LA HIDRLISIS DE MATERIALES LIGNOCELULSICOS PARA LA PRODUCCIN DE ETANOL: UNA

REVISIN

Resumen

La biomasa lignocelulsica se puede utilizar para producir etanol, una fuente de energa
alternativa y prometedora para el limitado petrleo crudo. Hay principalmente dos procesos que
intervienen en la conversin: la hidrlisis de la celulosa en la biomasa lignocelulsica para
producir la reduccin de azcares, y la fermentacin de los azcares a etanol. El costo de
produccin de etanol a partir de materiales lignocelulsicos es relativamente alto basado en las
tecnologas actuales, y los principales desafos son el bajo rendimiento y alto costo del proceso de
hidrlisis. se han realizado esfuerzos de investigacin considerables para mejorar la hidrlisis de
materiales lignocelulsicos. El pretratamiento de materiales lignocelulsicos para eliminar la
lignina y la hemicelulosa puede mejorar significativamente la hidrlisis de la celulosa.
Optimizacin de las enzimas de celulasa y la carga de la enzima tambin puede mejorar la
hidrlisis. La sacarificacin y la fermentacin simultneas eliminan eficazmente la glucosa, que es
un inhibidor de la actividad de la celulasa, lo que aumenta el rendimiento y la velocidad de
hidrlisis de la celulosa.

1. Introduccin
El consumo de energa ha aumentado de forma constante durante el siglo pasado como la
poblacin mundial ha crecido y se han convertido en ms pases industrializados. El petrleo
crudo ha sido el principal recurso para satisfacer la creciente demanda de energa. Campbell y
Laherrere (1998) utilizaron varias tcnicas diferentes para estimar las reservas de crudo actuales
conocidas y las reservas an por descubrir y concluyeron que la disminucin de la produccin de
crudo en todo el mundo comenzar antes de 2010. Tambin predijeron que la produccin anual
mundial de petrleo se reducira desde los actuales 25 millones de barriles de aproximadamente
5 mil millones de barriles en 2050. Debido a que la economa en los EE.UU., y muchas otras
naciones depende del petrleo, las consecuencias de la inadecuada disponibilidad de petrleo
podran ser graves. Por lo tanto, hay un gran inters en la investigacin de las fuentes alternativas
de energa.

A diferencia de los combustibles fsiles, el etanol es una fuente de energa renovable que se
produce a travs de la fermentacin de azcares. El etanol se utiliza ampliamente como un
reemplazo parcial de la gasolina en los EE.UU.. etanol combustible que se produce a partir del
maz se ha utilizado en gasohol o combustibles oxigenados desde los aos 1980. Estos
combustibles de gasolina contienen hasta un 10% de etanol en volumen. Como resultado, el
sector del transporte de EE.UU. ahora consume alrededor de 4540 millones de litros de etanol al
ao, alrededor de 1% del consumo total de gasolina (Wang, 1999). Recientemente, los fabricantes
de automviles estadounidenses han anunciado planes para producir un nmero significativo de
vehculos de alimentacin flexible-que pueden utilizar una mezcla de etanol - E85 (85% etanol y
15% de gasolina en volumen) - solo o en combinacin con la gasolina. El uso de combustible
mezclado con etanol para los automviles puede reducir significativamente el uso del petrleo y
las emisiones de gases de efecto invernadero (Wang., 1999). El etanol es tambin una alternativa
ms segura al ter metil butilo terciario (MTBE), el aditivo ms comn a la gasolina utilizada para
proporcionar una combustin ms limpia (McCarthy y Tiemann, 1998). MTBE es un compuesto
qumico txico y se ha encontrado en aguas subterrneas contaminadas. La Agencia de Proteccin
Ambiental de Estados Unidos ha anunciado recientemente el inicio de la accin reguladora para
eliminar MTBE en la gasolina (Browner, 2000). Sin embargo, el costo de etanol como fuente de
energa es relativamente alto en comparacin con los combustibles fsiles. Un aumento
dramtico en la produccin de etanol utilizando la tecnologa actual basada en el almidn de maz
puede no ser prctico porque la produccin de maz para etanol competir por el suelo agrcola
limitada necesaria para la produccin de alimentos y cuidos. Una fuente potencial para la
produccin de etanol de bajo costo es utilizar materiales lignocelulsicos tales como residuos de
cultivos, pastos, serrn, virutas de madera y residuos slidos de animales.

Una amplia investigacin se ha completado en la conversin de materiales lignocelulsicos a

etanol en las dos ltimas dcadas (Dale, 1984;. Wright, 1998; Azzam, 1989; Cadoche y L opez,
1989;. Reshamwala, 1995; Bjerre et al., 1996 ; Duff y Murray, 1996). La conversin incluye dos
procesos: la hidrlisis de la celulosa en los materiales lignocelulsicos fermentables azcares
reductores, y la fermentacin de los azcares en etanol. La hidrlisis es catalizada por lo general
por enzimas celulasa, y la fermentacin se lleva a cabo por las levaduras o bacterias. Los factores
que han sido identificados para afectar a la hidrlisis de la celulosa incluyen porosidad (zona
accesible de la superficie) de los materiales de desecho, la cristalinidad de la fibra de celulosa y la
lignina y contenido de hemicelulosa (McMillan, 1994). La presencia de lignina y la hemicelulosa
hace que el acceso de las enzimas de celulasa a la celulosa sea difcil, lo que reduce la eficiencia de
la hidrlisis. El contenido de celulosa, hemicelulosa y lignina en residuos agrcolas comunes se
enumeran en la Tabla 1. La eliminacin de la lignina y la hemicelulosa, la reduccin de la
cristalinidad de la celulosa, y el aumento de la porosidad en los procesos de pretratamiento
pueden mejorar significativamente la hidrlisis (McMillan, 1994).

2. El pretratamiento de materiales lignocelulsicos

El efecto del pretratamiento de materiales lignocelulsicos se ha reconocido durante mucho
tiempo (McMillan, 1994).

El objetivo del pretratamiento es eliminar la lignina y la hemicelulosa, reducir la cristalinidad de la

celulosa, y aumentar la porosidad de los materiales. El pretratamiento debe cumplir con los
siguientes requisitos: (1) mejorar la formacin de azcares o la capacidad de formar
posteriormente azcares por hidrlisis enzimtica; (2) evitar la degradacin o prdida de los
hidratos de carbono; (3) evitar la formacin de subproductos inhibidores para los subsiguientes
procesos de hidrlisis y fermentacin; y (4) ser rentable. procesos Fsicos, fisicoqumicos, qumicos
y biolgicos se han utilizado para el tratamiento previo de materiales lignocelulsicos.

2.1. pretratamiento fsico

2.1.1. trituracin mecnica
Los materiales de desecho pueden ser triturados por una combinacin de astillado, trituracin y
molienda para reducir la cristalinidad de la celulosa. El tamao de los materiales es generalmente
de 10 a 30 mm despus de astillado y 0,2-2 mm despus de la molienda o trituracin. El molino de
bolas vibratorio se ha encontrado ms eficaz que el molino de baln ordinario para la
descomposicin de la cristalinidad de celulosa de picea y virutas de lamo tembln y para mejorar
la digestibilidad de la biomasa (Millet., 1976). El requisito de potencia de trituracin mecnica de
los materiales agrcolas depende del tamao de partcula final y las caractersticas de los residuos
de biomasa (Cadoche y Lopez, 1989). Una comparacin se muestra en la Tabla 2.

La descomposicin es mucho ms lenta y menos productos voltiles se forman a temperaturas

ms bajas. La hidrlisis cida suave (1 N H2SO4, 97? C, 2,5 h) de los residuos del pretratamiento
de la pirlisis se ha traducido en un 80-85% de conversin de la celulosa en azcares reductores
con ms de 50% de glucosa (Fan., 1987). El proceso se puede mejorar con la presencia de oxgeno
(Shafizadeh y Bradbury, 1979). Cuando se aade cloruro de cinc o carbonato de sodio como
catalizador, la descomposicin de la celulosa pura se puede producir a una temperatura inferior

2.1.2. La pirolisis
La pirlisis tambin se ha utilizado para el tratamiento previo de materiales lignocelulsicos. ?
Cuando los materiales son tratados a temperaturas superiores a 300C, la celulosa se
descompone rpidamente para producir productos gaseosos y carbn residual (Kilzer y Broido,
1965; Shafizadeh y Brad-Bury, 1979). (Shafizadeh y Lai, 1975).

2.2 Pretratamiento fisico-qumico

22.1 Steam explosion (explosin de vapor- autohidolisis)

Steam explosion es el mtodo ms comnmente utilizado para el pretratamiento de materiales

lignocelulsicos. En este mtodo, la biomasa chipped (astillada ) se trata con vapor saturado (de
agua) a alta presin y luego, la presin se reduce rpidamente, lo que hace que los materiales se
someten a una descompresin explosiva. Steam explosion es tpicamente iniciado a una
temperatura de 160 a 260C (correspondiente presin de 0,69 a 4,83 MPa) durante varios
segundos a unos pocos minutos antes que el material est expuesto a la presin atmosfrica. El
proceso causa la degradacin de hemicelulosa y lignina, transformacin debida a la alta
temperatura, lo que aumenta el potencial de la hidrlisis de la celulosa. El noventa por ciento de
eficiencia de la hidrlisis enzimtica se ha conseguido en 24 h para las virutas de lamo
pretratado por steam explosion, en comparacin con slo 15% de hidrlisis de los chips (astillas)
no tratadas. Los factores que afectan pretratamiento con steam explosion son el tiempo de
residencia, la temperatura, el tamao de la astilla y el contenido de humedad. La ptima
solubilizacin de la hemicelulosa y la hidrlisis se puede lograr por altas temperaturas , y corto
tiempo de residencia (270C, 1 min) o temperatura ms bajas y tiempo de residencia ms largo
(190C, 10 min). Estudios recientes indican que la menor temperatura y el tiempo de residencia
ms largo son ms favorables.

Adicin de H2SO4 (or SO2) or CO2 en steam explosion puede mejorar efectivamente la hidrlisis
enzimtica, disminuir la produccin de compuestos inhibidores, y dar lugar a la eliminacin ms
completa de la hemicelulosa. Se han encontrado las condiciones ptimas para el pretratamiento
del bagazo de caa con steam explosion , y son las siguientes: 220C; tiempo de residencia de 30s;
relacin agua-slidos , 2; y 1% H2SO4. La produccin de azcar fue de 65,1 g de azcar / 100 g a
partir del bagazo despus del pretratamiento de steam explosion .

Las ventajas del pretratamiento de steam explosion incluyen el bajo requerimiento de energa en
comparacin con la trituracin mecnica , el no reciclaje o costes ambientales. Los mtodos
mecnicos convencionales requieren 70% ms energa que el steam explosion para lograr la
misma reduccin del tamao. Steam explosion es reconocido como uno de los procesos de
pretratamiento ms rentables para maderas duras y residuos agrcolas, pero es menos eficaz para
ablandar madera. Limitaciones de steam explosion incluyen la destruccin de una parte de la
fraccin de xilano, la interrupcin incompleta de la matriz de lignina-carbohidrato, y generacin
de compuestos que pueden ser inhibitoria a los microorganismos utilizados en los procesos aguas
abajo. Debido a la formacin de productos de degradacin que son inhibidoras de crecimiento
microbiano, la hidrlisis enzimtica y la fermentacin, la biomasa pretratada necesita ser lavada
con agua para eliminar los materiales inhibidores junto con la hemicelulosa soluble en agua. El
lavado con agua disminuye los rendimientos globales de sacarificacin debido a la eliminacin de
los azcares solubles, tales como los generados por hidrlisis de hemicelulosa. Por lo general, el
20-25% de la materia seca inicial se elimina por lavado con agua.

2.2.2. Ammonia fiber explosion (AFEX)

AFEX es otro tipo de pretratamiento fsico-qumica en la que los materiales lignocelulsicos se

exponen a amonaco lquido a alta temperatura y presin durante un perodo de tiempo, y luego
la presin se reduce rpidamente. El concepto de AFEX es similar al stream explosion. En un
proceso tpico AFEX, la dosis de amonaco lquido es de 1-2 kg de amoniaco biomasa / kg de
materia seca, la temperatura de 90 C, y el tiempo de permanencia, 30 min. AFEX pretratamiento
puede mejorar significativamente las tasas de sacarificacin de diversos cultivos herbceos y
pastos. Se puede utilizar para el tratamiento previo de muchos materiales lignocelulsicos
incluyendo alfalfa, paja de trigo, paja de cebada, rastrojo de maz, paja de arroz, residuos slidos
urbanos, prensa blanda, prensa kenaf, hierba costera Bermuda, pasto varilla, virutas de lamo, y
el bagazo.

El pretratamiento AFEX no solubiliza significativamente la hemicelulosa en comparacin con el

pretratamiento con cido (que se discutir en la siguiente seccin) y acido-catalisis steam
explosion. Mes-Hartree et al. (1988) compararon el pretratamiento de steam y amoniaco para la
hidrlisis enzimtica de madera de lamo,paja de trigo, alfalfa y tallos, y se encontr que steam
explosion solubiliza la hemicelulosa, mientras AFEX no lo hizo. La composicin de los materiales
despus del pretratamiento AFEX fue esencialmente el mismo que en el material original. Ms del
90% de hidrlisis de la celulosa y la hemicelulosa se ha obtenido despus del pretratamiento
AFEX de la hierba de Bermudas (aproximadamente 5% de lignina) y bagazo (15% de lignina). Sin
embargo, el proceso de AFEX no era muy eficaz para la biomasa con alto contenido en lignina
tales como el peridico (18 a 30% lignina) y viruta de lamo (25% de lignina). Se report
rendimiento de la hidrlisis del peridico y virutas de lamo pretratados con AFEX fue slo 40% y
por debajo de 50%, respectivamente. Para reducir el costo y la proteccin del medio ambiente, el
amoniaco se debe reciclar despus del tratamiento previo. En un proceso de recuperacin de
amonaco, se utiliz un vapor de amonaco supercalentado a una temperatura de hasta 200C
para vaporizar y tira el amoniaco residual en la biomasa pretratada y despus el amoniaco
evaporado es retirado del sistema por un controlador de presin para recuperacin. El
pretratamiento con amonaco no produce los inhibidores de los procesos biolgicos corriente
abajo, por lo que el agua de lavado no es necesario. Pretratamiento AFEX no requiere tamao de
partculas pequeos para ser eficaz .

2.2.3. CO2 explosion

Similar a pretratamiento steam explosion y amoniaco, explosin CO2 tambin se utiliza para el
tratamiento previo de materiales lignocelulsicos. Se plante la hiptesis de que el CO2 podra
formar cido carbnico y aumentar la velocidad de hidrlisis. Dale y Moreira (1982) utilizan este
mtodo para tratar previamente la alfalfa (4 kg de CO2 = kg de fibra a la presin de 5.62 MPa) y
obtener 75% de la glucosa terico liberada durante las 24 h de la hidrlisis enzimtica. Los
rendimientos son relativamente bajos en comparacin con el pretratamiento stream explosion o
amoniaco , pero alto en comparacin con la hidrlisis enzimtica sin pretratamiento. Zheng et al.
(1998) compar la explosin con vapor de CO2 y explosin de amoniaco para el tratamiento
previo de la mezcla de papel reciclado, bagazo de caa de azcar, y el triturado de residuos de
papel reciclado, y se encontr que la explosin de CO2 era ms rentable que la explosin de
amoniaco y no caus la formacin de compuestos inhibidores que podran ocurrir en steam
explosion

2.3 Pretratamiento qumico

2.3.1. Ozonolysis:

El ozono puede ser utilizado para degradar la lignina y la hemicelulosa en muchos materiales
lignocelulsicos como la paja de trigo, bagazo, paja verde, man, pino, paja de algodn, y la viruta
de lamo. La degradacin era esencialmente limitada en la lignina y la hemicelulosa fue
ligeramente atacada, pero la celulosa result poco afectada. La velocidad de hidrlisis enzimtica
aument en un factor de 5 despus de la eliminacin del 60% de la lignina de la paja de trigo en el
pretratamiento de ozono. Como el rendimiento de la hidrlisis enzimtica aument de 0% a 57%
el porcentaje de lignina se redujo de 29% a 8% despus del pretraramiento de ozonlisis de viruta
de lamo. Pretratamiendo de ozonlisis tiene las siguientes ventajas: (1) se elimina de forma
efectiva la lignina; (2) que no produce residuos txicos para los procesos posteriores; y (3) las
reacciones se llevan a cabo a temperatura y presin ambiente . Sin embargo, se requiere una
gran cantidad de ozono, haciendo el proceso caro.

2.3.2. Hidrlisis cida

Los cidos concentrados tales como H2SO4 y HCl se han utilizado para el tratamiento de
materiales lignocelulsicos. A pesar de que son agentes potentes para la hidrlisis de celulosa, los
cidos concentrados son txicos, corrosivos y peligrosos y requieren reactores que son resistentes
a la corrosin. Adems, el cido concentrado debe recuperarse despus de la hidrlisis para hacer
que el proceso sea econmicamente factible.

hidrlisis cida diluida se ha desarrollado con xito para el pretratamiento de materiales

lignocelulsicos. El tratamiento previo con cido sulfrico diluido puede lograr altas velocidades
de reaccin y mejorar significativamente la hidrlisis de la celulosa. A temperatura ambiente, la
sacarificacin directa sufra de bajos rendimientos debido a la descomposicin del azcar. Alta
temperatura en el tratamiento con cido diluido es favorable para la hidrlisis de la celulosa.
Recientemente se han desarrollado procesos de hidrlisis cido diluido en condiciones menos
severas y lograr un alto xilano rendimiento de conversin de xilosa. El logro de alto xilano a
rendimientos de conversin de xilosa es necesaria para lograr una economa global favorable del
proceso porque las cuentas de xilano son de hasta un tercio de la cantidad total de carbohidratos
en muchos materiales lignocelulsicos. Existen principalmente dos tipos de procesos de
pretratamiento con cido diluido : alta temperatura (T mayor de 160 C), el proceso de flujo
continuo de slidos de baja carga (5- 10% [peso de sustrato / peso de la mezcla de reaccin]) y
baja temperatura (T inferior a 160 C), proceso por lotes de alto contenido en slidos de carga (10-
40%). A pesar de que el pretratamiento con cido diluido puede mejorar significativamente la
hidrlisis de la celulosa, su costo es generalmente ms alto que algunos procesos de
pretratamiento fsico-qumicos como steam explosion o AFEX. Una neutralizacin de pH es
necesario para los procesos de hidrlisis enzimtica o fermentacin aguas abajo.

2.3.3. La hidrlisis alcalina

Algunas bases tambin se pueden utilizar para el tratamiento previo de materiales
lignocelulsicos y el efecto del pretratamiento alcalino depende del contenido de lignina
de los materiales (Fan et al, 1987; McMillan, 1994). El mecanismo de la hidrlisis alcalina
se cree que es saponificacin de enlaces ster intermoleculares de entrecruzamiento de
hemicelulosas, xilano y otros componentes, por ejemplo, la lignina y otra hemicelulosa. La
porosidad de los materiales lignocelulsicos aumenta con la eliminacin de los
entrecruzamientos (Tarkow y Feist, 1969). El tratamiento con NaOH diluido de materiales
lignocelulsicos caus inflamacin, lo que lleva a un aumento en rea de superficie
interna, una disminucin en el grado de polimerizacin, una disminucin de la
cristalinidad, la separacin de los enlaces estructurales entre la lignina y carbohidratos, y
la interrupcin de la estructura de la lignina (Fan et al ., 1987). La digestibilidad de la
madera dura tratada con NaOH se increment de 14% a 55% con la disminucin del
contenido de lignina 24-55% a 20%. Sin embargo, no resulto tratamiento previo de NaOH
diluido se observ para maderas blandas con contenido de lignina mayor que 26% (mijo
et al., 1976). El pretratamiento de NaOH diluido tambin es efectivo reflexivo para la
hidrlisis de la paja con relativamente bajo contenido de lignina de 10 a 18% (Bjerre et al.,
1996). Chosdu et al. (1993) utilizaron la combinacin de irradiacin y NaOH al 2% para el
pretratamiento de caa de maz, cscara de yuca y la cscara de man. El rendimiento de
glucosa de tallo de maz fue de 20% en las muestras no tratadas en comparacin con 43%
despus del tratamiento con irradiacin de haz de electrones a una dosis de 500 kGy y 2%
de NaOH, pero los rendimientos de glucosa de la corteza de yuca y cscara de cacahuete
eran slo el 3,5% y el 2,5%, respectivamente.
El amonaco tambin se us para el tratamiento previo para eliminar la lignina. Iyer et al.
(1996) describieron un proceso de amonaco reciclado de percolacin (temperatura, 170
C. Concentracin de amonaco, 2,5 a 20%. Tiempo de reaccin, 1 h) para el tratamiento
previo de maz mezcla mazorcas / Stover y csped Panicum virgatum. La eficiencia de des
lignificacin era 60-80% de las mazorcas de maz y 65-85% para el pasto varilla.
2.3.4 Des lignificacin Oxidativa
La biodegradacin de la lignina puede ser catalizada por la enzima peroxidasa con la
presencia de H2O2 (Azzam, 1989). El tratamiento previo de bagazo de caa con perxido
de hidrgeno mucho mayor su susceptibilidad a la hidrlisis enzimtica. Alrededor del
50% de lignina y la mayor parte de hemicelulosa se disolvieron en un 2% de H 2O2 al 30 C
dentro de las 8 h, y 95% de eficiencia de la produccin de glucosa a partir de celulosa se
logr en la saccharification posterior por celulasa a 45 C durante 24 h (Azzam, 1989) .
Bjerre et al. (1996) utilizaron la oxidacin hmeda y la hidrlisis alcalina de la paja de trigo
(20 g de paja / l, 170? C, 5 a 10 min), y ha logrado versin rendimiento 85% con- de
celulosa en glucosa.
2.3.5. Proceso organosolv
En el proceso organosolv, una mezcla de disolvente orgnico acuoso u orgnico con
catalizadores cidos inorgnicos (HCl o H2SO4) se utiliza para romper los enlaces de
lignina y hemicelulosa internos. Los disolventes orgnicos utilizados en el proceso
incluyen metanol, etanol, acetona, etilenglicol, trietilenglicol y alcohol
tetrahidrofurfurlico (Chum et al, 1988; Thring et al., 1990). cidos orgnicos tales como
oxlico, acetilsaliclico y cido saliclico tambin se pueden utilizar como catalizadores en
el proceso organosolv (Sarka- nen, 1980). A altas temperaturas (Por encima de 185 C), la
adicin de catalizador era innecesario para la des lignificacin satisfactoria (Sarkanen,
1980; Aziz y Sarkanen, 1989). Por lo general, un alto rendimiento de xilosa se puede
obtener con la adicin de cido. Los disolventes utilizados en el proceso deben ser
drenados desde el reactor, se evapor, condensa y se reciclan para reducir el costo.
Eliminacin de los disolventes desde el sistema es necesario porque los disolventes
pueden ser inhibitorio para el crecimiento de organismos, la hidrlisis enzimtica y
fermentacin
2.4. Pretratamiento biolgico
En los procesos de pretratamiento biolgicos, los microorganismos tales como marrn-,
blanco- y hongos podredumbre blanda se utiliza para degradar la lignina y la hemicelulosa
en los materiales de desecho (Schurz, 1978). La pudricin marrn atacan principalmente
de celulosa, mientras que la pudricin blanca y blanda atacan tanto celulosa y lignina. Los
hongos de podredumbre blanca ms efectivos son los basidiomicetos para el
pretratamiento biolgico de materiales lignocelulsicos (Fan et al., 1987). Hatakka (1983)
estudi el pretratamiento de la paja de trigo por 19 los hongos de la pudricin blanca y se
encontr que 35% de la paja se convirti a la reduccin de azcares por Pleurotus
ostreatus en cinco semanas. La conversin similar se obtuvo en el pretratamiento por
Phanerochaete sordida 37 y Pycnoporus cinnabarinus 115 en cuatro semanas. Con el fin
de evitar la prdida de la celulosa, y el mutante de celulasa menor de Sporotrichum
pulverulentum fue desarrollado para la degradacin de la lignina en las astillas de madera
(Ander y Eriksson, 1977). Akin et al. (1995) tambin inform la des lignificacin de pasto
Bermuda por hongos de la pudricin blanca. La biodegradacin de pasto Bermuda tallos
fue mejorado por 29-32% utilizando Ceriporiopsis subvermispora y 63-77% utilizando
Cyathus stercoreus despus de 6 semanas.
La podredumbre blanca hongo P. chrysosporium produce enzimas que degradan la
lignina, lignina peroxidasa y peroxidasas manganeso dependiente de la humanidad,
durante el metabolismo secundario en respuesta a la limitacin de carbono o nitrgeno
(Boominathan y Reddy, 1992). Ambas enzimas se han encontrado en los infiltrados
extracelulares de muchos hongos de pudricin blanco y para la degradacin de las
paredes celulares de madera (Kirk y Farrell, 1987; Waldner et al., 1988). Otras enzimas
incluyendo polifenol oxidasas, lacasas, las enzimas que producen H2O2 y enzimas de
quinona-reductor puede alsodegrade lignina (Blanchette, 1991). Las ventajas de
pretratamiento biolgico son la baja demanda de energa y las condiciones ambientales
suaves. Sin embargo, la velocidad de hidrlisis en la mayora de los procesos de
pretratamiento biolgico es muy baja.
3. Hidrlisis enzimtica de la celulosa
La hidrlisis enzimtica de la celulosa se lleva a cabo por enzimas celulasa que son
altamente especfico (Beeguinand Aubert, 1994). Los productos de la hidrlisis son por lo
general azcares reductores incluyendo la glucosa. El costo de utilidad de la hidrlisis
enzimtica es baja en comparacin a la hidrlisis cida o alcalina debido a la hidrlisis
enzimtica es generalmente llevada a cabo en condiciones suaves (pH 4,8 y temperatura
de 45- 50 C) y no tiene un problema de corrosin (Duff y Murray, 1996). Tanto las
bacterias y hongos pueden producir celulasas para la hidrlisis de materiales
lignocelulsicos. Estos microorganismos pueden ser aerbico o anaerbico, mesfila o
termfila. Las bacterias que pertenecen a Clostridium, Cellulomonas, Bacillus,
Thermomonospora, Ruminococcus, Bacteriodes, Erwinia, Acetovibrio, Microbispora, y
Streptomyces pueden producir celulasas (Bisaria, 1991). Cellulomonas fimi y
Thermomonospora fusca han sido ampliamente estudiados para la produccin de
celulasa. Aunque muchas bacterias celulolticas, en particular los anaerobios celulolticas
tales como Clostridium thermocellum y cellulosolvens Bacteroides producen celulasas con
actividad especfica alta, que no producen ttulos altos de enzimas (Du ff y Murray, 1996).
Debido a que los anaerobios tienen una tasa de crecimiento muy bajo y requieren
condiciones de crecimiento anaerobias, la mayora de investigaciones para la produccin
de celulasa comercial se ha centrado en los hongos (Du ff y Murray, 1996).
Los hongos que se han reportado para producir celulasas incluyen Sclerotium rolfsii, P.
chrysosporium y especies de Trichoderma, Aspergillus, Penicillium y Schizophyllum
(Sternberg, 1976; Fan et al, 1987; Duff y rayos Mur-, 1996). De todos estos gneros de
hongos, Trichoderma ha sido ms ampliamente estudiado para la produccin de celulasa
(Sternberg, 1976).
Las celulasas son generalmente una mezcla de varias enzimas. Al menos tres grupos
principales de celulasas estn involucrados en el proceso de hidrlisis: (1) endoglucanasa
(. Por ejemplo, endo-1,4-D-glucanohidrolasa, o EC 3.2.1.4) que ataca a las regiones de
baja cristalinidad de la celulosa de fibra, creando de cadena extremos libres; (2)
exoglucanasa o celobiohidrolasa (. CBH, 1,4-b-D-glucano celobiohidrolasa, o EC 3.2.1.91)
que degrada la molcula ms extrayendo unidades de celobiosa de los extremos libres de
cadena; (CE 3.2.1.21) (3) b- glucosidasa que hidroliza celobiosa para producir glucosa
(Coughlan y Ljungdahl, 1988). Adems de los tres grupos principales de enzimas celulasa,
tambin hay una serie de enzimas auxiliares que atacan hemicelulosa, tales como
glucuronidasa, acetilesterasa, xilanasa, b-xilosidasa, galactomananasa y gluco-mananasa
(Duff y Murray, 1996). Durante la hidrlisis enzimtica, la celulosa se degrada por las
celulasas de azcares reductores que pueden ser fermentados por levaduras o bacterias a
etanol.
4. Mejora de la hidrlisis enzimtica
Los factores del efecto de la hidrlisis enzimtica de la celulosa incluyen sustratos, la
actividad de celulasa, y condiciones de reaccin (temperatura, pH, as como otros
parmetros). Para mejorar el rendimiento y la velocidad de la hidrlisis enzimtica, la
investigacin se ha centrado en la optimizacin del proceso de hidrlisis y la mejora de la
actividad de celulasa (Cantwell et al, 1988;.. Durand et al, 1988; Orpin, 1988).
4.1. Sustratos
La concentracin de sustrato es uno de los factores principales que afecta el rendimiento
y la velocidad inicial de la hidrlisis enzimtica de la celulosa. A bajos niveles de sustrato,
un aumento de la concentracin de sustrato normalmente resulta en un aumento de la
tasa de rendimiento y la reaccin de la hidrlisis (Cheung y Anderson, 1997). Sin embargo,
la alta concentracin de sustrato puede causar la inhibicin de sustrato, lo que reduce
sustancialmente la velocidad de la hidrlisis, y el grado de inhibicin del sustrato depende
de la relacin de sustrato total de enzima total (Huang y Penner, 1991; Penner y Liaw,
1994). Huang y Penner (1991) encontraron que se produjo la inhibicin de sustrato
cuando la relacin entre el sustrato de microcristalina Avicel pH 101 a la celulasa de
Trichoderma reesei (gramos de celulosa / FPU [unidad de papel de filtro, se ha definido
como un micro mol de azcares reductores como la glucosa producido por 1 ml de
enzima por minuto] de enzima) fue mayor que 5. Penner y Liaw (1994) informaron de que
el sustrato ptimo para la enzima proporcin era de 1,25 g del sustrato microcristalina
Avicel pH 105 por FPU de la celulasa de T. reesei. La susceptibilidad de los sustratos
celulsicos de celulasas depende de las caractersticas estructurales del sustrato
influyendo cristalinidad de celulosa, grado de polimerizacin de celulosa, rea superficial,
y el contenido de lignina. La lignina interfiere con la hidrlisis por el bloqueo del acceso de
celulasas a la celulosa y por las enzimas hidrolticas de forma irreversible la unin. Por lo
tanto, la eliminacin de la lignina puede aumentar drsticamente la velocidad de
hidrlisis (McMillan, 1994).
4.2. Celulasa
El aumento en la dosis de las celulasas en el proceso, en cierta medida, puede mejorar el
rendimiento y la velocidad de la hidrlisis, pero aumenta significativamente el costo del proceso.
Una dosis de celulasa de 10 FPU / g de celulosa se utiliza a menudo en los estudios de laboratorio,
ya que proporciona un perfil de hidrlisis con altos niveles de rendimiento de glucosa en un
tiempo razonable (48-72 h) a un costo de enzima razonable (Gregg y Saddler, 1996). Las cargas de
enzima celulasa en la hidrlisis varan entre 7-33 FPU / g de sustrato, dependiendo del tipo y la
concentracin de sustratos.

La hidrlisis enzimtica de la celulosa se compone de tres pasos: adsorcin de enzimas de celulasa

sobre la superficie de la celulosa, la biodegradacin de celulosa en azcares fermentables, y la
desorcin de celulasa. La actividad de celulasa disminuye durante la hidrlisis. La adsorcin
irreversible de la celulasa sobre la celulosa es parcialmente responsable de esta desactivacin
(Converse et al., 1988). La adicin de agentes tensioactivos durante la hidrlisis es capaz de
modificar la propiedad de superficie de la celulosa y minimiza la unin irreversible de celulasa en
la celulosa. Los tensioactivos usados en la hidrlisis enzimtica incluyen Tween 20, 80 no inico,
(Wu y Ju, 1998), polioxietilenglicol (Park et al., 1992), Tween 81, Emulgen 147, anfteros Anhitole
20BS, catinico Q-86W (Ooshima et al ., 1986), soforolpido, ramnolpido y bacitracina (Helle et
al., 1993). Efectos inhibitorios se han observado con catinico Q-86W en alta concentracin y el
tensioactivo aninico Neopelex F-25 (Ooshima et al., 1986). Por lo tanto, se cree que los
tensioactivos no inicos son ms adecuados para mejorar la hidrlisis de la celulosa. La velocidad
de hidrlisis enzimtica se ha mejorado en un 33% usando Tween 80 como agente tensioactivo en
la hidrlisis de peridico (Castan y Wilke, 1981). Wu y Ju (1998) probaron que Pluronic F68 y
F88 (BASF); y Tween 20 y 80 mejora la hidrlisis enzimtica de papel peridico tratado
previamente (Tabla 3). La conversin de celulosa con 2% (w / v) de F68 y 2 g / l de celulasa alcanz
52%, en comparacin con la conversin de 48% con 10 g / l de celulasa en un sistema libre de
tensioactivo. Sin embargo, Tween 20 fue altamente inhibidor a D. clausenii incluso a una baja
concentracin de 0,1%.

El uso de una mezcla de celulasa a partir de diferentes microorganismos o una mezcla de celulasas
y otras enzimas en la hidrlisis de materiales celulsicos ha sido ampliamente estudiado (Beldman
y otros, 1988;.. Excoffier et al, 1991; Xin et al., 1993). La adicin de b-glucosidasas en el sistema de
ceulasas T. reesei logra mejor sacarificacin que el sistema sin b-glucosidasas (Excoffier et al,
1991;. Xin et al., 1993). Las b-glucosidasas hidrolizan la celobiosa, que es un inhibidor de la
actividad de la celulasa. Una mezcla de hemicelulasas o pectinasas con celulasas exhibi un
aumento significativo en el grado de conversin de celulosa (Ghose y Bisaria, 1979; Beldman et
al., 1984). Un rendimiento de conversin de celulosa del 90% se logr en la sacarificacin
enzimtica de 8% de bagazo de caa de azcar tratado con lcali cuando se utiliz una mezcla de
celulasas (dosis 1,0 FPU / g sustrato) a partir de A. ustus y T. viride (Mononmani y Sreekantiah,
1987). Una sacarificacin casi completa de vapor-explosin pretratado con fragmentos de
Eucalyptus viminalis (concentracin de sustrato de 6% y la carga enzimtica de 10 UPF / g de
celulosa) se obtuvo usando una mezcla de celulasa de Celluclast comercial y preparaciones
Novozym (Ramos et al., 1993). Baker et al. (1994) encontraron un nuevo endoglucanasa
termoestable, Acidothermus cellulolyticus E1, y otra endoglucanasa bacteriana, T. fusca E5 que
exhibi un sorprendente sinergismo con T. reesei CBH1 en la sacarificacin de la celulosa
microcristalina.

Las celulasas se pueden recuperar a partir del sobrenadante lquido o de los residuos slidos y las
celulasas ms recicladas se recuperan a partir del sobrenadante lquido. La enzima reciclada
puede aumentar efectivamente la tasa y el rendimiento de la hidrlisis y reducir el costo de la
enzima (Mes-Hartree et al., 1987). Ramos et al. (1993) informaron que la mezcla de enzimas de la
Celluclast comercial y la preparacin de Novozym se recicl con xito para cinco pasos
consecutivos con un tiempo transcurrido de 48 h entre cada etapa del reciclado. La eficiencia de
la hidrlisis de la celulosa disminuy gradualmente con cada etapa de reciclado.

4.3. Inhibicin de producto final de la actividad celulasa

La actividad de la celulasa es inhibida por celobiosa y en menor medida por la glucosa. Varios
mtodos han sido desarrollados para reducir la inhibicin, incluyendo el uso de altas
concentraciones de enzimas, la suplementacin de B-glucosidasas durante la hidrlisis, y la
eliminacin de azcares durante la hidrlisis por ultrafiltracin o por sacarificacin y fermentacin
simultneas (SSF).

El proceso SSF se ha estudiado extensamente para reducir la inhibicin de productos finales de la

hidrlisis (Takagi et al, 1977;. Blotkamp et al, 1978;. Szczodrak y Targonski, 1989; Saxena et al,
1992;. Philippidis et al, 1993. ; Zheng et al, 1998). En el proceso, la reduccin de azcares
producidos en la hidrlisis o en la sacarificacin de celulosa se fermentan a etanol de forma
simultnea, lo que reduce en gran medida la inhibicin del producto de la hidrlisis.

Los microorganismos utilizados en la SSF son generalmente el hongo T. reesei y la levadura S.

cerevisiae. La temperatura ptima para el SSF es de alrededor de 38 C, que es un arreglo entre
las temperaturas ptimas para la hidrlisis (45-50 C) y la fermentacin (30C) (Philippidis, 1996).
La hidrlisis es por lo general el proceso limitante de la velocidad en SSF (Philippidis y Smith,
1995). Las levaduras y bacterias termotolerantes se han utilizado en la SSF para elevar la
temperatura cerca de la temperatura ptima de hidrlisis. Ballesteros et al. (1991) han
identificado que Kluyveromyces marxianus y K. fragilis tienen la ms alta productividad de etanol
a 42 C de 27 cepas de levadura. K. marxianus tiene un rendimiento de etanol de 0,5 g / g de
celulosa en 78 h usando Solka Floc 200 como sustrato a 42 C. Kadam y Schmidt (1997)
encontraron que Candida acidothermophilum, una levadura termotolerante, produjo 80% del
rendimiento terico de etanol a 40 C usando cido diluido pretratado de lamo como sustrato.
Se ha encontrado que cepas de Kluyveromyces son ms termotolerantes que las cepas de
Candida y Saccharomyces (hacking et al., 1984).

En comparacin con el proceso de hidrlisis en la fermentacin de dos etapas, SSF tiene las
siguientes ventajas: (1) aumento de la velocidad de hidrlisis por la conversin de los azcares
que inhiben la actividad de celulasa; (2) disminucin en el requisito de la enzima; (3) mayores
rendimientos del producto; (4) menores necesidades de condiciones estriles ya que se elimina
inmediatamente la glucosa y se produce etanol; (5) ms corto el tiempo de proceso; y (6) menos
volumen del reactor porque se utiliza un nico reactor. Sin embargo, el etanol tambin puede
exhibir inhibicin de la actividad de celulasa en el proceso de SSF. Wu y Lee (1997) encontraron
que la celulasa perdi 9%, 36% y 64% de su actividad original a concentraciones de etanol de 9, 35
y 60 g / l, respectivamente a 38C durante el proceso de SSF. Las desventajas que deben tenerse
en cuenta para SSF incluyen: (1) Temperatura de la hidrlisis y la fermentacin incompatible; (2)
tolerancia al etanol de los microbios; y (3) inhibicin de las enzimas por el etanol.

5. Perspectivas de futuro

La industria del combustible de etanol en Estados Unidos produce ms de 6,2 millones de litros de
etanol en el 2000, la mayora de las cuales fue producido a partir de maz (MacDonald et al.,
2001). Sin embargo, un aumento de la produccin de etanol a partir de maz competira por la
tierra limitada frente a la produccin de alimentos a base de maz. El precio del maz se estima
que aumentar en $ 1,20-2,00 / tonelada por cada 2,5 millones de toneladas de maz utilizado
para producir etanol (Elander y Putsche, 1996). Por otro lado, hay una gran cantidad de
materiales de lignocelulsicos o residuos de bajo valor que en la actualidad se queman o se
desperdicia. La utilizacin de materiales lignocelulsicos puede reemplazar el equivalente de 40%
de la gasolina en el mercado estadounidense (ronchas et al., 1999). El uso de materiales
lignocelulsicos tales como residuos agrcolas, pastos, residuos forestales y otras biomasas de
bajo valor puede reducir significativamente el costo de las materias primas (en comparacin con
el maz) para la produccin de etanol.

Una reduccin del costo de produccin de etanol se puede lograr mediante la reduccin del costo
de cualquiera de las materias primas o de las enzimas de celulasa. Se predijo que el uso de
materias primas genticamente modificadas con mayor contenido de hidratos de carbono
combinadas con la mejora de la tecnologa de conversin podra reducir el costo de etanol de
$0,11 por litro en los prximos 10 aos (Wooley et al., 1999). Reducir el costo en la produccin de
enzimas celulasa es una cuestin clave en la hidrlisis enzimtica de materiales lignocelulsicos.
Las tcnicas genticas se han utilizado para clonar las secuencias de codificacin de la celulasa en
bacterias, levaduras, hongos y plantas para crear nuevos sistemas de produccin de celulasa con
la posible mejora en la produccin y en la actividad de la enzima. Wood et al. (1997) informaron
de la expresin de genes recombinantes de endoglucanasa a partir de Erwinia chrysanthemi
P86021 en Escherichia coli KO11 y el sistema recombinante 3200 IU producido en caldo de
endoglucanasa / l de fermentacin (IU, unidad internacional, que se define como un micromol de
azcares reductores como la glucosa liberada por minuto utilizando carboximetil celulosa como
sustrato). La endoglucanasa termoestable E1 de Acidothermus cellulolyticus se expres en hojas
de Arabidopsis thaliana (Ziegler et al., 2000), la patata (Dai et al., 2000), y tabaco (Hooker et al.,
2001).

El uso de microorganismos genticamente modificados que pueden convertir xilosa y / o pentosa

a etanol puede mejorar mucho la eficiencia de la produccin de etanol y reducir el costo de la
produccin. La construccin de operones que codifican para la asimilacin de xilosa y enzimas de
la ruta de pentosa- fosfato se transformaron en la bacteria Zymomonas mobilis para la
fermentacin efectiva de la xilosa para producir etanol (Zhang et al., 1995). La cepa recombinante
de E. coli con los genes de Z. mobilis para la conversin de piruvato en etanol ha sido reportado
por Dien et al. (2000). Los plsmidos recombinantes con genes de la xilosa reductasa y xilitol
deshidrogenasa de Pichia stipitis y el gen de xiluloquinasa de Saccharomyces cerevisiae han sido
transformados en Saccharomyces spp. para la co-fermentacin de la glucosa y la xilosa (Ho et al.,
1998).

Aunque la produccin de bioetanol se ha mejorado en gran medida por las nuevas tecnologas,
todava hay retos que necesitan ms investigaciones. Estos desafos incluyen mantener un
funcionamiento estable de las levaduras a escala comercial por medio de la ingeniera gentica en
las operaciones de fermentacin (Dipardo, 2000), el desarrollo de tecnologas de tratamiento
previo para la biomasa lignocelulsica ms eficientes, y la integracin de los componentes
ptimos en los sistemas de produccin de etanol econmicos.