Caldo M.R.S.

Utilizacin

El Caldo M.R.S. fue desarrollado por Man, Rogosa y Sharpe para proveer un medio que pudiera
evidenciar un buen crecimiento de lactobacilos y de otras bacterias cido lcticas.

Fundamento

El medio de cultivo permite un abundante desarrollo de todas las especies de lactobacilos. La

peptona y glucosa constituyen la fuente de nitrgeno, carbono y otros elementos necesarios para
el crecimiento bacteriano. El monoleato de sorbitn, magnesio, manganeso y acetato, aportan
cofactores y pueden inhibir el desarrollo de algunos microorganismos.
El citrato de amonio acta como agente inhibitorio del crecimiento de bacterias Gram negativas.

Formula

Frmula (en gramos por litro) Instrucciones

Proteosa peptona N 3 10.0 Suspender 51 g del medio en un litro de
Extracto de carne 8.0 agua destilada. Reposar 5 minutos y
Extracto de levadura 4.0 mezclar calentando a ebullicin durante
Glucosa 20.0 1 2 minutos. Esterilizar en autoclave
Monoleato de sorbitn 1 ml durante 15 minutos a 121 C.
Fosfato dipotsico 2.0
Acetato de sodio 5.0
Citrato de amonio 2.0
Sulfato de magnesio 0.2
Sulfato de manganeso 0.05
pH final: 6.4 0.2

Siembra

Por inoculacin directa del material a analizar.

Caldo Casoy
Utilizacin

Medio adecuado para el desarrollo de microorganismos exigentes. Es utilizado en el control de

esterilidad de productos biolgicos, farmacuticos y cosmticos.

Fundamento

La triptena y la peptona de soya aportan nutrientes ricos en pptidos, aminocidos libres, bases
pricas y pirimdicas, minerales y vitaminas. La peptona de soya contiene alta cantidad de hidratos
de carbono que estimulan el crecimiento de una amplia variedad de microorganismos. El cloruro de
sodio mantiene el balance osmtico. El fosfato dipotsico otorga capacidad buffer y la glucosa es la
fuente de energa.

Formula

Triptena 17.0 g Peptona de soya 3.0 g

Cloruro de sodio 5.0 g Fosfato dipotsico 2.5 g
Glucosa 2.5 g Agua purificada 1000 ml
pH final: 7.3 0.2
Siembra

Inocular directamente el material en estudio.

Agar Nutritivo
Utilizacin

Utilizado para propsitos generales, para el aislamiento de microorganismos poco exigentes en lo

que se refiere a requerimientos nutritivos.

Fundamento

Utilizado para propsitos generales, para el aislamiento de microorganismos poco exigentes en lo

que se refiere a requerimientos nutritivos.

Formula
Frmula (en gramos por litro) Instrucciones
Pluripeptona 5.0 Suspender 31 g de polvo por litro de agua
Extracto de carne 3.0 destilada. Mezclar y dejar reposar 5 minutos.
Cloruro de sodio 8.0 Calentar suavemente agitando y hervir 1 o 2
Agar 15.0 minutos hasta su disolucin. Distribuir y esterilizar
a 121C durante 15 minutos.
pH final: 7.3 0.2

Siembra

En superficie o por la tcnica de pour plate, segn el uso a que se destine.

Agar PDA
Utilizacin

Medio de cultivo utilizado para el aislamiento y recuento de hongos y levaduras en muestras

clnicas, alimentos, cosmticos y otros materiales.

Fundamento

Tanto la glucosa presente como la infusin de papa favorecen el desarrollo exuberante de hongos
y levaduras, mientras que el desarrollo bacteriano es inhibido con el agregado de cido tartrico
luego de la esterilizacin hasta alcanzar un pH: 3.5 0.2. Una vez agregado el cido no se puede
recalentar ya que el agar se hidroliza.

Formula
Frmula (en gramos por litro) Instrucciones
Infusin de papa 4.0 Disolver 39 g de polvo en un litro de agua
Glucosa 20.0 destilada. Dejar reposar 5 minutos. Calentar hasta
Agar 15.0 ebullicin con agitacin continua. Esterilizar a
121C durante 15 minutos. Si se desea ajustar el
pH a 3.5 agregar aproximadamente 14 ml de una
solucin estril de cido tartrico al 10 %, cuando
el agar se encuentra entre 45-50 C.
pH final: 5.6 0.2

Siembra

- Tcnica De Pour Plate: sembrar 0.1 o 1 ml y agregar 15 ml del Papa Glucosado Agar fundido y
enfriado
a 45-50 C
- En superficie: por estriado

Agar TCBS
Utilizacin

Medio selectivo para el aislamiento y cultivo de Vibrio cholerae, Vibrio parahemolyticus y otras
especies de Vibrio a partir de heces, agua y alimentos contaminados.
Tambin es conocido como Agar Tiosulfato Citrato Bilis Sacarosa, o como Agar Selectivo para
Vibrios.

Fundamento

En el medio de cultivo, el extracto de levadura, la peptona de carne y la triptena aportan nutrientes

para el desarrollo bacteriano. es inhibidor para la mayora de las enterobacterias. Esta inhibicin se
basa en las altas concentraciones de tiosulfato y citrato, la presencia de bilis y un pH fuertemente
alcalino. La degradacin de la sacarosa es variable entre las especies de Vibrio y las colonias son
verdes para las cepas que no la utilizan y amarillas para aquellas que producen cido a partir de
este azcar. Esto es debido al viraje del color de los indicadores de pH azul de timol y azul de
bromotimol, del color azul al amarillo en medio cido.
El cloruro de sodio favorece el crecimiento de microorganismos. El tiosulfato de sodio aporta azufre
y junto con el citrato frrico permiten la deteccin de produccin de cido sulfhdrico.

Formula
Frmula (en gramos por litro) Instrucciones
Extracto de levadura 5.0 Suspender 89 g del polvo en un litro de agua
Peptona de carne 5.0 destilada. Calentar hasta ebullicin y hervir de 1 a
Triptena 5.0 2 minutos. NO AUTOCLAVAR. Distribuir en placas
Citrato de sodio 10.0 de Petri estriles.
Tiosulfato de sodio 10.0
Bilis de buey 8.0
Sacarosa 20.0
Cloruro de sodio 10.0
Citrato frrico 1.0
Azul de bromotimol 0.04
Azul de timol 0.04
Agar 15.0
pH final: 8.6 0.2

Siembra

1-Materiales clnicos:
a-materia fecal: suspender 1 gramo de heces o el contenido del hisopo en 10 ml de Agua
Peptonada Alcalina (B02-159-05, B02-159-06) e incubar de 6 a 8 horas a 35-37C, en aerobiosis.
b-materiales provenientes de infecciones extraintestinales: no es necesario realizar
enriquecimiento previo en Agua Peptonada Alcalina.

2-Agua: Filtrar de 1 a 10 litros (el volumen deseado) de agua con membrana de 0.22.Colocar la
membrana en un recipiente conteniendo Agua Peptonada Alcalina e incubar de 6 a 8 horas a 35-
37C, en aerobiosis.

3-Alimentos: Licuar 25 g de la muestra con 225 ml de Agua Peptonada Alcalina (B02-159-05,

B02-159-06) e incubar de de 6 a 8 horas a 35-37C, en aerobiosis.

En todos los casos sembrar una alcuota del caldo de enriquecimiento en la superficie de
una placa de TCBS, por estriado, para el aislamiento de colonias.
Agar XLD
Utilizacin

Es un medio moderadamente selectivo y de diferenciacin para el aislamiento y la diferenciacin

de patgenos entricos gram negativos (Salmonella y Shigella) a partir de muestras clnicas. Es
adecuado en especial para el aislamiento de la especie Shigella.
Fundamento

Contiene extracto de levadura como fuente de nutrientes y vitaminas. Utiliza el desoxicolato de

sodio como agente selectivo y, por consiguiente, inhibe los microorganismos gram positivos. La
xilosa se incorpora en el medio dado que la fermentan prcticamente todos los entricos, excepto
Shigella, y esta propiedad hace posible la diferenciacin de dicha especie. La lisina se incluye para
permitir la diferenciacin del grupo Salmonella de los organismos no patgenos, dado que, sin
lisina, Salmonella fermentara rpidamente la xilosa y no se distinguira de las especies no
patgenas. Cuando la Salmonella agota el suministro de xilosa, la lisina es atacada por la enzima
lisina descarboxilasa, lo que genera un cambio a un pH alcalino que imita la reaccin de Shigella.
Para evitar el cambio similar en los organismos coliformes positivos a la lisina, se aaden lactosa y
sacarosa para producir cido en exceso
Formula

Xilosa 3,5 g L-Lisina 5,0 Lactosa 7,5

sacarosa 7,5 Cloruro sdico 5,0 Extracto de levadura 3,0
Rojo fenol 0,08 Desoxicolato de sodio 2,5 Tiosulfato sdico 6,8
Citrato frrico de amonio 0,8 Agar 13,5 pH 7,4 0,2

Agar Selenito Cistina

Utilizacin

Medio utilizado para el enriquecimiento selectivo de Salmonella spp. a partir de muestras de

alimentos, productos lcteos y otros materiales de importancia sanitaria.

Fundamento

En el medio de cultivo, la peptona aporta los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano. La
lactosa es el hidrato de carbono fermentable, el selenito de sodio inhibe flora Gram positiva y la
mayora de la flora entrica excepto Salmonella spp.. La l-cistina es el agente reductor y fue
propuesta por la FDA para el aislamiento de Salmonella en productos alimenticios incrementando
la recuperacin por reduccin de la toxicidad del selenito.

Formula
Frmula (en gramos por litro) Instrucciones
Peptona 5.0 Suspender 23 g del polvo en un litro de agua
Lactosa 4.0 destilada. Mezclar bien y calentar ligeramente
Fosfato de sodio 10.0 hasta disolucin completa. Evite el calentamiento
Selenito de sodio 4.0 excesivo y no esterilice en autoclave.
L-Cistina 0.01
pH final: 7.0 0.2

Siembra
Puede realizarse la siembra partiendo de un caldo de preenriquecimiento o en forma directa
conservando la proporcin 1:10.

Caldo Tioglicolato
Utilizacin

Este medio de cultivo fue descripto originalmente por Brewer, y es recomendado para usar en
ensayos de control de esterilidad, en diversos productos biolgicos.

Fundamento

El medio de cultivo, tiene por sus componentes la calidad nutricional del caldo triptena soya. Este
permite el desarrollo de una amplia variedad de microorganismos, incluidos los nutricionalmente
exigentes. Adems, se observa que las bacterias estrictamente aerobias, crecen en la parte
superior, mientras que las anaerobias facultativas o anaerobias estrictas crecen en las
profundidades del medio. Las sustancias reductoras como tioglicolato de sodio y cistena
proporcionan una anaerobiosis suficiente y debido a los grupos -SH- de estos compuestos, se
neutralizan los efectos bacteriostticos de los derivados mercuriales, arsenicales y de otros
metales pesados. La presencia de una baja cantidad de agar, retarda la dispersin de CO 2 y O2.

Formula
Frmula (en gramos por litro) Instrucciones
Triptena 17.0 Suspender 30 g del polvo por litro de agua
Peptona de soya 3.0 destilada. Dejar reposar 5 minutos. Calentar a
Glucosa 6.0 ebullicin hasta disolucin total. Distribuir y
Cloruro de sodio 2.5 esterilizar a 121C por 15 minutos.
Tioglicolato de sodio 0.5
Agar 0.7
L-cistina 0.25
Sulfito de sodio 0.1
pH final: 7.0 0.2

Siembra

Segn la muestra a analizar:

-Muestras lquidas: agregar 1 o 2 gotas de la muestra a tubos conteniendo medio de cultivo.
-Tejidos y otras muestras slidas: macerar en caldo estril. Luego sembrar de la misma manera
que para muestras lquidas.
-Hisopos: insertarlos en el medio de cultivo, luego de haber sembrado el medio slido apropiado.
-Para el cultivo de anaerobios, antes de sembrar, eliminar el oxgeno presente, mediante el hervido
de los tubos con las tapas flojas, y luego enfriarlos a temperatura ambiente con las tapas bien
cerradas.

Agar Baird Parker

Utilizacin

Medio de alta especificidad diagnstica, selectivo y diferencial para el aislamiento y recuento de

estafilococos coagulasa positiva en alimentos y otros materiales de importancia sanitaria.

Fundamento

En el medio de cultivo preparado y completo la peptona y el extracto de carne constituyen la fuente

de carbono y nitrgeno, el extracto de levadura aporta vitaminas del complejo B, la glicina y el
piruvato estimulan el crecimiento de los estafilococos.
Este medio de cultivo es selectivo y diferencial debido al telurito de potasio y al cloruro de litio, los
cuales inhiben el desarrollo de la flora acompaante. La yema de huevo permite demostrar la
actividad lecitinsica.
Los estafilococos coagulasa positiva reducen el telurito a teluro y originan colonias de color
grisceo-negro, y dan reaccin sobre la yema de huevo produciendo alrededor de la colonia una
zona opaca que a menudo tiene una zona clara mas externa.

Formula
Frmula (en gramos por litro) Instrucciones
Peptona de casena 10.0 Suspender 60 g del medio deshidratado en 940ml
Extracto de carne 5.0 de agua destilada. Dejar en reposo 5 a 10
Extracto de levadura 1.0 minutos. Calentar agitando frecuentemente y
Cloruro de litio 5.0 hervir durante 1 minuto. Distribuir y esterilizar en
Agar 17.0 autoclave a 121C (15 libras) durante 15 minutos.
Glicina 12.0 Enfriar a 45-50C y agregar 50 ml de la emulsin
Piruvato de sodio 10.0 de yema de huevo y 10ml de la solucin de
telurito (Cdigo B03-601-61). Homogeneizar y
distribuir en cajas de Petri.
pH final: 6.8 0.2

Siembra

Dejar secar la superficie de la placa preparada y extender 0.1 ml de la dilucin de la muestra a

analizar.