Interaccin Ligando- Protena.

Ejercicios

1.- Si la unin de un ligando a una macromolecula es fuerte, se puede determinar el

nmero de sitios de unin, n, por un mtodo directo de titulacin. Tal es el caso de la
unin de NADPH a la enzima isocitrato deshidrogenasa aislada de mitocondrias de
corazn de bovino, la cul es registrada por el aumento en la fluorescencia al tener
NADPH-Enzima. Los siguiente datos fueron obtenidos al agregar NADPH a una solucin
de la enzima (masa molar 9x104) de concentracin 1,35x10-2 g/L

NADPH agregado (M) Fluorescencia

0,07 2,3
0,14 4,7
0,21 7,0
0,28 9,3
0,35 9,9
0,50 10
0,75 10
Cul es el nmero de sitios de unin para NADPH en la enzima? R) n=2

2.- Los siguientes datos fueron obtenidos para la unin de Mn2+ a la enzima fosforilasa
(concentracin 100 M)
[Mn2+] total (M) [Mn2+] unido (M)
110 75
190 125
290 175
500 250
750 300
Determinar el valor de los sitios de unin a la enzima y la constante de asociacin.
R) n=4 y K= 6757 M-1

3.- La unin de NAD+ a gliceraldehido-3-fosfato de levadura fue estudiada por dilisis en

equilibrio obteniendose los siguientes resultados:
[NAD+] total (M) [NAD+] libre (M)
41 13
78 21
132 30
187 39
230 48
285 68
374 125
474 211
Si la concentracin de la enzima es 71 M. Qu tipo de unin existe?.
R) Cooperacin positiva, n=4

4.- La enzima aspartato transcarbasilasa es inhibida por CTP. Mediciones de unin de

CTP a la enzima fueron realizadas en dilisis en equilbrio.
Experimento A (enzima 0,27 g/L)
[CTP] total (M) [CTP] libre (M)
0,78 0,24
1,29 0,43
2,35 1,00
4,63 2,56
11,65 8,86

Experimento B (enzima 9,00 g/L)

[CTP] total (M) [CTP] libre (M)
144,9 27,9
172,0 43,0
203,7 65,7
269,5 122,5
416,0 260,0
Aspartato transcarbosilasa posee seis subunidades catalticas y seis subunidades
regulatorias con una masa molecular total de 3x105. Qu tipo de unin existe?.
R) Cooperacin negativa, n=6

5.- Se realizaron anlisis de unin del Hormona, a un receptor a concentracin 0,57 mM.
Qu tipo de unin existe?
[Hormona] total [Hormona] libre
(mM) (mM)
0,570 0,466
0,970 0,800
1,51 1,28
2,27 1,99
3,43 3,09
5,88 4,98
8,90 8,45

6.- Se realizaron anlisis de unin del Hormona, a un receptor a concentracin 0,40 mM.
Qu tipo de unin existe?
[Hormona] inicial [Hormona] unida
(mM) (mM)
0,750 0,040
1,00 0,120
1,25 0,240
1,67 0,360
2,31 0,480
3,75 0,600
6,08 0,680
10,00 0,720