OBJETIVOS GENERALES:

Reconocer la presencia de carbohidratos e identificar los tipos de carbohidratos mediante

diversas pruebas de utilidad bioqumica

OBJETIVOS ESPECFICOS:

Reconocer la presencia de carbohidratos en una muestra problema mediante la prueba de

Molish.

Diferenciar carbohidratos reductores de los no reductores por su comportamiento frente al

reactivo de Benedit.

Realizar ensayos cualitativos para el reconocimiento de carbohidratos especficos.

 CARBOHIDRATOS O GLUCIDOS

El termino carbohidratos significa hidratos de carbono o carbono de agua. Los glucidos son
biomoleculas formadas bsicamente por carbono-hidrogeno y oxigeno, en proporcin
aproximada de un tomo de carbono por dos de hidrogeno y uno de oxigeno. Los tomos de
carbono estn unidos a grupos alcohlicos (-OH), llamado tambin radical hidroxilo.
En todos los glucidos siempre hay un grupo carbonilo, es decir, un carbono unido a un oxigeno
mediante un doble enlace (C=O); el grupo carbonilo puede ser un grupo carbonilo, puede ser
un grupo aldehdo (-CHO) o un grupo cetonico (-CO-); por tanto los glucidos puede definirse
como un polihidroxialdheido o polihidroxicetona.
Entre el grupo de los carbohidratos se incluyen los azucares, almidn y glucosa: los
azucares y almidones sirven como fuente de energa para las celulas; la glucosa es el
componente estructural de las paredes de la clula vegetal.
A los carbohidratos que tienen una unidad de azcar se denominan monosacridos, a los
que tienen dos, disacridos, a los que tienen varias unidades polisacridos

1. MONOSACRIDOS: son glucidos sencillos, constituidos por una cadena que tiene de 3
a 7 tomos de carbono. segn el nmero de carbonos: (triosa, pentosas, etc).

2. DISACRIDOS: consiste en dos unidades de monosacridos (2 azucares) enlazada de

forma covalente entre si (enlace glucidico), (Ej.: lactosa, sacarosa y maltosa)

3. POLISACRIDOS: son los carbohidratos ms abundantes, estn formadas por la

unin de muchos monosacridos (entre 11 y miles) mediante enlace glucocidico
(Ej.: glicgeno y almidn).

Los carbohidratos son los compuestos orgnicos mas abundantes de la biosfera y a su vez los
mas diversos. Se encuentran en tejidos animales, sirven como fuente de energa para todas las
actividades celulares vitales.
Los carbohidratos aportan 4 Kcal/gramos y son considerados macro nutrientes energticos al
igual que las grasas, cumplen un rol importante en el metabolismo.
Monosacridos, oligosacaridos y poligosacaridos.
En la prctica se realizaran pruebas para su identificacin como lo son:

PRUEBA DE MOLISH: El acido sulfrico concentrado hidroliza los enlaces glucocidico

Para dar monosacridos que pueden ser luego deshidratados dando furfural y sus derivados.
Estos productos se combinan con el alfa- naftol sultanato, originando un compuesto
prpura, esta reaccin es general para todos los carbohidratos pero algunos otros compuestos
orgnicos dan tambin furfural con acido sulfrico concentrado.

PRUEBA DE BENEDIT: Es una modificacin de la prueba felhing, introducida por

Benedit en ella se usa nicamente una solucin; lo cual lo hace mucho mas simple con la
ventaja adicional de que el reactivo es mas estable que el de felhing (la dan solo las azucares
reductores).
PRUEBA DE SALLIWANOFF :Las cetosas se deshidratan mas rpidamente que las
aldhosas, dando derivados de furfurol que se condensan con resorcinol para formar un
complejo rosado, por lo tanto debe evitarse un calentamiento prolongado de la muestra que
se esta estudiando.
 PRUEBA DE BARFORD:El reactivo de barford es dbilmente acido y solamente puede
Ser un residuo de monosacridos.
Si se deja hervir por largo tiempo existe la posibilidad de hidrolizarlos disacridos dando as
reacciones falsamente positivos.
El precipitado de oxido cuproso es menos denso que los mtodos previos y se recomienda dejar
el tubo en reposo hasta que el precipitado precipite.

PRUEBA DE BIAL:Cuando se calientan las pentosas en acido clorhdrico concentrado se

Forma furfural que se condensa con orcinol en presencia de iones ferricos para dar un color
verde azulado.

PRUEBA PARA POLISACARIDOS: Los polisacridos contienen un grupo reductor por

varios cientos o ms residuos, as que en la prctica no son reductores. La hidrlisis acida
libera los monosacridos constituyentes que luego son ensayados.

PRUEBA PARA SACAROSA: La sacarosa es el nico disacrido comn no reductor y

por lo tanto no reduce las soluciones alcalinas de cobre. Esta es hidrolizada en solucin
acida y luego se ensaya la glucosa y la fructosa

MATERIALES Y REACTIVOS

Reactivo de molish
Acido sulfrico concentrado
Reactivo de Benedit
Reactivo de Barford
Reactivo bial
Alcohol Amilico
Reactivo de Salliwanoff
Acido clorhdrico concentrado
Hidrxido de sodio
Soluciones de yodo
Soluciones de:
Glucosa
Galactosa
Fructosa
Ribosa
Arabionosa
Sacarosa
Lactosa
Almidn
Leche

NORMAS DE BIOSEGURIDAD PARA LOS REACTIVOS:

ACIDO CLORHIDRICO:
Irrita las vas respiratorias
Provoca quemaduras graves
 ACIDO SULFURICO:
Produce graves quemaduras
En contacto con los ojos lavar inmediatamente
Nunca verter el agua con este producto
Corrosivo

HIDROXIDO DE SODIO:
Produce quemaduras graves
En caso de contacto con los ojos, lavar inmediatamente con agua y acudir al medico.
Usar guantes de proteccin adecuada y apropiadas.
Cubrirse los ojos y la cara.

SOLUCION DE YODO:
Nocivo por inhalacin y en contacto con la piel.
No respirar los gases, vaporar, aerosoles y evitar el contacto con los ojos

PROCEDIMIENTO

PRUEBA DE MOLISH

5 gotas de reactivo de molish AGREGAR 1 ml de leche

Por las paredes del tubo 1 ml de acido sulfrico

AADIR

Formacin de capas OBSERVAR Cambio de color

PRUEBA DE BENEDICT

TOMAR 3 tubos

AGREGAR Tubo 1: 0.5 ml de lactosa

Tubo 2: 0.5 ml de glucosa
Tubo 3: 0.5 ml de sacarosa

ADICIONAR 0.5 ml de reactivo de

Benedit

COLOCAR Los 3 tubos al bao

Maria

OBSERVAR

PRUEBA DE BARFOED

TOMAR 3 tubos

ADICIONAR Tubo 1: 0.5 ml de galactosa

Tubo 2: 0.5 ml de ribosa
Tubo 3: 0.5 ml de almidn

1ml de reactivo de
AGREGAR Barford

HERVIR Por 2 Minutos

REPOSAR

OBSERVAR Precipitado rojo ladrillo

 PRUEBA PARA POLISACARIDOS

En un tubo 1ml de
COLOCAR solucin de almidn
1 gota de s/n de yodo

AADIR

OBSERVAR

Bao Maria
CALENTAR

ENFRIAR

OBSERVAR

PRUEBA DE BIAL

3 tubos
TOMAR

ADICIONAR Tubo 1: 0.5 ml de ribosa

Tubo 2: 0.5 ml de arabinosa
Tubo 3: 0.5 ml de almidn

0.5 ml de reactivo
AGREGAR de Bicel

CALENTAR Hasta hervir

ENFRIAR

AADIR 1 ml de alcohol amilico

AGITAR

OBSERVAR
 PRUEBA DE SALLIWANOFF

TOMAR 3 tubos

ADICIONAR Tubo 1: 0.5 ml de fructosa

Tubo 2: 0.5 ml de arabinosa
Tubo 3: 0.5 ml de glucosa

1ml de reactivo de
AGREGAR salliwanoff

CALENTAR En bao Maria hirviendo

OBSERVAR

PRUEBA DE SACAROSA

2.5 ml de sacarosa TOMAR 3 gotas de acido clorhdrico

Bao de agua hirviendo

CALENTAR

ENFRIAR

AGREGAR NaOH al 1M

S/N hidrolizada DIVIDIR 2 porciones

Por separado REALIZAR Benedit y salliwanoff

 RESULTADOS

1. PRUEBA DE MOLISH

OBSERVAR

TUBO 1 TUBO 1

2. PRUEBA DE BENEDICT

OBSERVAR

TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3 TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3

3. PRUEBA DE BARFOED

TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3

 OBSERVAR

TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3

4. PRUEBA PARA POLISACARIDOS

OBSERVAR

TUBO 1 TUBO 1

5. PRUEBA DE BIAL

TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3

ENFRIA AGITAR
R

TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3 TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3

6. PRUEBA DE SALLIWANOFF

TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3

OBSERVAR

TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3

 7. PRUEBA DE SACAROSA

ENFRIAR

TUBO 1

BENEDIT

DIVIDIR PORCION 1

SALLIWANOFF

PORCION 2
 TABLA DE RESULTADOS PRUEBA DE MOLISH
Tubo Sustancia Reactivo Resultados Observaciones
Se formaron 3 1. la reaccin fue
1 ml de H2SO4 capas rpida.
1 ml de leche 1. Coagulo de
1 reactivo de leche 2. se presento calor.
Molish 2. Capa prpura
3. Capa 3. anillo de color
transparente prpura.

TABLA DE RESULTADOS PRUEBA DE BENEDIT

Tubo Sustancia Reactivo Bao de Resultado Observaciones

H2O
1 ml de 1 ml de Hirviendo positiva cambio de color azul
1 lactosa Benedit por 3 a naranja rojizo
min.
1 ml de 1 ml de Hirviendo positiva cambio de color azul
2 glucosa Benedit por 3 a rojo ladrillo
min.
1 ml de 1 ml de Hirviendo positiva no hubo cambio de
3 sacarosa Benedit por 3 color
min.

TABLA DE RESULTADOS PRUEBA DE SALLIWANOFF

Tubo Sustancia Reactivo Temperatura Resultado Observaciones

1 1ml 2ml Hirviendo por 1 positivo Se torno de un

fructuosa salliwanoff minuto color rosado
leve
2 1ml 2ml Hirviendo por 1 positivo Se torno de un
arabinosa salliwanoff minuto color rosado
leve
3 1ml 2ml Hirviendo por 1 negativo no cambio de
glucosa salliwanoff minuto color

TABLA DE RESULTADOS PRUEVA BIAL

Tubo Sustancia Reactivo Temperatura Resultado Observaciones
Reactivo de Cambio de rojo
1 Arabinosa Bial. Hasta hervir Positivo a azul verdoso
leve por
alcohol presencia de
amilico pentosas
Reactivo de La s/n no
Bial. adquiri ningn
2 Almidn Hasta hervir Negativo color luego de
alcohol agregar los
amilico reactivos y
hervirlo
 TABLA DE RESULTADOS PRUEBA DE BARFOED
Tubo Sustancia Reactivo Temperatura Resultado Observaciones
0.5 ml de 1 ml de 2 minutos Hervir Positivo Se formo
1 galactosa Barfoed precipitado rojo
ladrillo
0.5 ml de 1 ml de 2 minutos Hervir ---------- -----------
2 ribosa Barfoed

0.5 ml de 1 ml de 2 minutos Hervir negativo No cambio de

3 almidn Barfoed color

TABLA DE RESULTADOS PRUEBA PARA POLISACARIDOS

Tubo Sustancia Reactivo Temperatura Resultado Observaciones
Se observo
color
prpura al
agregar
1 Almidn Gotas de s/n Calentar Positivo lugol
de yodo Al calentar
amarillo
Al enfriar
prpura

TABLA DE RESULTADOS PARA SACAROSA

Tubo Sustancia Reactivo Resultado PH Observaciones
Sacarosa, Cambio de azul
1 HCL, Benedit Positivo 11 a naranja rojizo
NaOH
Sacarosa, Cambio a
2 HCL, salliwanoff positivo 11 naranja
NaOH

ANALISIS DE RESULTADOS

1. PRUEBA DE MOLISH:
Al agregarle el reactivo tomo una coloracin rojiza por un momento, pero al agregarle el acido
sulfrico inmediatamente torno un anillo violeta permitiendo identificar de esta forma la
presencia de carbohidratos. La parte superior de la solucin se condenso y se torno espesa.

2. PRUEBA DE BENEDIT:
Esta prueba es til para la identificacin de azucares reductores y no reductores utilizando,
reactivo de Benedit, calentar, para observar un resultado positivo, si es reductor (rojo ladrillo) o
negativo (no hay cambio).
LACTOSA: Al practicar la prueba de Benedit con la lactosa, se pudo notar que la s/n tomo
una coloracin verde pero manteniendo la presencia de un precipitado de color rojo
 ladrillo, indicativo de que la prueba da positiva y por tanto hay presencia de azcar
reductor (carbohidratos).

GLUCOSA: Aqu tambin encontramos la presencia de azcar reductor ya que redujo la

solucin de cobre a oxido cuproso dando como resultado un color rojo ladrillo, que indica
que la prueba es positiva para azcar reductor

SACAROSA: A diferencia de los procedimientos anteriores, la prueba dio negativa al

tomar la coloracin verde, pero sin presentar precipitado de ningn tipo, con lo que
concluimos que no es un azcar reductor.

3. PRUEBA DE BARFOED:
La prueba de barfoed se realiza para identificar la presencia de monosacridos, ya que el
reactivo de barfoed tiene Cu
Se nota la formacin de precipitado al dejar la prueba en reposo como ocurri al realizar la
prctica con la solucin de galactosa, la cual dio positivo y cuya caracterstica principal fue la
coloracin azul cielo con precipitado rojo ladrillo, lo cual indica que es un monosacrido
(reduce este reactivo que es dbilmente acido) y con el almidn la prueba dio un resultado
negativo sin precipitado.

4. PRUEBA DE SALLIWANOFF:
En esta prueba pudimos observar que la nica solucin que dio positiva fue la de fructosa
puesto que esta pertenece al grupo de las cetosas dando una coloracin rosada.

5. PRUEBA PARA LA SACAROSA:

La sacarosa es deshidratada de lo cual resulta la glucosa y la fructosa, lo cual es confirmado
por las siguientes pruebas:
Se tomaron 2 porciones, a una se le hizo la prueba de Benedit y a la segunda porcin se le hizo
la prueba de salliwanoff dando como resultado de este procedimiento:
La prueba de Benedit positiva ya que tomo una coloracin naranja y con el reactivo de
salliwanoff hubo cambio de color indicndonos una prueba positiva

6. PRUEBA PARA POLISACARIDOS:

Al agregarle la solucin yodada al almidn este se torno amarillo con sedimento de color
oscuro que al agitarse sube pero no se disuelve, luego de calentarlo notamos que por el efecto
del calor el precipitado se disuelve, tomando as la solucin un color oscuro, demostrando de
esta manera que el almidn es un polisacrido no reductor.

7. PRUEBA DE BIAL:
Al realizar la prueba de Bial para la arabinosa se presento un cambio de color de rojo a azul
verdoso lo que indica la presencia de pentosa ya que forma un furfurol que se condensa con el
reactivo, en presencia de un Ion frrico mientras que para el almidn no hubo cambio de color,
indicando una prueba negativa.
 CUESTIONARIO

1. Escriba cada una de las reacciones en las diferentes pruebas para carbohidratos.

1. PRUEBA DE MOLISH

CH2OH CH2OH CH2OH CH2OH

H2SO4 OH

OH OH OH OH
OH OH OH OH OH OH OH OH
OH
CH2OH
3 H2O 2 H2O
COMPLEJO
C PURPURA
+H2SO4 +H2SO4
OH OH H
OH OH

2. PRUEBA DE BENEDIT:

CH2OH CH2OH CHO CHO

CU2+

+
OH -OH
OH OH OH OH OH OH OH OH
OH OH
CH2OH CHO
CU2+ Glucosa
CU2O PARDO
ROJIZO
-OH OH OH + CO2O
OH OH
OH OH OH OH

3. PRUEBA DE BARFOED:

CH2OH CH2OH
OH OH
+ Cu2O
H H + (CH3COO)2Cu H H
OH OH
H H
OH OH OH OH

CHO CH
+ (CH3COO)2Cu Cu2O
+

4. PRUEBA DE SALLIWANOFF:
 OH
HCL
CH2OH
OH C C + Fructosa producto
de condensacin
H H (Rojo)
H CH2OH HIDROXIBUTIL OH
FORFORAL RESORCINOL
CH2OH HCL CH2OH

OH H
CH2OH
OH
OH CH OH OH H OH OH
OH

C C + Producto condensado de color negro

CH2OH
H H

OH

PRUEBA DE SACAROSA:

CH2OH CH2OH
HOH2C CH2OH

+ HCL +

O
OH OH

HCH2O CH2OH

PRUEBA PARA POLISACARIDOS

CH2OH CH2OH

Amilasa
incolora
HOH

I2 + I - I3-
Amarillo oscuro
Con
sedimento I3-

Amilasa desorganizada

Azul intenso

2. Explique los resultados de cada una de las pruebas realizadas.

VER ANALISIS DE RESULTADOS

3. Explique estructuralmente por que la maltosa es un azcar reductor y por que el almidn no
lo es.

RTA// la maltosa es un azcar reductor porque la primera D-GLUCOSA posee un grupo

aldehdo potencial libre.

CH2OH CH2OH
H

H OH H OH Grupo reductor

OH OH
H
OH OH H

Enlace (1-4) D-GLUCOSA

El almidn es un polisacrido que esta compuesto por monosacridos de glucosa unidos entre
si por enlaces glucosidicos que comprometen el carbono anomerico y no dejan que un agente
oxidante las reduzca.

CH2OH CH2OH CH2OH

H H H n...
OH OH OH
OH
OH H OH H OH H

4. Consulte las enfermedades producidas por el metabolismo de los carbohidratos:

GLUCOSURIA: conocida como percusin de glucosa en la orina, puede ser consecuencia de
una concentracin excesiva de azcar en la sangre o de un efecto de su reabsorcin a nivel del
tubo renal, se mide aproximadamente mediante el mtodo de Benedit y de un mtodo mas
preciso que es el de glucosa oxidada.

DIABETES MELLITUS: resultado de deficiencia de la hormona insulina que dificulta la

entrada de glucosa de las celulas y provocan con ella una elevacin de la glucosa sangunea la
hiperglicemia de la diabetes mellitus se debe a:
1. Perdida del transporte de la glucosa a las celulas debido a la insuficiencia de insulina
2. elevada velocidad de la glucognesis porque la insulina no controla la accin del glucagon

5. por que la celulosa a pesar de estar formado por molculas de glucosa es insoluble en agua?

La celulosa, el otro polmero importante de las plantas cumple trabajos funcionales en vez de
nutritivos, este es un polmero no ramificado, formado por los residuos de la glucosa unida por
los enlaces B-14, la configuracin B permite que la celulosa forme cadenas muy largas y
rectilneas, las fibrillas estn formadas por cadenas paralelas que interaccionan una con otra
por medio de puentes de hidrgenos. Los enlaces alfa 1-4 del glicgeno y del almidn
producen una arquitectura molecular muy diferente de las que presentan las celulas, estas
diferencias entre los enlaces y alfa tiene importantes consecuencias biolgicas.
La cadena recta formada por enlaces resulta optima para la construccin de fibras con
elevada fuerza tensil.
Esta es la razn por la cual es importante su solubilidad en H2O, ya que es difcil recuperar los
enlaces y por consiguiente su solubilidad en agua es algo imposible.

6. por que la sacarosa es un azcar no reductor. Consulte las posibles estructuras de las
muestras problemas:

La SACAROSA es un no reductor ya que esta resulta de la unin de glucosa + fructosa, no

quedando ningn grupo aldehdo, ni cetona libre lo que no permite que se desvi al plano de
los polarizados por eso no tiene poder rotatorio.

Estructuras de las muestras:

GLUCOSA: FRUCTOSA

CH2OH H2OH CH2OH

OH OH

OH
OH OH
OH OH

ALFA-D-SACAROSA

CH2OH
H2OH CH2OH
OH OH

OH OH
OH

7. consulta el fundamento de otras pruebas usadas para la determinacin de glucosa en el

laboratorio.
Biosensor de glucosa
Cromatografa
Cromatografa de reparto
Cromatografa de absorcin
Cromatografa de afinidad
Prueba de tamizaje para carbohidratos
Muco polisacridos
Cromatografa de carbohidratos
Albumina leda
Reaccin de la antrona: es una prueba general para carbohidratos; el fundamento es el
mismo que el de molish, solo que el furfurol reacciona con antrona (1-0-ceto-1,10-
dihidroxiantraceno), forma un complejo azul verdoso.
 Mtodo de la ortotoludina: se basa en la condensacin de azucares reductores con la
ortotoludina en un medio de acido actico glacial. Produciendo un cromgeno. Esto trata de
un mtodo en desuso, porque utiliza corrosivos y como la ortotoludina no se puede
atomizar esta es potencialmente cancerigena.

SUGERENCIAS
Nuestro grupo propone que tanto la teora como el laboratorio deben ir acorde y no uno ms
adelantado que otro, ya que es difcil comprender la prctica sin ni siquiera saber o tener una
base acerca el tema, lo cual se logra en la teora
.

CONCLUSIONES

De la anterior prctica podemos concluir que los carbohidratos son molculas muy complejas
e importantes en el metabolismo corporal y en la realizacin de las actividades vitales.
Que existen distintas clases de carbohidratos tales como monosacridos, disacridos y
polisacridos y se pueden identificar en muestras a travs de distintas pruebas especificas para
ello, como la prueba de molish, se pueden distinguir entre reductores y no reductores, y que
gracias a estas pruebas se pueden diagnosticar diferentes patologas que son ocasionadas por el
mal metabolismo de los carbohidratos.

BIBLIOGRAFIA
Macarulla, Jos, Bioqumica Humana Edit, reverte S.A segunda edicin Barcelona 1994
PLUMER DT, introduccin a la bioqumica practica, Mxico. Magraw-Hill
latinoamericana S.A
LOPEZ Y ANZOLA, c. guas del laboratorio de bioqumica, facultad universidad nacional,
santa fe de bogota.