UNIVERSIDAD PRIVADA ANTENOR ORREGO

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS

BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

DRA. OFELIA CORDOVA PAZ SOLDN

CIEN 579
Fecha inicio/fin : 03/04/2017 al 27/07/2017
Semana 10

Replicacin del
ADN. Concepto.
cidos Nucleicos: Mecanismo molecular.
ADN y ARN. Enzimas participantes.
Estructura. Proceso de replicacin
Funciones. en procariotaa.
Diferencia entre
procariotas y eucariotas.
 ACIDOS NUCLEICOS

Miescher en 1871 aisl del ncleo de las clulas de pus

una sustancia cida rica en fsforo que llam "nuclena".
Un ao ms tarde, en 1872, aisl de la cabeza de los
espermas del salmn un compuesto que denomin
"protamina" y que result ser una sustancia cida y otra
bsica. El nombre de cido nucleico procede del de
"nuclena" propuesto por Miescher.
 COMPOSICIN QUMICA DE LOS CIDOS NUCLEICOS

La hidrlisis qumica
completa de un cido
nucleico da lugar a una
mezcla equimolar de: una
base nitrogenada, una
pentosa y ortofosfato

Los c. nucleicos son las molculas que contienen la informacin que prescribe la secuencia de aminocidos en las protenas
Todos los organismos vivos contienen cidos nucleicos en forma de cido dexosirribonucleico (DNA) y cido ribonucleico (RNA).
Algunos virus slo contienen DNA, mientras que otros slo poseen RNA.
EL DNA y el RNA tienen grandes semejanzas qumicas. Por sus estructuras primarias ambos son polmeros lineales compuestos por
monmeros denominados nucletidos
NUCLESIDOS y NUCLETIDOS
ACIDO DESOXIRRIBONULEICO
Modelo de doble hlice

Dos fuentes de informacin:

Estudio de composicin de bases de Erwin Chargaff
El DNA es una doble cadena que consiste de ~50%
purinas (A,G) y ~50% pirimidinas (C, T)
La cantidad de A=T y la cantidad de G=C (regla de
Chargaff)
% GC vara de organismo a organismo.
(James Watson y Francis Crick
1953)
 Estructura Terciaria

ESTRUCTURA DEL DNA

Estructura secundaria
Estructura primaria

Palndrome: Secuencia de DNA con bases repetidas en

secuencia inversa en ambas hebras. Esta secuencia es
autocomplementaria por lo tanto puede formar
estructuras en forma de horquilla o cruz

5'-ATCCCAGCCCGATTAAAGCC-3'
El orden de la secuencia es muy Repeticin especular: La secuencia repetida se
importante, la orientacin viene dada en el encuentra sobre la misma hebra de DNA. No puede
sentido 5' 3' 3' 5'; el 5' representa formar ninguna de las estructuras anteriores.
el extremo terminal del fosfato y el 3' el
extremo final del tomo de carbono de la
desoxirribosa
1947 - Erwin Chargaff

Las bases de DNA siguen ciertas reglas.

La composicin es especie especfica
A = T, C = G en todas las especies
 ADN DE TIPO
A, B Y Z
El DNA de cadena doble
puede asumir distintas
conformaciones debido a la
flexibilidad del anillo de
ribosa y al giro del enlace
C1 - N.

Caractersticas ADN - B ADN A ADN - Z

Tipo de hlice Dextrgira Dextrgira Levgira
Dimetro de la hlice (nm) 2,37 2,55 1,84
Distancia entre par de bases (nm) 0,34 0,29 0,37
Distancia por giro completo (nm) 3,4 3,2 4,5
Nmero de pares de bases por giro 10 11 12
completo
Topologa del surco mayor Ancho, profundo Angosto, profundo Plano
Topologa del surco menor Angosto, superficial Ancho, superficial Angosto, profundo
PROPIEDADES DEL DNA

El contenido de DNA en las

clulas coincide con la
demanda de la plodia..
El DNA es estable, sus enla-
ces covalentes resisten la
temperatura de ebullicin y la
exposicin a lcalis fuertes.
El DNA tiene gran capacidad
de almacenamiento de
informacin.
La doble cadena de DNA
puede autorreplicarse..
El DNA puede expresarse.
NIVELES DE EMPAQUETAMIENTO DEL ADN
ACIDO RIBONULEICO
ESTRUCTURA Y TIPOS DEL RNA
ARN
TRANSFERENCIA
ARN MENSAJERO

ARN RIBOSOMICO
UBICACIN Y FUNCIONES DE LAS DIFERENTES CLASES DE MOLECULAS DE
RNA
Clase de RNA Tipo celular Localizacin de la Funcin
funcin en las
clulas eucariotas
RNA ribosmico Bacterias y Citoplasma Componentes estructurales y
(RNAr) eucariotas funcionales del ribosoma
RNA mensajero Bacterias y Ncleo y citoplasma Es portador del la informacin
(RNAm) eucariotas gentica para las protenas
RNA de transferencia Bacterias y Citoplasma Ayuda a incorporar los
(RNAt) eucariotas aminocidos a la cadena
polipeptdica

RNA nuclear Eucariotas Ncleo Procesamiento del RNAm

pequeo (RNAsn)
RNA nucleolar Eucariotas Ncleo Procesamiento y ensamblaje
pequeo (RNAsno) del RNAr

RNA citoplasmtico Eucariotas Citoplasma Variable

pequeo (RNAsc)

Micro RNA (RNAmi) Eucariotas Citoplasma Inhibe la traduccin del RNAm

RNA interferente Eucariotas Citoplasma Desencadena la degradacin

pequeo (RNAsi) de otras molculas de RNA
Sntesis del ADN: Replicacin
DNA Polymerase III

Helicase

Single-strand binding proteins

Primase

https://www.youtube.com/watch?v=DMbjI-uj6G8
REPLICACIN DEL DNA

CARACTERSTICAS

Semiconservativa
Bidireccional
Asimtrica
Semidiscontnua
Asincrnica
Simultnea
Secuencial
Es multifocal en eucariotas
Requiere de cebadores
Ocurre en el perodo S.
Bidireccional y Asimtrica
Semidiscontnua
Multifocal en Eucariotas
 4
During mitosis the sister chromatids condense
Ocurre en Fase S del and become visible. Then the sister chromatids
are pulled apart, with one going to each
ciclo celular. daughter cell. When mitosis is complete the
single chromosome again takes on the more
dispersed form and is no longer visible.
3
En eucariotas, ocurre con After replication,
the duplicated
alta fidelidad dentro de un chromosomes
consist of sister
perodo de tiempo chromatids held
determinado en forma precisa together by a
centromere.
dentro del ciclo celular.
MITOTIC 1
PHASE During G1, DNA
M molecules exist
Centromere
as chromatin
G2 G1 material that
cannot be seen
S distinctly under
Sister the microscope.
chromatids INTERPHASE

Single
chromosome

2
During the S phase, the two strands of
the DNA molecule unwind and replicate.
Replication occurs at multiple sites
along the chromosome.

Ms. Pablo Chuna Mogolln / pchunam@upao.edu.pe / Mayo - 2016

ETAPAS DE LA REPLICACION

INICIACION
Reconocimiento de orgenes de replicacin
Separacin de hebra
Posicionamiento de maquinaria de replicacin

ELONGACION
Crecimiento bidireccional de la horquilla de replicacin
Replicacin semiconservativa, semidoscontinua,
coordinada.

TERMINACION
Reconocimiento de seales de terminacin
Desensamble de replisomas
1. INICIACION
La sntesis se inicia en regiones especiales llamadas orgenes de replicacin.
Los orgenes de replicacin contienen mltiples secuencias repetidas cortas.
Estos segmentos se reconocen por protenas multimricas que se unen al
origen y, a su vez, reclutan hacia ste enzimas de la replicacin.
2. ALARGAMIENTO DE LAS CADENAS.
 Direccin de
nueva sntesis

Nueva cadena
sintetizada
DNA polimerasa III

RNA primer
DNA helicasa DNA girasa
Molde de
cadena lder
Tau
DNA parental

DNA polimerasa III RNA primer

DNA primasa

Nueva cadena Protenas de

sintetizada Molde
de cadena unin a cadena
retardada simple
Direccin de
nueva sntesis

2012 Pearson Education, Inc.

3. TERMINACIN
La horquilla de replicacin se encuentra con el lugar de terminacin, la regin ter ( ).
La protena tus se une a la secuencias de terminacin. Esta protena bloquea el
movimiento de la helicasa.
Las molculas de DNA hijas se separan por la accin de una topoisomerasa IV.
INICIO DE REPLICACIN EN EUCARIOTAS
MCM (minichromosome maintenance proteins),
protenas ORC (origin recognition complex)
 Iniciacn occurre slo en los
orgenes que son licenciadis para
replicarse.
Una vez activados,los orgenes no
pueden ser usados otra vez hasta el
prximo ciclo celular
REPLISOMA EUCARIOTA
 REMOCIN DE CEBADORES DNA LIGASA
FEN 1/RNAasa H1 remueve RNA primer Forma el enlace fosfodister entre
DNA Pol sintetiza los desoxiribonucletidos dos fragmentos de Okazaki
DIFERENCIAS DE
REPLICACIN EN
PROCARIOTAS Y
EUCARIOTAS

INICIO

Procariotas:

Orgenes fijos
Protenas DnaA
DnaB (helicasa)

Eucariotas:

Multiples orgenes
Complejo proteico ORC
Cdc6 y Cdt1
Complejo MCM (helicasa)
DIFERENCIAS DE REPLICACIN EN PROCARIOTAS Y EUCARIOTAS

http://www.mhhe.com/biosci/bio_animations/04_MH_DNAReplication_ http://fd.valenciacollege.edu/file/mlocascio/DNAReplication.mpg
Web/index.html

Ms. Pablo Chuna Mogolln / Octubre - 2015

DIFERENCIAS DE REPLICACIN EN PROCARIOTAS Y EUCARIOTAS
 TELMEROS
Clulas madre y germinales
Telmeros (gr. telos final y
tienen telomerase que
meros parte ) los extremos mantiene el tamao del
de los cromosomas, regiones telmero.
de ADN no codificante y muy
repetitivas. Clulas somticas contienen
bajos niveles de telomerasa y
La Secuencia telomrica, tienen telmeros muy cortos.
tiene una repeticin en
tndem de oligonucletido
Prdida de telmeros
rico en G. desencadena inestabilidad
cromosmica o apoptosis.
En humanos: TTAGGG.
Repetidas 150 a 2000 . Clulas cancerosas contienen
telomerasa y tienen largos
Funcin: estabilidad estruc- telmeros
tural de los cromosomas, la
divisin celular y el tiempo
de vida de las estirpes
celulares from Lodish et al., Molecular Cell Biology, 6th ed. Fig 25-31

Ms. Pablo Chuna Mogolln / pchunam@upao.edu.pe / Mayo - 2016

 PROTENAS REQUERIDAS EN LA REPLICACION
FUNCIN PROCARIOTAS EUCARIOTAS

PCNA (proliferating cell

Protena de enganche deslizante (sliding Anillo , trabaja con DNA Pol
nuclear antigen), trabaja con
clamp), que une polimerasa al DNA molde III
DNA pol o

Protena de enganche de carga (clamp

Complejo RFC
loader)

Actividad exonucleasa de lectura de Parte de subunidad de la DNA

Subunidad de la DNA pol II
prueba (proof-reading) pol y

RNA asa H1, Fen 1 (flap

Remocin de RNA primer RNAasa H, DNA Pol I
endonuclease)
Reemplazo de RNA con DNA DNA polimerasa I DNA polimerasa
Unin de fragmentos DNA ligasa DNA ligasa
 PROTENAS REQUERIDAS EN LA REPLICACION

EN EUCARIOTAS
EN PROCARIOTAS
RNA Polimerasas (RNA Pol) I, II y III
RNA Polimerasas (RNA Pol) Topoisomerasa I
Pirofosfatasa.
Topoisomerasa I DNA molde
Pirofosfatasa. Los 4 ribonucletidos trifosfato: (ATP, CTP, GTP,
DNA molde UTP)
Los 4 ribonucletidos trifosfato: Mg++, Mn++
(ATP, CTP, GTP, UTP) Factores de transcripcion especficos.
Mg++ Activadores y represores
Factores de transcripcin: Factores de Transcripcin basales: TFIIA, TFIIB,
sigma (), rho () TFIID, TFIIE, TFIIF, TFIIH. TFIIS, TFIIIS (elongina).
Poli A polimerasa.
Espliceosoma
 DIFERENCIAS EN REPLICACIN EN PROCARIOTAS Y EUCARIOTAS

PROCARIOTAS EUCARIOTAS
No protenas unidas al DNA Protenas histonas unidas al DNA
Un origen de replicacin Varios orgenes de replicacin
Cinco polimerasas (I, II, III, I y V) Cinco polimerasas (, , , , y )
Funcin de polimerasas. Funcin de polimerasas:
I. involucrada en sntesis, proofreading, reparacin y : una enzima polimerizante
remocin de primers : es una enzima de reparacin
II: es una enzima de reparacin : principal enzima polimerizante
III: es la principal enzima polimerizante : enzima polimerizante
IV y V: son enzimas de reparacin bajo condiciones : sntesis de DNA mitocondrial
inusuales
Polimerasas son tambin exonucleasas No todas tienen actividad exonucleasa
Fragmentos de Okasaki de 1000 a 2000 nucletidos de Fragmentos de Okasaki de 150 a 200 nucletidos de
longitud longitud
La velocidad es de ~1000 pb/seg La velocidad es de ~100 pb/seg
El tiempo de replicacin es ~42 min. El tiempo de replicacin es ~8 horas.
COMPARACION ENTRE ADN Y ARN
AISLAMIENTO DE ACIDOS NUCLEICOS :

3. Electroforesis