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- PRESENTACIN
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pura como reactivo analtico (R.A.), ha consultado las estructuras qumicas
correspondientes, tambin sus propiedades qumicas, propiedades que ha
corroborado mediante la experimentacin en el laboratorio, pero adems, a esas
mismas molculas las ha aislado de sus fuentes naturales, las ha identificado
como ya se ha dicho y algo mas, las podr haber cuantificado y reportado usando
las unidades de concentracin adecuadas.
Por otro lado, el estudiante tambin sabr acerca del metabolismo de los
organismos, sntesis y degradacin de compuestos, la accin de las enzimas, as
como la medicin de procesos fisiolgicos como la respiracin , todo ello haciendo
uso de las metodologas de la qumica analtica clsica o cuando as se requiera,
usando mtodos instrumentales como la espectrofotometra, cromatografa,
refractometra, polarimetra,
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REGLAMENTO PARA EL USO DE LABORATORIOS
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DEPARTAMENTO DE PARASITOLOGA AGRCOLA
PROGRAMA DE PRCTICAS DE LABORATORIO DE BIOQUMICA
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PRCTICA 1
INTRODUCCIN
OBJETIVO
Dar a conocer al alumno el material de vidrio volumtrico y equipo
gravimtrico.
Que el alumno conozca el uso correcto del material volumtrico,
gravimtrico y en general del laboratorio.
Revisar los conceptos tericos y clculos para preparar soluciones molares,
normales, porcentuales, partes por milln, muy usadas en el laboratorio y
en el campo profesional.
Encontrar experimentalmente el volumen que ocupa una gota ideal
volumtrica.
Presentar ejercicios para realizacin de clculos gravimtricos.
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instrumento, normalmente se utiliza para preparar soluciones y/o diluciones de
concentracin exactamente conocidas.
Pipeta: Instrumento cilndrico de vidrio que se emplea para medir con mayor
exactitud, pueden estar graduados en mL, en sus fracciones o son volumtricos,
es decir, en estos ltimos solamente se puede medir la cantidad total en mL ya
que no tienen graduacin en fracciones de mL..
Existen diversos materiales, en esta ocasin, para esta la primera prctica, solo
incluimos los que se van a utilizar para demostracin.
Gramos por litro (g/L). Indica la masa en gramos disuelta en cada litro de
disolucin. Tiene la ventaja de ser una concentracin expresada en unidades
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directamente medibles para el tipo de disoluciones ms frecuentes en qumica (las
de slidos en lquidos). La balanza expresa la medida de la masa de soluto en
gramos y los recipientes de uso habitual en qumica indican el volumen de lquido
contenido en litros de solucin o en sus submltiplos. Su clculo inmediato es:
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N de g de soluto (ejemplo 4.5 g de NaCl / 100 mL de disolucin
total en agua destilada) = 4.5 % p/v
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MATERIALES Y REACTIVOS
Soporte universal
Pinzas para soporte universal.
Bureta de 25 o 50 mL.
Matraz Erlenmeyer de 250 mL.
Pipeta volumtrica de varias capacidades.
Pipeta graduada de varias capacidades.
Matraces aforados.
Balanza analtica.
Balanza granataria.
Vaso de precipitados.
Agua destilada.
EXPERIMENTO 1
Disear experimento para que usando diferentes equipos volumtricos, se
encuentre el volumen en mL de una gota ideal volumtrica.
Para obtener resultados llenar esta tabla de frecuencia.
Volumen de
gota ideal,
Equipo mL/gota, esto
Muestra mL No. de gotas mL/ gota
volumtrico por la
tendencia
observada.
Pipeta
graduada 5 mL
Pipeta
graduada 10
mL
Pipeta vol. 1 mL
Pipeta vol. 5 mL
Bureta de 25
mL
PROMEDIO mL / gota.
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EXPERIMENTO 2
Ensayar pesada en la balanza analtica y granataria, esto con ayuda del
instructor, anotando como resultado, la secuencia para su uso correcto y obtener
la pesada.
Adicionalmente revisar bibliogrficamente, el uso correcto, la instalacin de una
balanza analtica y reportar qu mide, as como el fundamento terico de la
medicin.
RESULTADOS
1. Dar una clasificacin del material utilizado en el laboratorio, sealando
caractersticas y uso.
2. Reportar los aspectos sealados en el experimento 1 y 2.
3. Definir peso molecular, solucin molar, peso equivalente y solucin normal.
4. Reportar el peso molecular de los siguientes compuestos y proponer otros
cinco.
a) cido sulfrico
b) Hidrxido de sodio
c) HCl
d) Na2CO3
e) KHC8H4O4
5. Reportar el peso equivalente (g) de los siguientes compuestos y sealar
otros cinco.
Ejemplo: H2SO4 cido Sulfrico P.E. = 98g / 2 = 49 g.
a) NaOH
b) (NH4)2SO4
c) HCl
d) Na2CO3
e) KNO3
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c) 1.5L de NaOH a 0.1N, los datos de este Reactivo Analtico, ya estn en
el problema (b). Cuantos g del hidrxido de sodio R.A. se necesita
pesar para esta solucin?.
d) 1.5L de HCl 0.1N, este R.A. est a 37 % p/p de pureza, su densidad es
1.19 g/mL. Cuantos mL debe medirse de este reactivo para la
preparacin ?
e) 1.5L de H3BO3 al 4 % p/v, la pureza de este reactivo es 99.5 % p/p,
Cuntos g del R.A. se pesar para esta solucin?.
f) Define qu es una solucin que contiene 30 ppm p/v, o p/p de
CaCO3?.
g) Define Cuantos g habr de NaCl puro, en 500 L de una solucin que
contenga 2.5 % p/v ?
h) Reporta la bibliografa consultada.
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PRCTICA 2
INTRODUCCIN
Una solucin que contiene a una temperatura dada tanto soluto como puede
disolver se dice que es saturada, cualquier solucin que tiene una cantidad mayor
se llama sobresaturada, este ltimo tipo de solucin existe nicamente en
deficiencia de solvente y es sumamente inestable, pues la simple agitacin de una
diminuta cantidad de soluto basta siempre para provocar la precipitacin del
exceso de este.
OBJETIVO
Preparar soluciones de concentracin requerida, a partir de
especificaciones de reactivos de alta pureza.
Valorar una solucin cida (HCl 0.1N) por medio de titulacin, aplicando el
principio de equivalencia y empleando una solucin Tipo o Estndar de
compuesto tipo primario.
Titular una solucin alcalina (NaOH 0.1N) a partir de una solucin Tipo o
Estndar de compuesto tipo primario.
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MATERIAL Y REACTIVOS
Fenolftalena solucin indicadora
1 Soporte universal
Na2CO3 R.A.
1 Matraz aforado de 100 mL
KHC8H4O4 R.A.(Biftalato de
2 Matraces Erlenmeyer de 250 mL
potasio a peso cte.), revisar
1 Vaso de precipitado de 250 mL
pureza.
1 Bureta de 25 50 mL
1 Pipeta graduada de 10 mL
Rojo de metilo sol. indicador.
HCl R.A., d= 1.19 g/mL, pureza
37 % p/p,
NaOH R.A., pureza 99.5 %
PROCEDIMIENTO
Titulacin de las soluciones aproximadamente 0.1N de NaOH.
La bureta debe estar limpia y seca, posteriormente se mantiene en posicin
vertical con ayuda de un soporte universal (o pie universal) con la llave cerrada
(posicin horizontal) y se vierte en ella unos cinco mL de la solucin que se va a
emplear para su titulacin (NaOH patrn). Se gira la bureta en posicin horizontal
de modo que moje toda la superficie interior de la bureta, luego se desecha la
solucin de enjuague abriendo (posicin vertical) la llave de la bureta para eliminar
esa solucin empleada. Este proceso se llama ambientar la bureta. Esto se realiza
para eliminar los posibles residuos de agua que podra contener la bureta lo que
traera como consecuencia un cambio en la concentracin de NaOH patrn lo que
alterara los resultados verdaderos de clculos de la titulacin.
Posteriormente se llena la bureta con la solucin (NaOH patrn) sobrepasando la
marca cero de aforo; la marca cero (se encuentra en la parte superior de la
bureta). Se elimina un volumen de disolucin (NaOH patrn) que se agreg a la
bureta, de modo que la parte inferior del menisco coincida con el comienzo de la
graduacin, es decir la marca cero. La punta inferior de la bureta debe quedar
totalmente llena de disolucin. Se debe tener la precaucin de que no se formen
burbujas en la punta de la bureta; de ser as, se debe abrir la llave y dejar caer un
volumen de disolucin hasta eliminar las burbujas y se vuelve a aforar.
La vlvula de la bureta debe de quedar graduada de tal forma que vierta una gota
despus de otra (se distinga cada una). Ya aforada la bureta con la solucin de
NaOH a valorar, se agrega entonces la solucin gota a gota a 10 mL de solucin
exactamente 0.1N de cido patrn o estndar tipo primario contenido en un
matraz Erlenmeyer que adems contiene 50 mL de agua destilada y una a dos
gotas de solucin indicadora de fenolftalena. El matraz erlenmeyer se coloca
sobre una superficie blanca para poder observar la aparicin (vire) de color rosa el
cual debe persistir al menos 30 segundos, lo que significa que el volumen gastado
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y anotado de la solucin de sosa, contiene los mili equivalentes de los 10 mL
del patrn primario usado.
Cada vez que se agrega un volumen de solucin desde la bureta, se debe agitar el
matraz con una mano o con un magneto especial para uso en parrillas con
agitador elctrico, para permitir que las sustancias reaccionen y poder identificar
con el menor error el punto final de la reaccin. Con la otra mano se controla la
vlvula de la bureta.
La titulacin se repite tres veces como mnimo cuando los datos se han
reproducido.
Para el clculo de la normalidad de la solucin de hidrxido de sodio, usar la
ecuacin de los volmenes equivalentes, esto para cuando se usa el patrn
primario en solucin exactamente 0.1N que tambin deber haberse calculado y
preparado correctamente.
Nsosa Vsosa= Nprimario Vprimario
Posterior a las titulaciones repetidas, se conocern tres datos de la ecuacin por lo
que se despeja Nsosa, se sustituyen los datos en la ecuacin y se calcula el valor
resultante promediando las tres de repeticiones.
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PRCTICA 3
CIDO CTRICO
El ciclo del cido ctrico, considerado el centro del metabolismo, consiste en
reacciones enzimticas, todas ellas mitocondriales, en los eucariontes del ciclo del
cido ctrico es la va central del metabolismo aerobio, es la va oxidativa final en
el catabolismo de los carbohidratos, cidos grasos y aminocidos, adems es una
fuente importante de intermediarios de las molculas biosintticas. En muchas
clulas la accin acoplada del ciclo de cido ctrico y la cadena de transporte de
electrones son responsables de la mayora de la energa producida.
El ciclo de Krebs, es la ruta central comn para la degradacin de los restos
acetilo (de los tomos de C) que derivan de los glcidos, cidos grasos,
aminocidos. Es una ruta universal, catalizada por un sistema multienzimtico
que acepta los grupos acetilo de acetil-Co A como combustible, degradndolo
hasta CO2 y tomos de H, que son conducidos hasta el O 2 que se reduce para
formar H2O (en la cadena de transporte de electrones). El trabajo acoplado del
ciclo del cido ctrico y la cadena de transporte de electrones es la mayor fuente
de energa metablica.
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Fig 1. Ciclo de Krebs
OBJETIVO(S)
MATERIALES Y REACTIVOS
Matraz Erlenmeyer de 250mL
Coladera de plstico
Algodn o tela filtrante
Centrfuga con tubos y camisas metlicas para los tubos.
1 pipeta de 10 mL
1 probeta de 50 mL
1 matraz aforado de 500 mL (solo uno para todo el grupo)
1 vaso de pp. de 200 mL
1 soporte universal
1 bureta de 25 mL
Hidrxido de sodio 0.1N o de la normalidad exacta que haya resultado.
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Fenolftalena solucin como indicador
Jugo o extracto filtrado de cualquier fruta (naranja, toronja, uva, etc.)
PROCEDIMIENTO
Extraer el jugo de la fruta (o muestra representativa de unos 40 a 60 mL), colar y/o
filtrar para eliminar completamente los slidos suspendidos, si es necesario
centrifugar por 10 min y 3000 rpm, medir una alcuota de 50 mL, aforar con agua
destilada a 500 mL en un matraz aforado. Se procede a tomar una alcuota de 10
mL y se colocan en un matraz Erlenmeyer de con 40 mL de H2O destilada
recientemente hervida, ms una agota del indicador de fenolftalena para la
valoracin.
RESULTADOS
Clculo:
La concentracin porcentual de acidez, se calcula de la siguiente manera:
Donde:
N= Normalidad de hidrxido de sodio.
V= Gasto de NaOH 0.1 N en mL.
P meq= peso en mili equivalentes gramo del cido ctrico = 0.0713.
D= Dilucin (500/50).
A=volumen en mL utilizados del diluido para la valoracin o gramos de
muestra valorados.
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Reporta todos los clculos realizados de manera secuencial.
Reportar los resultados como g de cido ctrico/100 mL de jugo filtrado.
Reportar la reaccin qumica utilizada para la valoracin
Reportar qu otros cidos orgnicos existen en diferentes frutas como
pltanos, manzanas, en el yogurt, en el vinagre, y en los productos
metablicos de los ciclos bioqumicos.
Reportar bibliografa referente a la concentracin de acidez en los
diferentes productos trabajados en la prctica, as como los citados como
cuestionario.
Bioqumica fundamental.
Eric E. Conn y Stuphf.
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PRCTICA No 4
Casi todo, el hidrgeno del agua tiene una masa atmica de 1.00797. El qumico
estadounidense Harol Clayton Urey descubri en 1932 la presencia en el agua de
una pequea cantidad (1 parte por 6.000) de lo que se denomina agua pesada u
xido de deuterio D2O; el estadounidense Ariatid Grosse descubri que el agua
existente en la naturaleza contienen tambin cantidades mnimas de xido de tritio
(T2O); el tritio es el istopo del hidrgeno con masa atmica de 3.
Donde:
Debido a que los iones H+ se asocian con las molculas de agua para formar
iones hidronio, H3O+, el pH tambin se expresa a menudo en trminos de
concentracin de iones hidronio.
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midiendo el potencial elctrico que se origina en ciertos electrodos especiales
sumergidos en la disolucin.
SOLUCIONES AMORTIGUADORAS
Solucin tampn, solucin Buffer o solucin amortiguadora, es una solucin que
contiene sustancias que inhiben los cambios de pH o concentracin de Ion
hidrgeno de la disolucin. Como ejemplo de dichas sustancias se puede
mencionar una solucin en que se encuentra mezcladas cido actico y acetato
de sodio en alguna proporcin.
OBJETIVO
Que el alumno reconozca in vitro, el efecto amortiguador a los cambios de pH
cuando existe presencia de una mezcla de un cido dbil no disociado y su base
conjugada, esto cuando llega al ambiente amortiguador en cantidades no
catastrficas, algn agente de carcter cido o alcalino.
MATERIALES Y REACTIVOS
1 vaso de pp. 500mL.
1 vaso de pp. 250mL.
1 probeta de 500 mL.
1 agitador de vidrio
2 pipetas de 5 mL.
1 pH-metro
cido Actico 0.1M
cido Fosfrico 0.1M
Hidrxido de sodio 0.1M
PROCEDIMIENTO
En un vaso de precipitado verter 50 mL de H3PO4 0.1M medir el pH con un
potencimetro previamente calibrado a pH 7, enseguida aadir 5mL de NaOH
0.1M homogeneizar con la varilla de vidrio la muestra y volver a medir pH, repetir
colocando adiciones de 5mL de NaOH 0.1M y leer pH, esto se realiza hasta
observar que el pH ha variado de manera abrupta a un valor alto de 10 o ms.
graficar para identificar el valor pH=Pka.
pH = pKa+log (A-/HA)
Este mismo procedimiento se toma pero variando el cido, en el lugar del cido
fosfrico se coloca cido actico y se sigue el mismo procedimiento.
RESULTADOS
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Dnde se localiza ese valor o valores segn el caso en la grfica de la curva de valoracin
correspondientes?
Qu importancia tiene el pka en los sistemas biolgicos?
Reporte los valores o rangos de pH ptimos a los cuales se desarrollan mejor los hongos
microscpicos, bacterias y levaduras.
Reporte anexo los ejercicios de clculos de pH, concentraciones de iones hidrgeno, anexo
en el texto Bioqumica General del autor Eric E. Conn y Stumpf. Ed. LIMUSA.
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PRCTICA No 5
INTRODUCCIN
Desarrollada por primera vez en el siglo XIX como un medio para estudiar y
separar pigmentos de plantas de ah el nombre de croma. La metodologa de la
cromatografa incluye ahora diversos procedimientos. Todos funcionan bajo el
mismo principio general: el flujo interrumpido de una fase en movimiento que
contiene la muestra por analizar a travs de una regin de una sustancia
estacionaria, la cual, por varios medios, interacta en grados diferentes con los
componentes individuales de esta.
Principios de la cromatografa
El soluto se mueve en direccin del flujo del solvente a una velocidad que es
regulada por su atraccin a la fase acuosa estacionaria o por la fase orgnica
mvil no polar. La atraccin del soluto por la ltima fase es prueba de una mayor
velocidad de migracin del soluto. Entre ellos se citan: el peso molecular, tipo de
papel empleado, tamao de la cmara cromatogrfica, temperatura, etc. La
velocidad de migracin del soluto problema en la direccin del flujo del solvente
viene determinada por lo que se denomina Rf, que es la distancia recorrida por el
soluto, desde el punto de partida o de aplicacin, dividida por la distancia recorrida
por el frente del solvente igualmente desde el punto de aplicacin del soluto
problema.
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.
El Rf de cualquier soluto de un sistema no debe ser mayor de 1.0 (una
representacin esquemtica de un desarrollo cromatogrfico ser elaborado por el
estudiante en su informe, incluyendo los datos referidos para el clculo de Rf).
Se han ideado muchas tcnicas para llevar a cabo la cromatografa en papel. Los
carbohidratos, por ejemplo (sobre todo los azcares sencillos), son difciles de
separar por las tcnicas corrientes, debido a las semejanzas existentes entre ellos
en peso molecular y grupos activos. Posiblemente el mejor mtodo de separacin
de los azcares sencillos lo constituye la cromatografa en papel de tipo
descendente continuo (el cual es empleado en esta prctica), de contarse con
equipo para ese tipo, puede encontrarse la tcnica ascendente.
Cuando los solutos que se van a separar pueden existir como iones cargados
positiva o negativamente, el procedimiento de cromatografa de intercambio inico
es una tcnica muy efectiva y con un poder de resolucin muy alto. La fase
estacionaria est compuesta por una sustancia slida que participa realmente en
el proceso, interactuando con los componentes de la mezcla. Por razones que
sern obvias, estos materiales se llaman intercambiadores inicos. La mayora de
los intercambiadores inicos son materiales sintticos (llamados resinas) que se
fabrican en forma de esferas muy pequeas. Qumicamente, cada esfera slida
est compuesta de cadenas polimricas grandes. El poder de la resina para
funcionar como intercambiador inico se origina por la presencia de diversos
grupos ionizables que estn unidos a lo largo de la cadena polimrica. Existiran
miles de estos grupos en una sola esfera.
Un ejemplo tpico del mtodo cromatografa en capa fina es el ejemplo de una fase
estacionaria slida pulverizada como una fina cubierta, sobre una superficie lisa de
un soporte firme (vidrio o plstico). La fase slida puede funcionar como agente
absorbente (por lo comn la slica gel), un intercambiador inico (se usan
materiales de celulosa modificada), o un barniz (un gel poroso como poli acrlica).
El procedimiento es similar al de cromatografa en papel. La popularidad de la
cromatografa en capa fina se debe a varias caractersticas: la resolucin de los
solutos y la reproducibilidad de los resultados estn comprendidas de buenas a
excelentes; la mayora de las separaciones se logran rpidamente, de 0.5 a 3 hrs.;
puede utilizarse para el anlisis de casi todo tipo de sustancias; pueden detectarse
cantidades muy pequeas (niveles de microgramos) de soluto; y finalmente,
aunque no menos importante, el mtodo resulta barato y fcil de realizar.
OBJETIVO
Aprender a usar el mtodo cromatogrfico en papel para identificar los tipos
de azcares de cualquier fuente natural; frutos, material foliar, lizados de
microorganismos, cualquier extracto de material biolgico.
Conocer los diferentes mtodos de anlisis.
MATERIALES Y REACTIVOS
1 tira de papel para cromatografa
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Tubos capilares, uno para cada azcar testigo y el o los problemas con
azcar.
Estufa para secado 90 a 95 C
Regla de 30 cm.
Vaso de precipitados de 250 mL
Ftalato de anilina, o nitrato de plata amoniacal.
Dextrosa solucin al 1% como testigo.
Fructosa
Xilosa
Otros azcares
Extracto clarificado de una muestra de fruto, u otro tipo de muestra.
Solvente para el desarrollo cromatogrfico: etanol(100 mL) -n-butanol(400
mL)-agua destilada(500 mL)
PROCEDIMIENTO.
Extraer de una muestra el jugo de cualquier fruta, se eliminan restos de tejidos, se
cuela con ayuda de un trozo de tela si es necesario, se clarifica con ayuda de
crema de almina, como se indicar. El lquido obtenido contiene carbohidratos
simples (azcares), los cuales sern separados por cromatografa en el papel que
se le proporciona (papel para cromatografa), la muestra anterior se colocar en
un vaso de precipitados.
Con ayuda de un tubo capilar, se toma una muestra sin que escurra y se coloca
tocando la superficie del papel para cromatografa en el punto de aplicacin
correspondiente previamente marcado como F (fructosa), R (ribosa), S (sacarosa),
P (problema), tales marca se harn de tal manera que no interfieran el lugar o
punto de aplicacin pero que s identifique la muestra aplicada ah. Se aplicar
tres veces cada muestra, pero deber secarse la primera para poder aplicar la
segunda y as tambin la tercera; se colocan con estricta limpieza y cuidado, el
tubo capilar utilizado se separa de los dems o se coloca en la solucin
correspondiente de azcares testigo o del problema, cada solucin de azcares
testigo y solucin problema debern tener su propia pipeta capilar y no permitir
contaminaciones cruzadas entre ellas, al trmino se lavan y en otra ocasin se
pueden utilizar, en caso de contar solo con uno se lava bien se seca y se utiliza y
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para las dems aplicaciones se hace lo mismo. Se usarn como testigos dextrosa,
fructosa, xilosa y otros que se requieran y que estn disponibles.
Al trmino de la preparacin de las tiras cromatogrficas, se colocan en la cmara
para el desarrollo, se dejan ah con el solvente previamente colocado para
saturacin con sus vapores, se coloca solvente en la cubeta superior de donde
penden las tiras de cromatografa y se procede as al desarrollo cromatogrfico
que puede tardar aproximadamente de 6 a 8 horas.
RESULTADOS
1) Los resultados se reportan de la siguiente forma:
Rf= Distancia recorrida de la mancha (cm)/ Distancia recorrida del
solvente ( cm).
2) Qu aplicaciones tiene la cromatografa?
3) Explica qu es la fase mvil ?
4) Explica qu es la fase estacionaria en cromatografa.
5) Incluye un esquema del cromatograma obtenido.
6) Cuantos azcares identificaste en la muestra problema y cuantos
aparecen en total en el cromatograma?
7) Anexa tu tira cromatogrfica.
8) Bibliografa consultada?
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PRCTICA No 6
INTRODUCCIN.
b) Oligosacridos
Por hidrlisis dan de 2 a 6 molculas de monosacridos. Se forman por la unin
de n molculas de estas ltimas con prdidas de n-1 molculas de agua. Si por
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hidrlisis dan dos molculas se denominan disacridos, etc. Algunos son
reductores otros no reductores.
c) Polisacridos u sidos
Por hidrlisis, dan un nmero variable de monosacridos. Si dan pentosas por
hidrlisis se denominan pentosanos; si dan hexosas, hexosanos. Otros
compuestos dentro del grupo son los monosacridos y ciertos cidos urnicos
derivados de la glucosa y la galactosa. No son reductores.
OBJETIVOS
a) Reconocer experimentalmente a los carbohidratos dependiendo de sus
caractersticas qumicas.
b) Realizar reacciones cualitativas con compuestos azucarados.
c) Probar las diferentes reacciones de identificacin de azcares en un extracto
biolgico
MATERIALES Y REACTIVOS
Tubos de ensayo Reactivo de Fehling A Y B
Gradilla Reactivo de Barfoed
Pinzas para tubo de ensayo Fructosa en solucin al 1 %
Mechero para gas Xilosa
Pipetas graduadas de 1, 5 y Sacarosa
10 mL Dextrosa
Tripi para mechero Ribosa
Tela de alambre con asbesto Jugos filtrados de varios frutos
Reactivo de Seliwanoff
Reactivo de Orcinol de Bial
PROCEDIMIENTO
Reaccin de Seliwanoff.
Las cetosas (glcidos con funcin cetona en carbono 2) se diferencian de las
aldosas ya que las cetosas por su mayor velocidad de reaccin dan mayor
cantidad de producto colorido en el mismo tiempo que las aldosas, que producen
menor cantidad de color.
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Reaccin de Orcinol de Bial.
Reaccin de Fehling.
4. Colocar todos los tubos a bao mara hasta el cambio de color (aparicin
de precipitado rojo). Anotar todos los resultados para consultar, analizar,
explicar, concluir y reportar.
Reaccin Barfoed.
Los monosacridos dan positiva esta reaccin en menor tiempo que los
disacridos ya que los disacridos tardan un mayor tiempo para la aparicin de
precipitado rojo al someter a bao mara los reactantes.
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2. A cada tubo preparado anteriormente adicionar 5mL de reactivo de Barfoed
(acetato de cobre en medio cido).
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PRCTICA No 7
INTRODUCCIN.
ESPECTOFOTOMETRA
La espectrofotometra, como su nombre indica, consiste en la medicin de LA
CANTIDAD DE LUZ ABSORBIDA (A) utilizando alguna de las distintas longitudes
de onda que forma el espectro U.V., visible o I.R. El espectro visible est
comprendido entre 350 a 750 nanmetros.
Cuando, con un ancho determinado, se miden todas las ondas del espectro visible
entre 400 700 nm; se obtiene una curva, que se le denomina curva espectral,
que es respectiva del color analizado.
LONGITUD DE ONDA.
Cuando la luz solar ilumina a los objetos de la superficie terrestre una porcin de
la energa es la absorbida; otro parte es transmitida hacia sectores inferiores y otra
ms reflejada. La luz solar que incide en la superficie terrestre posee un amplio
rango de valores de longitud de onda. Por otro parte, las propiedades fsicas y
qumica de los objetos de la superficie de la tierra afecta la cantidad y
caractersticas de la energa que es reflejada, transmitida absorbida, en
comparacin con el total que incide en dichos objetos. En general, los objetos de
la superficie terrestre actan como filtros que selectivamente reflejan, absorben o
transmiten energa dependiendo de su longitud de onda.
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La colorimetra se refiere a la determinacin de sustancias dependiendo de su
propiedad de absorber luz visible. Es un mtodo visual que se basa en la
comparacin de color de una solucin de concentracin no conocida contra una
solucin de concentracin conocida. La sensacin de color es la respuesta a una
serie de estmulos fsicos, qumicos y biolgicos, combinados de ciertas partes de
la retina del ojo para la energa radiante en determinadas longitudes de onda o
frecuencia. La colorimetra se emplea para designar la medida de la fraccin de la
luz blanca de una lmpara incandescente que pasa a travs de un medio lquido o
disolucin o es reflejada por una superficie slida. La colorimetra tambin es una
tcnica instrumental que tiene por objeto determinar la absorcin de luz visible por
una muestra, que puede ser una sustancia pura o bien una mezcla en solucin.
OBJETIVO.
MATERIALES Y REACTIVOS:
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Clarificante de almina
Papel filtro Whatman n 1
Probeta de 100 mL,
Matraz aforado de 100 y 500 mL
Fenol al 80 %
Agua destilada.
Muestra problema con bajo contenido de azcar, p.e. limn mexicano.
Vaso de precipitados de 250 mL, 400 mL .
Pipeta volumtrica de 1 mL
Pipetas graduadas de 5 y 10 mL
Enumerar ocho tubos de ensaye del 1 al 8 con tinta indeleble, hacer duplicados de
cada uno de ellos y colocarlos en una gradilla para aadirles los reactivos
indicados en la tabla siguiente, esto en orden de columnas de izquierda a derecha.
El ltimo reactivo a aadir con mucho cuidado y con una pipeta es el H2SO4 R.A.,
lo cual se har deslizando este por la pared del tubo y sin agitar, cuando todos los
tubos contengan el cido, se agitar uno a uno con el agitador vortex especial
para estos casos; deber asegurarse que las soluciones queden homogneas.
Dejar reposar las soluciones por 15 minutos a obscuridad, esto para desarrollar
un color mbar que absorbe luz de longitud de onda de 490 nm.
33
residual, juntar los lquidos obtenidos y medir el total recuperado para
calcular la dilucin.
Reportar:
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PRCTICA No 8
INTRODUCCIN.
Los aminocidos son sustancias cristalinas, casi siempre de sabor dulce; que
tienen carcter cido como propiedad importante y actividad ptica; qumicamente
son cidos carboxlicos con por lo menos, un grupo amino por molcula, 20
aminocidos diferentes son los componentes esenciales de las protenas
especificas consumidas por la sola accin de vivir.
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aminocidos formando molculas capaces de absorber toxinas del torrente
sanguneo.
5. L-Citrulina: intervienen especficamente en la eliminacin del amoniaco.
6. L-Cistina: tambin intervienen en la desintoxicacin, en combinacin con
los aminocidos anteriores. La L-Cistina es muy importante en la sntesis de
la insulina y tambin en las reacciones de ciertas molculas a la insulina.
7. L-Cistena: junto con la L-Cistina, la L-Cistena est implicada en la
desintoxicacin, principalmente como antagonista de los radicales libres.
Tambin contribuye a mantener la salud de los cabellos por su elevado
contenido de azufre.
8. L-Glutamina: nutriente cerebral e interviene especficamente en la
utilizacin de la glucosa por el cerebro.
9. Acido L-Glutmico: tiene gran importancia en el funcionamiento del
sistema nervioso central y acta como estimulante del sistema
inmunolgico.
10. L-Glicina: en combinacin con muchos otros aminocidos, es un
componente de numerosos tejidos del organismo.
11. L-Histidina: en combinacin con la hormona de crecimiento y algunos
aminocidos asociados, contribuyen el crecimiento y reparacin de los
tejidos con un papel especficamente relacionado con el sistema
cardiovascular.
12. L-Serina: junto con algunos aminocidos mencionados intervienen en la
desintoxicacin del organismo, crecimiento muscular y metabolismo de
grasas y cidos grasos.
13. L-Taurina: estimula la hormona del crecimiento en asociacin con otros
aminocidos, esta aplicada en la regulacin de la presin sangunea,
fortalece al msculo cardiaco y vigoriza el sistema nervioso.
14. L-Tirosina: Es un neurotransmisor directo puede ser muy eficaz en el
tratamiento de la depresin, en combinacin con otros aminocidos
necesarios.
15. L-Ornitina: Es especifico de la hormona del crecimiento en asociacin con
otros aminocidos ya mencionados. Al combinarse con la L-Arginina y con
carnitina que se sintetiza en el organismo, la L-Ornitina tiene una importante
funcin corporal en el metabolismo del exceso de grasa corporal.
16. L-Prolina: Est involucrada tambin en la produccin de colgeno y tiene
gran importancia en la reparacin y mantenimiento del msculo y huesos.
Los (8) esenciales
17. L-Isoleucina: Junto con la L-Leucina y la hormona del crecimiento
intervienen en la formacin de reparacin del tejido muscular.
18. L-Leucina: Junto con la L-Isoleucina y la hormona del crecimiento reparan
el tejido muscular.
19. L-Lisina: es uno de los ms importantes aminocidos por que, en
asociacin con varios aminocidos ms, interviene en diversas funciones,
influyendo el crecimiento, reparacin de tejidos, anticuerpos del sistema
inmunolgico y sntesis de hormonas.
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20. L-Metionina: colabora en la sntesis de protenas y constituye el principal
limitante en las protenas de la dieta. El aminocido limitante determina el
porcentaje de alimento que va a utilizarse a nivel celular.
21. L-Fenilalanina: interviene en la produccin del colgeno fundamentalmente
en la estructura de la piel y el tejido conectivo, y tambin en la formacin de
diversas neuro hormonas.
22. L-Triptofano: Esta implicado en el crecimiento y en la produccin hormonal
especialmente en la funcin de las glndulas de secrecin adrenal.
Tambin interviene en la sntesis de la serotina, neuro hormonal
involucrada en la relajacin y el sueo.
23. L-Treonina: Junto con la L-Metionina y el cido L-Asprtico ayuda al
hgado en sus funciones generales de desintoxicacin.
24. L-Valina: Estimula el crecimiento y reparacin de los tejidos, el
mantenimiento de diversos sistemas y balance de nitrgeno.
Debemos recordar que, debido a la crtica relacin entre los diversos aminocidos
limitantes presentes en cualquier alimento, solo relativamente pequea cantidad
de aminocidos de cada alimento pasa a formar parte de las protenas del
organismo. El resto se usa como fuente de energa o se convierte en grasas si no
debe usarse inmediatamente.
OBJETIVO.
MATERIALES Y REACTIVOS
1 tira de papel para cromatografa
Cmara cromatogrfica
Regla de 30 cm
Lpiz carbn.
Aminocidos testigo en solucin
Tubos capilares
Estufa para secado de cromatogramas
Muestras proteicas digeridas en HCl 6N
Vaso de precipitados de 250 mL
PROCEDIMIENTO.
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c) Aplicar 5 6 veces los testigos de aminocidos y las muestras problema
hidrolizadas con HCl 6 N., Dejar que sequen cada una de las aplicaciones
de muestras a desarrollar.
d) Desarrollar el cromatograma usando el solvente adecuado para separacin
de aminocidos. Al final del mismo y antes de que seque el solvente de
desarrollo, trazar con lpiz el frente del solvente.
e) Revelar los cromatogramas atomizando Ninhidrina en solucin y
calentando dichas tiras en estufa a 95 |C.
f) Delinear con lpiz el contorno de las manchas reveladas, estimar los
centros de cada una de ellas y calcular los Rfs.
g) Con los valores obtenidos, compara los valores de manchas problema y
valores de los testigos. Los valores iguales encontrados en estas
comparaciones indican presuntivamente que se trata de los mismos
aminocidos testigo y mancha problema.
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PRCTICA No 9
Las molculas proteicas van desde las largas fibras insolubles que forman el tejido
conectivo y el cabello, hasta los glbulos compactos solubles, capaces de
atravesar la membrana celular y desencadenar reacciones metablicas. Tiene un
peso molculas elevado y son especficas de cada especie y de cada uno de sus
rganos se estima que el ser humano tiene unas 30 000 protenas distintas, de las
que solo un 2% se han descrito con detalle. Las protenas sirven sobre todo para
construir y mantener las clulas aunque su descomposicin qumica tambin
proporciona energa, con un rendimiento de 4 Kcal / g., similar al de los hidratos de
carbono.
Las protenas, desde las humanas hasta las que forman las bacterias unicelulares
son el resultado de las distintas combinaciones entre 20 aminocidos distintos,
compuestos a su vez por carbono, hidrgeno, oxigeno, nitrgeno, y a veces,
azufre.
Para sintetizar sus protenas esenciales, cada especie necesita disponer de los
veinte aminocidos en ciertas proporciones. Mientras que las plantas que pueden
fabricar sus aminocidos a partir de la fotosntesis, casi todos los dems
organismos solo pueden sintetizar algunos. Los restantes llamados aminocidos
esenciales para mantenerse sano: Leucina, isoleucina, lisina, metionina
fenilalanina, treonina, triptofano, y valina todos ellos se encuentran en las
protenas de las semillas vegetales, pero como las plantas suelen ser pobres en
lisina y triptofano, los especialistas en nutricin humana aconsejan complementar
la dieta con protenas animales presentes en la carne, los huevos y la leche, que
contienen todos los aminocidos esenciales.
Las protenas son componentes altamente polimerizados, que estn formados por
aminocidos. Tambin se unen a componentes no proteicos. Las protenas se
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encuentran entre los nutrientes ms importantes, junto con los lpidos y los
carbohidratos. Adems de su funcin energtica al organismo, dada su naturaleza
nitrogenada, son necesarias para la sntesis de compuestos propios del organismo
implicados en la estructura de las membranas junto con los lpidos, como
glicoprotidos en funciones de lubricacin como nuclidos que posibilitan la
sntesis de las protenas propias del organismo, as como la formacin de los
cromosomas y la divisin celular.
OBJETIVO(s)
MATERIALES Y REACTIVOS
Campana de extraccin de gases
Tubos de digestin Agua destilada
Termo bloque apropiado para los 0.2500 g a 0.30 g de muestra.
tubos anteriores HCl 0.1N
Balanza analtica Na2SO4 catalizador
Erlenmeyer de 250mL Cu2SO4 catalizador
Equipo de titulacin. cido Brico al 4.0 %
Indicador cido-base para NaOH al 40 %
protena.
PROCEDIMIENTO
Digestin de la muestra:
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Pesar aproximadamente 0.2500 g de muestra molida, hmeda o seca cuyo
contenido de % de humedad se conozca, verterla con todo y el papel con la que
fue pesada en el tubo digestor; aadir catalizador Na 2SO4, CuSO4.5H2O una
pastilla-, 8 mL de H2SO4 reactivo analtico, aadir 4 perlas de vidrio y dejar a
ebullicin hasta que el color obscuro de la muestra cambie a azul-verde brillante
limpio de cualquier indicio de materia orgnica sin digerir, despus del cambio de
obscuro a azul claro, dejar reposar durante 15 20 minutos para enfriar. Y
proseguir al destilado.
Destilacin:
Para ello, retirar en primer trmino el matraz de destilacin de tal manera que el
tubo de bajada del destilado quede fuera del lquido destilado, solo
entonces apagar el mechero de gas encendido. Si no se hace de esta manera y
se apaga la fuente de calor, el destilado retorna abruptamente al matraz de
destilacin perdindose el trabajo realizado, adems de que pudiera
romperse el equipo por cambio brusco de temperatura.
Valorar el destilado:
Valorar el destilado con HCl 0.1N, usando indicador cido base especial para
mtodo de Kjeldahl. Con el volumen gastado de HCl calcular el % de N y % de
protena.
CLCULOS:
NOMENCLATURA:
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REPORTAR:
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PRCTICA No 10
ANLISIS DE LPIDOS.
INTRODUCCIN.
Es un grupo de sustancias muy heterogneas que solo tienen en comn estas dos
caractersticas.
1. Lpidos Saponificables
a) Simples
-Acilglicridos
-Cridos
b) Complejos
-Fosfolpidos
-Glucolpidos
2. Lpidos Insaponificables
a) Terpenos
b) Esteroides
c) Prostaglandinas
CIDOS GRASOS.
Loa cidos grasos son molculas formadas por una larga cadena hidrocarbonada
de tipo lineal, y generalmente con un nmero par de tomos de carbono. Tiene en
un extremo de la cadena un grupo carboxilo.
Desde el punto de vista qumico, los cidos grasos son capaces de formar enlaces
ster con los grupos oxidrilo de un alcohol como el glicerol o de otros alcoholes
lineales. Cuando estos enlaces se hidrolizan con un lcali, se rompen y se
obtienen las sales de los cidos grasos correspondientes, denominados jabones,
mediante el proceso llamado saponificacin.
Lpidos Simples:
Acilglicridos:
Son lpidos simples formados por la esterificacin de una, dos o tres molculas de
cidos grasos con una molcula de glicerina. Tambin reciben el nombre de
glicridos o grasa simples.
Ceras:
Las ceras son steres de cidos grasos de cadena larga con alcoholes tambin de
cadena larga. En general son slidas y totalmente insolubles en agua. Todas las
funciones que realizan estn relacionadas con su impermeabilidad al agua y con
su consistencia firme. As las plumas, el pelo, la piel, las hojas, frutos, estn
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cubiertos de una capa de cera protectora. Una de las ceras ms conocidas es la
que generan las abejas para confeccionar su panal.
OBJETIVOS.
MATERIALES Y REACTIVOS:
PROCEDIMIENTO.
( P1 P 2) 100
% de extractoetreo ; El resultado es en base seca, calcular para
M base hmeda, considerando un dato de %
humedad.
NOMENCLATURA:
P1= Peso del cartucho con muestra seca y con grasa.
P2= Peso del cartucho con muestra seca y sin grasa.
M= Peso de la muestra molida y seca con grasa en gramos.
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CUANTIFICACIN DE ACIDEZ EN UN LPIDO (INDICE DE ACIDEZ)
MATERIALES:
PROCEDIMIENTO:
V x 56.108
ndice de acidez = ---------------------
m
NOMENCLATURA:
V.- Volumen de KOH gastado en la titulacin.
56.108 = mg de KOH equivalente a 1 mL de KOH 1N.
REPORTAR:
- El ndice de acidez encontrado comparando con el dato bibliogrfico de la
muestra usada.
- Calcular usando los mismos datos de valoracin, el % de acidez como cido
oleico.
- Reportar la reaccin qumica usada (neutralizacin).
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PRCTICA 11
OBJETIVO
Comprobar que una muestra vegetal contiene enzimas, peroxidasa y catalaza que
inactivan al sustrato H2O2.
Comprobar que las reacciones estn catalizadas por enzimas, las cuales actan a
una velocidad de reaccin en determinadas condiciones.
Comprobar que la concentracin de sustrato afecta la velocidad de reaccin.
MATERIALES Y REACTIVOS
1 Mortero
1 Matraz Erlenmeyer de 250 mL
1 Matraz aforado de 500 mL
1 Papel filtro
6 Tubos Smith
Carbonato de calcio
10g de muestra biolgica vegetal fresca ( chcharos, el cual debe tener
agua destilada previamente hervida con 0.2g de carbonato de calcio.
Agua oxigenada
1 Pipeta graduada de 1 mL
1 Pipeta graduada de 5 mL
1 Pipeta graduada de 10 mL
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PROCEDIMIENTO
Pesar 10 g de chcharos frescos u otra especie vegetal.
Macerarlos con ayuda de un mortero.
Aforar a 500 mL. Filtrar el preparado.
Enumerar 8 tubos de Smith (1 al 8) y tratarlos de acuerdo al cuadro.
RESULTADOS
1. Reportar la grfica Michaellis- Menten como mmol O2/min contra mmol
H2O2/mL
2. Reportar la grfica de Linewaver-Burk de las inversas 1/Vo contra 1/(S),
donde se estimara los valores de km y Vmx, el significado de Km y su
localizacin marcados en la grfica Michaellis- Menten.
3. Ejemplo de los clculos de los moles para Vo (mmol O2/min y mmoles
H2O2/mL en cada punto de la grfica.
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PRCTICA 12
OBJETIVO
La mayora de las enzimas son muy sensibles a los cambios de pH. Desviaciones
Dar a conocer al aluno los pH de las enzimas
MATERIALES
1 mortero
1 Matraz Erlenmeyer
10gr de muestra
6 Tubos Smith
EQUIPO
PROCEDIMIENTO
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mL de extracto mL de sol. mL de H2O2 Lectura de mL Lectura de mL
No de tubo
de enzimas buffer al 3% de O2 / 5min de O2 / min
pH 2 4 7 1.0
pH 4 4 7 1.0
pH 6 4 7 1.0
pH 7 4 7 1.0
pH 8 4 7 1.0
pH 10 4 7 1.0
pH 12 4 7 1.0
RESULTADOS.
1. Con una grfica de moles O2/min generados (Vo), contra pH, encontrar el
pH ptimo al cual la peroxidasa acta para degradar al sustrato H2O2.
2. Reportar de la bibliografa, cinco enzimas con sus pH ptimos de actividad
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PRCTICA 13
RESPIRACION
Respiracin, proceso fisiolgico por el cual los organismos vivos toman oxigeno
del medio circundante y desprende bixido de carbono. El trmino respiracin se
utiliza tambin para el proceso de liberacin de energa por parte de las clulas,
procedente de la combustin de molculas como los hidratos de carbono y las
grasas. La respiracin celular es similar en la mayora de los organismos, desde
los unicelulares, como la ameba y el paramecio, hasta los organismos superiores.
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Figura 3. Transporte terminal de electrones o cadena de electrones
OBJETIVO
Dar a conocer que cualquier objeto que tuvo o tenga vida sigue respirando o
consumiendo oxgeno y eliminando CO2.
MATERIALES
Muestra representativa de cualquier especie que tenga vida.
EQUIPO
Se usara un sensor de CO2 como producto de respiracin, tal sensor es un
electrodo especifico, que emite seal a una interface y este a su vez a una
computadora que registra las ppm de CO2 acumulado en un recipiente con
material respirado, adicionalmente un programa grafica la velocidad de respiracin
con respecto al tiempo.
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BIBLIOGRAFA RECOMENDADA
BUSCADORES RECOMENDADOS
www.ingenieriaquimica.net
www.fisicanet.com
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UNIVERSIDAD AUTNOMA CHAPINGO
PRCTICAS DE BIOQUMICA
JULIO 2008
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