MEMBRANELE BIOLOGICE

lector dr. Simionic Eugen

 Definiie

MB sunt structuri
supramoleculare alctuite din
lipide i proteine, care
delimiteaz coninutul celular
de mediul extern i pot
ndeplini mai multe funcii.
 Funciile
Delimitarea coninutului unei celule de mediul
extern
Compartimentalizarea - Delimitarea coninutului
organitelor specializate ale celulei de citozol
Permeabilitate selectiv a diferitor compui
Organizarea unor reacii biochimice
Recepionarea semnalelor externe i transducia lor
Transportul soluiilor, ionilor
Asigur interaciunile intercelulare
Transformrile energiei
 Compoziia chimic
Lipide 30-50%
Colesterol 20% (e.g. eritrocite 25%)
Proteine 30-50%
Glucide 5-15%
Cantitatea lor variaz n dependen
de tipul membranei
Exemple de compoziie a unor membrane n dependen de tipul celulei

NEURON
G
G
LL PP
ERITROCIT

HEPATOCIT

MITOCONDRIE
Membrana intern
 Lipidele
Fosfolipide
Glicolipide
Colesterol
 Fosfolipidele
Glicerofosfolipide
Sfingofosfolipide
 Glicerofosfolipidele
Fosfatidilcolina (lecitinele)
Fosfatidiletanolamina (cefalinele)
Fosfatidilserina
Fosfatidiliozitolii
Cardiolipinele
Rolul : formarea bistratului lipidic
leag covalent unele proteine
pot servi ca surs de mesageri secundari n
transmiterea semnalului unor hormoni
pot semnala declanarea apoptozei
 Propritatea amfifil a fosfolipidelor i
formarea bistratului lipidic
a)

Cap polar

Cozi nepolare
 Sfingofosfolipidele
Sfingomielinele 10-20%
Intr n componena tecii mielinice a axonilor
cu rol de izolatori electrici
Particip n numeroase ci de semnalare prin
eliberare de DAG i ceramid
Implicate n apoptoz prin eliberare de
ceramid
Alctuiesc pontoanele lipidice combinaii
lipidice rigide asociate cu proteine
Ponton lipidic
 Glicolipide

Cerebrozide
Gangliozide
 Cerebrozidele

Galactocerebrozide
Glucocerebrozide
 Galactocerebrozide
Principale componente ale membranelor
celulelor nervoase, n special creier
2% n substana cenuie i 12 n cea alb
n teaca mielinic, oligodendrocite
Au rol n organizarea pontoanelor lipidice
datorit gradului nalt de a forma legturi de
hidrogen intermoleculare
n combinaie cu colesterolul formeaz situsuri
de legare a proteinelor, receptorilor
 Glucocerebrozidele
Predomin n membranele eritrocitelor,
celulelor splinei, pielii, mai puin n esutul
nervos
ndeplinesc funcii comune glicolipidelor
Localizarea colesterolului n membrane
Datorit moleculei
rigide se localizeaz
printre cozile
hidrocarburice
nepolare ale acizilor
grai, preponderent
nesaturai
 Rolul colesterolului n membrane
Ridic gradul de ordine
i rigiditate
Stabilizeaz cozile
acizilor grai saturai
meninndu-le ntr-o
poziie dreapt prin
interaciuni van der
Waals
Ca rezultat membranele
devin mai rigide,
rezistente la lovituri
Organizarea diferitor tipuri de
lipide i a colesterolului n
bistratul lipidic al membranei
 Proteinele
Pot fi localizate n bistratul lipidic periferic sau
integrate n el
Proteinele periferice se leag de lipidele polare
prin legturi ionice sau interaciuni polare
Pot fi uor separate cu detergeni
Proteinele integrale sunt mai puternic legate prin
numeroase interaciuni hidrofobe datorit
structurii lor de -helix sau -structuri
Unele proteine sunt legate covalent de lipidele
bistratului
Organizarea proteinelor membranare
Proteine membranare legate covalent
cu acizi grai
Proteine GPI-linkate
Proteine membranare legate covalent
cu acizi grai
Clasificarea structural a proteinelor
membranare

-helicale -structuri
 Rolul proteinelor membranare

Proteine transportatori
Proteine receptori
 Organizarea structural-funcional a
membranelor
Este descris de modelul fluid-mozaical
Componentele membranei sunt strns
asociate ntre ele fr a interaciona
chimic
Modelul descrie membrana ca un bistrat
lipidic n care sunt integrate proteinele
care plutesc prin el
Modelul fluid-mozaical
Modelul fluid-mozaical
 Proprietile membranelor biologice
Fluiditatea
Motilitatea
permeabilitatea selectiv
Asimetria
Autoasamblarea
autorepararea
 Importana acizilor grai nesaturai n
organizarea fluido-cristalin a membranei
Distribuirea asimetric a fosfolipidelor n membrane
Lipidele sunt distribuite asimetric pe ambele
fee ale bistratului
asimetria, este un efect, un rezultat al
perceperii sau rspunsului la diveri factori cu
care contacteaz membrana
Asimetria este asigurat de nite enzime
transportori ai lipidelor membranare (LT)
Se disting cel puin trei grupe de transportori
LT: aminofosfolipid translocazele (flipazele),
flopazele i fosfolipid scramblazele
 Diversitatea i specificitatea structural i
funcional a membranelor
Membrana citoplasmatic
Membranele simple ale organitelor celulare
Mebranele duble al organitelor celulare
Mebrane specializate pentru protecie,
transport, generare de curent electric,
transformare a diferitor tipuri de energie,
membrane cu rol n respiraie, oxidarea i
sinteza diferitor compui
 Transportul membranar
transportul membranar asigur ptrunderea
selectiv a diferitor compui necesari celulei
dar i a medicamentelor
poate fi asigurat prin difuzie, canale sau
transportatori.
Defectele n transportul membranar este
asociat cu unele patologii ca fibroza cistic,
nefropatii, dereglri neurologice, rezisten la
medicamente, senescen precoce
 Molecule permeable

Molecule mici
Nepolare
O2, N2
Molecule polare fr sarcin DIFUZIE
H2O SIMPL
Uree
Glicerol
CO2
NH3
 Molecule impermeable
MOLECULE MARI
Polare, fr sarcin
e.g. glucoza

IONII
NU POT TRECE
COMPUI PRIN MEMBRANE
POLARI
CU SARCIN

AMINOACIZII
NUCLEOTIDELE
Tipuri de transport
 Canalele membranare

Se disting dou tipuri de canale:

tip alfa i
tip beta
 Canale de tip alfa
sunt proteine homo- sau hetero-oligomere
care conin segmente transmembranare alfa-
helicale.
La canalele membranare de tip alfa fac parte:
canalele voltaj-dependente specifice pentru
ionii Na, K, Ca, Cl;
aquaporinele
canalele agonist sau ligand-dependente
canalele cAMP-dependente
Aquaporinele de tip 1 din rinichi
 Aquaporin-1
Aquaporins help water to pass through biological
membranes.
They form hydrophilic pores that allow H2O molecules,
but not hydrated ions or larger molecules, to pass
through.
Aquaporins are particularly important in the kidney,
where they promote the reuptake of water.
Aquaporin-2 in the renal collecting ducts is regulated by
antidiuretic hormone (ADH, vasopressin), which via
cAMP leads to shifting of the channels from the ER into
the plasma membrane.
Aquaporin-1, shown here, occurs in the proximal tubule
and in Henles loop. It contains eight transmembrane
helices with different lengths and orientations.
Structura i mecanismul
de funcionare
a unui canal
Canal nchis
voltaj-dependent
pentru ionii de Na

Canal
deschis
 Voltage-gated Na+ channels
play a decisive part in the conduction of electrical
impulses in the nervous system
These channels open when the membrane
potential in their environment reverses.
Due to the high equilibrium potential for Na+, an
inflow of Na+ ions takes place, resulting in local
depolarization of the membrane, which
propagates by activation of neighboring voltage-
dependent Na+ channels.
A spreading depolarization wave of this type is
known as an action potential.
Externally directed K+ channels are involved in the
repolarization of the membrane.
 Canale de tip beta sau porinele
sunt proteine ce conin secvene de beta-
structuri transmembranare ce formeaz un
cilindru cu diametrul de la 0.6 3 nm
Acest tip de canale sunt mai mult prezente n
membrana extern mitocondrial, n
membranele unor bacterii
Permit trecerea diferitor tipuri de molecule de
la ioni anorganici pn la proteine.
 Transportorii membranari
prezint un grup de proteine
tranasmembranare foarte divers dup
structur, specificitate i funcii
au un grad foarte nalt de specificitate
structural i chiar stereospecifitate fa de
moleculele pe care le transport
De exemplu, transportorul pentru D-glucoza n
eritrocite are o afinitate de 10 ori mai mic
pentru D-galactoz i de 1000 ori mai mic
pentru L-glucoz.
Transportorul pentru glucoz GLUT1
 Se disting 4 etape n funcionarea
transportorilor:
Recunoaterea din mulimea substanelor
dizolvate doar a moleculei specifice
Legarea i Translocarea moleculei specifice
prin membran
Eliberarea moleculei n citosol
Regenerarea transportorului la starea iniial
 n dependen de necesitile
suplimentare pentru funcionarea
transportorului, deosebim
transportori ce funcioneaz pasiv, fr
consum de energie
i transportori care necesit energie pentru
funcionare
Respectiv deosebim transport pasiv i
transport activ.
Ultimul poate fi primar i secundar.
 Transportul pasiv
Transportorii ce asigur transportul pasiv
prezint molecule proteice ce conin ntre 400-
600 resturi de aminoacizi.
Lanurile lor polipeptidice formeaz de la 2
pn la 24 secvene transmembranare de tip
alfa-helix.
Transportorii pasivi transport ioni anorganici,
monozaharide, aminoacizi, diveri metabolii
TRANSPORTUL
PASIV
Concentraie Concentraie
mare mic

DIFUZIUNE
SIMPL

Protein canal

TRANSPORT
PASIV
Transportator DIFUZIE
FACILITAT

Transportatorii
sufer modificri
conformaionale
 Exemple de transportori pasivi pot fi:
transportorii pentru glucoz GLUT1-GLUT5
Transportorii ce asigur antiportul pasiv al
anionilor de Cl- i HCO3- n eritrocite i rinichi
(proteine schimbtoare de anioni).
Transportorii membranei mitocondriale
interne: antiporteri pentru ADP i ATP;
simporteri pentru fosfat i H+; antiporterii
glutamat-aspartat.
 Transportul activ
Transportorii activi catalizeaz
translocarea moleculelor contra
gradientului de concentraie cu
consum de energie
Se deosebesc transportori activi
primari i secundari, respectiv
transport activ primar i secundar.
 ATP
TRANSPORTUL
FOSFORILARE
ACTIV

Transportatorul DEFOSFORILARE
este o ATP-az

Transportatorii
sufer modificri
conformaionale
MECANISMUL DIFUZIEI FACILITATE (PASIV) I A
TRANSPORTULUI ACTIV

DF TA
 Transportori primar activi (PAT)
necesit pentru funcionare ATP pe care l
scindeaz autofosforilndu-se tranzitoriu,
substratul transportat nu este fosforilat.
Aa tip de transportori se refer la ATPaze.
Se disting trei familii de PAT care catalizeaz
translocarea cationilor anorganici:
transportatori de tip P, V i F.
 Tipuri de TPA
Tipul P transport ioni de Na, K, Ca. Se cunosc
peste 300 de membri.
Tipul V (V de la vacuol) prezint pompe de H+,
responsabili pentru acidificarea coninutului
lizozomal, endozomal, veziculelor Golgi i
secretorii.
Tipul F sunt prezeni n membranele
mitocondriei, cloroplastelor i bacteriilor.
Particip n translocarea H+ cu consum de ATP.
La PAT face parte i o superfamilie de transportori
numii ABCt (ATP-binding cassette) care la fel
scindeaz ATP pentru a transporta
Structura pompei Ca2+ -ATPaza sarcoplasmatic

Ca 2+
 Transportorii ABC
Transportorii ABC catalizeaz influxul sau efluxul
diferitor fosfolipide, Acil-CoA cu caten lung,
srurile acizilor biliari, colesterolul, peptide.
funcia normal a unor ABCt umani este de a
elimina din celul substaele citotoxice i
medicamentele
Aceti transportori au un rol medical foarte
important.
Muli dintre ei sunt implicai n transportul selectiv a
diferitor compui exogeni, toxine i medicamente.
Unii ABC transportori sunt responsabili de
fenomenul rezistenei la medicamente, n special
chimioterapice.
Structura unui ABCt tipic
2 domenii transmembranare
care leag ligandul

2 domenii care leag

i catalizeaz
scindarea ATP
Mecanismul de funcionare a ABCt
 Structura ABCt
Two transmembrane domains (TMDs) form the ligand
binding sites and provide specificity, and two
nucleotide binding domains NBDs bind and hydrolyze
ATP to drive the translocation of the bound ligand.
The NBDs, but not the TMDs, are homologous
throughout the family and have several characteristic
motifs including the Walker A and B motifs common to
many nucleotide binding proteins and others like the
ABC signature, stacking aromatic D, H, and Q loops,
which are unique to the family.
 The normal function of some human
ABC transporters
is to secrete from cells cytotoxic compounds
(dietary cytotoxics and therapeutic drugs).
These transporters (P-glycoprotein, BCRP, and
MRP1) are highly expressed in the gut, liver
and kidneys where they restrict the
bioavailability of administered drugs.
 Transportori secundar activi (SAT)
nu necesit direct ATP pentru funcionare
fac parte transportorii Na+ - dependeni (SSAT, sodium-
dependent secondary active transporters). peste 400 de
reprezentani.
SAT asigur transportul monozaharidelor, aminoacizilor,
ionilor i altor micromolecule prin simport cu Na+.
SAT folosesc ca surs energetic gradientul electochimic
creat de Na+; ulterior excesul de Na+ acumulat intracelular
este pompat de ctre Na+/K+-ATPaz, de unde i
denumirea de transportori secundar activi.
SAT folosesc energia ATP indirect, deoarece ATP este
folosit doar pentru meninerea gradientului Na+ i nu
pentru fosforilarea sau activarea transportorului
Mecanismul transportului activ
secundar
Absorbia aminoacizilor n intestin prin transport
activ secundar (simport cu ionii de Na)
Diferite tipuri de transport a monozaharidelor
n procesul absorbiei

Intestin

TA secundar

Snge
 Exemple de boli genetice produse prin mutatii ale
unor proteine de transport
Diabetul insipid nefrogen - mutatii ale unor proteine
canal - Aquaporina 2 AQP2 12q13
Epilepsia generalizata cu crize comitiale febrile -
Subunitatea alfa a canalului de sodiu neuronal tip 1 SCN1A
Paralizia periodica hipokaliemica - Canal de calciu voltaj-
dependent tip L, subunitatea -1S CACNA1S 1q32
Osteopetroza - Canalul de clor tip 7 CLCN7 16p13
Malabsorbtia pentru glucoza/galactoza -cotransportorul
sodiu-glucoza SLC5A1 22q13.1
Hipotiroidia congenitala - Cotransportor sodiu-iod SLC5A5
Fibroza chistica - ABCt, subfamilia C, membrul7 ABCC7