia simptomatic cu CMV este n 20-50%. Poate s apar la
sugari, copii, adolesceni, mai rar la aduli. Se transmite pe cale oral, prin
mni murdare, saliv contaminat, sexual, transfuzii de snge, transplant de
organe sau pe cale vertical. Manifestarea mononucleozic principal,
rspunsul negativ n Ac heterofili o difereniaz de mononucleoza cauzat de
VEB
Infecia congenital i perinatal cu CMV
Este cea mai comun form transmis in uter o, rata de infecie a ftului
este de 30-50%. Transmiterea se face transplacentar, fiind urmat de invazia
esuturilor embrionare, care poate duce la moartea ftului, sau la malformaii
congenitale ale nou-nscutului: retard psihomotor, surditate, disfuncii de
smal.
Boala cu incluzii citomegalice
Are o inciden de 1-2 cazuri la 10.000 de nateri, este infecia cu CMV
la nou-nscui care poate fi letal n 30% din cazuri. Se caracterizeaz prin
hepatosplenomegalie, icter, trombocitopenie, fenomene hemoragice (peteii),
corioretinit, atrofie optic i anomalii a SNC. n esuturile afectate (rinichi,
ficat, intestin, pulmon, creier) apar alterri citologice patognomonice, de tip
citomegalic: citoplasm destins,
vacuolizat, nudei mari cu incluzii bazofile (15 pm) mai rar
eozinofile. Dup vindecare cca. 90% dintre pacieni vor prezenta ntrziere
mental, anomalii oculare i auditive.
n infecia subclinic a nou-nscutului, pot s apar complicaii tardive,
pneumonii (dup 6 luni) sau dup 1-2 ani tulburri neurologice, surditate. Se
presupune c 40% dintre cazurile de surditate se datoreaz infeciei cu CMV.
Nou-nscuii infectai sunt excretori de virus de la vrsta de
8- 12 sptmni.
Diagnostic de laborator
Produse patologice: urin, saliv, splturi faringiene, LCR, lichid
amniotic, snge prelevat pe anticoagulante (n vederea obinerii leucocitelor

277
Caliopsia FLOREA L Bacteriolagie i virusologie
periferice), snge tar coagulant recoltat n dou prize la interval de 14 zile
pentru detectare Ac n ser, fragmente de esuturi necroptiCe.
- Examenul direct prin microscopie optic (a esuturilor) sau electronic
a virionilor, PCR, IF, etc,
- Izolare i identificare pe culturi celulare prin constatarea efectului
dtopatic (culturi de fbroblaste umane, culturi diploide umane).
- Diagnostic serologic prezena Ac specifici de tip IgM sau IgG, care
pot fi detectai prin: ELISA, latex aglutinare, RFC, chemiluminiscen.
Tratament
Numai n cazurile complicate sau la imunodeprimai cu Acyclovir,
Vidarabina i IFN.

Subfamilia Ganmaherpesvirinae
Genul Lymphocryptovirus, virusul Epstein-Barr (VER)

A fost descoperit de Epstein i Barr n 1958. Sunt de dou tipuri: VEB-


1 i VEB-2.
Transmiterea infeciei se face pe cale oro-faringian (prin saliv),
sanguin, sexual i vertical. VEB se replic n celulele

278
Caiiopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie
epiteliale din mucoasa nazofaringian, o parte din virionii ajuni n
saliv strbat mucoasa i infecteaz limfocitele B din formaiunile faringiene,
dezvoltnd o infecie latent. Infecia este diseminat n organism prin
intermediul limfocitelor infectate.
VEB este considerat agentul etiologic al urmtoarelor afeciuni:
- mononucleoza infecioas (boala srutului);
- limfom Burkitt;
- carcinom nazofaringian (afecteaz n special brbaii de 20-
50 ani); \j
- boala Hodgkin i unele dintre limfoamele non- Hodgkiniene;
- leucoplazia proas a limbii (apare n cursul infeciei cu HIV);
- leucemia limfoblastic L3.
n cele ce urmeaz se va descrie cea mai frecvent manifestare i anume
mononucleoza infecioas.
Mononucleoza infecioas
Apare la copii i tineri.
Incubaie 30-50 zile.
Debutul insidios cu: febr (cca. 10 zile), adenopatie generalizat.
Perioada de stare: angin cu rinofaringit i icter, se poate asocia i o
erupie eritematoas (mai ales la pacienii tratai cu antibiotice).
Tabloul sanguin este caracteristic: n primele zile se observ leucopenie
cu granulopenie, apoi leucocitoz cu limfocite mononucleare anormale (50-
99%) cu dimensiuni mari, citoplasm este bazofil, cu vacuole i granulaii
azurofile, nucleul este n steag. n snge se evideniaz anticorpii heterofili
de tip IgM (reacia Paul-Bunnell-Hngnuiu-Davidsohn pozitiv).
Forma comun de boal este autolimitant cu vindecare n 2- 3
sptmni. Uneori pot s apar complicaii: hepatosplenomegalie pn la
ruptur de splin i necroz hepatic, anemie hemolitic, trombocitopenie,
edem faringian pn la asfixie, encefalit, meningit aseptic.
Diagnostic de laborator
1. Examen direct: microscopie electronic, PCR, antigenele virale prin
IF.
2. Izolare i identificare pe culturi celulare se constat morfologia

279
Caiiopsia FLOREA Bacteriologic i virusologie
limfoblastoid i agregrile celulare.
3. Examen citologic pe snge periferic, se constat prezena
mononuclearelor anormale, cu citoplasm intens bazofil, vacuolizat i nudei
n steag de peste 10%
4. Diagnostic serologic, testul de elecie este reacia Paul- Bunnell-
Hngnuiu-Davidsohn, ce evideniaz anticorpii heterofili fa de hematiile
de oaie, efectuat pe o prob de snge, n truse comercializate. Testul este rapid
i pozitiv la 80-85% dintre pacieni. Titrurile crescute se observ n prima lun
de la infecie i descresc n urmtoarea lun. Dac reacia este negativ, este
necesar i testarea Ac specifici anti VEB prin: IF direct sau indirect, SN,
ELISA.
Tratament
Simptomatic, igieno-dietetic.
Acyclqwirul nu influeneaz evoluia mononucleozei
infecioase,{reduce eliminarea virusului prin saliv.

Capitolul XXV
Parvovirusuri, adenovirusuri, poxvirusuri
i parapoxvirusuri

Familia Parvoviridae

Conine dou subfamilii:


- subfamilia Parvovirinae, care infecteaz vertebratele.
- subfamilia Densovirinae care infecteaz insectele.

280
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

Subfamilia Parvovirinae are trei genuri: Parvovirus, Erytrovirus care sunt


capabile de replicare autonom i Dependovirus care necesit pentru replicare
prezena unui helper, adenovirus sau herpesvirus.
Sunt virusuri ADN, cu capsida icosaedric, nenvelite, sunt foarte mici
de 18-26 nm. Sunt foarte rezisteni, rezist lh la 56C, pentru c nu sunt nvelite
sunt stabile n prezena solvenilor lipidici (eter, cloroform) i la mari
concentraii de sruri.
Parvovirusurile autonome se replic numai n celulele care se gsesc n
diviziune activ. Ele grupeaz cca. 30 de virusuri ale mamiferelor i psrilor
afectnd: cini, pisici, iepuri, porci, bovine, cai, cai, oi, oareci. Pot produce
enterite, hepatite, encefalite.
Exemplu boala nurcii aleutine cu hipergamaglobulinemie,
glomerulonefrit, poliartrit (a generat epizootii n cresctoriile de nurci).

281
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

Genul Erytrovirus cu specia Virusul B19


Este singurul agent patogen pentru om. Infecia cu acest virus poate fi
asimptomatic sau cu manifestri respiratorii minore cu cefalee, mialgii, frison
asociate cu viremie. Aceste simptome pot constitui prodromul eritemului
infecios sau megaleritemul epidemic nsoite de poliartropatie, infecia cu
acest virus poate da crize aplastice tranzitorii.
Eritemul infecios denumit i boala a 5 a eruptiv a copilriei este
manifestarea cea mai frecvent a infeciei cu virusul Bl9, apare mai ales la
copii.
Dup 18 zile de la expunere, se manifest prin apariia pe fa a unui rash
maculopapular cu marginile uor proeminente, edematoase, dnd aspectul de
fa plmuit, dup 1-4 zile, rash- ul se extinde pe trunchi i membre ca
macule eritematoase cu zone clare, ca o reea. Erupia dispare dup o
sptmn, dar pot surveni recrudescene dup 2-3 sptmni, dup bi,
expunerii la soare sau schimbrilor de temperatur. Boala evolueaz benign i
este autolimitant.
Poliartropatia poate fi o complicaie a eritemului infecios la 10% din
copiii care au avut eritem infecios sau manifestarea clinic dominant la adult,
n special Ia femei cu virusul Bl9. Poate fi asociat cu un sindrom pseudogripal
i erupii eritematoase tranzitorii. Simptomele de poliartrit debuteaz brusc,
simetric, bilateral, nti la articulaiile mici, artraigiile pot fi de intensitate
variabil, nsoite de fenomene de artrit acut, edem i rigiditate articular.
Dureaz cca. 2-3 sptmni, dar evoluia poate fi ciclic, cronic, luni sau ani.
Nu se observ modificri distructive articulare.
Criza aplastic tranzitorie
Este consecina infeciei cu v. B19 a precursorilor eritroizi, cu oprirea
producerii elementelor eritroide. La oamenii imunocompeteni,
eritroblastopenia se caracterizeaz prin scderea numrului de reticulocite i
scderea tranzitorie a hemoglobinei. Durata mbolnvirii este de 1-2
sptmni, cnd apar anticorpii neutralizani care elimin virusul. Anemia este
nsoit de leucopenie i trombocitopenie.
La persoanele imunodeprimate, datorit incapacitii organismului de a
produce anticorpii neutralizani i deci de a elimina virusul, se nregistreaz o

282
Caliopsia FLOREA Bacterioiogie i virusologie
viremie cronic i eritroblastopenie de durat.
Criza aplastic tranzitorie induce imunitate pe via.
V

Genul Dependovirus \i
Multiplicarea acestor virusuri este condiionat de- existena unui alt
virus ajuttor (helper), care s le asigure produsele necesare replicrii virale.
Virusurile adenoasociate la oameni (adenoassociated virus- AAV)
tipurile 1, 2, 3,4, 5 sunt proprii omului. Tipurile AAV 1-3 au fost izolate din
secreiile oculare, rinofaringiene sau din materii fecale n afeciuni acute
determinate de adenovirusuri, AAV tip 5 s-a izolat din leziuni de tip
condilomatos.

Familia Adenoviridae

Sunt virusuri numeroase rspndite la psri, mamifere, marsupiale i


amfibii, genernd multe afeciuni: gastroenterite, sindroame febrile, sindroame
respiratorii, faringoconjunctivite. Ele se mpart n dou genuri:
- Genul Mastadenovirus care infecteaz mamiferele, omul, maimuele,
ecvinele, bovinele i muridele. Ele posed un antigen fixator de complement.
Cuprinde 48 de serotipuri, grupate n 6 subgenuri (ubgrupuri) de la A la F.
- Genul Aviaadenovirus infecteaz psrile (rae, curcani, gte, fazani,
gini).
Adenovirusurile sunt virusuri ADN cu dimensiuni de 70-80 nm, cu o
capsid (252 capsomere) de form icosaedric, nenvelite.
Adenovirusurile pot da afeciuni respiratorii, digestive sau
conjunctivale, n general cu evoluie blnd. Ele cresc uor pe culturi celulare
unde dau incluzii intranucleare mari. Dou feluri de antigene permit
diagnosticul infeciei:
- antigen comun de grup prezent la cele 48 de serogrupuri i
evideniate prin RFC i 1F;
- antigenul specific de tip detectat prin RHAI sau SN.
Infeciile cu adenovirusuri se transmit aerogen, prin aerosoli,
virusurile fiind rezistente n mediul nconjurtor, pot contamina apa bazinelor
de not sau obiectelor de la bolnavi. Adenovirusurile pot da:
283
. Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie
- faringite (serotipuri 1,2, 5, 6);
- infecii acute ale cilor respiratorii superioare (serotipurile 4,6,7);
- conjunctivite (serotipurile 4,8,11,19);
- pneumonia (serotipurile 3, 7),
- gastroenterita (serotipurile 40,41);
- adenia (apendicita) mezenteric;
- cistit^ acut hemoragic serotipurile 11 i 21;
- uretrita la brbat i cervicita la femei se datoreaz serotfpului 37;
- meningoencefalita serotipurile 3, 5,6,7,12, 32);
- sindromul Reye, semnalat rareori la copii, nsoind
adenovirozele. \

284
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

Familia Poxviridae Se

submparte n 2 subfamilii:
- Entamopoxvirinae, ce cuprinde virusuri ale insectelor.
- Chordopoxvirinae n care sunt incluse virusurile vertebratelor, deci i
acele virusuri patogene pentru om.

Acesta cuprinde urmtoarele genuri.


1. Genul Orthopoxvirus cu: v. variolic, v. vaccina, v. pox bovin (cowpox),
v. pox ale maimuelor (monkey pox) care infecteaz omul i animalele,
etc.
2. Genul Parapoxvirus: v. orf, v. pseudocowpox, v. stomatitei papulare
bovine.
3. Genul Moliuscipoxvirus: v. molluseum contagiosum.
4. Genul Yatopoxvirus: v. Yatopox i v. Tanapox.
5. Genul Copriopoxvirus; v. pox la capre i oi.
6. Genul Leporipoxvirus: v. myxomului i fibromului la iepure.
7. Genul Avipoxvirus: v. variolei psrilor (curcanilor, canarilor,
porumbeilor).

Subfamilia Chordopoxvirinae

Genul Orthopoxvirus Y. variolic


i v. vaccina
Virusurile din aceast familie provoac afeciuni la om. Caractere
generale
Sunt virusuri ADN, liniar, bicatenar, cu dimensiuni mari, ntre 140-450
nm, nvelite.
Rezistent
Sunt relativ stabili la aciunea diferitor ageni: v. variolic i pstreaz
infectivitate n cruste, la temperatura camerei pn la 1 an, suspensiile virale
rmn viabile 12 sptmni la temperatura camerei cu umiditate sczut, iar la
4 C cel puin 14 sptmni. La temperaturi de -20 C, -70 C,. ambii virusuri

285
Caliopsia FLOREA Bacterioogie i virusologie
rezist ani, iar liofilizai rezist 6 ani. Pierderea infectivitii se realizeaz n
60 min la 55 C, sau 10 min la 60 C.
Cultiv pe culturi celulare HeLa, Vero, dup 1-3 zile apare efectul
citopatic caracterizat prin focare numeroase cu celule multfnucleate (datorit
fuziunilor celulare), hiperplastice cu dimensiuni de 1-3 mm, corpusculii
Guarnieri. Mai poate cultiva pe ou embrionate i pe animale.
Patogeneza
Poate genera variola, care este o boal infecioas extrem de contagioas,
care a provocat epidemii grave i a decimat omenirea timp de milenii. Ultimul
caz de variol a fost nregistrat n 1977 n Somalia, iar n anul 1979 OMS a
declarat eradicarea definitiv a variolei pe glob.
Ptrunderea virusului n organism se realizeaz pe cale respiratorie, pe
cale dermic, pe cale intramuscular.
incubaia este de 12-18 zile, debutul este brusc cu stare general alterat
(faza toxemic) cu febr ridicat, prostraie, cefalee, rash, care n 2-4 zile se
concretizeaz n enantem i exanem caracteristic, cu leziuni focale.
Enantemul este localizat n orofaringe, pe palatul tare, limb, pilier! cu
macule mici care se transform n vezicule i se rup. Se poate extinde n
faringe, laringe i trahee. Se vindec n cca. 10 zile.
Exantemul este de tip centrifug, mai dens pe fa i extremiti (inclusiv
palme i tlfi) dect pe trunchi. n 1-4 zile evolueaz ca maculopapiile ce devin
vezicule timp de 5-6 zile, apoi se transform n pustule cu coninut opalescent,
atingnd punctul maxim n 11 zile. Pustulele se transform n cruste dup 2-4
sptmni, care prin desprindere las cicatrice.
Forma descris este forma comun, dar poate s se manifeste i sub
forma cu erupie hemoragic confluent care este nsoit de
hemoragii (epistaxis, melen, hemoptizii, hemoragii conjunctivale) cu
mortalitate de 90%.
Poate da complicaii: ulcere corneene, afectarea articulaiilor i oaselor
n
osteomielitis variolosa cu repercusiuni tardive prin defecte osoase, pulmonare
(bronit, edem pulmonar, bronhopneumonie) sau gastrointestinal. Mai poate
sa se complice cu encefalit care n forma major este principala cauz de
deces.

286
Caliopsia FLOREA BacterioJogie i virusologie
Pentru c s-a declarat eradicat, stocurile de v. variolic au fost distruse,
exceptnd dou laboratoare ale OMS din Atlanta (SUA) i Koltova-
Novosibirse (Rusia).
Vaccinarea antivarioic nu mai este obligatorie i nu se mai practic.
Vaccinul antivariolic era un vaccin viu atenuat, preparat cu tulpini de
virus vaccina, el oferea o protecie durabil se face prin scarificare sau
multipunctur, ea se mai face persoanelor din laboratoarele ce lucreaz cu
virus sau militarilor din unitile speciale.

Genul Parapoxvirus
Sunt tot virusuri ADN liniar, dublu catenar, cu dimensiuni mari de cca.
250 nm, nvelite. Cuprinde specii virale ce determin zoonoze transmise
accidentai la oameni, transmiterea are un caracter profesional.

V.ORF
Sunt ageni infecioi ai dermatitei contagioase pustuloase, ectimei,
stomatitei pustuloase contagioase la oi i capre precum i ai stomatitei papulare
la bovine, de la viei la vite.
La om infecia se manifest prin leziuni localizate, proliferative,
ombilicate, cu tendin la ulceraie. Sunt localizate pe mni, antebrae i fa,
dureroase, erupia este nsoit de febr i hipertrofie ganglionar. Se vindec
n cteva sptmni. Boala

287
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

se transmite de la animale bolnave, domestice (n special de la oi), dar


i de la animale de captivitate (cmile, cprioare).
Diagnosticul de laborator pentru poxvirasuri i parapoxvirusuri se face
prin cultivare pe culturi de celule, ou embrionate, animale de laborator i
punerea n eviden a modificrilor ce apar precum i a antigenelor prin reacii:
IF, ELISA, RHAI,RIA.
Serodiagnosticul se face prin compararea a dou prize de seruri recoltate
de la bolnavi i este semnificativ cnd se constat o cretere de 4 ori a titrului.
Se poate face prin: RHAI, ELISA, RIA, iar pentru parapoxvirusuri prin ELISA
i Wstem-blot.

288
Caliopsia FLOREA Bacterioiogie i virusologie

Capitolul XXVI
Virusurile hepatitice: A, B, C, D, E, F

Hepatitele virale sunt boli specific umane care sunt generate de


virusurile hepatitice care aparin unor familii diferite, dar au n comun
tropismul pentru celula hepatic.

Hepatita viral A

Este produs de virusul hepatitic A (VHA) care face parte din


genul Enterovirus, familia Picornaviridae. Este un virus ARN cu capsid
icosaedric, neanvelopat i are 27 nm. Este rezistent la temperatura de
60 C, eter, detergeni neionici, dar este distrus n cteva minute de
temperatura de 100C, de formol 1/4000, dup o expunere de 3 h la 37
C, sau de clor activ 0,1 mg %, timp de 30 min.
Rezervorul de virus A este reprezentat de bolnavii ieterici sau
anicterici.
Calea de transmitere este n special feeal-oral, direct sau indirect
(prin intermediul alimentelor sau a apei contaminate). Aceast boal se
mai poate transmite prin: saliv, contact sexual oral sau anal i prin snge
(n perioada viremiei).
Perioada de incubaie medie este de 3-4 sptmni, perioada de
contagiozitate ncepe cu 2-3 sptmni nainte de perioada icterie i se
menine nc o sptmn dup dispariia icterului.
Receptivitatea este general iar imunitatea specific este solid i
durabil.
Principalul antigen este Ag HA iar anticorpii corespunztori anti-
HA, IgG i IgM. Virusul i antigenele virale se pot decela din:
- materiile fecale examinate prin imunoelectromicroscopie;
289
Caliopsia FLOREA Bacteriologic i virusologie
- n hepatocite prin biopsie hepatic, tehnici de
imunofluorescen, se practic numai experimental la animale
infectate (cimpanzei i maimue);
- ARN-u viral din produsele patologice prin tehnici de biologie
molecular (PCR etc.).
Diagnosticul serologic se face imediat dup apariia icterului,
cnd n ser apar anticorpii Ig M specifici, care vor persista 10-12
sptmni, iar anticorpii anti-HA de tip IgG apar lent i persist ani.
Aceti anticorpi pot fi pui n eviden prin:
- testul de neutralizare specific,
- imunoaderen i RFC.
Hepatita A se poate manifesta sub mai multe forme clinice:
- asimptomatic (anicteric), mai ales la copii;
- icteric cu simptome nespecifice: anorexie, astenie, prurit,
greuri, vrsturi;
- fulminant, foarte rar, cu manifestri neurologice caracteristice
insuficienei hepatice.
Tratamentul este nespecific, simptomatic.
Profilaxia pasiv se face prin administrarea de imunoglobuine
polivalente sau specifice anit-HVA, 0,05 ml/kg corp.
Profilaxia activ cu vaccinuri VHA, obinut prin cultivarea VHA
n culturi celulare. Ele pot fi:
- vaccinuri inactivate obinut din ficat de marmot infectat,
inactivat cu formol;
- vaccinuri vii atenuate, n curs de experimentare;
- vaccinuri recombinate, vaccinuri din peptide sintetice.

290
Caliopsia FLOREA Bacteriologic i virusologie
Hepatita viral B

Este produs de VHB care aparine familiei Hepadnaviridae, genul


Orthohepadnavirm. Este un virus ADN, particula Dane, este sferic cu un
diametru de 42 nm, cu un centru electronodens de 28 nm corespunztor
nucleocapsidei i are anvelop. Particulele Dane sunt infecioase i
evidenierea lor n ser semnific existena replicrii virale. Pe lng
particulele Dane n serul bolnavilor mai pot fi pui n eviden: \
- particule sferice cu diametrul de cca. 22 nm, sun$ goale n
interior i provin din anvelop, sunt neinfecioase;
- formaiuni filamentoase cu o lungime ntre 50-230 nm i
diametrul ntre 10-22 nm, care iau natere prin agregarea particulelor
sferice i sunt neinfecioase.
Structura antigenic
- Ag de suprafa HBs, constituie nveliul extern al VHB i are o
structur complex iipoglicoproteic. Apare n sngele bolnavilor dup
4-6 sptmni de la infecie, nainte de debutul clinic al hepatitei i dispar
dup 3 luni de la debut.
Anticorpii anti-AgHBs apar n convalescen i prezena lor
semnific vindecarea bolii, apar i n urma vaccinrii anti-VHB.
- Ag nucleocapsidic HBc, de tip antigenic unic, se gsete n
virionul complet i n nucleocapsideie neasamblate din nucleul
hepatocitelor infectate, unde este decelabil la 10 zile de la infecie, dar
este absent n snge.
Anticorpii anti-HBc sunt anticorpi specifici IgM, apar la sfritul
perioadei de incubaie, prezena lor indic o infecie sigur. Sunt nlocuii
n convalescen de anticorpii anti-HBc de tip IgG concentraia lor scade
odat cu vindecarea bolii, persist n titruri mici toat viaa i indic
trecerea prin boal.
- Antigenul HBe asociat nucleocapsidei este un polipeptid solubil,
apare n ser n perioada de incubaie, imediat dup apariia Ag HBs,
negativndu-se dup 2-4 sptmni, dispariia lui
precednd-o pe a Ag HBs. Prezena lui semnific replicare viral.
Persistena ndelungat este asociat cu pronostic nefavorabil i este

291
1
Caliopsia FLORBA Bacteriologic i virusologie
semn de multiplicare viral intern n hepatocit. Dac evoluia este
bun, dup o lun de la apariia icterului apar i anticorpii anti- HBe,
decelndu-se consecutiv apariiei IgM anti HBc.
Rezisten VHB, este unul din cele mai rezistente virusuri, i
menine infectivitatea n ser, timp de 6 luni la 30 C i timp de 10 h la
60 C. Distrugerea acestui virus se obine prin autoclavare 30 min la
128 C, la etuv 180 C 1 h, cu hipoclorit de Na timp de 10 min,
permanganatul de K l%o, formolul 5%.
VHB este agentul etiologic al: hepatitei virale de tip B, hepatitei
virale B cronice progresive sau neprogresive, cirozei posthepatitice,
carcinomului hepatocelular.
Sursa de infecie o reprezint omul cu infecie acut sau cronic
cu VHB.
VHB a fost izolat din: snge, lichid seminal, secreii cervico-
vaginale, saliv, colostru.
Cile de transmitere:
- parenteral: injecii, transfuzii, instrumentar, contactul unor
{fluide biologice contaminate cu soluii de continuitate de
ia!nivelul tegumentelor i mucoaselor;
- sexual, heterosexual sau homosexual cu parteneri infectai
cu VHB;
- vertical, mam cu serologie pozitiv - pentru
AgHBs/AgHBe.
Receptivitatea este general cu excepia persoanelor imunizate
natural n urma infeciei sau a celor imunizate artificial prin vaccinare.
Incubaie de 4-28 sptmni (30 - 120 zile).
Perioada prodromal (preicteric) care se poate manifesta cu:
febr moderat, anorexie, greuri, vrsturi, artralgii, erupii
cutanate urticariene, vasculite neerozante, anemie aplastic,
trombocitopenie, agranulocitoz.
Perioada de stare (icteric) care se poate manifesta cu stare febril,
cefalee, astenie, greuri, vrsturi, artralgii, icter, hepatomegalie, urini
hipercrome, fecale decolorate.
Convalescena la copil dup cca. 2 sptmni, la adult dup 4-6
292
Calopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie
sptmni.
Diagnosticul de laborator
Examenul direct nu are utilizare curent.
- prezena antigenelor VHB n esutul hepatic prin biopsie
hepatic. Se evideniaz n esutul hepatic AgHBs n citoplasm i
AgHBc n nucleii hepatocitelor prin: IF, imunoelectronomicroscopie.
Diagnosticul serologic
Virusul nu cultiv pe culturile celulare, de aceea se pun n eviden
markerii de mbolnvire.
Structuri antigenice
- AgHBs indicator important de boal prin: imunodifuzie n gel,
contraimunelectroforez, latex aglutinarea, HAP, ELISA, RI A,
chemiluminiscen.
- AgHBe se deceleaz n snge prin ELISA, RIA.
- ADN-polimeraza viral apare n stadiul de viremie apare la scurt
timp n snge la scurt timp dup AgHBs.
- AgHBc se izoleaz numai pe praparatele de esut hepatic.
- ADN-VHB este marker de certitudine al infeciei cu VHB i se
face prin biologie molecular.
Anticorpi specifici
- Ac anti-HBc de tip IgM, apar la scurt timp dup AgHBs i
persist n convalescen. IgG HBc mpreun cu Ac anti HBs se menin
toat viaa, se pun n eviden prin ELISA.
- Ac anti-HBs, apariia lor arat nsntoirea dup boala acut, se
determin prin ELISA. Ei apar i la vaccinai.

293
Caliopsia FLQREA Bacteriologic i virusologie
- Ac nti-HBe nu este monitorizat n mod curent, dar este important
pentru bolnavii cu hepatit cronic, se determin prin ELISA i RIA.
Tratamentul
Se face simptomatic pentru formele acute sau cronice nonagresive.
Pacienii care au hepatit cronic activ pot face tratament cu a - IFN.
Profilaxia
Msuri generale: sterilizarea corect a instrumentarului, utilizarea
seringilor de unic folosin, controlul sngelui i preparatelor din snge,
sex protejat.
Profilaxie pasiv cu Ig specifice anti VHB.
Profilaxia activ se face cu vaccinuri VHB (vaccinuri preparate din
plasm i vaccinuri obinute prin tehnologii cu ADN recombinat).

Virusul hepatitei C (VHC)

Este un ribovirus (ARN) aparinnd genului Hepacivirus, familia


Flavmridae, cu capsid icosaedric, anvelopat. VHC produce hepatita
viral de tip C.
Incubaia dureaz ntre 2-8 sptmni, transmiterea este
predominant parenteral, cel mai frecvent posttransfuziona i post
transplant de esuturi i organe. Transmiterea pe cale sexual se pare c
are loc la persoanele cu parteneri multipli.
Majoritatea cazurilor sunt asimptomatice i diagnosticate tardiv n
stadiul de ciroz sau hepatit cronic. 80% din cazuri fac hepatit
cronic, 20% ciroz iar 3% hepatocarcinom. Acest tip de hepatit poate
fi nsoit de modificri imunologice prin depunerea complexelor imune
n esuturi i organe i apariia de: vasculite, artrite, purpur sau
glomerulonefrite membrano-proliferative. Poate s apar
crioglobulinemia mixt esenial i este asociat cu prezena factorului
reumatoid.

294
Caliopsia FLOREA Bacteriologic i virusologie

I
Diagnosticul de laborator
Examenul direct prin decelarea prin metodele biologiei
moleculare a ARN-ului viral.
Diagnosticul serologic prin punerea n eviden a anticorpilor-
antiVHC, iar testele surit imunoenzimatice. Tratamentul se face cu
Interferon a i Ribavirina.

Virusul hepatitei Delta (VHD)


X

Virusul hepatitic D este un virus defectiv (a cnii replicare este


posibil cu ajutorul VHB). Apare ca o suprainfecie la bolnavii cu
hepatita B, agravnd boala.
Anticorpii anti-Delta sunt anticorpi IgM i IgG, care pot fi
detectai prin metode serologice, RIA? ELISA i Westem-blot.
Cile de transmitere sunt identice cu a hepatitei B.
Tratamentul de face cu Interferon a.

Virusul hepatitei E

Este un ribovirus (ARN) cu capsid icosaedric, neanvelopat. Se


transmite pe cale enteral. Manifestrile clinice sunt ceva mai atenuate
dect n hepatita A. Formele fulminante au fost semnalate la gravide n
al 3-lea trimestru cu insuficien hepato-renal i a unui sindrom
hemoragie acut.
Tratamentul este nespecific.

Virusul hepatitei F

Este un virus ADN, se transmite preponderent enteral i se


manifest sub forme clinice severe.

295
Caliopsia PLOREA Bacteriologie i virusologie
Capitolul XXVII
Picornavirusuri: enterovirusuri,
rinovirusuri, reovirusuri, rotavirusuri,
ealicivirusuri

Sunt virusuri ARN de dimensiuni miei, cuprind numeroi ageni


patogeni pentru oameni i animale, ce afecteaz tractul digestiv,
respirator i uneori sistemul nervos, nsoite sau nu de exanteme. Sunt
particule sferice sau cu un contur hexagonal, avnd dimensiuni de 24-30
nm, cu o medie de 27 nm. Genomul este de tip ARN monocatenar, de
sens pozitiv, avnd particularitatea de a se comporta i ca ARNm.
Rezistent
j

Sunt rezistente mai multe zile la temperatura camerei i cteva


sptipni sau luni la 4 C. Infectivitatea este conservat ani la -70 Cf
Sunt distrui la temperatura de 50 C, dar prezena Mg sau a caionilor
bivaleni le protejeaz, soluia de MgCk este folosit ca stabilizator
pentru vaccinul polio viu atenuat. Deshidratarea i radiaiile UV i distrug
rapid.
Se vor prezenta cele mai frecvente enterovirusuri.
.i
\

Genul Enterovirus

Se ncadreaz urmtoarele specii patogene pentru om:


- v. poliomielitei;
- v. coxsachie;
-v. echo.
V. poliomielitic
A fost atestat ca agent etiologic al poliomielitei de ctre
Landsteiner i Popper n 1908. Acetia au reprodus experimental
poliomielita la maimua, prin inocularea intracerebral a unui filtrat de
mduva spinrii provenit de la un pacient cu mbolnvire letal. V. polio
296
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie
a fost mprit n trei serotipuri, cu cte o tulpin prototip: tip 1 Brunhilde,
tip 2 Lansing, tip 3 Leon.
Este un virus ARN foarte mic, de 23 nm, eapsida are simetrie
cubic, este un icosaedru ce 60 capsomere, sunt 12 subuniti identice,
are polaritate pozitiv, este infectant. Nu are anvelop.
Patogenez
Virusul polio ptrunde n organism pe cale oro-faringian.
Incubaia este de 7-14 zile (extreme 2-35 zile). Virusul se
multiplic n esuturile limfoide ale rinofaringelui i ale intestinului, n
plcile Peyer, fiind izolat din rinofaringe i materii fecale naintea
debutului clinic.
Diseminarea, iniial se face pe cale limfatic, urmeaz o viremie
tranzitorie, fenomenele clinice nsoitoare, gastrointestinale i
respiratorii nu sunt semnificative, infecia oprindu-se n majoritatea
cazurilor n acest stadiu.
Multiplicarea crescut a virusului n esutul reticuloendotelial
conduce la viremie persistent cu invazia sistemului nervos (mduv,
creier).
Infectarea sistemului nervos se face pe cale sanguin, iar
propagarea n esuturile nervoase de-a lungul axonilor nervilor periferici,
o dat intrat n cile nervoase, progresia acestuia nu mai poate fi oprit.
Factorii favorizani ai infeciei sistemului nervos sunt:
tonsilectomia, intervenii chirurgicale, injecii i traumatisme datorate
lezrii terminaiilor nervoase, stresului, oboseala fizic, sarcina i vrsta.
Forme clinice
A. Poliomielita paralitic (paralizia infantil)
Pentru c afecteaz vrste mici, se manifest numai la 0,1-1 %o
dintre indivizii infectai cu v. polio.
1. Forma comun - poliomielita paralitic spinal, denumit i
boala Heine-Medin.
Incubaia este de 3-14 zile, boala evolund n dou faze:
- Faza prodromal, debuteaz cu febr de maximum 39 C,
angin, tulburri digestive, uneori se asociaz cu mialgii. LCR este clar,
cu un numr moderat de elemente, albuminorahia normal. Durata
297
Caliopsia FLOREA Bacteriologic i virusologie
acestei faze este de 3-6 zile, apoi o perioad asimptomatic, afebril de
2-5 zile.
- Faza paralitic cnd se reinstaleaz febra 39 C, apar dureri i
spasme musculare, iar ntr-un interval de cca. 48 ore survin paraliziile,
ele pot fi limitate, asimetrice, monoplegii sau paraplegii. Sunt afectai n
special muchii membrelor inferioare, apoi cei ai membrelor superioare
i ai trunchiului. Sunt descrise forme de poliomielit n care faza
prodromal lipsete, paraliziile aprnd brusc. Paraliziile se instaleaz n
cca. 5 zile, iar dup dou sptmni febra scade, durerile se atenueaz, la
2-3 sptmni de la debut ncepe regresia paraliziilor, care pot s dureze
mai multe luni. Sechelele consecutive sunt prezente n majoritatea
cazurilor, cu atrofie muscular nsoit cu tulburri de cretere la copii.
Caracteristicile paraliziei n polio:
- paralizie flasc,
- asimetric,
- afecteaz anumite grupe musculare, lsnd altele integre,
- hiperestezii i parestezii n perioada paralitic,
- ROT: iniial hiperactive, apoi diminuate pn la dispariie.
2. Forma respiratorie apare n paraliziile periferice, fiind grav
datorit localizrii bulbo-protuberaniale, paralizia ascendent tip tip
Landry. Sunt afectai nucleii i neuronii motori ai nervilor cranieni:

298
Caliopsia FLOREA Bacteriologic i virusologie
- paralizii ale muchilor respiratori, a muchilor: diafragmei,
abdominali, intercostali;
- tulburri ale ritmului respirator, datorit atingerii centrilor
bulbari;
- tulburri n deglutiie, obstrucie traheo-bronic, tulburri de
vorbire, la care sunt asociate fenomene de anoxie i pierderea
cunotinei. Prognosticul este rezervat.
3. Forma encefalitic apare n cadrul paraliziei spinale sau
ascendente i are un prognostic grav. >
4. Forma cu paralizii izolate ale nervilor^ cranieni, (paraliziile de
nerv facial) evolueaz benign.
Sindromul postpoliomielit la interval de 30*40 ani de la
poliomielita acut, bolnavii acuz slbiciune muscular, dureri i
oboseal extrem, fenomenele nu sunt reactivri ale infeciei, ci al
epuizrii structurilor nervoase motorii, ca urmare a leziunilor asociate cu
boala.

B. Poliomielita neparalitic
- Meningita poliomielific este o meningit cu lichid clar,
debuteaz cu febr, cefalee, stare general alterat, redoarea cefei,
mialgii, hiperestezii, tulburri gastro-intestinale, grea, vrsturi,
evoluia este favorabil.
- Miopericardita, este ca afeciune de sine stttoare i are un
prognostic bun.

C. Poliomielita abortiv
Este o boal minor, cu simptomatologie asemntoare gripei.

D. Poliomielita inaparent
Este cea mai frecvent form de manifestare a infeciei.
Simptomele sunt absente, ns bolnavul excret virusul, fiind surs de
mbolnvire pentru contacii susceptibili.
Imunitatea
Rspunsul protector dominant este de tip umoral. Nivelul Ac dup

299
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie
expunere este maxim ntre 2 i 6 sptmni de la debut, scade lent i
persist toat viaa. Dup trecerea prin infecie sau boal, rezistena este
durabil i specific de tip. ntre virusurile polio de tip 1 i 2 este o
imunitate ncruciat, astfel nct o a doua mbolnvire va fi cu virusul
polio de tip 3. Apar anticorpii seroneutralizani care pot fi pui n
eviden prin RSN.
Rezistena care este ctigat pasiv (transplacentar de la mam la
ft) datorar Ac materni persist pn la vrsta de 6 luni.
La om profilaxia pasiv cu IgG specifice previn paraliziile.
Rezervorul de infecie este omul cu infecie aparent, inaparent
sau purttori.
V. polio este excretat pe cale nazofaringian cu 4-10 zile naintea
debutului i prin materii fecale pe ntreaga durat a bolii.
Transmiterea se realizeaz:
- direct, pe cale fecal-oral, prin contact cu indivizi cu forme
aparente sau inaparente, transmiterea se mai poate face i aerogen, prin
dispersia secreiilor nazofaringiene n mediul extern prin: tuse, strnut,
vorbire;
- indirect prin intermediul apei contaminate din lacuri, ruri sau
prin aj$a de canalizare. Se poate face prin alimente contaminate,! lapte
nefiert sau nepasteurizat, legume, zarzavaturi (cultivate n " soluri
contaminate) i fructe manevrate cu mini murdare, pot fi la originea
unor epidemii alimentare ce evolueaz lent i cu puine cazuri.
Susceptibilitatea este general.

Profilaxie nespecific
Msuri generale: bolnavul se spitalizeaz pe toat durata bolii,
reprimirea convalescentului n colectivitate (n special n sectorul
alimentar) se face dup 3 luni de la mbolnvire (absena eliminrii de
virus). Contacii copii sunt carantinai 21 de zile, vaccinai,
supravegheai medical i termometrizai zilnic. Se aplic msurile de
dezinfecie, regim igieno-dietetic.

Profilaxia specific pasiv


300
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie
Se aplic persoanelor expuse riscului de mbolnvire: personalului
medico-sanitar, gravide, contacii din focare. Se face prin administrarea
de IgG (0,14 ml/kg corp), este eficace naintea contactului infectant i
ofer protecie 5-8 sptmni.

Profilaxie specific activ


Vaccinuri virale (a fost posibil datorit lui Enders, Weller i
Robbins n 1949 care au cultivat v. polio n culturi celulare).
1. Vaccinul antipoliomielitic inactivat preparat n 1955 de Salk,
obinut prin cultivarea v. polio slbatic n culturi celulare de maimu,
suspensia fiind inactivat cu formol 1/4000, timp de 6 zile la 37 C, la
noi n ar acest vaccin a fost utilizat n anii 1957 i 1961, fiind nlocuit
cu VPO.
- Vaccinul inactivat cu potenial imunogen crescut {enhanced
potency VPI).
2. Vaccinul antipoliomielitic viu atenuat (VPO). A fost introdus ca
profilactic n 1962 de ctre Sabin, tulpinile de v. polio tipurile, 1, 2 i 3
au fost atenuate prin cultivare de pasaje numeroase n culturi celulare de
rinichi de maimu i selecionarea populaiilor virale atenuate.
3. Acum nu se mai face vaccinarea cu acest vaccin (VPO), se face
cu un vaccin anti-poliomielitic inactivat cu potential imunogen crescut
{enhanced potency), VPI, se face i.m. cu mai multe rapelari. La copii se
fac patru doze, iar la adulii nevaccinati trei doze.
Tratament
Este simptomatic, reducerea durerilor, spasmelor, meninerea
respiraiei, hidratare. n convalescen, kinetofizioterapia.
Virusurile COXSACKIE

Sunt dou subgrupuri: subgrupul A: serotipurile 1-22 i 24;


subgrupui B: serotipurile 1 -6.
Patogenez
Poarta de intrare este rinofaringian i digestiv, cu o prim etap
de multiplicare local, urmat de viremie, apoi diseminarea ctre
organele int: sistem nervos, miocard, muchi, schelet. Virusul se

301
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie
izoleaz n primele zile de la expunere, din rinofaringe i se elimin prin
materiile fecale timp de 5-6 sptmni. Infecia cu v. coxsackie este
benign, autolimitant. Factorul gazd este important, malnutriia,
stresul, oboseala favorizeaz atingerile miocardice.
Forme clinice
- Meningita aseptic
Dup o incubaie de 2-9 zile, debuteaz cu febr i fenomene de
iritaie meningian, redoarea cefei, vrsturi, cefalee, mialgii. Aceste
semne i simptome sunt mai frecvente la copii mici (0-1 an).
- Herpangina
Debut brusc, acut cu febr (40 C), cefalee, disfagie, diaree, dureri
abdominale. Pe faringe, vlul palatin, luet, limb, apar leziuni
veziculare pe fond eritematos, uneori ulcerative. Este frecvent n
anotimpul cald, cu caracter epidemic, afecteaz n special copiii.
- Mialgia epidemic
Incubaia 3-11 zile, debutuU este brusc, cu febr, cefalee, epistaxis,
dureri toracice, sau abdominale. In funcie de localizare se disting
formele clinice: toracal, sau la nivelul muchilor scheletici sau
abdominal (este cea mai frecvent la copii).'
Durata bolii este de cca. 2 sptmni, crize algice cu o durat de
15 minute pn Ia 2 ore.

302
Caliopsia FLQREA Bacteriologie i virusologie
- Stomatita vezicular cu exantem
Denumita i boala mini-picioare-gur {hand-foot and mouth
disease).
Asemntoare herpanginei, difer prin extinderea leziunilor
(vezicule i ulcere) de la mucoasa oral la tegumentele minilor i
picioarelor, iar la sugari i pe fese. Boala este benign.
- Miocardita/encefalomiocardita nou-nscutilor
*
Apare n primele 2 sptmni de la natere, precedat sau nu de
febr, cu anorexie i vrsturi. Simptomele dominante sunt cianoza,
tahicardia, dispneea, leziuni miocardice. LetaHtatea este de 60-70%.
1

- Miocardopata
In cca. 5% dintre infeciile clinic exprimate cu v. coxsackie
afecteaz miocardul, pericardul i endocardul. Se ntlnete la aduli i la
copiii mari, dar cu evoluie mai puin sever.
Imunitatea
Este specific de serotip i pus n eviden prin: RSN, RFC,
ELISA, IF.
Rezervor se virus este omul infectat cu boal aparent sau
inaparent.
Transmitere
Prin contact direct, pe cale aerogen sau fecal-oral. V. coxsackie
persist n materiile fecale mai multe sptmni.
Profilaxie
Nespecific: msuri generale: mbuntirea condiiilor de igien
i evitarea aglomeraiei.
Specific nu este n uz datorit numrului mare de virus i
diversitii sindroamelor clinice.
Tratament
Nespecifc, simptomatic.
Virusurile ECHO

Au fost izolate n 1956 din materiile fecale de la copii sntoi sau


cu forme neparalitice sau paralitice de boal.
303
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie
Denumirea ECHO (enteric cytopathogenic human orphan), se
caracterizeaz prin:
- spectru clinic variat;
- se izoleaz i se multiplic numai n culturi de celule;
- nu sunt patogene pentru animale de experien;
- nu au caractere antigenice comune cu alte virusuri cu habitat
intestinal.
Clasificare
Echovirusurile cuprind serotipurile: 1-7, 9, 11-27, 29-33 (1 este
identic cu 8, 10 este identic cu 1, 28 este IA, iar 34 este o variant a A24).
Patogenez
Determin boli febrile nedifereniate, rinofaringite, mbolnviri
minore asociate sau nu cu rash, meningite aseptice, paralizii, pareze,
encefalite etc.
Poarta de intrare rinofaringian sau oral, cu multiplicare local
apoi diseminare prin viremie n organism.
Sunt eliminate prin materiile fecale i secreiile nazofaringiepe.
Imunitatea
Este specific de tip, se evideniaz prin: RSN, ELISA, RFC, HAL
Protecia nu se cunoate exact, se pare c dureaz civa ani, se transmite
i transplacentar. \
Rezervorul de virus este omul infectat, cu boal inaparent sau
manifest, care elimin virus. Sunt infecii mixte cu v. coxsackie i v.
echo.
Transmiterea direct, respiratorie sau fecal-oral, dar i indirect
prin contaminarea alimentelor, apei, obiectelor.
Profilaxie
Msuri generale mbuntirea condiiilor de igien.
Profilaxia specific nu se practic.
Tratament
Simptomatic.

304
Caliopsia FLOREA Bacieriologie i virusologie
Toga virus uri (inclusiv virusul rubeolei).
Flavivirusuri, Filovirusuri, Rhabdovirusuri.
Familia Togaviridae

Cuprinde, dup ultimele clasificri dou genuri:


- Genul Alphavirus care este format din 24 specii de virusuri,
numai unele dintre ele sunt patogene pentru om.
- Genul Rubivirus are o singur specie care este patogen pentru
om, virusul rubeolos.
Denumirea familiei a fost dat de aspectul de tog, larg al
nveliului viral. .
Virionii sunt pleomorfi, cei mai muli sferici, cu dimensiuni de 50-
70 nm, nvelii. nveliul este lipoproteic este acoperit de proeminene,
spiculi (cu dimensiuni de 2-6 nm). Virioni sunt formai din nucleocapsid
i nveli viral.
Nucleocapsida este format din:
- genomul viral care este ARN, monocatenar, liniar, sens pozitiv;
- capsida are simetrie icosaedric, este fenestrat, ceea ce face
posibil degradarea ARH de ctre ribonucleaze;
- proteina C capsidal este un monomer format de peste 250 de
aminoacizi. Aceast protein este implicat n formarea
nucleocapsidei i stimularea sintezei de ARN.
nveliul viral este de natur lipoproteic, format din dou straturi
lipidice derivate din membrana plasmatic celular i glicoproteine
nglobate n structura lipidic, proeminente la suprafaa virionului sub
form de spiculi. Aceste glicoproteine au

305
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie
rol n ataarea la receptorul celular, de fuziune a membranelor celular
i hemaglutinare a eritrocitelor unor specii de animale i psri i se
inducere a anticorpilor seroneutralizani i hemglutinoinhibani.

Genul Rubivirus

Virusul rubeolos
Este agentul etiologic al rubeolei, este o boal de gravitate medie
sau uoar, dar este important pentru gravide unde infecia cu acest
virus poate produce concomitent leziuni fetusului i malformaii
congenitale.
Rubeola a fost recunoscut ca entitate nozologic distinct de
rujeol i scarlatin n 1881.
Patogeneza
Poarta de intrare i locul de multiplicare a virusului este mucoasa
rinofaringian, de aici virusul difuzeaz n ganglionii regional i snge
(viremie) n tot organismul. Virusul este detectat n snge ncepnd ce
a aptea zi de la infecie i se menine nc 1-2 sptmni, care dispare
o dat cu apariia anticorpilor.
La femeile gravide, virusul se transmite prin intermediul
placentei, se poate produce i ascendent din cile genitale materne,
deoarece v. rubeolos este prezent la nivelul cervixului ncepnd cu
prima sptmn de la debutul rash-ului.
Avortul spontan n primul trimestru de sarcin survine n
aproximativ 20% dintre cazuri.

Rubeola congenital
- malformaii oculare: cataract subtota sau total adesea
bilateral i retinopatie, microoftalmie i glaucom;
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie
- malformaii cardiace: persistena canalului arterial dintre aort i
artera pulmonar (care la natere se oblitereaz) i stenozaa.
pulmonare, miocardit;
- malformaii auditive: surditate;
- malformaii ale sistemului nervos central: microcefalie,
ntrziere psihomotorie.

Rubeola (infecia acut postnatal)


Este considerat o boal minor a copilriei.
Incubaia este de 14-18 zile, cu un prodrom de 2-4 zile, prin febr,
indispoziie, coriz, conjunctivit. Caracteristic este hipertrofia
ganglionilor preauriculari, occipitali i cervicali, se descrie semnul
pernei prin hipertrofia ganglionilor cervicali.
Exantemu! debuteaz pe fa n 24 ore, apoi se ntinde pe trunchi
i membre. Iniial are aspect maculopapular, conflueaz, dureaz 3-5
zile. Nu este nsoit de enantem. Febra scade dup 2-3 zile, dar
adenopatiile persist cteva sptmni.
Complicaii:
- Poliartrita, purpura trombociopenic, meningoencefalita.
- Panericefalita rubeoloas progresiv este o complicaie grav i
rar (au fost descrise 20 de cazuri), apare la 8-20 de ani dup infecia
primar. Debuteaz cu deteriorare intelectual, simptome neurologice, se
instaleaz lent cu convulsii, mioclonii, ataxie cerebeloas, i semne
corticale.
Rspunsul umoral
Anticorpii antirubeoloi apar imediat dup rash i cresc n 1- 3
sptmni, sunt de tip IgM, IgG, IgA dar i IgE. Sunt protectori pe via.
Diagnostic de laborator
Produse patologice: secreii nazofaringiene, lacrimi, snge, urin,
LCR, materii fecale; lichid amniotic, placent, esuturi fetale, fragmente
de esuturi (post-mortem), probe de snge recoltate la debut i dup 2-3
sptmni de la mbolnvire.

307
Catiopsia FLQREA Bacteriologie i virusologie
Examen direct prin RT-PCR:
Izolare i identificare
Izolare n culturi celulare primare de maimu, sau linii celulare
continue i Vero.
Identificare prin 1F indirect pe monostraturi infectate i
seroneutralizare n culturi celulare cu seruri specifice.
Diagnostic serologic
Este metoda de elecie: RHAI, HAP, Latex aglutinare, ELISA, IF
indirect.
Creterea n dinamic, de 4 ori fa de debutul bolii pune
diagnosticul.
Profilaxie nespecifc: msuri generale, izolare la domiciliu (boal
de tip B), pe o perioad de cca. 10 zile pn la dispariia exantemului,
izolarea contacilor. Dezinfecia continu a obiectelor i lenjeriei
contaminate.
Profilaxie specific pasiv
- IgG umane hiperimune, care se administreaz imediat i apoi se
repet la 48 ore, (n special la femeia gravid), dar protecia latului nu
este garantat.
Profilaxie specific activ
- Vaccinuri inactivate la care s-a renunat din cauza antigenicit
reduse.
- Vaccinuri vii atenuate care sunt folosite acum. Sunt monovalente
(HPV77, Cendenhill, RA27/3) sau bivalente (antirubeol i antirujeol)
sau trivalente (antirubeolos i antirujeolos i antiurlian).
Vaccinarea antirubeoloas p^ate fi asociat cu alte vaccinuri: anti
polio, DTP, BCG.
Vaccinul antirubeolos se administreaz la vrsta de 12-15 luni,
ntr-o singur doz i.m sau s.c, urmat de revaccinare cu nc o doz la
7-8 ani.
Tratament
Este igieno-dietetic simptomatic n toate forme de infecie
rubeoloas.

308
Caliopsia FLOREA Bacteriohgie i virusologie
Familia Flaviviridae

Este format din virusuri ce determin boli grave la om i animale


transmise prin artropode. Denumirea familiei deriv de la cuvntul latin
flavus (galben), asociat cu febra galben, determinat de virusul amarii,
care este specia prototip al acestei familii. Familia Flaviviridae cuprinde
3 genuri:
- genul Flavivirus care cuprinde virusuri patogeni pentru om i
animale;
- genul Pestivirus cu virusuri ce determin mbolnviri la animale
(bovine, porcine, ovine);
- genul Hepacivirus din care face parte v. hepatitei C, care afecteaz
omul.

Genul Flavivirus
Cuprinde cca. 70 de virusuri (dintre care v. encefalitei japoneze, v.
encefalitei St. Louis, v. encefalitei West Nile, v. Denga).
Structur
Genomul este de tip ARN cu polaritate pozitiv, monocatenar, cu
o capsid cu simetrie icosaedric, posed o singur protein (proteina C
care este asociat cu ARN-ul genomic). Este un virus nvelit cu un strat
dublu lipidic care conine spre interior proteina M i spre exterior
glicoproteina E.
Patogenez
Flavivirusurile intr n organism prin neptura artropodului
vector. Virusul se multiplic local, apoi pe cale limfatic la ganglionii
regionali i apoi n snge. Bolile provocate de aceste virusuri sunt
clasificate n trei categorii:
- Fiavivirusuri eneefalitice neurotrope St Louis, encefalita
japonez B, encefalita West-Nile, aceste virusuri strbat bariera
hematoencefalitic cu multiplicare n endoteliile vasculare.
- Virusurile febrei galbene, pantrop (viscerotrop i neurotrop).
- Febrele hemoragice produs de V. denga (denumirea provine de
la cuvntul spaniol denguerd** ce caracterizeaz mersul dificil, rigid,
309
Caliopsia FLOREA Bacteriologic i virusologie
cauzat de durerile musculo-articulare ale bolnavilor), V. febrei Omsk, v.
pdurii Kyasanur. Aceste virusuri produc diateza hemoragic cu
permeabilizare vascular crescut, pierderea difuz de plasm i snge
din capilarele lezate.
n Romnia a fost semnalat nc din 1966-1967 v. West- Nile,
epidemie confirmat cu acest virus n iulie-octombrie 1996 n Bucureti
i cmpia Dunrii.
Ciclul epidemic a fost de tip urban: psri>nari>om.
Tratament
Simptomatic i msuri de dezinfecie, dezinsecie.

Familia Filoviridae

Cuprinde virusuri care determin afeciuni foarte grave, febre


hemoragice acute cu letalitate crescut (25-90%) Din aceast familie fac
parte virusul de Marburg i virusul Ebola. Filovirusurile sunt filiforme
(filum ~ fir), au aspect de bastona sau filamente. Sunt virusuri ARN,
liniar, monocatenar, sens negativ, riucleoeapsida are simetrie
helicoidal, au nveli cu proeminene, peplomere (cu aspect globular).

Familia Rhabdoviridae

Sunt virusuri care infecteaz plante, nevertebrate, vertebrate.


Virusurile produc zoonoze care se pot transmite la om prin intermediul
animalelor. Denumirea familiei provine de la cuvntul

310
Caliopsia FLOREA Bacteriologic i virusologie
grecesc rhabdos (bastona) i care definete forma virionilor.
Cuprinde dou genuri:
- genul Veziculovirus cu specia virusul stomatitei veziculare,
- genul Lyssavirus, care cuprinde V. rabic.

Virusul rabic (VR)


Este agentul etiologic al turbrii, boala este cunoscut din
antichitate. Studii fundamentale au fost realizate de Loujs Pasteur n
1881. }
Structur \[
i

Are form cilindric cu o extremitate rotunjit, aspect de cartu cu


dimensiuni de 180/75 nm. Este un virus ARN monocatenar, liniar, sens
negativ. Nucleocapsida are simetrie helicoidal nfurat ordonat n
jurul axului central al structurii, este virus nvelit cu un dublu nveli
lipidic i spiculi de natur glicoproteic.
Rezisten la ageni fizici i chimici
Virusul rabic rmne infectant la temperatura de 40C n glandele
salivare i creier mai multe sptmni. Meninut n suspensie 1/100,
cteva ore la 45C, lh la 56C, 2 min. la 100C i pierde infectivitatea.
Prin liofilizare (desicare rapid i controlat) i pstreaz viabilitatea ani
de zile. V. rabic este inactivat sub influena radiaiilor UV, RX i lumina
solar. Solvenii lipidelor (eter, dezoxieolat de sodiu) inactiveaz toate
rhabdovirusurile prin deteriorarea nveliului viral. Tripsina este agent
inactivant. Fenolul i formolul n concentraie de 0,5-4%, atenueaz n
diferite grade virulena.
Patogenie
Virusul ptrunde n organism prin muctura de cine bolnav o
dat cu saliva infectat, sau aerogen n peterile cu lilieci infectai, sau
prin soluii de continuitate ale tegumentului atunci cnd vine n contact
cu virusul rabic. La locul infectrii virusul se multiplic, este un virus
neurotrop, virusul trece n receptorii nicotinici de acetilcolin de la
jonciunea neuromuscular, apoi se disemineaz centriped spre SNC.
Multiplicarea viral are loc n citoplasm neuronilor, unde se detecteaz
incluziile Babe-Negri. Diseminarea n creier este rapid determinnd
311
Caliopsia FLORE A Bacteriologie i virusologie
encefalita rabic nainte ca rspunsul imun s apar.
Sunt afectate n special zonele motorii, cile piramidale,
extrapiramidale i formaiunea reticulat, ceea ce determin paraliziile i
hiperestezia. Apar tulburri de comportament, hiperexcitabilitate?
iritabilitate i tendina de a muca.
Prezena virusului se poate detecta i n tractul respirator,
muchiul cardiac, rinichi, pancreas, retin, comee, foliculi piloi.

Rabia la om
Incubaia
Este relativ lung 14-100 zile, cu o medie de 50 de zile, rar poate
fi de un an sau chiar zece ani.
Stadiul prodromal
Este scurt, de 2-4 zile, cu o simptomatologie nespecific:
anorexie, febr moderat, cefalee, greuri, disfagie, parestezii n zona
mucturii, nervozitate, anxietate.
Perioada de stare
i

1. Rabl furioas (spastic)


Se manifest prin excitaie psihomotorie: hiperestezie cutanat
senzorial exacerbat de stimuli exteriori, halucinaii, convulsii, dilataie
pupilar (midriaz), hipersalivaie, hipersudoraie. Hidrofobia este
determinat de spasme ale musculaturii faringiene, care este nsoit de
febr ridicat (40- 41C)- i tulburri neurovegetative, variaii ale
tensiuni arteriale, pulsului, dificulti n respiraie.
2. Rabia paralitic
Debuteaz cu paralizii, dureri ale membrelor, urmate de paralizii
flasce progresive, ascendente de la membrele inferioare pn la teritoriile
inervate de nervii cranieni. Tulburri ale sfincterelor. Aceast form este
rar la om.
Perioada terminal
n rabia furioas, moartea survine dup 3-4 zile, iar n forma
paralitic n 5-6 zile prin stop cardiac i respirator.
O form particular este forma clinic de rabie de laborator,
contractat accidental, prin infecie cu virus rabic. Pot s apar paralizii
312
Caliopsia FLOKEA Bacteriohgie i virusologie
ascendente, tulburri bulbare care duc la moarte prin stop respirator.

Rabia la animale
Poate s se manifeste sub forma furioas cu evoluie rapid de
cteva zile sau sub forma paralitic cu o durat de cca. o sptmn.
Cinele nu prezint hidrofobie, bnd sau ncercnd s bea ap pn la
moarte. Animalul devine agitat, fuge de acas, muc alte animale, sau
omul, acces de furie paroxistic, sau poate s fie trist, linitit, infecia
rabic se manifest prin pareze, hemiplegii, parapiegii i apoi moare.
Pisica face forma furioas. Liliecii pot s fac forma furioas sau
inaparent. La toate animalele bolnave se observ o schimbare de
comportament, schimbare care poate sugera o infecie cu v. rabic.
Diagnostic de laborator
Prelevarea probelor, ambalarea, transportul i manipularea
materialului infecios impune msuri foarte stricte de prevenire a
infeciilor. Pe lng msurile uzuale de asepsie, personalul din laborator
va fi imunizat i protejat n timpul lucrului cu mnui i ochelari de
protecie.
Recoltarea produselor patologice
Saliv recoltate cu tampoane sau prin aspirare, amprente de comee,
biopsii de tegument, snge, LCR aceste pot fi recoltate ante-mortem.
Post-mortem esut cerebral (segmente din mduva spinrii, trunchi
cerebral, cerebel, hipocampus, fragmente din tegument). Atunci cnd
este suspiciunea la animale, se trimite

313
Caiiopsia FLQREA Bacteriologie i virusologie
capul animalului n laborator. Ambalarea trebuie s se fac n
containere etane i cu posibilitate de congelare, sau n zpada carbonic.
Nu se recomand meninerea probelor n formol.
Examen direct
- Se face 1F direct cu anticorpi monoclonali, antivirioni marcai
cu izotiocianat de fluorescein, pe amprente de comee, biopsii cutanate,
saliv.
- Examen histopatologic, evidenierea corpilor Babe- Negri, care
sunt prezeni n proporie de 95-100% n celulele infectate din cornul lui
Amon, cortexul cerebral (aria motorie), bulbul rahidian i ganglionul lui
Gasser. Se folosete coloraia Sellers (un amestec n pri egale de
albastru de metilen 1% n alcool metilic absolut i fucsin bazic 1% n
alcool metilic absolut).
n caz de turbare apar incluzi rabice, corpii Babe-Negri, sunt
rotunzi, sau ovalari de cca. 27 jam, au culoare roie cu tent magenta
(ciclame), cu granulaii interne bazofile, localizate n interiorul
citopasmei, sau n afara corpusculului, atunci cnd s-a rupt membrana.
Protoplasma celulelor este albastr, iar stroma roz. Prezena
corpusculilor este patognomonic pentru diagnosticul de rabie.
- ELISA se detecteaz antigenele rabice din esutul cerebral
Izolare i identificare
Pe culturi celulare, prezena virusului va fi detectat prin IF direct
sau animale, oarecele sugar inoculat i. cerebral, dezvolt dup o
incubaie de 7-20 zile encefalit rabic: tremor, paralizii i prostaie.
Identificarea se va face prin 1F direct.
Identificarea serotipului viral se realizeaz cu seturi de anticorpi
monoclonali specifici de identificare a virusului rabic.
Sau se poate folosi RT-PCR.
Diagnosticul serologic
Detectarea anticorpilor antirabici n serul bolnavilor prin SN, IF
indirect sau EL1SA. Anticorpii apar dup 10 zile de la debut, iar n LCR
dup nc o sptmn, timp uneori mult prea ndelungat.
Profilaxie nespecific
- Tratamentul local al plgii, daca nu permite curarea i
314
Caliopsia FLOREA Bacteriologic i virusologie
suturarea, se va infiltra local IgG specifice antirabice sau ser antirabic,
hiperimun, se va administra anatoxin tetanic, tratament cu antibiotice
pentru prevenirea infeciilor bacteriene.
- Aprecierea riscului de contaminare rabic n fmcie de starea de
sntate a animalului, specia animalului (rhuctura animalului slbatic
este mai grav). Prezena enzootiei nj teritoriu.
Profilaxie pasiv
Seroterapia sau administrare de IgG specifice. Acestea se
recomand n cazul mucturilor grave, adnci, la cap, gt, membre
produse de animale slbatice.
Profilaxie activ
Vaccinuri antirabice este singura metod eficient de prevenire a
rabiei.
- Au fost vaccinuri vii atenuate (vaccin Fermi) care au fost scoase
din uz din 1974.
- Vaccinuri preparate din esut cerebral adult obinut de la animale
inoculate intra cerebral cu tulpini de v. rabic fix. Sunt vaccinuri inactivate
cu formol i temperatur de 37C sau inactivate cu p-propiolacton.
Aceste vaccinuri au dezavantajul complicaiilor neurologice,
encefalomielitice (datorate antigenelor specifice esuturilor nervoase) n
proporie de 1/1200-1300. Din acest motiv OMS a recomandat ncetarea
utilizrii acestui vaccin.
- Vaccinuri preparate din esut cerebral de animale nou- nscute
(care au coninut foarte redus sau chiar absent de mielin) pentru a reduce
complicaiile neurologice. Aceste vaccinuri au fost preparate din creier
de iepure, oarece sugar, inactivat cu (3- propiolacton, cu un numr mai
sczut de complicaii neurologice.
- Vaccinuri preparate pe ou embrionate. Au fost preparate pe ou
embrionate de gin, cu dou variante: LEP (low
egg passage, dup 40-50 de pasaje) i HEP (high egg passage, cu cca.
200 de pasaje) eu patogenitate sczut pentru animale de laborator.
Aceste vaccinuri sunt de uz veterinar.
- Vaccinuri preparate pe culturi celulare.
Avantaje: sunt superioare vaccinurilor preparate pe esut nervos
315
Caliopsa PLQREA Bacteriologie i virusologie
sau ou embrionate, prin imunogenitate crescut.
Dezavantaje: costuri ridicate, dificultate n legtur cu
ntreinerea culturilor celulare.
- Vaccinuri preparate pe linii celulare continue, VERO.
Vaccinurile preparate n culturi de celule sunt vaccinuri
recomandate pentru vaccinarea antirabic.
Reacii adverse minore:
- durere la locul inoculrii i eritem,
- complicaiile neurologice sunt comparabile cu al altor
vaccinuri,
- eficacitate satisfctoare, nu s-a nregistrat nici un deces la
persoanele vaccinate care au fost mucate de animale bolnave.
- Vaccinuri recombinate
La noi n ar a fost utilizat vaccinul anti rabic LC. inactivat
preparat pe creier de oarece sugar, pentru evitarea reaciilor nedorite
s-a renunat Ia acest vaccin.
Din 200)1 vaccinarea antirabic se face cu vaccin preparat pe
culturi celulare VERO (VERORAB), preparat de Institutul Pasteur,
Paris?
Tratament
Tratamentul antiviral nu a dat rezultate.
Se face seroterapie concomitent cu vaccinarea antirabic

316
Caliopsia FLQREA Bacteriologic i virusologie

Capitolul XXVin
Orthomyxovirusuri: virusurile gripale/4, B i C.
Paramyxovirusuri: v. parainfluenza,
v. respirator sinciial, v. urlian, v. rujeolic.
Coronavirusurile

Familia Orthomyxoviridae

OrthomyxovirusuriJe sunt ageni etiologici ai unor infecii


respiratorii acute, uneori grave, cu impact global ce evolueaz n
epidemii/pandemii cu mortalitate mai ales n rndul copiilor i btrnilor.
Denumirea de myxovirus exprim afinitatea pentru mucoproteinele
suprafeei celulare, myxa nseamn mucus n grecete. Termenul de
orthomyxovirusuri le deosebete de paramyxovirusuri care, dei are
mecanisme asemntoare de ataare de celul, sunt diferite ca modalitate
de structur i replicare.
In 1996 Comitetul Internaional de Clasificare i Taxonomie
Viral a inclus n Orthomyxovirusuridae genul Thogotovirus, ce cuprinde
virusuri avnd proprieti similare familiei, iar n anul 2000 a divizat
genul Influenzavirus n alte trei genuri: A, B, C, cu genurile:
- genul Influenzavirus A cu tipul de v. gripal A,
- genul Influenzavirus B cu tipul v. gripal B,
- genul Influenzavirus C cu tipul de v. gripal C,
- genul Thogotovirus, cu tipurile Thogoto, Dhori i Batken.
317
Caltopsia FLORE A Bacterioiogie i virusologie
Genurile Influenzavirusi A, B, C
Morfologie
Virionii au aspect polimorf de la forme sferice cu diametrul de
80-120 nm, la forme filamentoase. Virionii sunt nvelii, pe suprafaa
nveliului viral se observ nite proeminene, spiculi, care au
dimensiuni de 10-14 nm lungime i 4-6 nm diametru. Virionul este
constituit din ARN 1%, proteine 73%, lipide 24% i carbohidrai 6%.
Nucleocapsida are simetrie helicoidal, este alctuit din genom ARN
dublu spiralat, cu dimensiuni ntre 50 i 150 nm, de sens negativ,
segmentat: virusurile gripale A i B au genomul format din 8 segmente,
iar v. gripal C este format din 7 segmente. Fiecare segment este o
minigen responsabil de codificarea unor proteine virale: trei
polimeraze, hemaglutinina, neuraminidaza, nucleoproteina, proteina
matrix (M) i o protein nestructural.
Infeciile gripale cu tipul A se ntlnesc i Ia animale domestice
sau la psri slbatice (rae, gte, psri cltoare). Uneori pot s apar
Ia om infecii simultane la om cu tulpini umane i animale. n astfel de
infecii mixte, cu tulpini de la specii diferite, dar de acelai tip, apar noi
tulpini prin reasortarea minigenelor, acestea se numesc reasortani,
pentru a le diferenia de recombinani (n care schimbrile genomice,
aparinnd aceleai specii, presupun ruperi ale genomului i legturi
covalente pentru refacerea genomului modificat).
Antigenul nucleocapsidar confer specificitate de tip virusului
gripal (permind diferenierea ntre cele trei tipuri: A, B, C). Dup cum
s-a amintit n inferiorul virionului se gsete i ARN polimeraza care
este esenial pentru infectivitate (genomul are polaritate negativ).
Virionul gripal prezint dou feluri de proiecii: hemaglutinina
(HA) i neuraminidaza (NA).
La exterior anvelopa conine lipide, glicolipide i glicoproteine
parial derivate din membrana plasmatic a celulei
gazd, parial codificate de genomul viral. Pe suprafa sunt dispuse
proeminene n form de spiculi (spikes), cu care virionul se ataeaz de
celulele receptoare.
Dou tipuri de peplomere sunt importante:
318
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virttsologie
- Hemaglutinina (HA) de cca. 14 nm lungime cu greutatea
molecular de 75-80 KDa i sunt structuri prismatice triunghiulare,
pentru fiecare virion exist ntre 500 i 1000 de peplomere de HA, ele
fiind identice din punct de vedere^ antigenic i dispuse pe toat suprafaa
anvelopei difuz. J
- Printre peplomerele de HA se gsete o alt categorie de
proiecii, structuri cu aspect de ciuperc, numite neurminidaze (NA).
Sunt enzime cu greutate molecular de 250 kDa care sunt formate din
mucopolizaharide' i mucoproteine din care ies gruprile sialil situate pe
ramificaiile laterale ale oligo sau polizaharidelor. Neuraminidaza
previne aglutinarea noilor particule virale, favorizeaz creterea
numrului de virioni infectai i difuzarea lor ctre alte teritorii tisulare
(altele dect locul de invazie). n infecia gripal, NA faciliteaz
fluidificarea stratului de mucin de la nivelul arborelui respirator i
angajarea tractului respirator inferior n procesul infecios.
Diferenele majore antigeniee ntre hemagiutinine i
neuraminidazele diferitelor tulpini, apar prin shift antigenic (variabilitate
major) datorit reasortrii unor segmente de genom viral (cu segmente
provenite de la tulpini aviare, porcine, ecvine etc.), rezultnd reasortani,
respectiv noi subtipuri antigeniee, ce pot declana pandemii.
Variabilitatea minor (drift antigenic) se datoreaz mutaiilor
spontane aprute n gene ce codific HA i NA, rezult noi tulpini de
virus gripal, iar n urma presiunii imunologice exercitat de populaia
gazd se selecteaz variante antigeniee responsabile de izbucnirea
epidemiilor.
Fa de aceste componente antigeniee apar anticorpi specifici:

319
Caliopsia FLORE A Bacteriologic i virusologie

- inhibitori ai hemaglutinrii,
- neutralizari i inhibitori ai activitii neuraminidazice.
Tulpinile gripale au o nomenclatur specific ce
cuprinde:
- tipul antigenic al ribonucleoproteinei virale (A, B, C);
- localitatea de izolare (originea geografic a tulpinii);
- numrul tulpinii, anul izolrii;
- tipul de HA i NA.
Exemplu: A/Solomon Islande/3/2006/HlNl.
Patogenie
Gripa este o boal infectocontagioas de grup B, cu evoluie ciclic
sezonier i multianual, cu manifestri clinice generale i respiratorii cu
potenial de severitate.
Sursa de infecie este omul bolnav.
Calea de transmitere este aerogen (prin picturile Pflugge), modul
este direct.
Incubaia este de 1-3 zile.
*

Debutul poate fi brusc cu: febr, frisoane, cefalee, catar oculonazal,


mialgii, poliartralgii.
n perioada de stare apare o stare de astenie pn la prostraie, cu
inapeten, cefalee, febr, frisoane, vrsturi, mialgii, obsucie nazal,
strnut, tuse, faringit, laringit, traheobronit, pneumonie interstiial.
Convalescena dureaz cca. 2 sptmni cu astenie i tuse.
Pot s apar complicaii: crup gripal, broniolite, pneumonii severe,
miocardit, pericardita, miozite, suprainfecii bacteriene (otite, sinuzite,
conjunctivite etc.), sindrom. Reye (este o encefalopatie nsoit de
degenerescena gras a ficatului, hiperamoniemie, sindrom hemoragipar -
poate fi indus de aspirin).
Tratamentul
Este simptomatic: antipiretice, dezobstruante nazale,
antitusive, fluidifiante ale secreiei nazale, expectorante. n

320
Caliopsia FLORE A Baceriologie i virusologie

anumite forme (grave) tratament etiologic: ribavirin, amantadin,


rimantadin. n complicaii bacteriene se adaug antibiotice.
Profilaxie
- Nespecific: prin msuri igieno-dietetice, izolare eventual
spitalizare.
- Specific prin administrarea vaccinului anti gripal, care este un
trivaccin, recomandat de OMS cu tulpinile de virus care sunt circulante n
anul respectiv. El se obine pe ou embrionate, de exemplu pentru
2008/2009 a avut urmtoarea compoziie:
- A/Brisbane/59/2007 (N1H1) 15 pg
- A/Brisbane/10/2007 (H3N2) 15 pg
- B/Brisbane/60/2008-like 15 pg
Se recomand persoanelor expuse, btrnilor, copiilor etc. Este
contraindicat: persoanelor care are hipersensibilitate la substana activ din
preparatul vaccinai, ou sau n general la proteinele aviare, neomicin i
thiomersal (sare de mercur cu rol consevant), precum i la cei cu boli acute
sau febrile.

Familia Paramyxoviridae

Sunt ageni infecioi ai omului, mamiferelor i psrilor. Ele


intereseaz n special aparatul respirator, sau ageni etiologici ai rujeoei i
oreionului.
Subfamilia Paramyxdvirinae care afecteaz omul cuprinde:
- genul Respirivirus cu virusurile paragripale umane tipurile 1 i 3
(VPGU);
- genul Rubulavirus cuprinde: v. paragripale umane tipurile 2,4A i
4B (VPGU), V. urban (VU), v. bolii Newcastle (VBN sau NDV);
- genul Morbilivirus cu v. rujeolos.
Subfamilia Pneumovirinae

- Genul Pneumovirus cu v. respirator sinciial uman (VRSU)


Familia Paramyxoviridae sunt ribovirusuri cu genom ARN cu

321
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

polaritate (-), nefragmentat, de forma sferic sau filamentoi cu dimensiuni


de 150-300 nm. Genomul este protejat de capsida care are simetrie
helicoidal i anvelopa cu una sau dou proiecii. La unele din
paramixovirusuri aceste proiecii dau proprietile hemaglutinante i/su de
neuraminidaza. Un al doilea fel de _ proiecii, proteina F, care reprezint
un factor de fuziune i mijlocesc intemalizarea i produce efectul citopatic
de tip sinciial in vitro prin formarea de celule gigant in vivo. Totodat
formeaz incluzii intranucleare eozinofile nconjurate de un halou.
- Virusurile paragriple umane (VPGU)
Sunt virusuri care determin mbolnviri ale cilor
respiratorii superioare i inferioare, afectnd mai ales vrstele mici, ceea
ce a determinat schimbarea denumirii genului Paramyxovirus n genul
Respirovirus,
^ Poarta de intrare este respiratorie
Modul de transmitere este contactul direct cu bolnavul.
Incubaia este de 3-6 zile.
Multiplicarea viral are loc la nivelul epiteliilor cilor respiratorii
superioare, a esuturilor laringotraheobronice, segmentele inferioare
respiratorii sunt mai puin interesate.
Simptomele clinice sunt Consecina inflamaiei cilor
respiratorii i rspunsul specific cu Ac Ig E i declanare de reacii i cu
eliberare de histamin ce amplific edemul care apare n crup (respiraie
sufocant).
Infecia primar a copiilor se manifest cu febr, rinit, ^ faringit uneori
cu bronit care pot evolua spre
laringotraheobronit/crup, mai ales la copiii sub 5 ani.La copiii mari
i aduli evolueaz de cele mai multe ori asimptomatic.
La copilul mic reinfeciile succesive pot favoriza supramfeciile
bacteriene, complicaiile cele mai frecvente sunt otita medie i traheita.
Tratamentul este simptomatic i ribavirina la pacienii cu
imunosupresie.

Genul Rubulavirus J

322
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

i
Virusul urlian (VU) este agentul etiologic al parotiditei epidemice
Patogeneza
Virusul este transmis prin picturile Pfliigge (saliv i secreii
respiratorii) ptrunde n cile respiratorii superioare unde se multiplic,
apoi virusul disemineaz n ganglionii regionali, apoi prin viremie n
tot organismul. Organele int sunt: glandele salivare, glanda parotid,
ovarele, testiculele, pancreasul. Virusul este excretat n saliv 5-6 zile
nainte i cca. 9 zile de la debut, cnd sunt detectai anticorpii IgM.
Sistemul nervos este interesat n 50% dintre cazuri, care variaz de la
meningism, exprimat prin uoar cretere a elementelor celulare pn
la meningoencefalit (0,5% dintre cazuri). Infecia cu v. urlian este
sistemic, acesta multiplicndu-se n celulele epiteliale ale diferitor
organe, chiar dac clinic predomin parotidita.
Forme clinice
- Parotidita epidemic (oreionui)
Incubaie medie de 18 zile (7-25 zile), cu febr medie, anorexie,
otalgie, indispoziie, urmat rapid de hipertrofia bilateral, dureroas a
glandelor parotide i a glandelor salivare.
Durata bolii este de 10-15 zile cu evoluie autolimitant.
Localizrile glandulare extrasalivare pot s apar nainte, concomitent,
dup sau n absena parotiditei.

323
Caiiopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

- Orbita se observ dup pubertate, la 10-30% dintre cazuri, este


precedat de febr, frison, dureri abdominale. Apare inflamaia
scrotal, eritemo-edematoas, dureroas, n 25% sunt interesate ambele
testicule. Evoluia este favorabil, cu durata de 8-10 zile. Uneori (5%o)
poate s apar atrofia testicular, iar azoospermia este excepional.
La femei poate s apar ovarita i mastita la 31% dintre cazuri la
fete dup 14 ani.
Complicaii:
- Meningita urlian care este o meningit limfocitar, ea poate s
apar dup 5-7 zile de la debut cu febr, redoarea cefei, vrsturi,
cefalee i fotofobie. Evoluia este favorabil, cu vindecare n cteva
zile.
- Encefalita, nainte de introducerea vaccinului, reprezenta cca.
20-30% dintre encefalitele virale. Ea apare la cca. l-5%o dintre cazuri,
ea poate s apar n timpul parotiditei sau la 2-3 sptmni, se
manifest prin confuzie, convulsii, tulburri motorii sau senzoriale.
Majoritatea cazurilor evolueaz fr sechele.
- Afectarea nervilor cranieni, surditate la 0,05%o dintre cazuri,
uni sau bilaterale ireversibile. Foarte rar este cecitate prin nevrit
optica.
- Altef complicaii: miocardite, nefrite, pancreatite (4% dintre
pacieni ~ diabetul juvenil ar fi o consecin posibil a diabetului
juvenil prin afectarea celulelor beta pancreatice).
Profilaxie
- Msuri generale: repauz, regim igieno-dietetic.
- Profilaxie specific pasiv prin administrarea de IgG specifice
hiperimune mai ales la indivizii de sex masculin dup pubertate.
- Profilaxie specific activ
Vaccinuri inactivate cu formol confer protecie limitat (6
luni). Vaccinuri vii atenuate. Vaccinarea se administreaz dup vrsta
de 1 an la toate persoanele cu risc crescut (colectiviti
colare, tineri, aduli) ntr-o singur doz. Poate fi monovalent,
bivalent (antiurlian + antirujeol) sau trivaccin (antiurlian +
324
Caliopsia FLOREA Bacterioiogie i virusologie

antirujeol + antirubeol).
Contraindicaii
- Nu se administreaz la femeile gravide, n boli acute i la
imunodeprimai.

Genul Morbilivirus

Virusul rujeolic
Este un ribovirus anvelopat ce face parte din genul Morbilivirus,
familia Paramyxoviridae. Este agentul etiologic al rujeolei.
Genomul este ARN cu capsid helicoidal, care este acoperit de
proteina M, matrix, i la exterior peplos format din dublu strat lipidic
derivat din membrana celulei infectate i spiculi glicoproteici:
hemaglutinina i proteina F (de fuziune).
Pe culturi celulare prezint un efect citopatic caracteristic:
- de tip sinciial, sinciii cu cca. 40 nuclee i celule gigante;
- cu celule stelate fuziforme.
Mai poate cultiva pe ou embrionate (lichid amniotic, lichidul
alantoidian i n embrion n titruri mici), pe animale, maimu,
oarece, hamster.
Patogenez
Virusul rujeolos ptrunde n organism prin aerosoli, se replic
local n mucoasa respiratorie i conjunctival. Disemineaz n
ganglionii regionali, ajunge n snge i apoi n organele interne.
Sursa de infecie sunt bolnavii de rujeol (nu sunt purttori
sntoi).
Calea de transmitere
- aerian, direct prin picturile Pfliigge eliminate prin tuse sau
strnut,
- indirect, prin obiecte proaspt contaminate.
Receptivitatea este general.
Incubaia este de 9-11 zile. Este o perioad prodromal care
dureaz 3*4 zile i se caracterizeaz prin febr, catar oculo-nazal,
fotofobie, lcrimare, tuse seac, uneori cu anorexie, vrsturi i rar
325
Caliopsia FLOREA Bacteriologic i virusologie

convulsii.
Perioada de stare cu febr, erupie maculopapuloas generalizat
cu caracter descendent, catifelat ia palpare, confluent n 4-6 zile.
Exantemul este nepruriginos care dispare la ~ presiune.
, Complicaii:
!_ - suprainfeciile,
- complicaiile nervoase imediate (encefalomielita acut
potinfecioas care poat s apar la 2 sptmni de la rash),
_ - complicaii nervoase tardive (panencefalita sclerozant
subacut - PESS) care poat sa apar la 2-15 ani de la infecia
rujeoloas; incidena este 1/106 de cazuri, se ntlnete mai - frecvent la
biei.
Tratamentul
Este simptomatic
Profilaxia
Profilaxia specific activ este singura metod eficace de
prevenirea rujeolei.
~~ - Vaccinuri inactivate preparate din virus disrupt (conine
numai hemaglutinina) sau ntreg, inactivate cu formol, P-
propiolacton, cu sau fr adjuvani.
- Vaccinuri vii atenuate sau supraatenuate.
' Se administreaz la 12-15 luni, s.c., o prim doz i
L. revaccinare la 7-8 ani. Vaccinurile sunt monovalente sau bivalente
(antirujeolos i antiurlian) sau trivaccin (antirujeolos + antiurlian f +
antirubeol).

326
Callopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

Familia Coronaviridae

Coronavirusurile umane (CVU)


Sunt virusuri care determin la om, animale afeciuni ale cilor
respiratorii i gastroenterite.
Denumirea se datoreaz aspectului caracteristic al virionului care
are nveliul acoperit de proeminene rotunjite, cu aspect de coroan
(corona).
Sunt virusuri ARN, sens pozitiv, capsida cu* simetrie
helicoidal, cu dimensiuni de 80-160 nm. Aspectul este \pleomorf,
sferici sau ovoidali i sunt nvelii. -
Patogenez
Sunt ageni infecioi ai guturaiului, infecii enterale: sindrom
diareic acut sau la copii d enterocolita necrozant.
Tratament simptomatic.
Profilaxie nespecific.
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

328
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie
Capitolul XXIX
Retrovirusuri, prioni

Familia Retroviridae

Este format din virusuri care sunt ageni patogeni ai vertebratelor


(om, mamifere, psri, reptile, peti) i nevertebratelor (insecte,
molute). Deii prezint caractere morfologice comune, infeciile pe
care le provoac se pot exprima divers, de la forme asimptomatice, la
manifestri clinice grave.

Virusul HIV
Virusul imunodefcienei umane (HIV) aparine familiei
Retroviridae, subfamilia Lentivirinae. -
Sunt virusuri ARN. HIV I i HIV II sunt agenii etiologici ai
sindromului] de imunodeficien dobndit (SIDA).
A aprut! ca entitate clinic n 1981, iar agentul etiologic a fost
izolat nM 983, iar dup 10 ani rspndirea SIDA a fost pandemic. n
anul 2000 creterea a fost de 30-40 milioane pe glob.
Structur
Virusul are un diametru de 100 pm. Genom ARN, monocatenar,
de sens pozitiv, diploid. Are trei categorii de gene: majore, reglatoare
i accesorii. Capsida cu simetrie icosaedric are form cilindric sau de
trunchi de con cu nlimea mare de 100 nm, extremitatea mare de 60
nm i extremitatea mic de 20 nm. Extremitatea mic este conectat la
nveli prin intermediul unei formaiuni de compoziie necunoscut,
denumit CEL (capsid-envelope link). Capsida are proteine capsidale:
proteina p24, este constituentul principal al capsidei, nucloproteina pl5,
care este situat n interiorul capsidei i echipament enzimatic:
- reverstranscriptaza (capabil s transforme ARN-uln ADN
proviral, avnd rol de ADN-polimeraz-ARN dependenta i

329
Caliopsia FLQREA Bacteriologie i virusologie
ADN polimeraz);
- integraza (integreaz ADN proviral n ADN-ul celulei gazde);
- proteaza, etc.
nveliul viral este format dintr-un strat dublu lipidic n care sunt
ncorporate proteine virale. Aceste proteine au rol n asamblarea
virionului i n procesul de nmugurire.
Ca toi membrii acestei familii, HIV prezint un mod particular de
replicare, poate realiza transcrierea ARN-ului viral n ADN proviral cu
ajutorul reverstranscriptazei.
Adsorbia i penetrarea virusului n celul
HIV ptrunde n celulele care au la suprafaa lor receptori CD4,
n urma fuziunii peplosului cu membrana celular. n citoplasm are loc
decapsidarea. Sinteza ADN-ului proviral i integrarea n genomul
celular, se realizeaz cu ajutorul reverstranscriptazei, iar integrarea
acestuia prin integraza viral. Transcripia provirusului ARN genomic
i sinteza proteinelor se realizeaz cu ajutorul ARN-polimerazei II ce
aparine celulei infectate. Sinteza proteinelor virale se face pe matria
ARN mesager viral. Dup asamblarea i maturarea componentelor
virale i incapsidarea ARN viral, se formeaz noi particule virale.
Eliberarea virionilor din celul gazd se realizeaz prin
nmugurire.
Ptrunderea virusului n organism se face la nivelul:
- mucoasei urogenitale, recale sau orale prin contact hetero sau
homosexual;
- perinatal, de la mam la fat;
parenteral, prin soluii de continuitate ale tegumentelor i
mucoaselor, injecii, acupunctura, tatuaje, transfuzii cu snge
integral sau derivate contaminate, transplanturi de la donatori
infectai, intervenii dentare.
Rezistena la ageni fizici i chimici
HIV este sensibil la cldura umed se inactiveaz n 15 min la 121C.
Este insuficient inactivarea la 30 min la 56C, este distrus dup 10 h la
60C, prin fierbere este inactivat dup 20 min. Cldura uscat 180C l

330
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie
distruge timp de 2 h. HIV este rezistent la radiaiile UV. PH-ul optim de
dezvoltare este de 7,1 este distrus la pH-uri extreme sub 5 i peste 10.
Substanele chimice eare-1 distrug sunt: aldehida glutarie 2% n 30 min,
peroxidul de hidrogen 6% n 30 min, alcoolul etilic de 70% i iodul de 10%
n 30 min, de asemeni derivatele de clor.
Patogenie
intele sunt celulele Langerhans din lamina propria, subiacent
acestora. Sunt infectate mai ales macrofagele n curs de difereniere, cu
susceptibilitate crescut la replicare i limfocitele T activate. Infecia
limfociteor T CD4 favorizeaz progresia spre ganglionii teritoriali i
esuturile mai profunde.
Intrarea direct prin transfuzie de snge a virusului favorizeaz acces
direct ia limfocitele CD4 i monocitele periferice circulante.
Diseminarea virusului de la poarta de intrare se face pe cale sanguin,
fie liber, fie asociat cu limfocitele CD4 sau monocitele spre sistemul
limfatic. La cteva zile de la infecie, replicarea lui n sistemul limfatic este
masiv. Aceast situaie este manifest prin prezena antigenelor p24 n
snge i scderea limfociteor CD4.
Rspunsul imun apare la cteva sptmni i se manifest
prin:
- creterea limfociteor T CD8 (care se menin crescute luni sau
ani);

331
Caliopsia FLOREA Bacterioiogie i virusologie
- apariia anticorpilor seroneutralizani.
Perioada de infecie latenta asimptomatic este nsoit de replicare
viral permanent cu creterea ncrcturii virale i distrugerea
permanent a limfociteor T CD4.
Trecerea de la forma asimptomatic la forma clinic manifest se
face ntr-un interval de cca. 2 ani (5% dintre pacieni) pn la 10 ani (50%
dintre pacieni).
Tablou clinic %
Clasificarea infeciei cu HIV la adult se face n funcie de anumite
criterii clinice (stadiul A, B sau C) i im^nologice (scderea
limfociteor T CD4 sub 200/mm3 sau sub 14% din totalul limfociteor,
acestea indicnd stadiul SIDA).
Stadiul A
Perioada de incubaie este ntre cteva zile pn la 3 luni, sunt
anumite aspecte clinice nespecifice:
- infecie asimptomatic
- infecie acu nespecific (sindrom retroviral), nsoit de febr,
oboseal, faringit, artragii, erupii maculo- papulare,
limfadenopatie generalizat poate dura 2-3 sptmni,
remisiunea fiind complet Aceast perioad poate dura pn la
10 ani.
Stadiul B
Sunt cazurile cu infecie simptomatic. Manifestrile clinice
corespunztoare stadiului B sunt:
- stare febril 38,5C care persist mai mult de o lun,
- sindrom diareic care persist mai mult de o lun,
- candidoz orofaringean sau vulvovaginal persistent sau
recidivant,
- herpes zoster extins sau recidivant,
- purpur trombocitopenic idiopatic,
- neuropatie periferic,
- infecii pelviene sau tuboovariene,
- listerioza, etc.

332
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

nrutirea unor marked de laborator, scderea numrului de celule


T CD4 la 500-200/mm3.
Stadiul C
Corespunde stadiului final al infeciei cu HIV, SIDA. Pacientul va
prezenta:
- o scdere mare n greutate;
- febr persistent de etiologie neprecizat;
- infecii cu germeni oportuniti (bacteriene, virale, micotice);
- parazitoze;
- neoplasme i n stadiile tardive manifestri neurologice.
Forma grav de manifestare a encefalopatiei HIV este
demena asociat cu SIDA, ADC (AIDS dementia complex).
Manifestrile oportuniste apar cnd limfocitele T CD4 scad la 200-
50/mml
Diagnostic de laborator
Produsele patologice sunt: sngele total, mononuclearele sanguine,
plasm, ser, LCR, exudat din ulceraii, esut cerebral.
Examen direct
Detecteaz structuri specifice (virale) din aceste produse patologice.
1
- ARN genomic sau ADN-ul proviral prin PCR sau RT-PCR.
Izolare |i identificare
Izolarea
Prin cultivarea mononuclearelor din sngele periferic al bolnavilor
fie pe mononucleare normale, fie pe limfocite din cordonul ombilical.
Replicarea viral este detectat dup 7-14 zile de la infecie, urmrindu-se
efectul citopatic, sau prin RT- PCR.
Identificarea
- detectarea antigenelor virale cu ELISA, RIA,
- evidenierea prezenei ADN proviral prin PCR.
Diagnostic serologic
La unii subieci infectai poate s existe fereastra serologic care
este o perioad n care organismul nu reacioneaz prin formarea de

333
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie
anticorpi (de la expunerea la virus la seroconversie) ea poate s dureze ntre
6 sau 9 luni. Prin diagnosticul serologic se vor pune n eviden anticorpii
specifici. Se pot folosi mai multe reacii: teste de aglutinare,
latexaglutinare, coaglutinare, ELISA.
n cazul unei reacii ELISA negativ, se va ine cont de fereastra
serologie n care anticorpii nu sunt detectabili, deci impune repetarea
testului la in interval de 6-9 luni, iar reacia pozitiv impune repetarea ei
printr-o alt reacie. De obicei se folosete Westem-blot care evideniaz i
difereniaz anticorpii specifici fa de antigenee virale (componentele pot
fi separate i concentrate, testul este deosebit de specific).
Profilaxie
Profilaxie nespecific
Msuri generale prin stoparea transmiterii n primul rnd sexual i
parenteral:
- sex protejat,
- evitarea vagabondajului sexual,
- evitarea turismului sexual,
- prevenirea transmiterii prin abuz de droguri,
- prevenirea transmiterii perinatal,
- prevenirea prin transmitere prin transfuzii de snge,
- prevenirea prin transmitere profesional.
Profilaxie specific
Profilaxie activ - vaccinuri. Au fost experimentate mai multe tipuri
de vaccinuri de la vaccinuri coninnd virus ntreg pn la vaccinuri
subunitare, pn acum nu au fost obinute rezultate pozitive, dar unele
deschid perspective noi constituind o speran pentru viitor.
Tratament
Scopul este inhibiia direct a replicrii virale la diferite niveluri de
replicare i anume:
- ataarea virusului de celula int,
- fuziunea cu membrana celular,
- decapsidarea i ptrunderea intracitoplasmatic a ARN viral,
- reverstranscrierea ARN n ADN proviral,

334
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie
- acumularea ADN viral neintegrat n celul,
- migrarea ADN viral n nucleu i integrarea acestuia,
- transcrierea i translaia proteinelor,
- maturarea viral i nmugurirea.

Prionii

Sunt ageni infecioi de natur proteic (PrP), cu proprieti unice,


responsabili de inducerea unor afeciuni ale sistemului nervos central la om
i animale. Denumirea vine din englez proteinaceos infectious per tides,
Prionii sunt ageni infecioi complet lipsii de acizi nucleici. Aceste
particule infectante nu stimuleaz sinteza de anticorpi. Sunt de o sut de
ori mai mici dect cele mai mici virusuri.
Sunt foarte rezisteni la cldur, radiaii i substane chimice, dar
sensibili la aciunea tripsinei.
Nu conin acizi nucleici, dar se pot multiplica n interiorul
organismelor superioare. Produc boli neurodegenerative incurabile
denumite encefalopatii spongiforme transmisibile care prezint un spectru
larg de manifestri:
- demen, ataxie, insomnie, paraplegie, parestezii, comportament
anormal.
La examenul anatomopatologic al esutului nervos se constat:
diferite grade de atrofie, pierderi neuronale, vacuolizri

335
CatiopsiaFLOREA Bacteriologie i virusologie

pn la modificri spongiforme, plci de amiloid (protein fibrilar


insolubil).
Prezena plcilor de amiloid pune diagnosticul de certitudine.
Principalele afeciuni date prioni la om i animale sunt:
Tabel V Encefalopatii fransmisilile spongiforme
(preluat dup tratatul de Virusologie Medical,
E.S. Ciufecu 3003) \
La om La animale }j
- boala Kuru - scrabie (tramblanta oilor) \
- boala Creutzfeld-Jacob (BCJ) - encefalita transmisibil a nurcilor
- boala Gerstmann-Strussler- - encefalita spongiform bovin (boala vacii
Scheincker (BGSS) nebune)
- varianta Creutzfeld-Jacob (v. - encefalita degenerativ a felinelor (pisici
BCJ) domestice)
- insomnia fatal familial (IFF) ~ encefalopatia ungulatelor exotice (nyala i
antilopa african n captivitate),
- boala cronic caectizant a cervideelor.

336
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

BIBLIOGRAFIE SELECTIV

1. Aram V., Azoici D., Infecii cu herpesvirusuri, Editura Infomedica,


Bucureti 2002.
2. Blbie V.9 Pozsgi N., Bacteriologie Medical voi. 1 i II, Editura Medical
Bucureti 1984.
3. Bncescu G., Virusologie, Editura Cartea Universitar Bucureti 2005.
4. Bosgiraud-Aemip C., Microbologie Generale et snte, Editions ESKA,
France 2003.
5. Buiuc D., Microbologie Medical, Editura Didactic i Pedagogic
Bucureti 1992.
6. Cajal N., Tratat de Virusologie Medical voi. 1 Editura Medical 1990.
7. Ceauu E., Curs de boli infecioase, Editura Universitara Carol Davila
Bucureti 2003.
8. Cemescu C., Ru S., Curs concis de Virusologie, Editura Universitar
Carol Davila Bucureti 2003.
9. Ciufecu C., Alexandrescu V., Calistru P., Infecia gripal - Gripa;
Actualizri, Editura Naional Bucureti 2003.
10. Ciufecu E. S., Virusologie Medical, Editura Medical Naional 2003.
11. Cristea V., Crian M., Costin N.s Olinescu A., Imunologie clinic, Editura
Casa Crii de tiin Cluj, 1999.
12. Debeleac L., Popescu-Drnda M. C., Microbologie, Editura Medical AM
ALTE A Bucureti 2003.
13. Dimache Ghe., Panaitescu D., Microbologie i Parazitologie Medical,
Editura URANUS Bucureti 1994.
14. Florea C., Microbiologie. ndreptar de lucrri practice, Editura "Dunrea
de Jos Galai 2008.
15. Ghiduri i Standarde Internaionale n Laboratorul Clinic (CLSI) 2000.
16. Iancu L.S., Virusologie medical. Note de curs i lucrri practice pentru

337
Caliopsia FLOREA Bacteriologic i virusologie

medici rezideni. Editura GR. T. Popa lai


2004.
17. Israil A. M., Biologie Molecular, Editura Humanitas 2000.
18. Ivan A., Tratat de Epidemiologia Bolilor Transmisibile, Editura Polirom
Iai 2002.
19. Jehl F., M. Chomarat, M. Weber, Gerard A., De la antibiogram la
prescripiei a 2 a ediie, Editura tiinelor Medicale 2003.
20. Moreno E., Planells L, Prats G., et al., Comparative study of _
Escherichia coli. Diagn. Microbiol. Infect Dis. 53: 93-99.
2005.
21. Nester E. W., Roberts C. E., Pearssall N., Microbiology a _ Humann
Perspective, WCB/Mc Graw-Hill 1998.
22. Norme Specifice de protecie a muncii pentru activiti n domeniul sanitari
Nr. 85 din 2005.
23. Olinescu A., Panait M., Introducere n imunologiei Editura INFO Medica
Bucureti 2004.
24. Pasquier C., Bertagnoli S., Messud-Petit F., Izoped J., Virologie
humaine et animale, Ed. Dunod Paris 2005.
25. Popa M. I., Diagnosticul de laborator n microbiologie, Editura INFO
Medica Bucureti 2004.
26. Rebedea I., Boli infecioase,\ Editura Medical Bucureti
2000.
27. Revista Laborator Clinic i Tehnic Medical, Antibiograma automat
1997.
r
28. Revista Romn de Laborator Medical, anul II, Nr. 5, martie L 2007, Ordinul
Nr. 2 2007.
29. Schffler A., Altekriiger I., Microbiologie medical i imunologie,
Editura ALL 1994.
30. Sorensen R.L.L., Moore C.L. (2000). Antibody deficiency
syndrome. Pediatr. Clin. N. Am. 24: 252-253.
31. urcanu L., L. Mitrofan, Neonatologie, Editura Medical
Bucureti 1985.

338
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

32. Vassu T., Csutak O., Stoica 1., Muat F., Genetica
microorganismelor i inginerie genetic microbian. Editura Petrion
Bucureti 2001. j
33. Voiculescu M. i coiab., Boli Infectioase9 Editura Medical 1980
34. Voiculescu M. i coiab., BoliJnfecioase, Ediia a II-a, Editura
| Medical 1981.
j
i

i
i
j

339
n

i
k
Caliopsia FLOREA Bacteriologie i virusologie

List de abrevieri

AAV = virus adenoasociat


AD = ap distilat
ADN = acid dezoxiribonucleic
ADCC = antibody dependent cell cytotoxiciy-citotoxicitate dependent
de antocorpi Ac = anticorp Ag = antigen
AgHBc = antigenul de miez ("core) al VHB
AgHBe = antigenul e al VHB
AgHBs = antigenul de suprafa al VHB
ARN - acid ribonucleic
ARNm - ARN mesager
ARNr = ARN ribozomal
ARNt = ARN de transport
BSE = encefalopatie spongiform bovin
CHO = culturi de ovar de hamster
CID = coagulare intravascular diseminat
CIEF = contraimunoelectroforez
CMV = cytomegalovirus (virusul citomegalic)
CRP = proteina C reactiv
DD = dubl difuziune n gel
EBV = Ebstein-Barr virus - virusul Ebstein-Barr
ELISA - enzyme linked immunosorbent assay test cu enzime
legate de imunosorbeni
Fab = fragment de legare al Ig cu Ag
Fc = fragment cristalizabil al Ig
HA = hemaglutinin, hemaglutinare
HAD = hemadsorbie

341
Caliopsta FLOREA Bacteriologie i virusologie

~ HAI ~ hemaglutinoinhibare HAP =


hemaglutihare pasiv HIN = hidrazida
acidului izonicotinic
HIV = human imunodeficiency virus v. imunodefieienei umane IEF
= imunoeleetroforez _ i.d. = inoculare intradermica IF =
imunofiuorescen IFN = interferon Ig = imunoglobulin IL =
interieukin i.m. - inoculare intramuscular
IME imunomicroscopie electronic
i. peritoneal ~ inoculare intraperitoneal
IPV = vaccin antipolio inactivat LA = latex
aglutinare l.c.r. - lichid cefalorahidian M =
matrix (protein)
ME ~ microscopie electronic '
NA - neuraminidaz NK =
natural Mller
PCR =polymeraze chain reaction - reacie de amplificare genic, cu
ajutorul polimerazei
- PESS = panencefaita sclerozant subacut
RFC ~ reacie de fixare a complementului
RIA = radioimmunoassay radioimunoanaliz
RSN - reacie de seroneutralizare
, i
, SNC sistem nervos central \
I SPIEM ~ imunoelectromicroscopie n faz solid ^
SV40 - simian virus 40 Th - limfocite T helper
TNF tumor necrosis factor factor de necroz al tumorilor VHA -
f
v. hepatitei A VHB - v. hepatitei B

342
i
i
\
j
1 H

vi