DESARROLLO DE UNA BASE DE DATOS PARA

LA IDENTIFICACIN DE PRINCIPIOS
ACTIVOS Y ANLISIS DE MEDICAMENTOS
POR ESPECTROSCOPIA INFRARROJA.
Tesis de grado para optar al ttulo
de Qumico Farmacutico

Tutor: Guillermo Rocabado Calizaya Msc. PhD.

P f
Profesor G
Gua:
Q.F
Q F Marco
M Carmona
C B
Bez

Alumno: Ariel Fras Figueroa

2012
 Introduccin

El Instituto de Salud Pblica (ISP) referente normalizador y

fiscalizador.

El ISP y la Agencia Nacional de Medicamentos (ANAMED) en la

actualidad.

El Laboratorio Nacional de Control (LNC).

Uno de los requisitos es garantizar idoneidad y trazabilidad de los

estndares de referencia utilizados.
 Introduccin
El Espectrofotmetro IR garantiza la idoneidad de estndares.

Tcnica recomendada por Farmacopeas para anlisis cualitativos.

cualitativos
 Introduccin
En que consiste el Espectrofotmetro IR?
1. Fuente de Emisin.
2. Sistema Interferomtrico.
3. Detector.
4. Accesorios.

Regin de inters
 Introduccin
Elaboracin de la biblioteca espectral.

Calificaciones del instrumento.

instrumento

Intervalos del infrarrojo (12800 - 10 cm -1 )

 Introduccin

Pruebas
Pruebas de Identificacin Espectrofotomtricas
Espectrofotomtricas::

1. La sustancia se mezcla ntimamente con KBr <197k>.

2
2. La sustancia se muele y se dispersa en aceite mineral <197M>.
<197M>
3. La sustancia se suspende entre placas adecuadas <197F>.
4. La sustancia se analiza por reflectancia total atenuada <197A>*
5
5. La sustancia se analiza por microscopa IR <197E>*

Ensayos
y Cualitativos*
Reflectancia Total Atenuada (ATR)
ATR
 Objetivos
Objetivo General:

Desarrollar una base de datos usando espectroscopia IR para

t
trazar y garantizar
ti l identidad
la id tid d de
d estndares
t d secundarios
d i en
pruebas cualitativas.
 Objetivos

Objetivos Especficos:
Redactar Hoja de Vida, Instructivo de Uso, Instructivo de
V ifi
Verificacin
i y Bitcora
Bit d uso del
de d l espectrofotmetro
t f t t IR. IR

Desarrollar una biblioteca de estndares primarios empleando

114 analitos, para ser identificados en productos farmacuticos
registrados.

Comparar la Trazabilidad de estndares de referencia empleando

el Espectrofotmetro IR equipo primario hacia otro equipo
secundario para la valoracin del principio activo utilizando
Cromatografa Liquida de Alta Eficiencia HPLC.

Elaborar un Compendio de Espectros IR de los estndares

usados en la Biblioteca Espectral.
 Metodologa

1 Calificaciones del Equipo

2 Seleccin de Analitos

3 Seleccin de Informacin

4 Creacin de Mtodo de Lectura

5 Registro y Almacenamiento

6 Determinacin de umbral

7 Cadena de Trazabilidad
 Metodologa
1. Calificaciones de Equipo:

Calificaciones de Diseo.
Calificaciones de Instalacin.
Calificacin Operativa.
C lifi
Calificacin
i de
d Desempeo.
D

2 Seleccin de Analitos:
2.

Lote Vigente.
Nivel de Peligrosidad.
Peligrosidad
 Metodologa
3. Seleccin de Informacin que se
registrar en los espectros:

Etiqueta del frasco estndar.

Certificado de Anlisis.

4. Seleccin modo de lectura y

Creacin del Mtodo:

Modo ATR.
Apodizacin, Escaneos, Resolucin,
R
Rango d Lectura,
de L t H
Haz d Luz,
de L
Detector, Velocidad del Espejo.
 Metodologa
5. Registro y Almacenamiento de espectros:

Peaks Principales.
Compendio de Espectros IR.

6 Determinacin
6. D t i i de
d umbral
b l o score de
d identificacin:
id tifi i

Grficos de Control de Shewhart.

Limite Inferior de Control criterio mnimo de aceptacin.
aceptacin
 Metodologa
Frmula 1: Clculo de Lnea Central (LC) o Media:

Frmula 2: Clculo de Lmite inferior de Control (LIC)

 Metodologa

7. Extensin de Cadena de Trazabilidad:

Comparacin de 10 estndares primarios con estndares

secundarios usando FT-IR.

Comparacin de 10 estndares primarios con estndares

secundarios usando HPLC.

Comparacin de estndares secundarios con cromatogramas

de 10 productos farmacuticos terminados.
Resultados
 Calificaciones de Equipo

Documentacin Profesional Responsable Cumplimiento

Calificacin de Diseo Analista +

Calificacin de Instalacin Servicio Tcnico +
Calificacin de Operacin Servicio Tcnico +
Servicio Tcnico
Verificacin Performance
Analista +

Hoja de Vida Equipo Tesista +

Bit
Bitcora de
d Uso
U T i t
Tesista +
Instructivo de Uso Tesista +
Instructivo de Verificacin Tesista +
Calificaciones de Equipo
Calificaciones de Equipo
Calificaciones de Equipo
 Seleccin de Analitos
De un Total de 970 Estndares de Referencia del LNC

ER ER ER

1 Estndar BP ER 1 Estndar EP
ER ER
ER
ER ER
ER ER

ER
ER
ER

108 Estndares USP 4 Estndares LGC

 Seleccin de informacin para los
espectros
t IR

Nombre del estndar

Porcentaje de pureza del estndar
Lote del estndar
P
Procedencia
d i del
d l estndar
t d
Tipo de estndar
Cdigo Interno de Laboratorio

j p
Ejemplo:
Tolbutamida/Estndar Primario USP/C.I:P-037/06/P:100%/L:I
Seleccin modo de lectura y creacin del
mtodo
t d
Parmetros Configuracin
Parmetros del mtodo.
Modo de Medicin Transmitancia

Para los anlisis se establecieron los Apodizacin Happ-Genzel

siguientes pasos bsicos: Numero de Escaneos 10
1. Encendido de equipo. Resolucin 4
2
2. C
Carga d
de mtodo.
t d Rango de Lectura 4000-600 1/cm
3. Verificacin de equipo. Haz Infrarrojo Interno
4. Realizar background. Detector Estndar
5
5. Registrar datos de la muestra
muestra. Velocidad del Espejo 28
2.8

6. Adicionar la muestra sobre el cristal Ganancia Automtica

del accesorio ATR. Apertura Automtica
7. Prensar la muestra hasta el tope de Ganancia 1
apriete. Modo Power
8. Ordenar la lectura desde el software. IFG Noise 1
IFG Similarity 1
Retraso de Apertura 0
Rango IR MID (medio)
Fuente de Luz Infrarroja
 Registro y Almacenamiento
Los 114 espectros IR se almacenaron en la biblioteca IRs
ATR LNC.

Creacin de un compendio.
 Estndar Score obtenido
Acetaminofeno 92,8
Alprazolam
p 96,9
Ambroxol 93,7
Amiodarona Clorhidrato 94,2
Bromuro de Vecuronio ,
97,8

Determinacin de Bupivacaina Clorhidrato

Carbamazepina
94,4
96,0
umbral o score de Gemfibrozilo 94,2

identificacin Ketoprofeno
Ketorolaco Trometamina
92,2
89,7
Lamivudina 98,1
Lincomicina Clorhidrato 90,1
Ceftriaxona Sdica 92,0
Ciclobenzaprina Clorhidrato 98,0
Ciprofloxacino 88,2
Claritromicina 98,2
Cloxacilina Monohidrato 96,3
Metoclopramida Clorhidrato 90,3
Paroxetina Clorhidrato 95,8
Propanolol Clorhidrato 97,3
 Uso de Grficos de Control

Los 20 analtos se utilizaron para obtener un Lmite Inferior de

Control (LIC) mediante el Grfico de Control por Desviacin
Estandar y Promedio.

Para el clculo se usaron las frmulas 1 y 2 obteniendo el

siguiente
g resultado:

LC = 94.3
= 3.12

Luego:
LIC = LC - A
LIC = 94.3
94 3 - (0.671
(0 671 3.12)
3 12)
LIC = 94.3 - 2.09
LIC = 92.2
 Score
Ac
et
am
in

82
84
86
88
90
92
94
96
98
100
102
of
en
Al
pr o
Am a zo
io la
da Am m
ro b
Br n
om a C roxo
ur lo l
o rh
id
Bu
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Lim ite Inferior

ca cu
Lim ite Superior

in ro
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C C C in
ic e l or a
lo ftr h

Analito
be ia id
xo ra
nz na to
ap
ri n S
d
a ic
C a
lo
C rh
ip i
Grafico de Control Score IR

dr
ro at
o
fl o
C C
xa
lo la ci
M xa ri t no
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et
oc l ina
ro
m
lo M ic
in
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Pa a d ra
ro C to
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a d ra
C to
lo
rh
id
Pr ra
op to
an
ol
ol
.
Uso de Grficos de Control
 Extensin de Cadena de Trazabilidad

Lote Estndar Lote Estndar Producto

Nombre Estndar Identidad
1 2 Terminado
Acetaminofeno J2C423 104K0154 RC 1463 +
Acido Acetilsalicilico H 096K0104 RC 1723 +
Alprazolam I0G195 ALP/32 RC 377 +
Claritromicina G2I235 1000001655 RC 544 +
Gemfibrozilo H1F285 HC064205 RC 177 +
Ketoprofeno H1H247 2007292299 RC 541 +
Ketorolaco Trometamina H0I305 HX898118 RC 548 +
Metformina Clorhidrato I0H236 575-10 RC 1719 +
Naproxeno Sdico J1H092 2011191708 RC 1686 +
Paroxetina Clorhidrato G1F261 2010114038 RC 278 +
Extensin de Cadena de Trazabilidad
Discusin
 Fundamentos para desarrollar la
bibli t
biblioteca espectral
t l

Bibliotecas dispuestas a la venta.

La lectura de muestras en ATR y sus resultados.

Establecimiento de Estndares Secundarios seguros,

confiables y a un costo menor.
 Fundamentos para su Desarrollo
1. Calificaciones del instrumento.
2. Seleccin de estndares primarios de lote vigente y de baja
peligrosidad.
3. Seleccin de informacin para generar espectros IR con
informacin til para la cadena de trazabilidad y compendio
espectral.
espectral
4. Creacin del mtodo de lectura Muestra ATR.
5. Mismo tratamiento de datos.
6. El LIC calculado (92.2).
7. Cadena de Trazabilidad.
 Identidad positiva de analitos
Inspeccin visual prueba concluyente
para identidad positiva, tomando en
cuenta los peaks principales.
principales

Analto Score
Ketorolaco Trometamina 89 7
89.7
Metoclopramida Clorhidrato 90.3
Ciprofloxacino Clorhidrato 88.2
Ceftriaxona Sdica 90.2
Lincomicina Clorhidrato 90.1

Comprobacin de la identidad de los 10 principios activos

presentes en los productos terminados.
 Conclusin
1. Se elabor una biblioteca espectral usando condiciones
experimentales conocidas. Es el mtodo ms seguro para
identificar compuestos usando la modalidad de bibliotecas.
bibliotecas

2. La calificacin de los instrumentos de laboratorio es

fundamental ppara su correcta instalacin,, manipulacin
p yp
para
obtener resultados de calidad.

3. Se identificaron principios activos en productos farmacuticos

usando la biblioteca espectral.
espectral Se requiere de una tcnica que
permita aislar los principios activos de su formulacin para
recin compararlos con su respectivos estndares.

4. Se compararon las cualidades cromatografcas entre

estndares y productos terminados obteniendo resultados
trazables para los 10 principios activos analizados.
 Conclusin
5. Se elabor el compendio de espectros IR, que es un respaldo
informativo importante para los anlisis cualitativos, ya que
este alberga informacin sobre cada analito permitiendo ser
referente disponible para los anlisis en el espectrofotmetro
IR.

6. Se pudo demostrar que el empleo de estndares secundarios

disminuye los costos en la adquisicin de estndares
primarios permitiendo realizar anlisis cualitativos y
cuantitativos a un costo menor.
 Recomendaciones
Es conveniente actualizar la base de datos cada 1 ao
verificando los lotes de cada estndar en las
Farmacopeas correspondientes (EP), (BP), (USP), (LGC)
para garantizar la vigencia de los estndares y de la base
de datos.
GRACIAS!