Carlos Salameh Borrero

MICROBIOLOGA

Regulacin de la expresin gnica

Introduccin
Mecanismos de regulacin gentica
Regulacin por subunidades sigma alternativas
Regulacin del inicio de transcripcin por protenas reguladoras
Regulacin por atenuacin de la transcripcin
Sistemas de regulacin de dos componentes

Introduccin
Las variaciones bacterianas son cambios moleculares y eventualmente fenotpicos que se
producen en las bacterias por causas genticas.
Se pueden distinguir dos grandes grupos de variaciones que pueden experimentar las
bacterias:
Variaciones por adaptacin al medio: son cambios moleculares y fenotpicos que ocurren
sin modificacin del material hereditario (sin variacin del genotipo), debidos a diversos
mecanismos de regulacin de la expresin de los genes.
Variaciones genotpicas: Se deben a alteraciones en el genotipo y son siempre hereditarias.
Mutaciones: Son cambios bruscos en el genotipo que se transmiten a las generaciones
siguientes
Tansferencia de material gentico entre bacterias: Son variaciones hereditarias debidas a
intercambio de material gentico entre una bacteria donadora y otra receptora. Los
fenmenos de Transformacin, Conjugacin y Transduccin son responsables de esta
transferencia.

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Mecanismos de regulacin gentica

Desde el punto de vista de la regulacin gentica, los operones bacterianos se pueden
clasificar como:
Operones de expresin constitutiva: aquellos que se transcriben permanentemente,
independientemente de las condiciones ambientales). Por ejemplo, operones para las
ADN- y ARN-polimerasas, operones para las protenas de las cadenas transportadoras
de electrones, operones para las protenas ribosmicas, etc.

Operones cuya expresin est regulada en funcin de las condiciones ambientales.

Dentro de esta categora, se distinguen a su vez, operones de expresin inducible y
operones de expresin reprimible. En general, la Induccin permite el ajuste rpido para
la utilizacin (catabolismo) de ciertos sustratos disponibles, mientras que la Represin
permite el ajuste de la sntesis (anabolismo) de una sustancia que interviene como
intermediario metablico.

Nivel transcripcional y sobre el ARNm

A nivel del inicio de la transcripcin.
Sustitucin del factor s de la ARN-polimerasa
Por interaccin de protenas regulatorias sobre secuencias de ADN cercanas al
promotor (por control positivo o negativo):
Fenmenos de induccin gnica
Fenmenos de represin gnica
Terminacin prematura de la transcripcin: fenmenos de atenuacin de la
transcripcin.
Procesamiento de ARN (casos muy raros en procariotas)
Nivel traduccional
Regulacin de la sntesis de las protenas ribosmicas
Regulacin por ARN antisentido, que interfiere con la traduccin del ARNm
Nivel post-traduccional (No son puramente mecanismos de regulacin gentica)
Degradacin de protenas y modificacin covalente de protenas (p. ej., fosforilacin)
Regulacin alostrica por retroalimentacin (feed-back) de la actividad de las
protenas enzimticas.

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Sistemas globales de regulacin

Cuando varios operones estn regulados coordinadamente por un mismo tipo de
estmulos, constituyen una red de regulacin que se suele denominar con el nombre de
reguln (p. ej., el reguln de los operones spo de la esporulacin en las especies del gnero
Bacillus).
Casi todos los productos de genes bacterianos estn regulados en al menos uno de estos
niveles, y a menudo lo estn en varios niveles al mismo tiempo.

Regulacin por subunidades alternativas:

Se trata de una estrategia muy directa y sencilla, en la que la subunidad estndar de la
clula vegetativa normal se ve desplazada y sustituida por otro tipo de diferentes
(codificado por un gen distinto). La holoenzima de la ARN polimerasa con la nueva s
reconoce ahora e inicia la transcripcin a partir de un tipo distinto de promotor. Esto hace
que se transcriban operones que hasta entonces permanecan silenciosos (sin expresin).
La ARN polimerasa bacteriana reconoce un tpico factor s para la transcripcin de la
mayora de los operones, sin embargo, la expresin de determinados operones puede
regularse, dependiendo de las condiciones ambientales, simplemente cambiando el factor
.

Uno de los casos mejor estudiados se da en las especies del gnero Bacillus, en el proceso
de esporulacin:

Durante el crecimiento vegetativo, B. subtilis posee una holoenzima tpica 2 +43 (=A),

que reconoce los promotores estndar de los operones vegetativos. Al iniciarse la

esporulacin, se sintetiza en la pre-espora un nuevo s, llamada F, que desplaza

parcialmente a A (vegetativo). Ahora, la holoenzima reconoce los promotores de algunos

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operones spo (que estaban inactivos durante el crecimiento vegetativo), que codifican
funciones requeridas durante las primeras fases de la esporulacin. Uno de los genes que

ahora se expresa corresponde a otra subunidad (G) distinto de los dos citadas, y que
permite a la polimerasa transcribir en la pre-espora una nueva oleada de operones spo,
ms tardos. En una fase ms avanzada de la esporulacin, se expresan en la clula madre

otros genes spo debido a la activacin de un nuevo (K). Cada nueva holoenzima
reconoce un tipo distinto y caracterstico de promotor (con secuencias de nucletidos
peculiares), que no puede ser reconocido por las otras versiones de la ARN polimerasa
dotadas de subunidades .

Regulacin del inicio de transcripcin por protenas reguladoras:

Los sistemas de represin enzimtica e induccin enzimtica (control negativo), y el sistema
de represin catablica (control positivo), son ejemplos tpicos de este mecanismo de
regulacin (ver leccin 10).

Regulacin por atenuacin de la transcripcin:

La atenuacin es un mecanismo de control que se da en ciertos operones de rutas
biosintticas (sobre todo de aminocidos), por el cual una onda de transcripcin recin
iniciada puede terminar prematuramente en una zona denominada atenuador, antes de
alcanzar al primer gen estructural de ese opern. A nivel de ADN, el atenuador est situado
entre el promotor y el inicio del primer gen estructural, dentro de la porcin que a nivel de
ARN representa la secuencia lder. A diferencia de los mecanismos de regulacin anteriores,
la atenuacin no depende de protenas reguladoras.

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La atenuacin se produce por un control ejercido por la traduccin, que a su vez responde
al nivel intracelular del ARNt cargado con el aminocido de la ruta biosinttica en cuestin:
Si existe suficiente nivel de Trp-ARNt, habr atenuacin de la transcripcin
Si no hay suficiente Trp-ARNt, no habr atenuacin, y por lo tanto la transcripcin
continuar hasta el final.
La presencia o ausencia del Trp-ARNt concreto determina si el ribosoma puede traducir, o
no, una zona temprana del ARNm (dentro de la porcin del lder): si el ribosoma puede
traducir esa zona (porque hay suficiente Trp-ARNt), el avance del ribosoma detrs de la
ARN polimerasa impide ciertos emparejamientos intracatenarios dentro del ARNm naciente,
pero permite otros emparejamientos alternativos de modo que se forma una estructura
secundaria de tipo terminador simple (independiente de ). Por lo tanto la ARN-polimerasa
se atranca en esta horquilla y finalmente se separa, detenindose as la transcripcin antes
de que la onda de transcripcin haya alcanzado al primer gen estructural.

En la secuencia lder, que tiene 162 bases, hay una corta fraccin que puede traducirse
(ORF). Se pueden distinguir 4 regiones con capacidad para formar una estructura
secundaria tpica, con horquillas entre 1:2, 2:3 y 3:4. En la regin 1 hay 2 codones seguidos
que codifican para Trp. La horquilla
3:4 tiene el mismo efecto que la
protena (terminadora de la
transcripcin).
La traduccin comienza de forma
consecutiva a la transcripcin, de
manera que se pueden dar las
circunstancias que se visualizan en el
esquema que se presenta a
continuacin:

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Sistemas de regulacin de dos componentes:

Los sistemas de regulacin anteriores se ponen en marcha cuando un estmulo ambiental
qumico, normalmente una pequea molcula relacionada con el metabolismo (efector),
entra en la clula e interacciona con una protena reguladora, que a su vez se une (o deja de
unirse) con una secuencia de ADN al comienzo del opern. Pero hace relativamente pocos
aos se descubri que las bacterias poseen tambin numerosos sistemas en los que la
seal ambiental no entra a la clula, sino que es detectada por un sensor a nivel de
membrana, el cual reemite (transduce) el estmulo hacia una protena citoplsmica, la cual
a su vez interacciona con secuencias determinadas al comienzo del opern, para regularlo,
generando as la respuesta adaptativa correspondiente a la seal ambiental. Como en la
mayor parte de los casos el sistema funciona con dos protenas (la sensora y la reguladora),
a este tipo de sistemas se los conoce con el nombre de sistemas de regulacin de dos
componentes. Los distintos sensores, a pesar de que cada uno detecta un estmulo
diferente, se parecen entre s en al menos parte de su secuencia, y lo mismo ocurre con los
reguladores de respuesta, por lo que se habla de dos familias de protenas (cada una con
un probable origen evolutivo comn):

1.Familia de histidn-proten-quinasas (HPK): Este tipo de protenas son las sensoras

de algn tipo de estmulo ambiental. Muchas de ellas son autofosforilables, pero su funcin
esencial es la de fosforilar al correspondiente segundo miembro de la pareja (el regulador).
Los distintos sensores suelen tener en comn su porcin carboxiterminal, denominada
dominio transmisor (que incluye la histidina fosforilable). Los sensores suelen ser protenas
integrales de membrana citoplsmica. Cada sensor tiene un dominio aminoterminal
caracterstico, inmerso en el espacio periplsmico, y de este modo detectan algn
estmulo procedente del ambiente. Al hacerlo, parece que cambian de conformacin, de
modo que el dominio transmisor intracitoplsmico se autofosforila y luego fosforila al

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correspondiente regulador de respuesta.

2.Familia de reguladores de respuesta (RR): cada regulador de respuesta, tras ser

fosforilado en cierto asprtico por su correspondiente HPK, ejerce algn efecto regulatorio.
Normalmente, los RR fosforilados actan como activadores de la transcripcin de ciertos
operones. Los distintos reguladores comparten un mismo tipo de dominio aminoterminal,
denominado dominio receptor, que incluye el asprtico que recibe el fosfato del sensor
correspondiente.

Los sistemas de dos componentes son muy abundantes en bacterias. Por ejemplo, en E.
coli se han descubierto unos 50, entre los cuales se pueden citar:
Sistema Ntr de utilizacin de fuentes de nitrgeno, que responde ante los niveles de
amonio, y que permite el uso de fuentes alternativas de nitrgeno.
Sistema de respuesta ante osmolaridad: el aumento de presin osmtica es detectado
por la HPK sensora llamada EnvZ, que fosforila al regulador OmpR. A su vez, este
regulador controla las proporciones relativas de dos porinas, OmpC y OmpF, haciendo
que predomine la porina de poro ms pequeo (OmpC).

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Mutacin
Introduccin
Mutaciones
Mutaciones puntuales
Mutaciones por cambio de secuencia
Delecciones
Inversiones y translocaciones
Mutaciones polares
Agentes mutagnicos
Reversibilidad de las mutaciones
Efecto de la mutacin sobre el genotipo

Introduccin
Genotipo: Informacin gentica contenida en el cromosoma y los plsmidos.
Fenotipo: Conjunto de caracteres observables en un individuo.

Tipos de Variaciones
Modificaciones en la expresin del genotipo o Modificaciones de la Actividad Enzimtica:
Dependen de determinadas presiones ambientales y no son hereditarias. Son
variaciones por adaptacin al medio
Modificaciones del genotipo: Se heredan de generacin en generacin
Mutaciones
Variaciones ligadas a transferencia de material gentico
Transformacin (y Transfeccin)
Conjugacin (y Sexduccin)
Transduccin (Generalizada y Especializada).

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Mutaciones
Desde un punto de vista fenotpico, una mutacin es la aparicin brusca y espontnea en
un individuo, de una variacin que se transmite hereditariamente a la descendencia.

Desde el punto de vista gentico y atendiendo al concepto de gen, una mutacin es

cualquier alteracin en la secuencia de bases de un segmento de ADN relacionado con la
transcripcin.

Por trmino medio, un gen consta de unos 1000 pb (pares de bases), lo que significa que
un gen puede existir en una multitud de formas diferentes como consecuencia de cambios
en la secuencia de nucletidos.

Alelos: Son las diferentes formas en que puede encontrarse la secuencia de bases de
un gen.
Alelo Silvestre: Es la forma en que se encuentra la secuencia de bases del gen en el
organismo aislado de un hbitat natural.
Alelo Mutante: Es cualquier variacin con respecto al alelo silvestre, que se produce en
la secuencia de bases del gen.

Tipos de Mutaciones
Mutaciones Puntuales.
Mutaciones por cambio de secuencia (Frame-Shift).
Delecciones.
Inversiones y Translocaciones.
Mutaciones Polares.

Mutaciones puntuales:
Una mutacin puntual en un determinado gen tiene como consecuencia la alteracin de un
triplete o codn en el ARNm transcrito.

El cdigo gentico es altamente degenerado. De los 20 aminocidos proteinognicos, solo

2 (Met y Trp) son codificados por un nico triplete. 9 son codificados por 2 tripletes, 1 es

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codificado por 3 tripletes, 5 son codificados por 4 tripletes y 3 son codificados por 6
tripletes.
Este hecho origina una serie de consecuencias que pueden producirse como resultado de
Mutaciones Puntuales:
Una mutacin en cualquiera de las bases de un codn, podra no tener consecuencia
alguna, ya que podra seguir incorporndose el mismo aminocido en el pptido. Esta
mutacin sera una Mutacin Silenciosa.
Puede ser que la mutacin puntual origine la incorporacin de un aminocido diferente.
Si el nuevo aminocido no altera la estructura tridimensional de la protena, la mutacin
tambin sera Silenciosa.
Si el nuevo aminocido altera el centro activo de una enzima, por ejemplo, la mutacin
originara una inactivacin total o parcial de la enzima.
Si el nuevo aminocido altera la estabilidad estructural de la protena, hacindola
sensible a agentes ambientales (T oC, pH, etc.), se tratara de Mutaciones
Condicionales.
Si el cambio de base da lugar a un triplete sin sentido (UAG, UAA, UGA), se produce la
terminacin y liberacin prematura de la cadena peptdica: Mutacin Terminadora.

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Mutaciones por cambio de secuencia:

Son originadas por la prdida o insercin de un nucletido (o pequeo nmero de
nucletidos) dentro de un gen.
Dado que el ARNm se lee por grupos de 3 bases (tripletes o codones), el cambio de
secuencia solo se produce si se pierde o inserta un nmero de nucletidos diferentes a 3 o
mltiplo de 3.
La prdida o ganancia de nucletidos trae consigo un cambio total en el sentido del
mensaje a partir del primer nucletido perdido o ganado, con la consiguiente sntesis de
una protena inactiva, o la terminacin prematura, si aparece un triplete sin sentido.

Delecciones:
Son originadas por la prdida de cientos o miles de nucletidos.
Determinan una alteracin total de la protena resultante.
Si afectan a dos genes contiguos, se originan las denominadas Mutaciones Pleiotrpicas,
que dan lugar a ms de un cambio fenotpico. Por ejemplo, al obtener mutantes de
Escherichia coli resistentes al fago T1, se obtienen mutantes que tambin requieren
triptfano.
Se producen como consecuencia de la formacin y escisin de bucles intracatenarios en
zonas de homologa entre las dos cadenas.

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Inversiones y Translocaciones:
La Inversin es un cambio en la orientacin de un segmento de ADN, mientras que la
Translocacin es el movimiento de un segmento de ADN a otro sitio del genoma.
Son bastante frecuentes y estn originadas por la transposicin intracatenaria de
Secuencias de Insercin y Transposones.
Las Secuencias de Insercin (IS) y los Transposones (Tn) son elementos genticos mviles
que tienen la capacidad de transponerse a diferentes sitios del genoma bacteriano.

Mutaciones polares:
Las mutaciones polares son consecuencia de la insercin de un Transposn dentro de un
gen.
Se denominan polares porque impiden la transcripcin no solo del gen donde se inserta el
transposn, sino de todos aquellos que estn situados despus del punto de insercin.

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Agentes mutagnicos
Es un agente fsico, qumico o biolgico que altera o cambia la informacin gentica
(usualmente ADN) de un organismo y ello incrementa la frecuencia de mutaciones por
encima del nivel natural.
Agentes Fsicos
Temperatura
Radiaciones
Ultravioleta
Ionizantes
Agentes Qumicos
Anlogos de Bases (1)
5-BromoUracilo
2-AminoPurina
Agentes Intercalantes (1)
Derivados de la Acridina
Bromuro de Etidio
Agentes Alquilantes (2)
Mostazas Nitrogenadas
Metano-Sulfonato de Etilo o Metilo
Nitrosoguanidina
Agentes que alteran o eliminan bases (2)
Acido Nitroso
Hidroxilamina
(1) Se asocian o se incorporan al ADN (2) Reaccionan con el ADN

Reversibilidad de las mutaciones

Una propiedad de las mutaciones es que los cambios fenotpicos que producen se
transmiten hereditariamente a la descendencia, es decir, son permanentes.
Sin embargo, esto no quiere decir que los cambios en el fenotipo sean irreversibles, ya que
una nueva mutacin podra restaurar el fenotipo primitivo mediante dos clases de procesos
diferentes:

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Reversin: Una segunda mutacin restaura el genotipo inicial.

Supresin Gnica: Una segunda mutacin suprime los efectos de la primera pero no
restaura el genotipo inicial.
La Supresin Gnica puede ser Directa, cuando la segunda mutacin corrige el
producto del gen mutado, el cual recobra su actividad.
- Si la mutacin supresora tiene lugar en el mismo gen que la original, se trata de
una Supresin Gnica Directa Intragnica.
- Cuando la mutacin supresora ocurre en otro gen diferente al que sufri la
mutacin original, se denomina Supresin Gnica Directa Intergnica.
La Supresin Gnica puede ser tambin Indirecta, cuando las consecuencias de la
primera mutacin son anuladas sin que exista una correccin del producto del gen
mutado.
Efecto de la mutacin sobre el fenotipo
Desde el punto de vista gentico, el nmero de mutaciones que se puede producir en un
genoma bacteriano, es prcticamente ilimitado. Muchas de estas mutaciones son
Silenciosas, mientras que el resto origina alteraciones del fenotipo ms o menos profundas
Mutaciones Letales: Producen alteraciones en procesos indispensables para la vida de
las bacterias. Se producen, por tanto en genes cuyos productos primarios son
imprescindibles para la vida de la clula en todas las condiciones de crecimiento
Mutaciones No Letales: Afectan a caracteres no indispensables para la clula:
Caracteres morfolgicos celulares.
Caracteres morfolgicos coloniales.
Requerimientos nutricionales.
Resistencia a drogas y fagos.
Mutaciones Letales Condicionadas: Son mutaciones letales que se expresan solamente
bajo determinadas condiciones ambientales. Las condiciones en las que se expresa la
mutacin se denominan No Permisivas, ya que no permiten el desarrollo de la clula.
Un claro ejemplo de este tipo de Mutacin Letal Condicionada es el de los Mutantes
Termosensibles, que portan una modificacin en una protena que es activa por debajo
de una determinada temperatura y se inactiva por encima de ese valor.

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