VALIDACIN II

Una estrategia para validar un mtodo analtico.

Diseo experimental

Taller 5

Leonardo Merino
NATIONAL FOOD Science Department Swedish National Food Agency Santiago de Chile, Julio 2013
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Un Rompecabezas llamado Validacin

Sesgo/
Recuperacin Precisin Selectividad
intermedia

Incertidumbre
Linealidad
Robustez

Limite de Rango de
Repetibilidad
deteccin aplicacin

No existe un procedimiento nico de validacin aplicable a todas las circunstancias. Asi, diferentes
aplicaciones pueden exigir diferentes nfasis o prioridades.
De la misma manera que un rompecabezas puede ser descifrado an sin haberlo armado en su
totalidad, un estudio de validacin, tambien, an siendo parcial nos puede dar una cabal idea de la
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calidad del mtodo analtico en estudio.

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 Adecuado para el uso previsto
Fitness for purpose
Es la propiedad de los resultados producidos por un proceso de
medicin que permite al usuario de los resultados tomar una
decisin tcnicamente correcta para un propsito establecido.
Dos consideraciones deducidas de este principio :
1. La adecuacin a los fines exige suficiente, pero slo necesaria,
exactitud de los anlisis.
2. Los requerimientos cientficos y tcnicos pueden ser
restringidos por consideraciones econmicas.

El cumplimiento de este principio nos obliga a hacer un

manejo equilibrado e inteligente de los aspectos tcnicos y
NATIONAL FOOD econmicos de nuestro trabajo como analista.
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Como validar un mtodo analtico?

Defina los
requisitos Desarrollar/ Plan
analticos identificar mtodos experimental

Pasos importantes
previos a la validacin Realizar los
experimentos

Requisitos
cumplidos? Evaluar los datos
considerando si
Dictamen final
son adecuados al
de Validacin
uso previsto
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 Diseo experimental del estudio de validacin

Anlisis duplicado de muestras en grupos (das) diferentes.

Cada grupo de analsis incluye la determinacin de una curva de
calibracin y el anlisis duplicado de un mnimo de muestras de
ensayo, muestras fortificadas y materiales de referencia.
a) Soluciones de calibracin (incluyendo un blanco) (6)
b) Muestra-matriz original (2)
c) Muestra-matriz fortificadas (2-8)
d) Material de referencia (si hay disponible) (2)
Nmero total de anlisis en una jornada de trabajo (Grupo): 12-18

Nota 1: Relacin para calcular el nmero total de anlisis en el

estudio de validacin: m x n 10
m = nmero de grupos ;
n = nmero de repeticiones en cada grupo
NATIONAL FOOD Nota 2: Aadir 4 anlisis por cada matriz adicional
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Caractersticas de desempeo evaluadas del diseo experimental

Nmero de
Code Sample description Caractersticas de desempeo anlisis
0 5-6 soluciones patrn + Linealidad, LOD, LOQ, rango de 12
una muestra blanco aplicacin del mtodo analtico
1-2 Muestra original - [Co] Repetibilidad, precisin intermedia
2
e incertidumbre a [Co]
3-4 Muestra fortificada 1- [C1] Repetibilidad, precisin intermedia,
recuperacin e incertidumbre a [C1] 2
5-6 Muestra fortificada 2- [C2] Repetibilidad, precisin intermedia,
recuperacin e incertidumbre a [C2] 2
7-8 Muestra fortificada 3- [C3] Repetibilidad, precisin intermedia,
recuperacin e incertidumbre a [C3] 2
9-10 Material de referencia [Cx] Repetibilidad, precisin intermedia,
sesgo e incertidumbre a [Cx] 2
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 Simple y prctico?

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Principios bsicos para iniciar un estudio de validacin

Partir de los requerimientos del cliente para establecer los
requisitos que debe cumplir el mtodo.
Disear un plan de validacin.
El laboratorio debe tener clara comprensin de los
requerimientos exigidos al mtodo.
Disponer de un mtodo bien establecido y hacer una descripcin
detallada del procedimiento de aplicacin del mtodo en el
laboratorio.
Debe haber apropiados equipos calibrados, personal competente
para usar el mtodo y un ambiente de laboratorio apropiado. Las
condiciones durante la validacin, dentro de lo posible, deben
ser similares a las que se den durante el uso rutinario.
Debe haber apropiadas muestras de ensayo y materiales de
referencia que sean suficientemente estables y homogeneas.
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Magnusson B.,& rnemark, U. (2011). Metodvalidering-handbok fr laboratoriet

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 Preparacin prctica del estudio de validacin (a)
Lista de todos lo necesario para efectuar los anlisis:
- Reactivos qumicos
- Equipos Instrumentos (centrfugas, cromatgrafos, etc.)
Calibracin? Condiciones de funcionamiento?
Entrenamiento especial para los anlisis?
- Materiales y accesorios (filtros, columnas, etc)
Qu se tiene y qu se debe comprar? Dnde? Precios?
Preparacin de las muestras: extraccin, filtracin, separacin
Anlisis instrumental-capacidad. Alternativas.
Consideraciones de tiempo y espacio
Almacenamiento de las muestras y reactivos:
- estabilidad
- contaminacin
Impacto ambiental. Eliminacin de desechos txicos
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Preparacin prctica del estudio de validacin (b)

Muestras y estndares
Muestras que cubran el campo de aplicacin (matrices
y niveles de concentracin)
Muestras-matriz blancos
Materiales de Referencia y/o Materiales de referencia
Certificados.
Reactivos estndares del analito de interes

Identificar muestras de control de calidad

Origen de las muestras
Cantidad de muestra disponible
Estabilidad de las muestras
Cmo sern almacenadas y manipuladas las muestras?
NATIONAL FOOD Las condiciones experimentales deben estar bajo control!
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 Clculos usando una hoja de aplicacin
p en Excel (5)
Muestra:
Tabla I. Resultados experimentales
mg /L
Grupos
I II III IV V VI VII VIII IX X
Test 1
Test 2
Test 3
Test 4
Test 5
x

El xito de la validacin depende de la representatividad

y estabilidad de las muestras y de las condiciones
analticas establecidas a lo largo del estudio.
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Documentacin del mtodo

Dar objetiva evidencia de la utilidad del mtodo a traves de una
detallada descripcin de los procedimientos, resultados y
conclusiones del estudio de validacin.
1. Elaborar un plan o esquema de validacin.
2. Reportar los resultados del estudio de validacin con la
correspondiente evaluacin y discusin.
3. Dictaminar si el mtodo es adecuado para el uso previsto.
4. Establecer las bases para el control de calidad interno.
Aplicar las recomendaciones sobre el control de documentacin
establecidos en el sistema de calidad del laboratorio.
Un formato es dado en ISO 78-2:1999 (resumen, ttulo, advertencias y
precauciones de seguridad, aplicacin, referencias, normativas, definiciones,
principio, reactivos, equipos, muestreo y muestras, calibracin, QC, eventuales
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modificaciones, procedimiento, expresin de resultados).

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 Reportando el estudio de validacin (ejemplo)

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Resumen

La validacin es necesaria para producir y demostrar

resultados tiles
Todo mtodo utilizado debe ser validado/verificado
La validacin debe ser planificada con anticipacin

Considerar la ligazn entre los parmetros de interes al

momento de definir el diseo experimental a aplicarse
La validacin debe ser terminada con una clara decisin
acerca de la adecuacin para el uso previsto

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 Taller 5

Cada grupo deber elaborar el esbozo de un plan de validacin de un mtodo

analtico en uso en su laboratorio. Se recomienda tomar como gua el esquema
de plan de validacin repartido y el ejemplo dado.
Elegir una persona responsable de reportar las conclusiones del grupo a los
demas participantes.
Referencias
IUPAC Tech Report, Harmonized Guidelines for single-Laboratory validation of methods of
analysis. Pure Appl. Chem.- Vol 74, No. 5, 2002
Wilson, A.L. A Manual on Analytical Quality Control for the Water Industry. Water Research
Centre, 1989
Method Validation Course 0072. LGC limited. London, 2002
In-House Method Validation. A Guide for Chemical Laboratories. VAM. 2003. London
IUPAC Technical report (2002). Harmonized Guidelines for Single-Laboratory Validation of
Methods of Analysis.
Magnusson B. & rnemark, U. (2011). Metodvalidering-handbok fr laboratoriet. SP Rapport
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