ao de buen servicio al ciudadano

MTODOS DE MONOGRAFA DE INVESTIGACIN

Realizacin de dos mtodos de identificacin para malaria y

plasmodium vivax

Autores :
Bryan amir Quispe vargas

CARRERA DE LABORATORIO CLININO TERCER SEMESTRE

ISTITUTO SUPERIOR TECNOLOGICO PRIBADO MSRIA
MONTESSORI

2017

La presente trabajo monogrfico investigativo est dedicada a aquellas personas que puedan
beneficiarse de los mtodos de identificacin de la malaria y del plasmodium vivax. El
propsito del presente trabajo de grado es ayudar a la deteccin ms rpida de la enfermedad
de la malaria y del plasmodiumvivax , utilizando mtodos, para el mejoramiento de
identificacin en el laboratorios y centros de salud

INDICE

I. RESUMEN
II. MARCO TERICO INTRODUCCIN
III. HIPTESIS Y OBJETIVOS
1. Hiptesis:
2. Objetivos:
Objetivos generales
Objetivos especficos

IV. MATERIALES Y MTODOS

1. Enfermedad de la malaria
Materiales
mtodo
2. Plasmodium vivax
Materiales
 mtodo

V. RESULTADOS
VII. CONCLUSIONES
VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
IX. ANEXOS Y APNDICES

I. RESUMEN
La malaria es una enfermedad causada por parsitos del gnero
Plasmodium, siendo cuatro las especies que pueden parasitar al
hombre: Plasmodium falciparum, Plasmodium vivax, Plasmodium
ovale y Plasmodium malariae. Desde que se describiera por primera
vez en 1880, el diagnstico de esta enfermedad se ha realizado
mediante la observacin de las distintas formas del parsito en el
examen microscpico de extensiones de sangre perifrica teidas
con diversos colorantes. Hoy da, 120 aos despus, esta tcnica
sigue siendo el mtodo de referencia. Sin embargo, la laboriosidad
que precisa el entrenamiento de un buen microscopista y la dificultad
que entraa observar parasitemias bajas ha impulsado el desarrollo
de nuevas tcnicas ms sencillas. Diagnosticar a tiempo una malaria
puede ser vital para el enfermo, ya que la aparicin de
complicaciones est muy relacionada con la demora de la
instauracin del tratamiento. El objetivo de esta pequea revisin es
el proporcionar al microbilogo una visin general de las ventajas e
inconvenientes de las distintas tcnicas disponibles para el
diagnstico de esta enfermedad. A modo de resumen (ver tambin
tablas 1 y 2), el examen microscpico de muestras de sangre teidas
sigue siendo el mtodo de eleccin, las tcnicas de fluorescencia o
de deteccin antignica comercializadas pueden resultar de utilidad
cuando el microscopista no tenga experiencia suficiente y la PCR es
una tcnica muy sensible pero que no est disponible en todos los
laboratorios. Se complementa la revisin con algunas ideas prcticas
sobre la profilaxis antipaldica en la actualidad.
II. MARCO TERICO INTRODUCCIN

III. HIPTESIS YOBJETIVOS

1. Hiptesis:
Los pacientes con malaria o plasmodium vivax puede
conducir a la muerte siempre y cuando sea
diagnosticado y tratados
Los mtodos de diagnostico son casi efectivos en el
resultado , puede variar siempre y cuando el
procedimiento del mtodo no sea el indicado
Los resultados pueden variar cuando el personal del
laboratorio este utilizando los materiales vencidos o
estn en mal estado
2. Objetivos:
Objetivos generales
 Establecer los procedimientos para realizar el
diagnstico de malaria y del plamodium vivax

Objetivos especficos

Lo que se quiere llegar con este tema de investigacin

es que son los mtodos ms prcticos para la malaria y
el plasmodium vivax

IV. MATERIALES Y MTODOS

1. Enfermedad de la malaria

La Malaria, conocida tambin como paludismo, es una

enfermedad parasitaria producida por protozoarios hemticos del
gnero Plasmoium y transmitida por la picadura de mosquitos
hembra del gnero Anopheles. Slo cuatro especies del gnero
Plasmodium (P vivax, P falciparum, P malariae, P ovale) producen
enfermedad en humanos.

La nica forma posible de contagio directo entre humanos es que

una persona embarazada lo transmita por va placentaria al feto,
tambin es posible la transmisin por transfusiones sanguneas de
donantes que han padecido la enfermedad, o bien, por la
transmisin directa a travs de la picadura de un mosquito.

Sus manifestaciones clnicas ms importantes son fiebre,

escalofros y dolor de cabeza, y cuando progresa la enfermedad,
ictericia, anemia y visceromegalia, entre otras. Las caractersticas
clnicas ms especficas y la gravedad de la enfermedad dependen de la especie
de Plasmodium involucrado en su transmisin, siendo la enfermedad transmitida
por P. falciparum ms grave y eventualmente mortal.

La confirmacin del diagnstico de laboratorio se realiza por la demostracin de

los parsitos en una muestra de frotis sanguneo y actualmente adems existen
pruebas rpidas (inmunocromatogrficas) que detectan antgenos del parsito
en sangre perifrica.
a) GOTA GRUESA
Una vez obtenida la muestra, realizar la gota gruesa de la siguiente manera:
utilizando uno de los ngulos de una segunda lmina (lmina auxiliar) esparcir
rpidamente la gota de sangre y extenderla uniformemente hasta formar una
gota gruesa de 1 cm de lado o de dimetro. La sangre no debe ser
excesivamente revuelta, es suficiente con 3 a 6 movimientos. De preferencia,
realizar el homogeneizado de la muestra en una sola direccin, en forma
concntrica (de adentro hacia fuera o viceversa).
Materiales
o Pipeta pasteur con chupete
o 2 portas
 o Cristalizado
o Puente de tincin
o Frasco lavador
o Microscopio ptico
o Gradilla
o Tubo de ensayo
o Muestra sangunea (propia o donada)
o Metanol
o Colorante Giemsa al 3% en agua destilada
Mtodo
o Obtenemos un poco de sangre de una bolsa de
hemodonacin, la cual introducimos en un tubo
de ensayo, que a su vez, depositamos en una
gradilla.

o Colocamos una gota de la muestra, con ayuda de

una pipeta pasteur, en el centro de un
portaobjetos.

o A la derecha de esta, colocamos tres gotas un

poco ms grandes, aproximadamente a 1cm de
distancia de la gota central.

o Realizamos una extensin con la gota central, con

ayuda de otro portaobjetos.

o Con una esquina del portaobjetos extensor,

mezclamos las tres gotas de sangre restantes, de
manera que formen una capa gruesa uniforme.

o Cuando la extensin est seca la fijamos con

metanol, dejndola actuar durante
aproximadamente un minuto.

o Una vez fijada la extensin, dejamos secar la

muestra hasta el da siguiente, pues la gota
gruesa necesita 24 horas para su procesado.

o Una vez transcurridas las 24 horas, colocamos un

puente de tincin sobre un cristalizador, ponemos
los portas con las muestras encima y aadimos
Giemsa al 3%, el cual dejamos actuar de 30 a 45
minutos.

o Para finalizar, desechamos el exceso de colorante

y retiramos con ayuda de agua destilada el que
quede por encima de la preparacin. Lavamos
hasta que deje de salir agua con colorante.

o El porta se deja secar de forma vertical y listo

 para el estudio microscpico.
b) TINCION DE GIEMSA
El constituyente bsico del colorante giemsa consiste en cierto tipo de eosinato
de azul de metileno, disuelto ya sea en alcohol metlico puro o glicerina pura. La
solucinalcohlica constituye una forma conveniente en la preparacin de la
solucin acuosa que tienesimultneamente en rojo, azul y violeta. Los elementos
disueltos permanecen en solucin y al cabo de un tiempo todos los elementos
activos de coloracin se precipitan.
Materiales
o 2 portas limpios
o Pipeta pasteur y chupete
o Tubo de ensayo
o Gradilla
o Muestra de sangre
o Tubo de ensayo
o Cristalizador
o Puente de tincin
o Frasco lavador
o Pipetas pasteur con chupete
o Cubreobjetos
o Microscopio
o Colorante Giemsa
o Solucin tampn pH 7,2
o Metanol
o Aceite de inmersin

Mtodo
o Preparamos la muestra de sangre en el tubo de
ensayo y lo colocamos en la gradilla.

o Con ayuda de una pipeta pasteur, colocamos una

gota de sangre en un extremo del porta y
realizamos la extensin, con el procedimiento que
hemos visto en prcticas anteriores.

o Colocamos el frotis sobre el puente de tincin y lo

cubrimos con metanol durante tres minutos, para
deshidratar la muestra y que se fije bien al porta.

o En un tubo de ensayo limpio preparamos la

tincin, que consiste en 0,2ml de Giemsa (azur-
eosina-azul de metileno), con 2ml de solucin
tampn pH 7,2.

o Con ayuda de una pipeta limpia, cubrimos la

extensin con la tincin y la dejamos actuar
durante 25 minutos.
 o Transcurrido el tiempo estimado, escurrimos el
exceso de tincn y enjuagamos la muestra hasta
que deje de salir tinte de ella. Hay que tener
especial cuidado en no verter el chorro de agua
directamente sobre la muestra, pues puede
desprenderse.

o Lavamos con solucin tampn a continuacin.

o Dejamos escurrir en posicin vertical hasta que

se seque.

o Para la observacin al microscopio, depositamos

un cubreobjetos sobre la muestra.

o Ponemos una gota de aceite de inmersin y ya

podemos observarlo con el objetivo 100x

2. Plasmodium vivax
a) Mtodo de lmina invertida
Este mtodo de coloracin se usa para
colorear la gota gruesa y frotis de
varias lminas a la vez en una bandeja
especial de coloracin hecha de material
acrlico, la inversin de las lminas
disminuye la probabilidad de precipitado
del colorante.
Mtodo

1. Coloque la bandeja de coloracin sobre

una superficie plana (mesa de trabajo)
cerca del lavatorio o recipiente, de tal
forma que facilite la eliminacin de los
lquidos que se usarn en la coloracin.
Acomode las lminas que desea colorear
en forma invertida (con la muestra hacia
abajo), espacindolas entre ellas de tal
manera que pueda agregarse el colorante
lmina por lmina (dejar fluir el
colorante por el borde de la lmina
2.

b) Mtodo rpido o coloracin en varilla

Este mtodo se usa generalmente para colorear entre 1

a 10 lminas. Debe tenerse en cuenta que la gota de
sangre tiene que estar seca antes de ser coloreada,
 debindose evitar secar las muestras con demasiado
calor
Mtodo
1. Coloque las varillas de vidrio sobre un
lavatorio o recipiente de tal forma que
facilite la eliminacin de los lquidos que se
usarn en la coloracin y coloque las
lminas que debe colorear sobre las
varillas, espacindola de tal forma que
pueda manipularlas con seguridad

2. Vierta colorante diluido sobre la gota

gruesa cubrindola por completo. Haga
esto suavemente, a una distancia corta de
la lmina y deje actuar el colorante por 10
minutos. La experiencia le puede indicar la
necesidad de modificar este tiempo de
espera.

3. Descarte el exceso de colorante diluido y

lave la lmina con agua corriente, usando
una pista, hasta que el agua no desprenda
colorante

4. Acomode las lminas en una gradilla de

madera, de modo que queden inclinadas y
con la gota gruesa hacia abajo. Deje secar
las lminas en esta posicin. En caso de no
poder dilucidar las especies en la gota
gruesa, colorear el frotis de la misma forma
anterior

V. RESULTADOS
Leve:
Frecuente en individuos parcialmente inmunes, quienes ya han tenido
ataques de malaria, o en personas con buena respuesta inmediata del
sistema inmune. En estos pacientes la fiebre no es muy alta y los
sntomas, si los hay, son discretos. La parasitema es baja, generalmente
por debajo de 0,1% de glbulos rojos infectados.

Moderada:
Es tpica en individuos no inmunes, quienes presentan el caracterstico
paroxismo febril con periodos de fro, calor y sudor, la temperatura es
alta, con aumentos en la crisis. Los sntomas generales son ms
intensos, con fuerte cefalea; adems, presentan anemia moderada y una
parasitema que varia de 0,1% a 0,5%.
 Grave y de urgencia:
Casi siempre se observan en las infecciones producidas por P.
falciparum. Este tipo de malaria se presenta en individuos no inmunes,
mujeres embarazadas y nios. El paciente mantiene una fiebre
persistente, la cefalea es fuerte, el vmito es frecuente y puede
presentarse delirio. Adems, la anemia es intensa y pueden estar
parasitados 2% a ms de los eritrocitos.

VI. CONCLUSIONES
En este tema de investigacin se a llegado a la conclusin que estos
mtodos de identificacin son muy importantes para el diagnstico
de la malaria y del plasmodium vivax y la utilizacin de estos metos
asegura la presencia de dichos parsitos sanguneos que
mayormente afectan a los seres humanos

VII. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

Organizacin Mundial de la Salud, 1992. Mtodos bsicos de laboratorio

en parasitologa mdica. 116 pp.

VIII. ANEXOS Y APNDICES