2.

Mtodos de micropropagacin vegetal

2.1 Bases Botnicas y anatmicas en

plantas.
2.2 Bases Bioqumicas y fisiolgicas
para el cultivo de tejidos.
Anatoma de la planta: Las clulas
Las clulas vegetales son bloques de construccin
bsicos
Puede especializarse en forma y funcin
Al trabajar juntos, formando tejidos, pueden
apoyarse mutuamente para sobrevivir
Niveles de organizacin
tomos > molculas >clulas >tejidos >rganos > Planta entera
rganos: tejidos que actan juntos para
dar una funcin especfica
Drmica
Raz Vascular
Soporte

Tallos Drmica
Vascular
Soporte

Hojas Drmica
Vascular
Soporte
Funciones de un sistema de races
1. Absorber agua y
minerales del entorno
2. Ancla a la planta en
el suelo
3. Almacena los
nutrientes que se ha
hecho en las hojas por
la fotosntesis
Puede ser utilizado ms
tarde por la planta para
crecer y sobrevivir Taraxacum officinale - el
diente de len comn

Cortesa de Wm. C. Brown Editores

 Cules son las partes de una raz?
Cuando una semilla
germina, la primera
estructura que aparece
es la raz o radcula
A. Se convierte en el raz
primaria
Por lo general, la raz
ms importante en
algunas plantas
B. Otros races se
Radcula = raz
primaria; cuenta
ramifican desde la raz
Cotiledn
todos los pelos primaria; llamado races
radicales secundarias
Cortesa de McGraw Hill
 Cilindro
Corteza
vascular
(almacen
(xilema y
amiento
floema)
de
Epidermis
C. El meristemo apical, alimentos
Que se encuentra en la )
punta de la raz, es
donde se desarrollan
nuevas clulas
Est cubierta por la
cofia - Protege de
daos a medida que
pasa a travs de las
partculas del suelo
Meristem
gruesos
o apical

Cofia

Cortesa de Dorling Kindersley, Inc.

Regiones de Desarrollo Celular
Observe que la
divisin celular se
Regin de la produce en la
maduracin punta de la raz
Las clulas viejas
se encuentran ms
Regin de
Elongacin
lejos de la punta de
la raz
Regin de
Divisin
Cofia Celular

Meristemo
Cortesa de McGraw
apical
Hill Publishers
Hay otras capas de clulas que se encuentran
dentro de la raz
A. Corteza las clulas almacenan nutrientes
producipos por las hjas, estan estan representads por
tejido parnquimatoso.
B. Endodermis - El lmite interior de la corteza; una
capa de clulas guesas; controla el movimiento de agua
y minerales en el xilema y floema
C. Periciclo - Una capa se encuentra dentro de la
endodermis que pueden producir races laterales;
tambin produce cambium vascular en dicotiledneas
Las capas internas de la raz
Raz Lateral

Cilindro
vascular
Xilema
Floema
Periciclo
Endodermis
Corteza

Pelos de
Anatoma de una raz

epidermis
corteza

vascular
Tejido de la raz de tierra
En las races, son los tejidos en el suelo
(corteza) ofrece apoyo y a menudo almacenan
azcares y almidn (por ejemplo: el ame,
papa, etc.)

corteza
Corte transversal de raz monocot
 Atmosphere Las bacterias del suelo convierten N2 (gas) del aire
en una froma que puede ser utilizado por las
plantas
N2 Fijacion de Nitrogeno N2 is convertido
en amonico
Soil Amonificacincconversin de materia
orgnica en amonioammonium
Nitrificacinconversin del amonio a
nitratos, la foma ms comun de abosorcin
de nitrogeno por las plantas

Amino
N2 acids, etc.
Nitrogen-fixing
bacteria
NH4+
H+

NH3 NH4+ NO3

(ammonium) Nitrifying (nitrate)
Ammonifying bacteria

Organic bacteria
material Root
Reguladores del crecimiento de
plantas
 PGR controlar el desarrollo del organismo, al
igual que las hormonas de origen animal
PGRs, hormonas de plantas, fitohormonas son todas las mismas
molculas
Breve descripcin: 5 clases principales "clsicos" de reguladores de
crecimiento
Auxinas (IAA, NAA, 2,4-D, 2,4,5-T)
Las citoquininas (Kinetina)
cido abscsico (ABA)
Giberelinas (GAx)
Etileno (C2H4)
Tambin: Nuevos reguladores de crecimiento emergentes:
brasinoesteroides y cido jasmnico
Concepto clave: Reguladores de crecimiento no actan de forma
independiente! Son parte de una red de control del desarrollo
Concepto que algunos reguladores de crecimiento son inhibitorios para el
metabolismo (por ejemplo, etileno), mientras que otros promueven el
crecimiento (por ejemplo, el gas, la citoquinina) es parecida obsoleta
 papel # 1 de PGR: La divisin celular, la diferenciacin y el
crecimiento

Se produce sobre todo en tallo y la raz meristemos

apicalesdivisin activa en las puntas
Las citoquininas desempear un papel significativo
Proliferacin incontrolada de clulas neoplsicas en
(canceroso!) agalla de la corona.

Las auxina producida en la agallas y

citoquinina; resultan en el crecimiento
celular neoplsico
Las citoquininas y auxinas regulan la
progresin de las clulas vegetales a travs
del ciclo celular
La ausencia de regulacin de los niveles
de las PGR hace entrar a la celula en
estado de reposo.
Las auxinas estimulan el alargamiento celular
coleoptile de avena
Se muestra cuando coloptilos (tallo de la planta de
avena) flotando en IAA
No funciona en plantas intactas (que contienen
suficiente IAA endgeno)
Se requiere auxina para iniciar el crecimiento de clulas
en cultivo de tejidos (con citoquininas)
auxina mecanismo de accin: el crecimiento de cido
aumenta la extensibilidad celular
(diferente
activa ATPasas que excretan H + en apoplasto (pared concentraciones
celular) a travs de la cadena de transduccin de del IAA)
seales
Activa expansina actividad Respuesta
La presin de turgencia permite a las fibrillas de curva
celulosa se deslicen una sobre otra crecer

conc crtica
Se requieren de auxinas y citoquininas
para la diferenciacin vascular
Es decir, el desarrollo de xilema y
floema de clulas indiferenciadas sitio de
Necesidad de auxinas (IAA) para iniciacin de
inducir la diferenciacin del xilema la
regeneracin
por ejemplo, si un haz vascular en vascular
desarrollo y es herido, se puede
regenerar el tiempo que
proporcionan auxina (desde el pice herida
del brote o aplicados de forma
exgena)
La presencia de citoquininas permite
la regeneracin simultnea del tubo
de tamiz floema y xilema elementos
de vaso
Control of in vitro culture
Cytokinin
Leaf strip

Adventitious
Shoot

Root Auxin

Callus
Factores que afectan el cultivo de tejidos vegetales

Medios de cultivo
Minerales, reguladores de crecimiento, la fuente de carbono
Factores ambientales
La luz, la temperatura, fotoperiodo
Fuente del explante
Tipos
Por lo general, cuanto ms joven, menos diferenciado del explante, el
mejor para el cultivo de tejidos
Gentica
1. Diferentes especies muestran diferencias en la susceptibilidad a
cultivo de tejidos
2. En muchos casos, diferentes genotipos dentro de una especie
tendrn variable de respuestas a cultivo de tejidos; respuesta a la
embriognesis somtica
Los componentes del medio
Formulacion de sales inorgnicas
Fuente de carbohidratos
Vitaminas
Agua
Las hormonas vegetales - auxinas,
citoquininas, GA de
Agentes solidificantes
Los suplementos no definidos
Los hidratos de carbono
Las plantas en la cultivo por lo general no
pueden satisfacer sus necesidades de
carbono. Por lo general es aadida
sacarosa a 2-3% w/v.
De glucosa o una mezcla de glucosa y
fructosa se utiliza de vez en cuando.
Para los cultivos a gran escala, las fuentes
ms baratas de azcares (jarabe de maz).
Cultivo fotoautotrofico
El crecimiento sin una fuente de carbono. Por lo
tanto necesitan para impulsar la fotosntesis.
altas intensidades de luz necesaria (90-150mMole
/ m2/ S) en comparacin con el normal (30 a 50).
Por lo general, aumentar CO2 (1000 ppm) en
comparacin con 369.4 ppm normal.
Mucho ms reducido nivel de contaminacin y las
plantas son ms fciles de transferir al
invernadero.
formulaciones de sales inorgnicas
Deben contener una amplia gama de
Macroelementos (> mg/L) y
microelementos (<mg/L).
Murashige y Skoog (1965) es el ms
popular para el cultivos de brotes.
Gamborg medio B5 es ampliamente
utilizado para cultivos de clulas en
suspensin(sin amonio).
Vitaminas
En general, cuanto menor sea el
desarrollo del explante, el requerimiento
es mas preciso.
Se utiliza a menudo un cctel vitaminas
(cido nicotnico, glicina, tiamina,
piridoxina).
El inositol por lo general tiene que ser
suministrado a una concentracin mucho
ms alta (100 mg/L)
Las hormonas vegetales
(reguladores de crecimiento)

Auxinas
Citoquininas
Acidos giberlicos
Etileno
cido abscsico
Compuestos similares a reguladores de
crecimiento
Auxinas
Absolutamente esenciales
Slo un compuesto natural el cido indol-3-actico.
Muchos anlogos sintticos (NAA, IBA, 2,4-D, 2,4,5-
T, Pichloram) son ms baratos y ms estables
En general, estimulante el crecimiento. Promover
el enraizamiento.
Producido en los meristemos, especialmente tallos
y se transporta a travs de la planta en clulas
especiales en los haces vasculares.
Citoquininas
Absolutamente esencials
Compuesto natural nico, zeatina. Anlogos
sintticos Benyzladenine (BA), kinetina.
Estimular la divisin celular (junto con auxinas).
Promueve la formacin de brotes adventicios.
Producido en el meristemo de la raz y se
transporta a lo largo de la planta como la
zeatina-ribsido en el floema.
Giberelinas
Es una familia de ms de 70 compuestos
relacionados.
Comercialmente, GA3 y GA4 + 9
disponibles.
Estimular etiolacin de los tallos.
Ayudar a la latencia de las semillas.
Producida en las hojas jvenes.
cido abscsico (ABA)
Slo un compuesto natural.
Promueve la abscisin de hojas y latencia
de las semillas.
Desempea un papel dominante en el
cierre de los estomas en respuesta al
estrs hdrico.
Tiene un papel importante en la
embriognesis en la preparacin de
embriones para la desecacin. Ayuda a
garantizar embriones 'normales'.
Sustancias similares a los reguladores de
crecimiento vegetal
Poliaminas - tienen un papel vital en el
desarrollo del embrin.
El cido jasmnico - implicado en la
planta herida respuestas.
cido saliclico.
No usados universalmente como hormonas
vegetales ya que suelen ser necesarios en
altas concentraciones.
Los suplementos no definidos
Fuentes de hormonas, vitaminas y
poliaminas.
Por ejemplo el agua de coco, extractos de
maz dulce
No reproducible
Lograr el cultivo
Conceptos Generales del
cultivo in vitro
Habilidades fundamentales de las plantas
Totipotencia
La capacidad potencial o inherente de una clula de planta para
desarrollar una planta entera con el estimulo adecuado.
Esto implica que toda la informacin necesaria para el crecimiento
y la reproduccin del organismo est contenida en la clula
Desdiferenciacin
La capacidad de las clulas maduras para volver a la condicin
meristemtica y el desarrollo de un nuevo punto de crecimiento,
seguido de re-diferenciacin que es la capacidad de reorganizarse
en nuevos rganos
Competencia
El potencial endgeno de una clula o tejido determinado para
desarrollar de una manera particular
Tipo de cultivo in vitro
Cultivo de plantas intactas (Semilla de cultivo
de orqudeas)
El cultivo de embriones (rescate de embriones)
Cultivo de rganos
cultivo de la meristemos.
cultivo de tallos.
cultivo de hojas
cultivo de anteras
cultivo de callo
suspensin celular y cultivo celular sola
cultivo de protoplastos
Las aplicaciones de reproduccin de
Cultivo de Tejidos
La micropropagacin
Preservacin de germoplasma
La variacin somaclonal
El cultivo de embriones
la produccin de haploides y dihaploides
In vitro hibridacin - la fusin de
protoplastos
ingeniera gentica de plantas
La micropropagacin

embriognesis
embriognesis directa
embriognesis indirecta
organognesis
Organognesis a travs de la formacin de callos
la formacin de rganos accidental directa
microtallo
Meristemo y punta del brote cultura
la cultura del brote
embriognesis somtica
embriognesis somtica
El proceso de iniciacin y el desarrollo de los
embriones o estructuras tipo embrin de clulas
somticas
La produccin de embriones a partir de clulas
somticas o "no germinales".
Por lo general, implica una etapa intermedia de
callo que puede resultar en la variacin entre las
plantas de semillero
No es una tcnica de micropropagacin comn, pero
actualmente est siendo utilizado para producir
plntulas de pino superiores
 embriognesis somtica a partir
masas pro-embrionarias (PEM)
+auxina conduce a alta [putrescina]
Las clulas individuales slo
PEM de la superficie
El desarrollo y el ciclismo
de las masas de Pro-embrionarias
putrescina
a espermidina
Por ejemplo. quitar
auxina
Zanahoria, poliamina
monocotiledneas Inter-convesions espermidina
, algunas a espermina
conferas
La escisin conferas Polyembryony-
longitudinal de escisin
Embrin

suspensor

Normal divisin lateral nuevos embriones

Embyro
la formacin del embrin Secundaria
- La mayora de las dicotiledneas

Abundante
Secundario
Los embriones + carbn de lea
+ ABA

+ citoquinina -Cytokinin

embrin temprano
Las fermentaciones de embriones
Los embriones somticos se pueden producir
profusamente de hojas o embriones cigticos.
Para la micropropagacin, potencialmente
extraordinariamente productiva.
Sensibilidad a la cizalladura es un problema.
La maduracin en el lquido es un problema.
Los embriones somticos
El cultivo de tejidos mantiene la gentica
de la clula o tejido utilizado como un
explante
las condiciones de cultivo de tejidos se
pueden modificar para hacer que las
clulas somticas para reprogramar en
una estructura bipolar
Estas estructuras bipolares se comportan
como un verdadero embrin - llamada
embriones somticos
organognesis
organognesis
El proceso de iniciacin y el desarrollo de una
estructura que muestra la forma y / o la funcin
del rgano natural.
la capacidad de los tejidos de las plantas no
meristemticas para formar diversos rganos de
novo.
la produccin de races, tallos u hojas.
Estos rganos pueden surgir de meristemas
preexistentes o fuera de las clulas
diferenciadas.
Esto, como la embriognesis, puede implicar un
callo intermedia, pero a menudo se produce sin
callos.
planta Organognesis
Indirecto:
Esta va incluye una etapa de
callo.
Callo: tejido indiferenciado
que se desarrolla en o
alrededor de una superficie de
la planta heridos o cortar o en
cultivo de tejidos.
Directo:
Que no pasa por una etapa de
callo. Las clulas en el acto de
explante como precursores
directos de una nueva primordio
Un rgano o una parte en su
forma ms rudimentaria o
etapa de desarrollo
organognesis
formacin de brotes adventicios es el desarrollo
de novo de brotes a partir de grupos de clulas
en ausencia de los meristemas preexistentes.
En algunas especies (por ejemplo, Saintpaulia),
muchos brotes pueden ser inducidas (3000 a
partir de una hoja).
En otras especies (por ejemplo caf), puede ser
necesario para inducir una proliferacin masiva
un-organizada de las clulas (callo) antes de la
formacin de brotes adventicios.
La embriognesis somtica y la
organognesis
Ambas de estas tecnologas se pueden
utilizar como formas de micro-
propagacin.
No siempre es deseable, ya que no
siempre pueden dar lugar a poblaciones
de plantas idnticas.
El uso ms beneficioso de la
embriognesis somtica y la organognesis
es en la produccin de plantas enteras a
partir de una sola clula (o unas pocas
clulas).
microtallo
Esta es una forma especializada de la
organognesis
Se trata de la produccin de brotes a partir de
meristemas preexistentes solamente.
Requiere romper la dominancia apical
Microestacas puede ser uno de tres tipos:
Nodal
cultivos de brotes
divisin de mata
Pasos de micropropagacin
Etapa 0 - Seleccin y preparacin de la planta madre
esterilizacin del tejido de la planta se lleva a cabo

Etapa I - Iniciacin de la cultura

explante coloca en medio de crecimiento

Etapa II - Multiplicacin
explante transferido a disparar los medios de comunicacin; brotes
se pueden dividir constantemente

Etapa III - El enraizamiento

explante transferido a los medios de comunicacin de raz

Etapa IV - Traslado al suelo

explante volvi a suelo; endurecido fuera