INTRODUCCION

Una enzima es una protena que acta como catalizador de una reaccin qumica
acelerndola. Las enzimas son protagonistas fundamentales en los procesos del
metabolismo celular. Las enzimas unen su sustrato en el centro reactivo o cataltico,
que suele estar protegido del agua para evitar interacciones no deseadas. En el
centro reactivo la disposicin espacial y los tipos de cadenas laterales de
aminocidos son fundamentales para orientar correctamente el sustrato y poder
interaccionar de la forma deseada para llevar a cabo la catlisis de la reaccin. Las
enzimas son muy selectivas en relacin a los sustratos que modifican. Las enzimas
suelen ser mucho ms grandes que sus sustratos y en muchas ocasiones requieren
de la participacin de otras molculas ms pequeas no polipeptdicas como las
coenzimas (biotina, NADH entre otros) o los iones metlicos llamados cofactores.

El hecho de que una reaccin qumica sea termodinmicamente favorable depende

de la diferencia de energa libre que haya entre los sustratos y los productos. Si esta
diferencia es negativa, la reaccin es espontnea. Aunque una reaccin sea
espontnea no significa que la velocidad de la reaccin sea elevada, existiendo
reacciones espontneas que tardan segundos y otras que tardan horas. En las
reacciones qumicas sencillas la transformacin de un sustrato en un producto suele
pasar por un estado intermedio llamado estado de transicin. Este estado de
transicin es muy inestable y suele necesitar aporte de energa. La velocidad de una
reaccin qumica depende de esta energa de activacin. Para que se produzca una
reaccin qumica, sin intervencin de enzimas, es necesario que los reactivos entren
en contacto, para lo que es necesaria una concentracin suficiente, y que el choque
de molculas tenga energa para superar la barrera de activacin. Este es el motivo
por el que la temperatura influye en el equilibrio qumico. La enzima acelera la
reaccin qumica disminuyendo la energa de activacin. La enzima lleva a cabo esta
disminucin de la barrera energtica interaccionando con los elementos que
participan en la reaccin qumica estabilizndolos en el centro reactivo. As, aumenta
enormemente la probabilidad de que se produzca la reaccin qumica ya que
concentra y pone en contacto los elementos necesarios para la reaccin.

La regulacin del metabolismo celular se lleva a cabo regulando la actividad

enzimtica. Existen varias formas de regular la actividad de una enzima que no son
excluyentes entre s. Se puede regular su concentracin, modificar su conformacin
con ligandos activadores o inhibidores, modificar su localizacin celular o introducir
modificaciones covalentes como metilacin o fosforilacin que incluso pueden llegar
a alterar la enzima de forma irreversible. No todas las enzimas tienen la misma
importancia en la regulacin de una ruta. Suele ser especialmente clave la
regulacin de las enzimas que catalizan reacciones poco favorables con energa de
activacin elevada. En muchos casos las reacciones termodinmicamente
desfavorables se acoplan a reacciones espontneas favorables que les aportan
 energa. ste es el caso de la hidrlisis del ATP (reaccin favorable) asociada a los
procesos de biosntesis.
La ureasa, cuyo nombre sistemtico es amidohidrolasa de urea, tiene un peso
molecular de 483 000 Dalton. La ureasa consta de 6 subunidades estructurales
iguales. Es una enzima muy especfica, que existe en varios tipos de vegetales,
por ejemplo, en el frijol de soya. La ureasa se utiliza mucho como agente cataltico
para la medicin cuantitativa de urea. El hidrxido de amonio que se forma puede
titularse y puede relacionarse, estequiomtricamente, con la cantidad de urea
presente en una muestra. Aunque la ureasa no es muy comn en la naturaleza,
esta enzima ha tenido ms importancia en el desarrollo de la enzimologa
moderna que ninguna otra. Las investigaciones sobre la ureasa han permitido
deducir el principio importante en las reacciones enzimticas: la funcin de los
grupos SH (sulfhdrico) en la catlisis. La ureasa posee 3 o 4 grupos activos, es
una representante de un gran nmero de enzimas cuya actividad depende de la
existencia de grupos SH, intactos, procedentes de cistenas que forman parte de
la cadena poli peptdica de la enzima.
OBJETIVOS: Analizar y observar las diferentes factores que sufre la ureasa
(extrada de frijol de soya) como concentracin de sustrato, temperatura, PH y
tiempo, como modificadores en la reaccin ezimatica, para de este modo determinar
las condiciones adecuadas para trabajar con esta enzima.

ANALISIS DE RESULTADOS

Las enzimas son protenas que aceleran la velocidad de la reaccin qumica en

nuestro organismo, con excepcin de los ribozimas (que son polinucletidos con
actividad cataltica). La actividad enzimtica, definida como cantidad de producto
formado o cantidad de sustrato degradado por unidad de tiempo, es afectada por
una serie de factores tales como:
Temperatura
La pH
La concentracin de sustrato
La concentracin de enzima

A) Efecto de la temperatura sobre la actividad de la ureasa

Para toda enzima una temperatura optima de actividad, a la cual la velocidad de
reaccin es mxima. A temperaturas debajo de esta temperatura, la frecuencia de
choques entre la enzima y el sustrato es baja y, por tanto, la velocidad de reaccin
tambin lo es. Conforme se incrementa la temperatura, aumenta la frecuencia de
choques y se favorece la velocidad de reaccin ( la formacin del producto). Pero si
la temperatura es muy elevada, pueden romper la estructura de Vander Waals y los
puentes de hidrogeno que estabilizan la estructura terciaria y cuaternario de las
enzimas, como consecuencia, se produce su desnaturalizacin y la perdida de la
actividad enzimtica.
B) Efecto de la pH sobre la actividad de la ureasa
La estructura tridimensional de una enzima de origen proteico determina su sitio
cataltico y, por lo tanto, su actividad. Dicha estructura se encuentra estabilizada por
una serie de enlaces no covalentes (hidrofbicos, puentes de hidrogeno,
atracciones electrostticas) y covalentes (puentes de disulfuro) que existen entre
los grupos R de los aminocidos que no son neutros ( como el aspartato, la lisina,
la arginina y el glutamato), e interfieren con las atracciones electrostticas y su
estabilidad estructural tridimensional, lo que provoca una prdida total o parcial de
la actividad enzimtica.
Para cada enzima existe un pH ptimo en relacin con la actividad, el cual vara
segn la regin celular en que se encuentre dicha enzima: por ejemplo, el pH dentro
del lisosoma o en el estmago es alrededor de 2 (y ese es el pH ptimo de las
enzimas all localizadas), mientras que las enzimas presentes en el plasma o en el
duodeno tienen un pH ptimo de actividad entre 7.0 y 8.0
La ureasa acta en los compuestos a nivel de los puentes C-N excepto en aquellos
que contiene puentes peptdicos. El pH ptimo para la actividad de la ureasa es de
7. (3)
C) Efecto del tiempo de reaccin en la cantidad de urea hidrolizada
En toda reaccin enzimtica, la enzima no es consumida ni sufre modificacin
alguna, de manera que puede continuar transformando otra molcula de sustrato
en producto. Por lo tanto, si se garantiza que la concentracin de sustrato no ser
un elemento limitante (es decir, que no se agotar), a mayor tiempo de reaccin,
mayor ser la formacin del producto o de la degradacin del sustrato.
D) Efecto de la concentracin de enzima sobre la actividad enzimtica
En todas reacciones enzimticas, si se incrementa la concentracin de enzima, se
forma mayor cantidad de productos por unidad de tiempo. EL incremento en la
velocidad de reaccin es directamente proporcional al incremento en la
concentracin de enzima, siempre y cuando la cantidad de sustrato no sea limitante,
es decir, que el sustrato no llegue a agotarse.

CONCLUSIONES:
Por medio del anlisis y clculos de las reacciones enzimticas en la ureasa, asi
como la representacin grafica del comportamiento dependiendo de los factores
como ph, temperatura, concentracin de sustrato y tiempo. Se pudo determinar
cuales eran las condiciones optimas para trabajar con esta enzima.
TEMPERATURA: Conforme se incrementa la temperatura, aumenta la frecuencia
de choques y se favorece la velocidad de reaccin ( la formacin del producto).
Pero si la temperatura es muy elevada, pueden romper la estructura de Vander
Waals.
PH. La ureasa acta en los compuestos a nivel de los puentes C-N excepto en
aquellos que contiene puentes peptdicos. El pH ptimo para la actividad de la
ureasa es de 7.
 TIEMPO: a mayor tiempo de reaccin, mayor ser la formacin del producto o de
la degradacin del sustrato.
Efecto de la concentracin de enzima sobre la actividad enzimtica
En todas reacciones enzimticas, si se incrementa la concentracin de enzima, se
forma mayor cantidad de productos por unidad de tiempo.

Fuentes bibliogrficas
I. Qumica de Alimentos: Manual de laboratorio Nuria Bolaos V., Giselle Lutz
C., Carlos H. Herrera R. - 2003 paginas(49-50)

II. Manual de experimentos de laboratorio para bioqumica. By Silvia Quesada

Mora paginas 35-37

III. Pruebas bioqumicas para la identificacin de bacterias de importancia

clnica By Jean F. MacFaddin paginas (398 y 399)