Clasificacin de los lpidos

Los lpidos se pueden clasificar muy adecuadamente por la estructura de su

molcula en ( 1) lpidos complejos o saponificables y (2) t pido sencillos o no
saponificables. Los primeros que contienen cidos grasos como componentes
de su molcula, incluyen a los acilglicridos, los fosfoglicridos, los
esfingolpidos y las ceras. Las ceras no nos interesan desde el punto de vista
de la biologa celular. Los sencillos no contienen cidos grasos en su molcula
y no son por tanto saponificables. La saponificacin es la propiedad de producir
jabones con los calis.
Los cidos grasos, componentes importantes de los lipidos complejos, estan
constituidos por una cadena hidrocarbonada larga con un carboxtlo terminal La
cadena puede ser saturada o tener uno o ms enlaces doble . Los ms
frecuentemente encontrados en el reino animal son de nmero par de tomos
de carbono, principalmente, entre 16 y 20 atamos de carbono; por ejemplo, el
cido palmtico con 16 y el oleico con 18 tomos de carbono. Los mamferos
pueden sintetizar todos los acidos grasos menos el linoleico y el gamma-
linolnico, que se consideran esenciales en la dieta, y se obtienen de los
vegetales. Ambos tienen 18 tomos de carbono pero, mientras el linoleico tiene
2 dobles enlaces el linolnico tiene 3. Estos dos cidos grasos esenciales son
precursore::, de las prostaglandinas que son fundamentales para ciertas
funciones fisiolgicas importantes.
Acilglicridos
Son steres de cidos grasos y de la glicerina Cuando los tres hidroxilos de la
glicerina estn esterificados con cidos grasos, se les llama triacilglicridos,
que son los principales componentes de los lpidos de deposito de la clula
animal y vegetal.
F osfoglicridos
A esta clase de lpidos complejos se Je ha llamado tambien glicerilfosfatidos
Son los principales componentes de las membranas celulares En estos
compuestos uno de los grupos hidroxilos primarios de la glicerina se halla
esterificado por el acido fosfrico y los ciernas lo estn por cidos grasos.
Como estos compuestos tiene una cabeza polar, -el acido fosfrico- y dos
cabezas apolarcs - los cidos grasos-, se llaman anfipticos
Unidas al cido fosforico puede ir la etanolamina o la colina, y tendremos
entonces los fosfoglicridos de etanolamina y los fosfogliceridos de colina, que
antiguamente se llamaban cefalina y lecitina respectivamente
Esfingolpidos y Glicolpidos
Son lpidos complejos que estn compuestos por
( 1) esfingo ina,
(2) una o dos cadenas de cidos grasos y
(3) una cabeza polar.
Los mas abundantes son la esfingornielinas cuya cabeza polar est compuesta
por fosforil-etanolamina o fosforil-colina La esfingosina se halla unida mediante
su grupo amino a un acido graso insaturado constituyendo una estructura que
recibe el nombre de ceramida y es el compuesto bsico de todos los
esfingolpidos.
Hay un grupo de esfingolpidos con restos azucarados como cabezas polares y
que por ello reciben el nombre de glucoesfingolp1dos
Entre estos tenemos los cerebrsidos que contienen galactosa y los
ulftidos que contienen galactosa sulfatada
Finalmente, slo vamos a mencionar un grupo muy importante de
glucoesfingoltpidos. los ganglisidos, que contienen uno o mas resto de acido
silico, lo que le da un carcter acido a la cabeza polar Esto compuestos van
unidos a la ceramida mediante re tos glucosa, pero pueden adems contener
restos galactosa y -acetilgalactosarnina, aparte de los restos cidos sialicos y
parecen participar en la transmision de la informacion a travs de la membrana
(Fishman y Brady 1976)
Monocapas, Bicapas y Mi celas Lipdica
En sistemas acuosos, los lpidos, principalmente, los fosfolptdos, que poseen
una "cola" apolar y una "cabeza" polar, se disponen con sus colas apolares
hidrfobas en direccin opuesta a la uperficie del agua y sus cabezas polares
dirigidas precisamente en esa direccin Esta disposicin lleva, cuando stas
molculas estn en un medio acuoso, a la formacin de micelas.
La importancia de esta observacin es porque permite el estudio de las
propiedades fisicas de esto modelos tan imilares a las membranas celulare -on
permeable al agua, pero relativamente impermeables a los cat1one ( a, K) y
aniones (CI) Tienen una gran capacitancia y resistencia electrica ya que la capa
hidrocarbonada continua tiene una baja constante dielectnca y es un conductor
muy pobre Estas y otras muchas ob ervac1ones han llevado al conocimiento
actual de las membranas h10- log1cas, cuyo estudio no podemos abordar aqu
Mtodos histoqumicos e histofsicos para la demostracin de lpidos.
Introduccin
Como dice \DAMS en su libro \e11roh1,1ochcr111,1n ( J 959 ). qu11as el meJnr
sobre la rnatena, 'los metodm lrn,toqu1m1cos dan 1nformacion mas util \
segura sobre la naturaleza de los hp1dos. en corte!'> h1..,toh)_g.ico que los
metodos h1'>tofis1cos"
1n embargo los metodo'i h1stotts1cos tienen su uttlidad en un e amen
preliminar ..,,empre Sl'l.!.Ull el auto citado, el '\euro . udan e:- el ma'>
informall\-O de todos Los metodos histoqu1m1cos dan una 111fonnacion
detallada de la naturaleza qu1m1ca de los hp1dos tisulares
1 \.1strn dos problemas sm embart1 en el estudio de lo-. ltp1dt1.-. ( 1) cuando
se \ an a demostrar fosfoltp1dos hidrfilo-. con metodo. hrstnqu1mico"> la
local1Lac1on de aquellos en el seno de hpido.., h1dw fobos. puede hacer
inaccesible a los reactt\Os acuo">os su llegada ,1 ello-. por tanto su
demo-,trac1on \('.?.)los metodos de C\.traccron de lip1do.., preconizado, corno
te tigos negativos de estas reacciones car eccn de sentido segun \dam">, va
que normalmente estan u111dos a protemas o polt..,acandos. de tal manera,
que es 1mpos1ble su e,tracc1on Por supuesto la e,tracc,on de las grasas
neutras de deposito cs. por el urntrar 10. mu\ fcil
Mtodo del tetrxido de osmio-alfa naftilamina para fosfolpidos, steres del
colesterol y steres de los triglicridos (Adams, 1959)
1. Fijar los cortes en formaldehido-calcio (acetato de calcio al 1 % en
formalina al 10% o cloruro clcico al 1 % en formalina al 10%, mantenida sobre
exceso de carbonato clcico). Aunque los autores no especifican tiempo ni
temperatura, 24 horas a temperatura ambiente puede ser adecuado.
2. Hacer cortes en el microtomo de congelacin de I O a 15 micras.
3. Tratar los cortes flotantes durante 18 horas, en una mezcla de I parte de
tetrxido de osmio al 1 % y tres partes de KCIO al 1 %, contenidos en un
recipiente hermticamente sellado y en campana de extraccin.
4. Lavar los cortes en agua destilada 1 O minutos y montarlos en portas
5. Tratar los cortes con una solucin acuosa saturada de alfa-naftilamina
en una incubadora a 3 7, de 1 O a 15 minutos. La solucin saturada de alfa-
naftilamina se prepara aadiendo este reactivo al agua destilada, previamente
calentada a 40 y filtrando despus.
NOTA: Hay que tener la precaucin de que la alfa-naftilamina sea pursima,
pues, si no lo es, puede ir contaminada con la forma beta que es un
carcingeno.
6. Lavar los cortes con agua destilada durante 5 minutos.
7. Contrateir con Azul Alciano al 0,5% en cido actico al 3%.
8. Montar en gelatina-glicerina.
Resultados:
Los fosfolpidos se tien de rojo-anaranjado, mientras que el colesterol y
steres de los triglicridos se tien de negro.
Mtodo de la NaOH-OTAN para esfingomielina (Adams y Bayliss, 1963)
Entre los pasos 1 y 2 del mtodo anterior hay que insertar lo que sigue:
1 a. Hidrolizar cortes flotantes en NaOH 2N a 3 7C durante I hora.
1 b. Lavar suavemente en agua, enjuagar en cido actico al 1 % durante 1
minuto y lavar de nuevo en agua.
Resultado
La esfingomielina y otros fosfolpidos lcali resistentes se tien de rojo
anaranjado Los fosfoglicridos lcali lbiles, son destruidos por la hidrolisis Lo
steres del colesterol y de los triglicridos e tien de negro
Mtodo del cobre-cido rubenico para los cidos grasos ( Holczinger, 1959).
1. Cortar tejido sin fijar en el criomicrotomo
2. Secar al aire las secciones, montadas en portas
3. Tratar con acetato cprico acuoso al 0,005% de tres a cinco horas
4. Lavar dos veces 10 segundos cada vez, en EDTA disdica al 0,1% a pH
5. Lavar 10 minutos en agua destilada
6. Sumergir los cortes en cido rubenico al 0, 1% en etanol de 70%, durante
tres minutos Disolver el cido rubenico en etanol absoluto, calentar
ligeramente y aadir agua para que quede al 70%
7. Lavar algunos minutos en etanol al 70% y despus en agua destilada 8
Deshidratar. aclarar y montar
NOTA Se pueden emplear tambin cortes fijados en formalina y cortados en el
microtomo de congelacin
Resultados
Los cidos grasos se tien en color verde negruzco
Mtodos que usan colorantes solubles en las grasas
Las tcnicas usuales para la demostracin de grasas neutras. esto es. de
aquellas que se encuentran en el interior de las clulas en forma de depsito o
almacenamiento, son tcnica con un fundamento fsico no qumico, esto es. no
se trata de tcnicas de coloracin 1110 de solubilizacion
El principio fsico en que se basan es el del producto de solubilidad En efecto,
si el colorante e mas soluble en los componentes grasos de tejidos y clulas,
que en el lquido en el que van disueltos. cuando la solucin del colorante se
ponga en contacto con el tejido habr una transferencia de la sustancia
colorante, desde la solucin hacia los componentes grasos del tejido.
Los colorantes bisazo. Los sudanes
Para este propsito de la coloracin de componentes grasos, se han usado
tradicionalmente, desde 1896, los Sudanes, especialmente el Sudn III y el
Sudn IV, el Negro Sudn y, ms recientemente, el Rojo Oleoso O.

Cuando el mismo esqueleto lleva cuatro grupos metilos se trata del Rojo
Oleoso O, el cual por tener ms grupos CH3 que los anteriores, es considerado
como el mejor "colorante" de grasas hasta ahora conocido (Lillie, 1944).
Finalmente hay que mencionar el Negro Sudn B,

Este colorante, sin embargo, debido a los dos grupos aminos secundarios que
posee, puede reaccionar qumicamente con componentes tisulares. La
sudanofilia estable de los leucocitos (Lillie y Burtner, 1953) es de esta
naturaleza. Esto se puede evitar acetilando el colorante, pero esto introduce
una complicacin que lo hace menos til para la rutina del laboratorio.
Mtodos para la tincin de grasas neutras con rojo Oleoso O, segn Lillie
(1944).
El mtodo para la tincin de grasas neutras con Rojo Oleoso O ( en ingls, Oil
Red O) es como e da a continuacin. Se puede usar material fijado en
formalina de rutina, cortados en el microtomo de congelacion con CO2 o en
material sin fijar, congelado con isopentano a -160 y cortado en el
criomicrotorno o otros hemos usado este ltimo procedimiento durante muchos
ao con buenos resultados
La solucion madre de ROJO Oleoso O se prepara como sigue
En el momento de usar se prepara una dilucin a partir de e ta, como sigue

La solucin as1 preparada, a la que ilamaremos solucion de trabaJo, se de.1a

e tar uno. 1 O a I e; minuto y luego se filtra, egun Lillie ( 1944) El procedimiento
de tincion e. el que se da a continuacion
1 -Cubrir lo cortes obtenidos en el criomicrotomo y dejados secar al aire unos I
O minutos con la solucion B filtrada sobre el corte
'.2 -La"ar con agua de tilada
3 -reir con hematoxilina de l larris acetificada durante 30 segundos 4 -Virar la
hematoxilina al chorro del agua de la llave unos I O minuto 5 -Montar en
gelatina-glicerina
Rc!:>ultados -Las grasa-; neutras se tien de rojo y lo nucleo!:> en color a/lil