INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLGICAS

Casillas Ramos Guillermo Arturo, Morales Alonso Dulce Deyadira
Orta Camargo Berenice
Equipo: 3 Grupo: 6FV1

PRCTICA 1: FACTORES QUE INFLUYEN EN LAS SEPARACIONES CROMATOGRAFAS

INTRODUCCIN.

La cromatografa se define como la separacin de una mezcla de dos o ms compuestos por distribucin entre dos fases,
una de las cuales es estacionaria y la otra una fase mvil. Se basa en los repetidos procesos de interaccin durante el
movimiento de los componentes de una mezcla arrastrados por la fase mvil a lo largo de la fase estacionaria (elucin),
producindose la separacin debido a las diferencias en las constantes de distribucin de los componentes de la mezcla
entre la fase estacionaria y la mvil.

Existen diversos factores que pueden influir en las preparaciones cromatografas, como son polaridad, volumen de la
muestra concentracin de la muestra, efecto de la matriz.

RESULTADOS.

POLARIDAD DEL VOLUMEN DE CONCENTRACIN DE EFECTO DE LA MATRIZ

DISOLVENTE MUESTRA LA MUESTRA
Disolvente Rf Ancho de la L /mL Asimetra disolvente Rf Otros Rf
L banda (mm) (si o no) analitos
AcOEt R 0.75 1 0.3 1 No Agua 0.61 Agua 0.7
S 0.9
AcOEt: Hex R 0.37 2 0.5 5 Si Metanol 0.73 Sal 0.65
(1:1) S 0.87
AcOEt: Hex R 0.24 4 0.6 10 Si Solo 0.69 Azcar 0.62
(3:7) S 0.95

Experimento 1. Efecto de la polaridad del disolvente

fm
Clculos de Rf: Rf =
fs

Placa 1 Placa 2 Placa

R 2.9 1.5 1
Rf = Rf = Rf =
4 4 4.1
Rf =0.75 Rf =0.37 Rf =0.243

S 3.6 3.5 3.9

Rf = Rf = Rf =
4 4 4.1
Rf =0.9 Rf =0.87 Rf =0.95

Figura 1. Efecto de la polaridad del disolvente en muestras de los colorantes Rojo de metilo (R) y Sudan I (S), con los
disolventes acetato de etilo, acetato de etilo:hexano (1:1) y acetato de etilo:hexano (3:7)
Experimento 2. Efecto del volumen de muestra aplicada

Ancho de la banda 0.3 0.5 0.6

(mm)
Rf 0.67 0.67 0.67

Figura 2. Efecto del volumen del colorante Rojo de Metilo en CH 3CN (1 mg/mL), en la primer aplicacin se tiene 1 L a 1
mg/mL, la segunda aplicacin 2 L a 0.5 mg/mL y la ultima es de 4L a 0.25 mg/mL

Experimento3. Efecto de concentracin de la muestra

Figura 3. Efecto de la concentracin en tres aplicaciones de colorante Rojo de Metilo en CH 3CN a 1, 5, y 10 mg/mL

Experimento 4. Efecto de matriz

a) Efecto de la naturaleza del disolvente de la muestra

Clculos de Rf:

Agua metanol Solo

2.6 3.1 2.9
Rf = Rf = Rf =
4.2 4.2 4.2
Rf =0.61 Rf =0.73 Rf =0.69

Figura 4. Efecto de la naturaleza del disolvente en una placa con 3 aplicaciones de 2 L de Rojo de Metilo en CH 3CN a una
concentracin de 1 mg/mL la primera aplicacin corresponde al agua, la segunda al metanol y la tercera solo

b) Presencia de otros analitos

Clculos de Rf:

Agua Sal Azcar

2.8 2.6 2.5
Rf = Rf = Rf =
4 4 4
Rf =0.7 Rf =0.65 Rf =0.62
Figura 5. Aplicaciones del colorante Rojo de Metilo, en la primera se tiene al colorante solo, en la segunda una mezcla
con NaCl y el ltimo una mezcla con la sacarosa

DISCUSIN DE RESULTADOS

Experimento 1: Efecto de la polaridad del disolvente

La placa est formada por una capa de gel de slice, una sustancia muy polar, por lo que atraer en gran medida a
componentes ms polares. La polaridad del eluyente es un factor que consigue que los componentes se muevan ms
rpido o mas lento en una cromatografa, es decir que para un eluyente con mayor polaridad como lo es el AcOEt estar
ms atrado por el soporte y los componentes sern ms libres para moverse mejor, por lo que al revelar la placa, los
componentes saldrn ms alejados de la lnea de base. Por la misma razn con un eluyente menos polar en este caso
hexano, este casi no interacciona con el soporte polar y los compuestos tendrn mayor interaccin con el soporte por lo
que su velocidad ser ms pequea y al terminar la cromatografa se habra desplazado muy poco a partir de la lnea de
base, se observ que la afinidad muestra- disolvente se fue modificando ya que se disminua la polaridad del disolvente
por la adicin del hexano, por lo que tenemos que las muestras de rojo de metilo sus Rf disminuan considerablemente a
comparacin del sudan por lo que podemos decir que el rojo de metilo es ms polar que el sudan ya que en el rojo de
metilo existe un grupo carboxilo que tiene puentes de hidrogeno con el acetato de etilo y en el sudan solo hay un
hidroxilo

Experimento 2: Efecto del volumen de muestra aplicada

En el experimento 2, se aplic rojo de metilo en CH3CN en diferentes volmenes 1, 2, 4 L con concentraciones de 1

mg/mL , 0.5 mg/mL, 4 mg/mL respectivamente, donde podemos observar que el Rf no vara esto debido a que el analito
es el mismo en todas las muestras, sin embargo el ancho de la banda varia, esto debido a que el volumen de analito fue
mayor en cada aplicacin lo que puede ocasionar que haya un ensanchamiento de la banda debido a que entre mayor
sea el volumen de aplicacin menor ser la eficacia de la separacin del analito.

Experimento 3: Efecto de la concentracin de la muestra

En esta experiencia podemos observar con una concentracin de 1mg/mL, la mancha presenta cierta simetra, pero
mientras se incrementa la concentracin, la asimetra va siendo mayor y esto se debe a que se est favoreciendo el
fenmeno de coleo, el cual se debe a un excesivo alargamiento de la mancha, ya que es ms difcil la elucin del sistema
cromatogrfico porque la composicin del analito provoca una saturacin de los sitios de la fase estacionaria, y ya no
habiendo tanta interaccin causa as que el corrimiento no sea uniforme.

Experimento 4: Efecto de Matriz

a) Presencia de otros analitos.

El analito rojo de metilo, fue disuelto en agua, sacarosa y cloruro de sodio, respectivamente; en el caso del agua, se
obtuvo un Rf mucho menor que en las otras muestras debido a que el analito no presentaba un compuesto que afectara
su adsorcin en la fase estacionaria, pero en el caso del NaCl (Rf=0.37) al presentarse una sustancia afectora ,repercute
en la interaccin con la fase tanto mvil como estacionaria; de igual manera en el caso de sacarosa (Rf=0.46),el analito se
ve afectado, puesto que el factor que lo afecta presenta un carcter no polar ,de manera que el equilibrio que se posea
entre el analito con ambas fases, se ve afectado disminuyendo as la afinidad del analito con sus fases, provocando una
valor de razn de frentes mayor.

b) Efecto de la naturaleza del disolvente de la muestra

El compuesto rojo de metilo es de carcter no polar, por lo que en el disolvente de acetonitrilo al ser un compuesto
medianamente polar el corrimiento de la muestra resulta ser el ideal ya que es disuelto casi completamente el colorante,
por tanto no afectando en la determinacin; a diferencia del agua y metanol, los cuales son compuestos de carcter ms
polar, lo cual provoca que el analito no sea disuelto en estos disolventes, provocando que la interaccin con la fase
estacionaria se vea afectada obteniendo una mancha ms tenue, lo que quiere decir que al no estar disueltos tanto el
disolvente y el analito por completo, estos tienden a competir por los sitios activos de la silica, obteniendo as una mala
determinacin.

CONCLUSIONES.

Pudimos analizar y comprobar que existen diversos factores que pueden afectar la separacin en un
cromatografa
A mayor polaridad mayor desplazamiento de la muestra
El ancho de la banda es directamente proporcional al volumen de muestra aplicada
A mayor concentracin mayor asimetra en la mancha
Se presenta una competencia entre analitos
La polaridad juega un papel importante en la cromatografa porque de ella depende la buena separacin de los
analitos.

CUESTIONARIO.

a) Defina brevemente los siguientes trminos.

Tipos de interacciones moleculares:

Interacciones moleculares son el resultado de las fuerzas intermoleculares que son de naturaleza elctrica.
Existen solo tres tipos de interacciones moleculares:
1. Fuerzas de dispersin
2. Fuerzas polares
3. Fuerzas inicas
Resolucin: Separacin entre dos bandas cromatografas (R), que se define como el cociente de
la distancia entre los centros de las dos bandas y el valor de la anchura de la misma.
Coeficiente de particin: es un parmetro fisicoqumico que permite determinar cuantitativamente el
grado de lipofilia.
Asimetra de pico: Es la porcin del cromatograma diferencial que registra la respuesta del detector
cuando un nico compuesto sale de la columna.
 Efecto de matriz. Consiste en una disminucin o aumento de la respuesta instrumental del analito
debido a la presencia de otros componentes

b) Investiga dos aplicaciones de la cromatografa en capa fina en el rea farmacutica

1.- Separacin y cuantificacin de ingredientes activos.
2.- Separacin de componentes de aceites esenciales, muestras botnicas o naturales.

c) Investigue los mecanismos de separacin cromatogrfica en capa fina

Separacin por adsorcin: La cromatografa de adsorcin utiliza una fase estacionaria adsorbente polar
(esencialmente slice o alumina) y una fase mvil poco polar, incluso no polar.
Separacin por reparto: diferente solubilidad en fases estacionaria y mvil (componentes con polaridad
media o alta)
Separacin por exclusin: La separacin se hace en base al tamao efectivo de las molculas.La separacin se
produce porque solo las molculas pequeas pueden entrar en los poros donde se protegen de la fase mvil
que fluye, por tanto las molculas ms grandes fluyen primero.
Separacin por intercambio inico: La cromatografa inica (IC) se refiere a los mtodos modernos y
eficientes para separar y determinar iones en columnas con relativamente baja capacidad de intercambio
inico o aninico.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS.

Harris D.C. Analisis quimico cuantitativo. 3 ed, editorial Reverte, Brcelona pp 88-89
Douglas A. Skooog, Principios de anlisis instrumental, 6 ed, Cengage Learning, Mexico pp 830-340
Dominique Pradeau Analisis Quimicos Farmaceuticos de medicamentos, 1 ed, editorial Noriega, Mxico
pp 413-435