DETECO DE LEISHMANIA INFANTUM NO TECIDO OVARIANO E

COMPLEXOS CMULOS OCITOS (CCOS) DE CADELAS INFECTADAS

NATURALMENTE.

Orientanda: Eslen Quezia Santos Miranda Bolsista BIC/FAPEMA. Graduanda em

Medicina Veterinria, UEMA- So Lus.

Orientadora: Ana Lcia Abreu SILVA

Prof Dr. do Departamento de Patologia, UEMA.

Colaboradores: Higor da Silva Ferreira - Mestrando em Cincia Animal; Renata Mondgo

de Oliveira - Mestra em Cincia Animal; Srgio Henrique Costa Junior - Aluno de
Iniciao Cientfica; Jao Vitor Aguiar Viana Barra - Aluno de graduao; Allana Freitas
Barros - Mestranda em Cincia Animal; Isabel Silva Oliveira - Mestranda em Cincia
Animal; Felipe de Jesus Moraes Junior Professor de Reproduo Animal; Fbio Henrique
Evangelista de Andrade - Chefe do Laboratrio de Anatomopatologia.

As leishmanioses so grupos de doenas infecciosas crnicas, causadas por protozorios

parasitos do gnero Leishmania, com uma incidncia anual de quase 1,8 milho de casos
humanos em todo o mundo (OMS, 2012). Leishmania infantum o agente etiolgico da
leishmaniose visceral, que est amplamente distribuda desde o sul dos EUA at o norte da
Argentina (KUHLS ET AL., 2011). A transmisso da doena geralmente ocorre quando o
inseto vetor (Lutzomyia longipalpis) inocula as formas promastigotas metacclicas nos
hospedeiros vertebrados durante o repasto sanguneo (MAEL, 1990). Por muitos anos
considerou-se que essa era a nica via transmisso. No entanto, h estudos que comprovam
outras formas de transmisso, como a transplacentria e venrea. Desta forma se faz
necessrio compreender como ocorre a transmisso da doena por essas vias, pois h uma
deficincia de estudos especficos sobre o parasitismo no ovrio. Sendo assim, o trabalho
teve por objetivo identificar Leishmania infantum no tecido ovariano e complexos cmulos
(CCOs) de cadelas infectadas naturalmente. Para a realizao da pesquisa, foram coletados
ovrios de cadelas soropositivas, assintomtica e sintomtica, em idade reprodutiva. Aps a
coleta, os ovrios obtidos foram transportados para o Laboratrio de Reproduo Animal
(LABRA-UEMA) para o rastreamento dos CCOs e coleta de fragmentos do tecido ovariano,
os quais foram submetidos aos mtodos de PCR convencional e imunohistoqumica. Ao final
da anlise o delineamento dos dados foi realizado ao acaso, com dois tratamentos
(sintomticos e assintomticos) e oito repeties (nmero de cadelas). Dessa maneira,
segundo os resultados da anlise clnica todos os animais apresentaram leses na pele e
mucosas plidas, enquanto que 75% apresentaram emagrecimento, onicogrifose e hipertrofia
de linfonodos (Figura 1). Foram ainda observadas alteraes anatomopatolgicas em todos os
animais sintomticos, na forma de hepatoesplenomegalia, no grupo sintomtico duas cadelas
apresentaram leses inflamatrias no ovrio e tero, e uma apresentou TVT (tumor venreo
transmissvel) na vulva. Segundo Silva (2008), a vulva de animais naturalmente infectadas
por L. infantum podem apresentar infiltrados inflamatrios multifocais, caracterizados por
infiltrados histio-plasmo-linfocitrio na regio periadnexial com a presena de amastigotas de
Leishmania sp.
Figura 1: Fotografia representativa de ces naturalmente infectados por Leishmania infantum,
considerando a forma clnica, utilizados no estudo. (A) Co assintomtico, (B) co sintomtico.
No foram encontradas marcaes positivas em ovrios para Leishmania sp. atravs da
tcnica de imunohistoqumica. Entretanto no PCR todas as amostras foram consideradas
positivas. A Figura 2 mostra que o DNA de Leishmania sp. estava presente em todos os
ovrios das cadelas estudadas. No entanto, no podemos afirmar se a utilizao de ocitos de
cadelas seria seguro para a fertilizao in vitro, mesmo se utilizssemos a PCR em tempo real
para quantificar as amastigotas. Para elucidar essa questo necessrio realizar a tcnica
fertilizao in vitro para avaliar se fetos nascem ou no livres do patgeno.
Os cmulos ocitos foram coletados, mas, no foi possvel process-los devido o peso muito
inferior ao recomendado para anlise de PCR. Em regioes endmicas os ces so os
principais reservatrios da infeco por Leishmania, sendo transmitida pelo flebotomo, assim
considerado o fator de risco mais significativo para a ocorrencia de infeco Humana
(GAVGANI et al., 2002).

Figura 2: Resultado representativo da PCR para deteco de DNA de Leishmania em amostras de

ovrio de cadelas naturalmente infectadas. As amostras utilizadas foram obtidas tanto de fmeas
sintomticas e assintomticas.
Nesse gel possvel observar que houve amplificao do gene esperado para todas as amostras
estudadas. A presena de amastigotas de Leishmania no tero de cadelas (ROSYPAL et al.,
2005), j foi relatada em alguns estudos em que associavam o aparecimento do parasito com
evidncias de transmisso vertical da doena (PETERSEN e BARR, 2009). A transmisso
vertical desse protozorio em ces tambm j foi descrita por Masucci et al. (2003) e Dubey
et al. (2005), embora na espcie canina tenham sido descritas evidncias que indicam que a
transmisso vertical no tenha possibilidade de ocorrer nessa espcie (Andrade et al, 2002).
Alteraes ovarianas associadas presena de Leishmania j foram descritas em cadelas,
porm, no h evidncia de que os oocitos sejam infectados pelo parasito. Pesquisas
realizadas com placenta de fetos abortados de cadela soropositiva para Leishmania mostram
que a principal leso encontrada foi a placentite, caracterizada por necrose e infiltrao de
leuccitos. Ao mesmo tempo, numerosas formas amastigotas de Leishmania sp foram
encontradas no trofoblasto placentrio de cadelas infectadas (DUBEY et al., 2005), indicando
que a transmisso vertical, ainda pouco considerada, pode ser uma rota em potencial de
transmisso do parasito. Para justifica a fatdica ocorrncia de leishmaniose visceral em canil
localizado em rea no endmica da doena e livre do vetor, Gaskin et al. (2002) sugeriram a
possibilidade de transmisso vertical da infeco por L. infantum na ausncia do vetor
invertebrado. H ainda relatos na literatura que apontam a ocorrncia de transmisso da
infeco por outras vias ainda no consideradas como a por transfuso sangunea (De Freitas
et al., 2006). A transmisso vertical da infeco em candeos foi tambm sugerida por
Masucci et al. (2003) e Dubey et al. (2005).
Dessa maneira, com os resultados dessa pesquisa e com a anlise de outros trabalhos
publicados, pode-se inferir que existe a possibilidade de uma infeco antes mesmo da
fecundao ocorrer, atravs da contaminao do ovrio e consequentemente dos ocitos que
ali esto presentes. Essa hiptese poder estabelecer novos mtodos de controle da doena e
restringir a aplicao de biotecnologias reprodutivas em animais portadores de Leishmania,
sendo eles assintomticos ou no.
Palavras-chave: Ovrio; Leishmaniose; Ces.

REFERNCIAS
ANDRADE, H. M., TOLEDO, V. P. C. P., MARQUES, M. J., SILVA, J. C. F.,
TAFURI, W. L., MAYRINK, W., GENARO, O. Leishmania (Leishmania) chagasiis
not vertically transmitted in dogs. Vet. Parasitol.,v.103, p.7181, 2002.

DE FREITAS, E., MELO, M. N., DA COSTA VAL, A. P., MICHALICK, M. S.

Transmission of Leishmania infantum via blood transfusion in dogs: potential for
infection and importance of clinical factors. Vet . Parasitol., v. 137, n. 1-2, p. 159-167,
2006.

DUBEY, J. P., ROSYPAL, A. C., PIERCE, V., SCHEINBERG, S. N., LINDSAY, D.

S. Placentitis associated with leishmaniasis in a dog. J. Am.Vet. Med. Assoc., v.227,
n.8, p.1266-1269, 2005.

GASKIN, A. A., SCHANTZ, P., JACKSON, J., BIRKENHEUR, A., TOMLINSON,

L., GRAMICCIA, M., LEVY, M.,STEURER, F.,KOOLMAR, E., HEGARTY, B. C.,
AHN, A., BREITSCHWERDT, E.B. Visceral leishmaniasis in a New York foxhound
kennel. J. Vet. Intern. Med., v.16, p. 34-44, 2002.

GAVGANI, A. Samad Mazloumi et al. Domestic dog ownership in Iran is a risk factor
for human infection with Leishmania infantum. The American journal of tropical
medicine and hygiene, v. 67, n. 5, p. 511-515, 2002.

KUHLS, K.; ALAM, M. Z.; CUPOLILLO, E.; FERREIRA, G. E. M.; MAURICIO, I.

L.; ODDONE, R.; FELICIANGELI, M. D.; WIRTH, T.; MILES, M. A.; SCHONIAN.
G. Comparative microsatellite of new world Leishmaniainfantum reveals low
heterogeneity among populations and recent old world origin. PLoSNeglTropDis, San
Francisco, v. 5, n. 6, p. e1155, 2011.

MASUCCI, M., DE MAJO, M., CONTARINO, R. B., BORRUTO, G., VITALE, F.,
PENNISI, M. G. Canine leishmaniasis in the newborn puppy. Vet. Res. Commun.,
v.27, Suppl.1, p.771-774, 2003.

MAUEL, J. Macrophage-parasite interactions in Leishmania infections. Journal of

leukocyte biology, v. 47, n. 2, p. 187-193, 1990.

ORGANIZAO MUNDIAL DE SADE (OMS), Leishmaniasis Disponvel em: <

http://www.who.int/in/> Acesso em: 11 abril. 2016.

PETERSEN, CHRISTINE A.; BARR, STEPHEN C. Canine leishmaniasis in North

America: emerging or newly recognized?. Veterinary Clinics of North America: Small
Animal Practice, v. 39, n. 6, p. 1065-1074, 2009.

ROSYPAL, A. C., TROY, G. C., ZAJAC, A. M., FRANK, G., LINDSAY, D. S.

Transplacental transmission of a North American isolate of Leishmaniainfantum in a
experimentally infected beagle. J. Parasitol., v.91, n.4, p.970-972, 2005.

SILVA, F.L et al. Genital lesions and distribution of amastigotes in bitches naturally
infected with leishmaniachagasi. Veterinary Parasitology, v. 165, n. 1, p. 1-8, 2008.